IDO和FoxP3表达与宫颈癌发生和病理进程的相关性

目的 探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和FoxP3表达与宫颈癌发生和病理进程的相关性.方法 随机选取2002-2007年在仁济医院妇产科手术治疗的患者标本,包括宫颈上皮内瘤变(CIN)I～Ⅱ级20例(CIN I～Ⅱ级组),CINⅢ级20例(CINⅢ级组),宫颈癌60例(宫颈癌组),因子宫肌瘤接受全子宫切除术且术后病理明确为子宫肌瘤的标本20例(对照组),采用免疫组织化学染色检测IDO、FoxP3在CIN及宫颈癌原发灶中的表达.随访宫颈癌组标本中IDO和FoxP3表达与临床病理学参数及患者生存状态的相关性.结果 宫颈癌组标本的IDO和FoxP3阳性表达明显高于对照组和CIN组(P＜0.01).在宫颈癌组,IDO的阳性表达与宫颈癌的FIGO分期和组织学分级均相关(P＜0.05),而FoxP3的阳性表达与FIGO分期相关(P＜0.05);IDO和FoxP3在复发与死亡组中的阳性表达率高于生存组,但两者间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 宫颈癌局部lDO和FoxP3的表达升高与肿瘤的发生和发展关系密切,两者既可作为宫颈癌的筛查、术前疾病评估和术后随访的辅助指标,也为临床靶向干预提供了理论依据.     

IDO基因稳定转染HepG2细胞系的建立

目的建立稳定转染IDO基因的HepG2细胞系,为进一步研究IDO基因在肝癌免疫逃逸中的作用奠定基础。方法应用脂质体将真核细胞表达质粒pcDNA3.1-IDO和空载质粒pcDNA3.1转染入HepG2细胞,经G418进行筛选后,挑取单克隆进行培养,用反转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法验证获得的表达细胞株。结果经RT-PCR和Western blotting检测证实空质粒转染组和空白对照组HepG2细胞无IDO基因及蛋白的表达,而重组质粒组的HepG2细胞表达IDO基因和蛋白。结论 pcDNA3.1-IDO质粒体外稳定转染人肝癌细胞HepG2,可以有效地使IDO基因在RNA水平和蛋白水平均表达,成功建立了稳定转染基因IDO的HepG2细胞系,为进一步探讨该基因的功能奠定了一定基础。     

IDO对肿瘤免疫耐受及肿瘤血管的影响

吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)作为一种经典的免疫负调控因子,在器官移植、肿瘤免疫逃逸等免疫调节中起着重要作用。IDO具有调节血管紧张度的功能,对肿瘤血管生成有一定的影响。IDO在实体器官异体移植的局部血管内皮细胞中表达,并且能诱导免疫细胞活化,促进肿瘤血管生成,而在肿瘤微环境中血管作为重要的运输通道对肿瘤的生长起着至关重要的作用。本文对肿瘤生长过程中IDO与肿瘤血管生成之间的关系作综述。 更多还原     

IDO基因转染小鼠树突状细胞体外诱导Treg细胞增殖的研究

目的调节性T细胞(Treg)在肿瘤局部免疫耐受中发挥了重要作用,但其产生机制尚不清楚。本实验通过将吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)基因转染小鼠树突状细胞(DC),体外研究对Treg细胞的诱导增殖作用,为肺癌免疫耐受产生机制研究提供新的依据。方法采用慢病毒转染技术,将含人全长IDO基因转染到小鼠DC细胞,G418筛选获得IDO-DC细胞,同时设置空白对照组(DC细胞)及空质粒转染组(EGFP-DC细胞),将3种细胞分别与小鼠T淋巴细胞混合培养,利用流式细胞技术分析3种细胞对Treg细胞的诱导增殖作用。结果 IDO基因成功转染到小鼠DC细胞,与小鼠T淋巴细胞共培养后,Treg细胞增殖明显,和EGFP-DC细胞(7.5%vs 3.6%,P<0.05)及DC细胞(7.5%vs 3.1%,P<0.05)相比差异显著。结论 IDO基因转染小鼠DC细胞在体外能明显增强Treg细胞的增殖,为肺癌局部免疫耐受机制研究提供了新的实验依据。     

