构建P16慢病毒载体永生化心肌干细胞的探讨

目的：构建P16慢病毒载体,为修复坏死心肌干细胞提供理论基础。方法构建 pLVX p16ink4a ZsGreen、pLVX P16INK4a慢病毒载体,将P16目的基因转导入目标细胞。利用倒置免疫荧光显微镜观察携带绿色荧光蛋白的 pLVX p16ink4a ZsGreen阳性转导细胞的变化,并通过β半乳糖苷酶染色鉴定观察 pLVX P16INK4a 转导阳性细胞即衰老细胞的变化。利用Western blotting法测定P16目的基因转导成功后蛋白变化水平。结果携带绿色荧光蛋白的 pLVX P16ink4a ZsGreen阳性转导细胞传代增殖受到抑制,β半乳糖苷酶染色鉴定观察 pLVX P16INK4a转导阳性细胞即衰老细胞增殖受到抑制,上述两种阳性转导细胞在细胞培养传代过程中被稀释。Western blotting法测定p16INK4a蛋白水平也存在稀释变化。结论构建P16慢病毒载体转导目标细胞传代培养过程中,目的基因P16在细胞传代增殖过程中存在抑制作用,并可导致转导阳性细胞稀释。     

睾酮对衰老心肌细胞及细胞周期调控因子的作用

目的 探讨不同剂量睾酮对心肌细胞衰老的干预作用及其可能机制.方法 用1 μmol/L、 100 nmol/L、10 nmol/L三种剂量睾酮干预自然衰老的小鼠心肌细胞,应用流式细胞仪检测各组细胞周期分布,用RT-PCR及Western印迹检测各组细胞p16INK4a、cyclinD1 mRNA、蛋白及去磷酸化RB蛋白的表达.结果 与衰老心肌细胞相比,1 μmol/L、100 nmol/L、10 nmol/L睾酮干预细胞G0/G1期比例明显降低(P＜0.05),这一作用具有剂量依赖性.睾酮干预可上调cyclinD1mRNA及蛋白表达,下调p16INK4a mRNA及蛋白表达,并使去磷酸化RB蛋白表达下降(P＜0.05),而这些作用均可被雄激素受体阻断剂而不被雌激素受体阻断剂所阻断(P＜0.05).结论 睾酮可剂量依赖性的抑制小鼠心肌细胞衰老,这一作用部分是通过睾酮上调cyclinD1表达,下调p16INK4a及去磷酸化RB蛋白表达而实现的.     

老化的临床客观指标

从不同角度衡量老化有不同标准,各指标之间存在着错综复杂的关系,未必都平行。目前评价人类老化程度的指标尚未规范化,为便于研究和应用,仅将临床常用的老化客观指标综述如下。 主要脏器的生理功能 一、脑功能 (一)智力测验 人们的智能随着衰老逐渐降低,有人认为20岁左右智能达到最高峰,30岁以后开始降低,50岁时约降低10％(16岁的程度),60     

选择性地杀死衰老细胞延缓老年小鼠的健康问题

<正>研究者选择性地杀死小鼠趋于老化的细胞,能够延缓年龄-相关的健康的问题。提示细胞的衰老会损伤周围的组织。希望将来能研究出抗老化的治疗。未参加此项研究的北卡路林那大学的老年及癌症专家Norman Sharples称,研究者们早就意识到衰老细胞在老化时健康     

清除P66基因可减少糖尿病导致的干细胞老化和心力衰竭的发生

糖尿病导致心肌失代偿的病理目前尚不清楚,糖尿病可增强氧化作用,氧的毒力可改变心肌血管内皮细胞(CPC)的增生障碍和心肌结构的改变,从而使未成熟心肌细胞老化和心力衰竭发生。研究表明在胰岛素依赖型糖尿病患者中活性氧的产生可导致端粒缩短,表达衰老相关蛋白P53P16(NK4a),凋亡的血管内皮细胞损伤了残存心肌的生长。然而消除P66基因通过干预心肌衰老基因的表型和糖尿病心力衰竭的发展,而使血管内皮细胞功能正常,活性氧可诱发3种分子活动:活性氧低水平可激活细胞生长,中等水平可触发细胞凋亡,高水平可导致细胞坏死,在P66野生型中占优势,…     

