Ig基因重排检测在B细胞性淋巴瘤诊断中的应用

目的探讨Ig基因重排检测在B细胞性淋巴瘤中的诊断价值。方法选取B细胞性淋巴瘤30例、淋巴组织反应性增生30例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统中的47条引物进行PCR扩增,核酸分子异源双链凝胶电泳分析Ig基因重排结果。结果 30例B细胞性淋巴瘤中检测出Ig克隆性重排,包括IGH(A+B)克隆性重排23例,IGK克隆性重排23例,IGL克隆性重排5例,IGH(A+B)+IGK克隆性重排30例,IGHA+IGK克隆性重排29例;在30例淋巴组织反应性增生中未检测到Ig克隆性重排。结论 Ig基因重排是诊断B细胞性淋巴瘤的有用工具。     

石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH基因重排的检测

目的：探讨克隆性免疫球蛋白重链第三互补决定簇区（IgHCD43）基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤（B－NHL）诊断方面的价值。方法：采用半巢式PCR、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）及银染技术,检测38例B－NHL、4例T－NHL及10例慢性扁桃腺炎,经福尔马林固定、石蜡包埋病理组织的克隆性IgHCDR3重排。结果：29例B－NHL及1例免疫组化未能明确细胞来源的NHL克隆性IgHCDR3重排阳性;4例T－NHL及10例慢性扁桃腺炎克隆性IgHCDR3重排阴性。结论：克隆性IgHCDR3重排可作为B－NHL与反应性增生鉴别的特生标志,大部分情况下可作为系分化标志。     

实时定量聚合酶链反应检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH基因重排

我们利用SYBR Green Ⅰ荧光染料，应用实时定量PCR（RQ-PCR）检测了15例B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）患者免疫球蛋白重链（IgH）基因重排情况，以探讨克隆性IgH基因重排在B-NHL诊断和鉴别诊断上的价值。     

半巢式聚合酶链反应方法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl-2/IgH基因重排

目的寻找一种敏感、特异的方法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）bcl-2／IgH基因重排，并通过测定产物的序列，以了解所建方法的可靠性、方法运用专业引物设计软件设计bcl-2／IgH基因重排半巢式PCR引物，对52例经临床病理确诊的DLBCL石蜡包埋组织及10例慢性扁桃体炎患者的新鲜扁桃体组织通过半巢式递降温度梯度PCR（touch down PCR）扩增，检测bcl-2／IgH基因重排，并对其产物进行克隆和序列分析。结果 通过一步法检测到bcl-2／IgH基因重排8例，其中DLBCL6例，新鲜扁桃体组织2例；进行第2次半巢式PCR时仅在DLBCL中发现5例阳性，新鲜扁桃体组织均阴性。将阳性产物在网上序列分析显示：一步法检测到的8例中有3例为假阳性，而半巢式PCR扩增出的5例均为bcl-2／IgH基因重排片段。3例假阳性的片段分别与人类第19号染色体BAC331191，LLNLR-245D11基因片段及1号染色体RP11-498P10基因片段同源。结论常用的检测bcl-2／IgH基因重排引物扩增结果存在一定假阳性，其机制可能是因为人类基因组中存在与常用引物同源性较高的序列。为研究设计的引物与传统的引物结合，进行半巢式PCR可以排除这种假阳性扩增，提高诊断的准确性。     