IFN-γ诱导胰腺癌细胞IDO表达及活性的变化

目的：观察胰腺癌细胞株Panc02在不同浓度γ干扰素（IFN-γ）作用下吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）表达及活性的变化。方法：分别用不同浓度的IFN-γ诱导刺激胰腺癌细胞株Panc02,检测各组Panc02中IDO表达水平的变化,高压液相测定培养液上清中犬尿氨酸的浓度来评价IDO的分子活性。结果：不同浓度IFN-γ诱导Panc02的IDO蛋白表达量分别为0.401±0.116、0.628±0.109、0.728±0.146、1.088±0.183,不同浓度组间差异有统计学意义（P〈0.05）;不同浓度IFN-γ刺激Panc02后细胞培养液上清中犬尿氨酸的浓度分别为5.609±1.123、6.279±0.717、9.152±2.920、11.866±1.596,不同浓度组间差异有统计学意义（P〈0.05）。而且Panc02中的IDO蛋白的相对表达量随着IFN-γ作用浓度的增大逐渐增高,同时活性增强。结论：胰腺癌细胞株Panc02本身表达IDO,在IFN-γ诱导下表达上调且活性增强,这可能是引起胰腺癌免疫逃逸的重要机制之一。     

IDO和FoxP3表达与宫颈癌发生和病理进程的相关性

目的探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和FoxP3表达与宫颈癌发生和病理进程的相关性。方法随机选取2002—2007年在仁济医院妇产科手术治疗的患者标本,包括宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ～Ⅱ级20例(CINⅠ～Ⅱ级组),CINⅢ级20例(CINⅢ级组),宫颈癌60例(宫颈癌组),因子宫肌瘤接受全子宫切除术且术后病理明确为子宫肌瘤的标本20例(对照组),采用免疫组织化学染色检测IDO、FoxP3在CIN及宫颈癌原发灶中的表达。随访宫颈癌组标本中IDO和FoxP3表达与临床病理学参数及患者生存状态的相关性。结果宫颈癌组标本的IDO和FoxP3阳性表达明显高于对照组和CIN组(P<0.01)。在宫颈癌组,IDO的阳性表达与宫颈癌的FIGO分期和组织学分级均相关(P<0.05),而FoxP3的阳性表达与FIGO分期相关(P<0.05);IDO和FoxP3在复发与死亡组中的阳性表达率高于生存组,但两者间差异无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈癌局部IDO和FoxP3的表达升高与肿瘤的发生和发展关系密切,两者既可作为宫颈癌的筛查、术前疾病评估和术后随访的辅助指标,也为临床靶向干预提供了理论依据。     

IDO基因转染小鼠树突状细胞抑制混合淋巴细胞反应

目的：观察吲哚胺2，3双加氧酶（IDO）基因转染的小鼠树突状细胞（DC）功能的改变。方法：分离培养小鼠DC，以IDO重组腺病毒转染培养的DC，混合淋巴细胞反应检测转染细胞的功能。结果与结论：与对照组相比转染细胞能明显地抑制混合淋巴细胞反应。     

哈萨克族食管癌患者外周血IDO检测的临床意义

目的探讨哈萨克族食管癌患者外周血中吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)的表达水平及其与食管癌临床病理特征的关系。方法用RT-PCR法检测50例哈萨克族食管癌患者治疗前外周血、20例正常人外周血中IDOmRNA的表达情况。结果 IDOmRNA在食管癌患者外周血中的表达为(1.836±0.583)×103,显著高于正常人的(0.145±0.024)×103(P<0.05);食管癌外周血中IDOmRNA的表达与肿瘤的临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05);年龄、性别以及肿瘤的生长部位与IDOmRNA的表达无关(P>0.05)。结论 IDOmRNA在新疆哈萨克族食管癌患者外周血中存在高表达,其表达程度与食管癌的发生,发展和转移有着密切的关系。     

IDO启动序列GAS和ISRE荧光素酶报告基因载体构建及其活性检测

目的构建pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS两个荧光素酶报告基因载体,并对其进行生物活性鉴定。方法通过人工合成调控吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）表达的启动序列ISRE4（4个串联的ISRE序列）和GAS7（7个串联的GAS序列）,与pGL3-Enhancer连接成重组体pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7,通过转化扩增,筛选出阳性克隆,并通过酶切、测序及生物学活性检测鉴定构建好的荧光素酶报告基因载体。结果成功地构建了pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7两个荧光素酶报告基因载体,在IFN-γ的诱导下,能启动细胞内荧光素酶的表达。结论 pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7的荧光素酶报告基因载体的成功构建为研究IDO蛋白的表达调控机制和以IDO为靶标的抗肿瘤免疫耐受药物快速高通量的筛选提供了重要的研究工具。     