miR-146a调控人脐静脉内皮细胞的衰老及机制

目的探究miR-146a在人脐静脉内皮细胞衰老中的调节作用,并初步探究其机制。方法以人脐静脉内皮ECV-304细胞为研究对象,连续传代建立ECV-304细胞复制性衰老模型,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)法检测不同代次(P2、P6、P9、P12、P15代)细胞中衰老细胞比例,实时定量PCR法检测不同代次(P2、P6、P9、P12、P15代)细胞中miR-146a表达。靶基因预测软件预测miR-146a靶基因。细胞转染建立miR-146a表达上调的P12代细胞(Pre-miR146a组)和miR-146a表达下调的P12代细胞(Anti-miR146a组),并建立相应对照组,SA-β-gal法检测衰老细胞比例,Western blot检测NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白表达。结果 P6、P9、P12和P15代细胞的衰老细胞比例明显高于P2代细胞(P0.05),miR-146a表达则明显低于P2代细胞(P0.05)。靶基因预测miR-146a的靶基因为NOX4;转染后,Pre-miR146a组衰老细胞比例明显低于对照组(P0.05),Anti-miR146a组衰老细胞比例明显高于对照组(P0.05); Pre-miR146a组NOX4蛋白表达明显低于对照组(P0.05),Anti-miR146a组NOX4蛋白表达明显高于对照组(P0.05)。结论 miR-146a在衰老的人脐静脉内皮细胞ECV-304中表达下降,上调miR-146a表达能够抑制ECV-304衰老,其机制与调节NOX表达有关。     

血吸虫病肝纤维化小鼠IL-22表达及肝星状细胞衰老的意义

目的 目的 观察血吸虫病肝纤维化小鼠模型中白介素22 （IL?22） 及其受体 （IL?22R1） 的表达状况, 并对与IL?22相关的 肝星状细胞 （HSC） 衰老机制进行探讨。方法 方法 建立血吸虫病肝纤维化小鼠模型, 按感染后第4、 6、 8周及12周时间点取材, 行生化功能检测、 HE染色和Masson染色、 β?半乳糖苷酶染色检测HSC衰老状况、 ELISA检测肝组织中IL?22蛋白水平、 荧光 定量PCR检测肝组织中IL?22及IL?22R1mRNA表达水平, 另设未感染小鼠为对照组。结果 结果 感染后第8、 12周时血清中丙 氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶水平较对照组明显增高 （P均＜0.05）。肝组织中IL?22蛋白于感染后第4、 6周时表 达较对照组明显增加 （P均＜0.05）, 感染后第8周时, 其表达水平较前下降, 第12周时仍维持在较低水平, 较第4、 6周差异 均有统计学意义 （P均＜0.01）。IL?22mRNA动态变化与蛋白水平一致, 感染后第4周时表达升高, 第6周时达高峰, 与对照 组比较差异均有统计学意义 （P均＜0.05）, 第8、 12周表达持续下降, 较第 6周差异均有统计学意义 （P均＜0.05）。IL? 22R1mRNA表达随病程进展逐渐升高, 于12周时达高峰, 较对照组、 第6周差异均有统计学意义 （P均＜0.05）。检测发现 HSC衰老, 随着IL?22在晚期病程中下降, HSC衰老减少。结论 结论 IL?22及其受体参与血吸虫病肝纤维化病程进展, 早期作 为炎症因子之一, 参与炎症反应; 至肝纤维化病程后期, 可部分通过诱导HSC衰老, 限制肝纤维化发展。     

睾酮对亚急性衰老小鼠下丘脑的影响及其机制

目的观察低刘量睾酮对小鼠下丘脑衰老的影响及其可能的调控机制。方法将24只健康雄性C57小鼠随机分为3组:D-半乳糖+睾酮治疗组(治疗组)、D-半乳糖组和正常对照组,每组8只。用药5个月后分离小鼠下丘脑组织,制备石蜡切片,测定小鼠下丘脑衰老相关性β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色情况,用免疫组织化学法检测p16~(INK4a)蛋白的表达水平。结果与正常对照组比较,D-半乳糖组小鼠体重降低(P<0.05),下丘脑SA-β-Gal染色阳性细胞率和p16~(INK4a)蛋白阳性细胞率明显升高(P<0.05);与D-半乳糖组比较,治疗组小鼠体重增加(P<0.05).下丘脑SA-β-Gal染色阳性细胞率和p16~(INK4a)蛋白阳性细胞率明显降低(P<0.05)。结论低剂量睾酮可能通过改变p16~(INK4a)的表达而发挥抗下丘脑细胞衰老的作用。     