非霍奇金淋巴瘤患者骨髓单个核细胞BCL-2/IgH、IgH基因重排的检测

本研究检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者BCL-2/IgH基因主要断裂区重排、IgH基因重排,并探讨其对疾病的早期诊断、疗效评价等方面的意义。分别提取70例NHL(60例B-NHL、10例T-NHL)、7例淋巴结炎性肿大患者、20名正常人的骨髓单个核细胞DNA,通过PCR方法检测BCL-2/IgH、IgH基因重排,以凝胶电泳出现相应条带者为阳性,并与患者病理组织学检查进行比较,探讨此两种基因重排发生的相关因素,比较化疗后的动态变化。结果表明,①30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者(DLBCL)中,10例骨髓BCL-2/IgH重排阳性(33.3%),与30例其它B-NHL(除外滤泡淋巴瘤FL及DLBCL)阳性率(6.7%)、20名正常人阳性率(5%)比较均有显著性差异(p均<0.05)。所有T-NHL及7例淋巴结炎性肿大患者BCL-2/IgH重排均为阴性;②对8例BCL-2/IgH基因重排阳性患者进行动态监测,经2个疗程R-CHOP治疗后BCL-2/IgH基因重排明显减少,PCR半定量结果均值由初治0.59降至0.16(p<0.05),6个疗程R-CHOP治疗后PCR半定量均值为0,BCL-2/IgH基因重排完全转阴;③BCL-2/IgH基因重排阳性患者中LDH水平升高占81.8%,在重排阴性患者中占28.6%,两组间有统计学差异(p<0.05)。然而,BCL-2/IgH基因重排与淋巴瘤分期、是否伴有全身症状、β2-MG水平、骨髓侵犯、肝脏脾脏侵犯均无显著相关性;④20例DLBCL(均为初治)骨髓单个核细胞DNA检测显示,9例IgH基因重排阳性(45%);30例其它B-NHL(均为初治或复发患者,DLBCL除外)中14例IgH基因重排阳性(46.7%),其两组间无统计学差异性(p>0.05),但对照组20名正常人、10例T细胞淋巴瘤患者及7例淋巴结炎性肿大患者均为阴性;⑤对7例IgH基因重排阳性患者进行动态监测表明,1个疗程的R-CHOP治疗就能显著减少IgH基因重排,PCR半定量结果均值由初治0.42降至0.13(p<0.05),2个疗程后PCR半定量均值为0,重排完全消除;⑥IgH基因重排阳性患者中LDH水平升高占90%,在重排阴性患者中占30%,两组间有统计学差异(p<0.05);IgH基因重排与淋巴瘤分期、是否伴有全身症状、β2-MG水平、骨髓侵犯、肝脏脾脏侵犯均无显著相关性。结论:BCL-2/IgH、IgH基因重排均可作为B-NHL早期诊断及评价疗效的特异性指标,这两种重排均与LDH水平相关;BCL-2/IgH基因重排对DLBCL特异性较高。     

Bcl-2/IgH基因重排与非霍奇金淋巴瘤关系的研究进展

t(14;18)(q32;q21)基因重排为Bcl-2与免疫球蛋白重链IgH的基因整合,发生在约85%滤泡性淋巴瘤和30%弥漫大B细胞淋巴瘤患者中,可使Bcl-2基因高表达,从而导致瘤细胞过度增殖.对疾病的辅助诊断、微小残留病监测、疗效评价和评估预后等具有重要指导意义.本文就Bcl-2/IgH基因重排的分子特点、生物学功能及临床意义进行综述.     

半巢式聚合酶链反应检测外套细胞淋巴瘤bcl—1／IgH基因重排

外套细胞淋巴瘤 (ＭａｎｔｌｅＣｅｌｌＬｙｍｐｈｏｍａ,ＭＣＬ)是一类具有独特临床病理特征的非何杰金淋巴瘤 ,临床表现为病程进展快 ,对常规化疗耐受 ,但单纯依赖形态学特征进行诊断非常困难[1] 。因此 ,寻找一种敏感而特异的检测方法来明确诊断就显得尤为重要。我们利用半巢式聚合酶链反应 (ｓｅｍｉ ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ)来检测此病患者的ｂｃｌ 1/ＩｇＨ基因的重排 ,得到了较好的结果。一、材料与方法1 病例 :2 8例外套细胞淋巴瘤来自 1987～ 1990年德国病理协会下属的基尔淋巴结登记中心。以淋巴结的新鲜冰冻组织作为实验材料。诊断依…     

抗原受体基因重排克隆性检测在淋巴瘤诊断中的应用

本研究旨在探讨抗原受体基因重排克隆性检测在淋巴瘤诊断中的意义。收集分析了31例淋巴瘤组织,石蜡包埋切片,HE染色后观察形态,免疫组织化学分析免疫表型。采用BIOMED-2标准化试剂盒检测抗原受体基因重排克隆性。结果表明,31例病例中形态学及免疫组织化学分析疑似T细胞淋巴瘤12例,T细胞反应性增生1例,B细胞淋巴瘤16例,B细胞反应性增生2例。基因重排克隆性检测免疫球蛋白(Ig)阳性率94.44%(17/18),T细胞抗原受体(TCR)阳性率92.31%(12/13),2例阴性。最终12例确诊为T细胞淋巴瘤,B细胞淋巴瘤17例,反应性增生2例,阳性检出率为93%。结论:抗原受体重排基因克隆性分析是诊断淋巴瘤的一种有效辅助手段。     