NK4基因转染对裸鼠人卵巢癌种植瘤生长的影响

目的 NK4不仅具有肝细胞生长因子(HGF)拮抗剂的作用,而且具有抗血管生成作用。该实验通过在人卵巢癌细胞SKOV-3中转染NK4cDNA片段,研究NK4在裸鼠体内对人卵巢癌的治疗作用。方法 NK4和荧光霉素(luciferase)表达质粒分别转染人卵巢癌细胞SKOV-3,稳定转染后,得到SKOV-3/NK4细胞和对照(SKOV-3/LUC)细胞。检测NK4在细胞培养基中的表达情况以及经不同培养基(SKOV-3、SKOV-3/LUC和SKOV-3/NK4培养基上清)培养后SKOV-3细胞中c-Met和磷酸化-c-Met的表达,检测三组肿瘤细胞(SKOV-3、SKOV-3/LUC和SKOV-3/NK4)体外生长速度,建立裸鼠皮下肿瘤生长模型,比较三组肿瘤细胞在裸鼠体内的生长速度。结果在SKOV-3/NK4培养基中有NK4蛋白表达,对照(SKOV-3和SKOV-3/LUC)细胞中无表达。磷酸化-c-Met在SKOV-3/NK4培养基培养的SKOV-3细胞中被抑制,而在对照(SKOV-3和SKOV-3/LUC)细胞培养基培养的SKOV-3细胞中正常表达。c-Met表达在各组无差别。三种细胞体外生长曲线差异无显著性(P>0.05)。一周后SKOV-3/NK4细胞接种的肿瘤生长缓慢,SKOV-3和SKOV-3/LUC细胞接种的肿瘤生长迅速,与SKOV-3/NK4组相比有统计学意义(P<0.05)。结论 NK4蛋白在SKOV-3/NK4细胞培养基中大量分泌,NK4能抑制人卵巢癌细胞c-Met受体磷酸化。在裸鼠体内NK4能抑制卵巢癌细胞生长,NK4可作为卵巢癌基因治疗的新方法。     

BALB/c裸小鼠人宫颈癌模型的建立

目的采用在裸鼠腹部皮下移植人原代宫颈癌组织的方法,研究其在裸鼠体内的成瘤性,并初步探讨此动物模型腹部肿瘤的生物学特性。方法将人宫颈癌组织接种于裸鼠腹部皮下建立人宫颈癌裸鼠模型,观察荷瘤鼠成瘤、一般特性和移植瘤生长情况。80d后处死裸鼠,取肿瘤块做病理切片;用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测肿瘤组织、外周血和肝、脾等脏器HPV DNA表达情况。结果接种后第42天在接种部位可见结节,第80天后肿瘤块平均表面积为(50.0±5.1)mm2,肿瘤移植平均成功率为90.5%。移植瘤生长以局部浸润为主,未见转移瘤。组织学检查结果示所有移植瘤与种植前肿瘤组织病理检查结果一致,HPV DNA呈阳性,且为高危型人乳头瘤病毒HPV16型阳性。而外周血与肝、脾等脏器HPV DNA呈阴性。结论本研究所建立裸鼠人宫颈癌组织模型成瘤率较高,操作简便,可保持人宫颈癌生物学特性,为进一步研究宫颈癌的发病机制提供了重要的科研工具。     

6,8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素抑制人宫颈癌裸鼠移植瘤生长

目的:研究6,8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素(dFMAChR)的抗宫颈癌作用。方法:体外培养人宫颈癌(HeLa)细胞,采用MTT比色法测定不同浓度dFMAChR作用72 h对HeLa细胞增殖相对抑制率;建立人宫颈癌裸鼠移植瘤模型,评价dFMAChR在体人宫颈癌治疗的有效性。结果:MTT法测定结果显示,dFMAChR抑制体外培养HeLa细胞生长,呈浓度依赖性。人宫颈癌裸鼠移植瘤模型治疗实验结果表明,dFMAChR对人宫颈癌裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用,呈剂量和时间依赖性。结论:dFMAChR能抑制人宫颈癌裸鼠移植瘤生长。     

hTR-siRNA腺病毒对裸鼠人宫颈癌移植瘤的治疗作用

目的 探讨人端粒酶RNA(hTR)-siRNA腺病毒对裸鼠人宫颈癌移植瘤的治疗作用及其机制.方法 将HeLa细胞注射到裸鼠的右腋皮下建立肿瘤模型,27 d后将荷瘤裸鼠随机分为4组,采用瘤体内多点注射方式,分别向各组荷瘤鼠注射0.1 mL的DMEM、Ad-NT-siRNA(1013 pfu/L)、Ad-hTR-siRNA (1013 pfu/L)或顺铂(1.20 g/L), 以后每隔3 d注射1次, 连续15 d.观察注射腺病毒后移植瘤的体积变化、毒副作用.治疗结束后间隔7 d处死动物,剥离出肿瘤组织称重.切取瘤组织做TUNEL染色测定组织的凋亡指数.结果 将HeLa细胞移植到裸鼠皮下,成瘤率为100%.与Ad-NT-siRNA处理组相比,Ad-hTR-siRNA处理组的裸鼠移植瘤的体积和质量分别降低45.48%和34.68%,TUNEL分析显示凋亡细胞量约11.8%;但是Ad-hTR-siRNA的抗肿瘤作用不及顺铂.结论 hTR-siRNA腺病毒能够明显抑制裸鼠人宫颈癌移植瘤的生长,其抗肿瘤机制与诱导肿瘤细胞凋亡、坏死有关.     