通补延衰方对衰老模型影响的形态学观察

目的 观察通补延衰主对衰老小鼠模型肝和胸腺两组织延缓衰老的作用。方法 用Ｄ－半乳糖小鼠颈部皮下注射复制衰老小鼠模型,同时灌肠通补延衰方,１个月后取部分肝、胸腺组织用ＨＥ染色光镜和艇电镜进行观察。结果 通补延衰方能预防和治疗衰老模型小鼠肝、胸腺两组织的老化。结论 通补延衰方具有延缓衰老小鼠的作用。     

细胞衰老机制及药物干预作用研究进展

<正>机体衰老与细胞衰老密切相关,机体的衰老是指与年龄相关的内在生理功能下降,细胞衰老则是与时间相关的细胞固有功能(如细胞内、细胞间通讯运输和细胞分裂复制等)丧失,以致衰老的细胞死亡或被其他细胞清除^[1]。细胞衰老是生命在细胞水平所必经的一种渐进性过程,细胞的衰老在一定程度上反映了个体生命的衰老。因此,在完善各项社会保障制度的同时,人们希望通过细胞水平的研究,从干预细胞的衰老入手,延缓个体衰老。近年来,随着相关研究的深入,     

Valsartan延缓血管内皮细胞衰老及p16INK4a表达变化的研究

目的 探讨Valsartan对血管内皮细胞衰老与p16INK4a表达变化的影响,为寻求廷缓内皮细胞衰老途径提供理论和实验依据.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,子血管紧张素Ⅱ及Valsartan干预,实验分为空白对照组、血管紧张素Ⅱ诱导组及Valsartan组,采用β-半乳糖苷酶(β-gal)染色鉴定细胞衰老;流式细胞术分析细胞周期变化;免疫细胞化学染色法、Western blot分析各组细胞p16INK4a蛋白的表达.结果 与对照组比较,血管紧张素Ⅱ诱导组β-半乳糖苷酶阳性染色率显著增多81.24％±6.46％,细胞周期停滞于G0-G1(88.36％±6.45％),p16INK4a 蛋白表达水平上调(P＜0.05);予以Valsartan干预后,β-半乳糖苷酶阳性细胞染色率减少,G0-G1细胞减少,p16INK4a蛋白表达水平下调(P＜0.05).结论 血管内皮细胞衰老分子机制可能通过下调p16INK4a的表达,使细胞周期停滞于G1期有关,Valsartan对血管内皮细胞衰老有一定保护作用,可能通过调控p16INK4a的表达发挥其延缓3血管内皮细胞衰老的作用.     

凝结芽孢杆菌TBC169株对亚急性衰老模型小鼠的抗衰老作用

目的 探讨凝结芽孢杆菌对亚急性衰老模型小鼠的抗衰老作用.方法 用D-半乳糖复制小鼠亚急性衰老模型,监测小鼠脑、心、肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)的水平并观察高、低剂量的凝结芽孢杆菌对这些指标的影响.结果 低剂量凝结芽孢杆菌能显著改善衰老模型小鼠脑组织SOD、 GSH-Px活性(P＜0.05),极显著改善肝组织GSH-Px活性、心脏组织SOD活性及降低心脏组织MDA水平(P＜0.01);高剂量凝结芽孢杆菌可显著降低肝组织MDA水平(P＜0.05)和极显著改善心脏组织GSH-Px活性(P＜0.01).结论 凝结芽孢杆菌TBC169株可诱导抗衰老酶合成,减少产生或加速清除自由基,起到延缓衰老作用.     