免疫球蛋白基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义

摘要：目的?探讨骨髓及外周血免疫球蛋白(Ig)基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)诊断中的临床意义。方法?采用多重聚合酶链反应(mPCR)技术并根据BIOMED-2引物系统对103例B-NHL患者及20例反应性淋巴组织增生患者骨髓及外周血标本基因组DNA进行扩增，对PCR产物进行IgH、IgK基因重排的克隆性分析。结果?103例B-NHL患者中IgH和IgK单克隆重排阳性率分别为41.7%和50.5%，IgH和IgK联合检出率为64.1%。59例慢性淋巴细胞白血病(CLL)/小B细胞淋巴瘤(SLL)患者中共检出Ig基因单克隆重排49例(83.1%)；除CLL/SLL以外的其他44例B-NHL患者中有17例(38.6%)检出Ig基因单克隆重排，而在20例反应性淋巴组织增生患者中均未检出。70例B-NHL患者外周血标本Ig基因重排检出率与骨髓标本之间的差异无统计学意义(45.7% vs 54.3%，χ2=1.03，P=0.31)；26例CLL/SLL患者外周血Ig基因重排率与骨髓标本之间的差异无统计学意义(69.2% vs 80.8%，χ2=0.92，P=0.34)；44例非CLL/SLL患者外周血Ig基因重排率与骨髓标本之间的差异亦无统计学意义(31.8% vs 38.6%，χ2=0.45，P=0.50)。结论?Ig基因重排可用于B-NHL的临床诊断，外周血与骨髓Ig基因重排检测具有同等的诊断价值。     

骨淋巴瘤诊断——附距骨B细胞源性淋巴瘤1例

原发于骨骼的淋巴类肿瘤不多见，仅占恶性骨肿瘤的5％，近年国内有关淋巴类骨肿瘤的报道较少，未见发生于距骨者，现报告经手术病理证实的距骨B细胞源性淋巴瘤1例。     

非霍奇金侵袭性B细胞淋巴瘤治疗进展

非霍奇金侵袭性B细胞淋巴瘤以弥漫大B亚型占绝对多数,利妥昔单抗的应用使得弥漫大B的预后得到很大的提高。而其他类型,如套细胞淋巴瘤(MCL)、Burkitt淋巴瘤(BL)、原发纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBL)、原发睾丸淋巴瘤(PTL)等肿瘤细胞均表达CD20( ),免疫化疗为这些患者提供了一种新型的治疗手段。     

Usefulness of long‐distance inverse polymerase chain reaction for molecular detection of 14q32 translocation in a clinical setting

All mature B‐cell leukaemias and lymphomas have a clonal Ig gene recombination, and half of them have a reciprocal chromosomal translocation involving the 14q32 locus. The 14q32 translocation partners are variable, such as BCL‐2, BCL‐1 and BCL‐6, thus accounting for the difficulty in molecular detection by the current genomic polymerase chain reaction (PCR) method. To identify B‐cell clones efficiently with an Ig gene rearrangement and reciprocal inter‐chromosomal translocation, we verified the usefulness, in a practical laboratory setting, of our modified long‐distance inverse (LDI) PCR method for detecting IgH gene rearrangements involving inter‐ and intra‐chromosomal segments. The total run time of this LDI PCR method was 5.5?h. Using 24 samples of mature B‐cell leukaemias and lymphomas, the modified LDI PCR gave clonally rearranged amplicons in 83?% (20/24) of cases. Direct sequencing results of the amplicons revealed inter‐chromosomal translocations in 5 cases (25?%) and intra‐chromosomal rearrangements in the remaining 15 cases (75?%). The partners of the inter‐chromosomal translocation consisted of the 11q13.3 segment containing a partial BCL1 sequence in 3 cases; 18q21.3 segment containing a partial BCL2 sequence in one case; and a segment of 7q11.2 in one case. We present an LDI PCR‐based methodology for the efficient identification of 14q32 translocations, with modifications to reduce the total run time to within one day.     