天丝饮的抗抑郁作用及其对IDO的调节

目的 研究天丝饮的抗抑郁作用及其对色氨酸(TRP)、犬尿氨酸(KYN)途径关键代谢酶吲哚胺2,3过氧化酶(IDO)的影响.方法 使用脂多糖(LPS)腹腔注射1 mg/kg造成小鼠抑郁模型,采用Noldus EthoVision XT9系统采集分析小鼠强迫游泳不动时间,采用HPLC-MS/MS技术检测脑组织色氨酸、犬尿氨酸含量,实时荧光定量PCR检测脑组织中IDO、NF-κB的mRNA表达水平.结果 LPS注射4h后可以引起模型组小鼠不动时间延长(P＜0.05),脑组织IDO活性增高,IDO和NF-κB mRNA表达增多(P＜0.01).天丝饮能缩短小鼠不动时间(P＜0.05),抑制IDO活性及IDO、NF-KB mRNA表达数量(P＜0.01).结论 天丝饮具有抗抑郁药物样作用,这一作用与抑制炎症因子诱导的IDO激活有关,天丝饮通过抑制NF-κB对IDO的直接和间接诱导作用而调节了IDO的活性和表达.     

二烯丙基二硫下调PCNA抑制人宫颈癌移植瘤生长

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)对宫颈癌HeLa细胞裸鼠致瘤的影响.方法 裸鼠皮下注入人宫颈癌HeLa细胞建立人宫颈癌裸鼠异种移植模型,观察DADS对宫颈癌移植瘤在裸鼠体内生长情况的影响,HE染色观察DADS对移植瘤组织形态的影响,免疫细胞化学检测DADS对移植瘤组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果 DADS可明显抑制人宫颈癌HeLa细胞移植瘤的生长,具有杀伤人宫颈癌裸鼠移植瘤细胞作用.PCNA蛋白在人宫颈癌移植瘤组织中高表达,DADS作用后PCNA蛋白表达明显下调.结论 DADS可明显降低人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长,其机制可能与抑制肿瘤细胞增殖的PCNA蛋白表达有关.     

热化疗治疗荷人卵巢癌裸鼠的疗效研究

应用热化疗（即肿瘤局部水浴44℃，30min，同时腹腔内注射CDDP3mg／kg）对移植于裸鼠的人卵巢癌进行实验研究。16只裸鼠分为热疗组、化疗组、热化疗组及对照组。结果热疗组TRW/CRW的最小值为3.2％，化疗组的TRW／CRW的的最小值为4.5％，两组相比差异无显著性意义（P＞0.05）。热化疗组TRW／CRW的最小值仅为0.165％，与其它各组相比差异有极显著性意义（P＜0.01）。热化疗组4只裸鼠中3只裸鼠的癌组织内可见广泛变性、坏死，但在纤维化的组织中仍可见少数存活的癌细胞，另一只裸鼠的瘤灶在治疗10d后脱落，基底组织病理检查未见癌细胞，其它各组无变化。上述结果显示，热化疗较单一热疗或化疗能明显抑制肿瘤生长。     

博来霉素A6对裸鼠移植的人体大肠癌的抑制作用

在裸鼠移植人结肠癌HT-29和人盲肠癌Hce-8693细胞,使用裸鼠可耐受的博来霉素A_6剂量,结果博来霉素A_6对肿瘤生长有明显的抑制作用,抑制率达90％左右。与等毒性剂量的5-氟脲嘧啶和丝裂霉素C比较,博来霉素A_6不仅对裸鼠移植的人结肠癌HT-29生长的抑制作用明显较强,且残存的非坏死肿瘤组织也较少。提示博来霉素A_6是一种对大肠癌有较强抗肿瘤活性的药物。     

内皮性吲哚胺2,3-过氧化酶抑制心脏移植后冠脉血管病的发生

目的 探讨内源性吲哚胺2,3-过氧化酶对小鼠心脏移植后移植物发生冠脉血管病变的影响.方法 分别利用IDO-/-、高表达IDO以及野生型C57BL/6小鼠作为供体,bm12小鼠作为受体,建立小鼠腹部心脏移植模型.分别测量心脏纤维化面积、冠脉血管狭窄程度以及细胞增殖指数.结果 IDO是小鼠心脏移植后自身保护机制,IDO-/-供心纤维化面积大大提高.相反,与对照组相比,SB-hIDO治疗的实验组可明显缓解冠脉血管狭窄程度.结论 血管内皮源性吲哚胺2,3-过氧化酶对心脏移植后纤维化和冠脉血管病变发生的有明显的抑制作用.