蒙药索吉德-11对催老小鼠睾丸功能的影响

目的 研究蒙药索吉德-11对催老小鼠睾丸功能的影响.方法 1月龄的ICR小鼠分为4组,正常对照组和衰老模型组用生理盐水灌胃,给药组用索吉德-11分别以每日0.2、0.1 g/kg的剂量灌胃,连续灌胃6W后检测小鼠血清睾酮含量、睾丸组织丙二醛(MDA)含量、超氧化歧化酶(SOD)的活性及睾丸生精细胞核抗原(PCNA)表达的变化情况.结果 索吉德-11可提高衰老小鼠血清睾酮含量(P<0.05)、睾丸组织SOD的活性及睾丸生精细胞PCNA表达水平(P<0.05),并降低睾丸组织MDA含量.结论 蒙药索吉德-11可明显改善衰老小鼠睾丸的功能,具有一定延缓衰老的作用.     

CD137和CD28分子对衰老T细胞活化的调节作用

目的观察两种共刺激分子CD137及CD28对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠及自然衰老小鼠T细胞活化后的细胞增殖、白介素2(IL-2)分泌及细胞存活的影响。方法7周龄BALB／c雄性小鼠随机分为D-半乳糖致亚急性衰老模型组(衰老模型组)、对照组和青年组,衰老模型组小鼠每日背部皮下注射D-半乳糖溶液(120 mg／kg,溶于0．1 ml蒸馏水中),连续注射5个月,建立亚急性衰老小鼠模型;对照组小鼠每日背部皮下注射0．1 ml蒸馏水,连续注射5个月;青年组小鼠未行处理。自然衰老组为16月龄BALB／c雄性小鼠。分离各组小鼠的脾脏T细胞,分别用ConA+ IgG、ConA+CD137单抗、ConA+CD28单抗体外活化,测定T细胞的增殖水平、培养上清液中IL-2的浓度及细胞凋亡率。结果(1)衰老模型组T细胞经ConA+IgG活化后,细胞增殖、IL-2的分泌水平(A值)及细胞存活率分别为0．422±0．057、0．632±0．066及68．0％±2．4％,与自然衰老组T细胞经ConA+IgG活化后的相应指标的差异无统计学意义,但两组衰老T细胞的活化指标均显著低于ConA+IgG活化的青年组及对照组;(2)衰老模型组T细胞应用ConA+CD137单抗活化后,细胞增殖、IL-2的分泌水平分别为0．639±0．053、1．119±0．035,显著高于ConA+IgG活化组,细胞存活率为53．3％±2．4％,显著低于ConA+IgG活化组,自然衰老组也显示同样的结果;并且发现CD137单抗对衰老T细胞功能的调节作用弱于CD28单抗。结论(1)衰老模型组与自然衰老组的T细胞功能均降低,呈现相似的增龄性变化;(2)CD137及CD28分子对两组衰老T细胞有近似的调节作用,均能促进衰老T细胞的活化及存活,CD28分子的调节作用强于CD137分子。     

端粒酶的再激活可逆转未老先衰实验鼠的衰老过程

<正>随着生活水平的改善和医疗技术的发展,人类寿命不断延长,老龄化问题受到广泛关注。人们期望能够延缓身体器官组织的功能老化,保持健康的身体。这点燃了科学家对再生医学的研究热情。目前,尚未解决的问题是,如果把导致组织功能退化的、与年龄相关的诱发因子去除,是否可以逆转衰老的各种症状人类衰老过程中,不断受损、缩短的基因组就是重要的诱发因子之一。     

蒺藜皂苷对D-半乳糖所致衰老小鼠皮肤形态结构的影响

目的 探讨蒺藜皂苷对D-半乳糖所致衰老小鼠皮肤形态结构的影响.方法 健康昆明种小鼠40只,随机分为正常对照组、衰老模型组、蒺藜皂苷组和维生素E组,每组10只.经颈背部皮下注射5％D-半乳糖连续6w,建立小鼠亚急性衰老模型.给药组同时灌胃给予蒺藜皂苷和维生素E,正常对照组和衰老模型组给予等体积纯净水.取材,光镜标本制备,染色,观察皮肤形态结构;TUNEL法检测皮肤组织凋亡细胞.结果 与衰老模型组相比,蒺藜皂苷组皮肤真皮层显著增厚,纤维成分增多,排列较紧密,皮肤形态学结构较接近正常对照组,皮肤组织凋亡细胞减少.结论 蒺藜皂苷可明显改善老化皮肤的形态结构,对皮肤具有一定的抗衰老作用.     