以呼吸道病变首诊的弥漫大B细胞淋巴瘤的诊治

弥漫大B细胞淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤的主要类型,原发于淋巴结外的器官和组织中,最常见部位为胃肠道,而以呼吸道症状首诊的相关报道较少。个案报道中以呼吸道症状首诊的弥漫大B细胞淋巴瘤多是肺部及纵膈原发的淋巴瘤。现报道1例以呼吸道病变首诊的弥漫大B淋巴瘤患者,并结合文献复习进行综合分析,旨在提高对弥漫大B细胞淋巴瘤的认识,从而避免延误治疗。     

多发性骨髓瘤患者免疫球蛋白重链基因重排的检测及意义

目的 探讨免疫球蛋白重链（IgH）基因重排在多发性骨髓瘤（MM）诊治中的应用。方法 采用半巢式PCR技术,分别用MM患者的IgH基因的CDR2和CDR3区的两组引物,对61份MM患者的骨髓和外周血单个核细胞进行扩增。结果 27份骨髓标本中,IgH基因重排Fr2A阳性率为70．4％（19／27）,34份外周血标本阳性率58．8％（20／34）。骨髓标本的Fr2A阳性率略高于外周血标本,而Fr3A的阳性率两者无明显差异。MM患者的IgH基因重排与Ig型别,临床分期及浆细胞数有关。IgG和IgH基因重排阳性率高于IgA型及轻链型;Ⅲ,期患者IgH基因重排阳性率高于Ⅰ,Ⅱ期患者;浆细胞数大于5％时,IgH基因重排阳性率略高;7例达临床完全缓解的患者中,仅有1例IgH基因重排Fr2A,Fr3A均转为阴性。结论 PCR技术检测MM患者IgH基因重排可作为诊断,疗效观察,预后判断及微小残留病监测的参考指标之一。     

MTDH基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨异黏蛋白(MTDH)基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭能力的影响。方法在B淋巴瘤细胞Raji中转染MTDH siRNA和siRNA对照,分别命名为MTDH siRNA组和siRNA对照组,将没有转染的细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blot方法检测细胞中MTDH表达水平,MTT方法检测细胞增殖和黏附能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白水平。结果MTDH siRNA细胞中MTDH mRNA和蛋白水平均明显低于对照组和siRNA对照组(P<0.05)。与对照组和siRNA对照组比较,MTDH siRNA细胞增殖和黏附能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力也降低,细胞中Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTDH基因沉默下调B淋巴瘤细胞增殖能力,抑制B淋巴瘤细胞侵袭和迁移。     

外周血淋巴细胞和单核细胞比值对预测弥漫大B细胞淋巴瘤复发的研究

目的 研究外周血中淋巴细胞和单核细胞比值（LMR）与弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL）患者临床特征的关系,判断预后及预测复发情况。方法 回顾性收集初治126例DLBCL患者的临床资料,应用统计学方法分析其与临床特征、预后、复发的相关关系,探讨其预测复发的价值。结果 低LMR（＜2.25）组患者常伴随B症状、国际预后指数(IPI)评分增高、临床分期较晚、β2 微球蛋白水平升高（P<0.05）。126例患者有43例（37.7%）复发,中位复发时间12（2~70）个月。多因素分析（OR=2.586,P=0.028）提示随访时低LMR与复发显著相关,低LMR比高LMR复发风险高,并且低LMR与较短总生存时间（OS）及无病生存时间（PFS）有关(OS:P=0.015;PFS:P=0.006）。结论 这项研究表明,LMR＜2.25提示不良的预后,随诊时较低的LMR可以用作预测DLBCL患者复发的指标。     

克隆性基因重排检测在NHL诊断中的意义

目的探明PCR克隆性基因重排检测（基因诊断）在NHL诊断中的意义。方法应用病理组织学、免疫组化、基因诊断方法三结合方案分析178例与会诊31例NHL诊断的作用。结果分析结果显示：以病理组织学为主，辅以免疫组化确诊NHL114例。疑难、早期、微量标本共64例与会诊31例均作了基因诊断。总的阳性率为61．4％（58／95）。其中IgH阳性13例（22．4％），TCRβ芝邱阳性41例（70．6％），双克隆性4例（7％）。本室基因诊断送检率为35．8％（64／178），总确诊率为93．7％（60／64）。结论本文分析证明基因诊断是NHL三结合诊断中确诊疑难病例及分型的最有效的方法。