独活及其醇提物对自然衰老小鼠脑组织细胞凋亡的影响

通过流式细胞仪技术检测自然衰老小鼠脑组织细胞凋亡率,探讨独活及其醇提物延缓自然衰老小鼠脑老化的机理.     

灵芝多糖抗H2O2诱导的HDF细胞衰老及其机制的研究

目的 探讨不同剂量灵芝多糖(GLP)对抗H2O2诱导的HDF细胞衰老及可能的细胞周期调控机制.方法 将HDF细胞培养至24代时分成6组:即青年组、对照组、衰老模型组及GLP小剂量(50 mg/L)、中剂量(100 mg/L)、大剂量(150 mg/L)组,体外DMEM培养,各GLP组和衰老模型组自30代始添加 H2O2诱导HDF细胞衰老,直至38代.采用MTT法检测细胞活力;Dimri法检测β-半乳糖苷酶活性;RT-PCR法检测p16INK4a、CyclinD1、CDK4的表达;Western印迹法检测Rb蛋白表达和磷酸化Rb.结果 与青年组及对照组比较,衰老模型组细胞活力下降(P＜0.01),β-半乳糖苷酶活性升高(P＜0.01),CyclinD1 mRNA表达升高(P＜0.01),CDK4 mRNA表达下降(P＜0.01),p16INK4a表达升高(P＜0.01),Rb磷酸化减少(P＜0.01);与衰老模型组细胞比较,中剂量和大剂量GLP细胞活力明显提高(均P＜0.01),而β-半乳糖苷酶活性降低(均P＜0.01),CyclinD1 mRNA表达降低(均P＜0.01),CDK4 mRNA表达升高(均P＜0.01),p16INK4a表达降低,Rb磷酸化增多(均P＜0.01),但两组之间差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 GLP可通过改变细胞周期调控因子CyclinD1/CDK4/p16INK4a进而调节Rb的磷酸化状态,发挥抗H2O2诱导的HDF细胞衰老作用.     

衰老相关信号转导通路的研究进展

正细胞衰老是指细胞在生命的进程中,随着机体的不断老化而出现的功能紊乱和分化增殖能力下降的过程,是细胞受到某种或多种特定的生理信号刺激后引起的一种常见的基本细胞应答程序[1-3],这些信号刺激包括端粒酶缩短、丝裂原及增殖相关信号的活化、基因组损伤以及肿瘤抑制信号的激活等[4-5]。细胞发生衰老的同时还伴随着分子、细胞、组织和器官损伤的不断累积,最终导致     

ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化进程中microRNA-146a的表达变化

目的:观察ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化发生过程中microRNA-146a(miR-146a)的变化,探讨miR-146a与动脉粥样硬化之间的关系。方法:在ApoE~(-/-)小鼠中通过高脂高胆固醇喂饲构建动脉粥样硬化模型,分别在喂饲后第0周、4周、8周、12周、16周时采血和分离主动脉组织,通过HE染色和油红O染色观察主动脉组织的斑块形态,计算主动脉内膜/中膜比值和主动脉斑块的脂质含量;采用Real-Time PCR检测第0周、4周、8周、12周、16周时血浆和主动脉组织的miR-146a水平。结果:在高脂高胆固醇饲养后第8周时ApoE~(-/-)小鼠主动脉组织开始出现动脉粥样硬化,在第16周时主动脉粥样硬化最显著,16周时主动脉组织的内膜/中膜比值和主动脉斑块的脂质含量显著升高(P0.01);在动脉粥样硬化发生过程中,小鼠血浆和主动脉组织中的miR-146a水平均明显升高,其中血浆miR-146a的峰值出现在第8周(P0.01),之后血浆miR-146a逐渐下降;而主动脉组织的miR-146a水平从第4周开始升高(P0.05),逐渐上升至16周时达到峰值(P0.01);主动脉组织中miR-146a水平与ApoE~(-/-)小鼠主动脉粥样硬化呈强正相关性(r=0.892 5,P0.000 1)。结论:miR-146a可能参与了ApoE~(-/-)小鼠主动脉主动脉粥样硬化的发生。