辛伐他汀抑制PDGF-BB诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖及对细胞表型转换的影响

目的 探讨辛伐他汀对血小板源生长因子(PDGF-BB)诱导增殖的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)抑制细胞表型转换及其可能的信号调节机制.方法 以体外培养SD大鼠PASMC为研究对象,PDGF-BB进行诱导,辛伐他汀及RhoA/Rho激酶抑制剂Y-27632进行干预,流式细胞术检测PASMC的增殖,荧光定量RT-PCR 检测各组PASMC α-SM-actin mRNA的表达及Western blot 检测各组PASMC α-SM-actin、SM22α和RhoA蛋白的表达.结果 辛伐他汀及Y-2763在抑制PDGF-BB诱导的PASMC增殖的同时,促进了主要收缩表型蛋白α-SM-actin mRNA 的表达,促进α-SM-actin 、SM22α这两种收缩表型蛋白表达,同步地相应抑制了RhoA蛋白表达.结论 辛伐他汀在抑制PDGF-BB介导的PASMC增殖的同时,也抑制了PASMC细胞表型的转换,而且该作用可能通过抑制RhoA/Rho激酶信号通路实现.     

反义c-jun对血管平滑肌细胞表型

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)异常增殖是许多心血管疾病的共同病理基础,位于血管中膜的VSMC由分化型转变为去分化型是其增殖的前提。c-jun产物是参与细胞增殖调控的主要转录因子之一。已经证明,应用反义技术抑制c-jun基因表达可有效抑制细胞增殖,但对VSMC表型转化有无影响尚未见报道。本文应用可表达c-jun反义RNA的真核细胞表达载体转染VSMC,分别以平滑肌α-肌动蛋白(SM α-actin)和平滑肌胚胎型肌球蛋白重链(SMemb)作为分化型与去分化型VSMC的分子标志,观察c-jun反义RNA对VSMC表型转化的影响。     

腺病毒介导的脾酪氨酸激酶对血管平滑肌细胞表型转换的影响

目的 构建脾酪氨酸激酶(Syk)重组腺病毒并感染血管平滑肌细胞(VSMC),观察Syk对VSMC表型转换的影响.方法 运用pDC315-GFP腺病毒载体系统,细菌同源重组法构建含目的 基因Syk腺病毒重组质粒pDC315-GFP-Syk,经过包装、扩增、纯化后获得Syk重组腺病毒;测定病毒滴度并感染体外培养的大鼠VSMC,饥饿处理24 h,用Real-time PCR法和Western blot法对Syk、平滑肌22a蛋白(SM22α)及平滑肌α肌动蛋白(α-SM-actin)表达活性进行检测,观察Syk对平滑肌细胞表型转换的影响.结果 成功构建携带Syk基因的重组腺病毒,纯化后滴度为1011 pfu/mL,腺病毒感染VSMC后5 d,与空病毒组和对照组相比,Syk mRNA(741638.70±35213.53)和蛋白表达水平(2.14±0.71)增高(P<0.01);α-SM-actin(0.80±0.04)和SM22α mRNA表达水平(1.00±0.01)下降(P<0.05),同时,二者的蛋白表达水平也降低(0.61±0.10和0.18±0.06,P<0.01).结论 在VSMC中,Syk通过对其表型转换进行调控,进而影响平滑肌细胞的增殖和迁移.     

体外诱导血红素氧合酶-1表达对抗PDGF-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞表型转化的作用

目的探讨体外诱导血红素氧合酶-1(HO-1)表达对血小板源性生长因子-BB (PDGF-BB)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(Vascular Smooth muscle Cell,VSMC)表型转化的影响。方法用贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞,分别给予PDGF诱导VSMC表型转化,并给予不同浓度的氯血红素诱导HO-1表达。采用免疫荧光和免疫组织化学法分别检测VSMCα肌动蛋白(SM-α-actin)和细胞核增殖抗原(PCNA)的表达,RT-PCR检测不同组HO-1mRNA的相对表达水平。结果与对照组比较,PDGF-BB诱导后VSMC SM-α-aCtin的表达明显减少,PCNA表达明显增多,同时给予PDGF和氯血红素诱导HO-1的表达随着氯血红素剂量的增加SM-α-actin的表达增加,PCNA表达减少。RT-PCR结果表明HO-1mRNA的表达与氯血红素的剂量正相关。结论体外诱导血红素氧合酶-1的表达可以抑制PDGF-BB诱导的VSMC表型转化,这种作用和HO-1表达的强度正相关。     

胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的:探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化的影响.方法:用酶消化法分离大鼠VSMC,采用免疫组织化学法检测胰岛素作用后VSMC肌动蛋白(α-SM actin),RT-PCR 检测胰岛素作用后VSMC中bFGF、TGF-β、PDGF、matrix Gla和OPN各目的基因mRNA相对表达水平.结果:胰岛素组VSMC的3H-TdR掺入值比对照组升高47％(P<0.01), VSMC α- SM actin免疫组化结果显示对照组的α-SM actin比胰岛素组染色深.而matrix Gla和OPN在培养的VSMC中mRNA的表达量,胰岛素组明显高于对照组(P<0.05),同时bFGF、TGF-β、PDGF的表达胰岛素组也明显高于对照组(P<0.05).并可明显见到细胞骨架F-actin、G-actin重新分布.结论:在合成表型的matrix Gla和OPN表达量明显高于收缩表型,而合成表型的α- SM actin表达量明显低于收缩表型.提示胰岛素对VSMC的表型转化起了一定作用.胰岛素在促进了VSMC增殖的同时,伴有VSMC由收缩型转变为合成型及细胞骨架F-actin、G-actin重新分布.     

Rho／Rho激酶在COPD大鼠气道的表达及其对气道重塑的影响

目的探讨Rho／Rho激酶信号通路在慢性阻塞性肺疾病大鼠气道中的表达及其对气道的影响。方法清洁级相同重量级Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组、COPD组、Y-27632干预组,每组20只。分析各组大鼠的支气管壁厚度（War）和平滑肌厚度（Warn）,以及RhoA,ROCKlImRNA的表达。结果与对照组相比,COPD组大鼠RhoA,ROCK1ImRNA表达明显增高,wat、wam也明显增加（P〈0．05）;与C（）PD组相比,Y-27632干预组大鼠RhoA,ROCKIImRNA的表达明显降低,Wat、wam也明显降低（P〈0．05）。结论COPD组大鼠RhoA,ROCKⅡmRNA表达明显增高;应用ROCKⅡ特异性拈抗剂Y一27632能够明显控制RhoA,ROCKⅡmRNA的表达,从而抑制慢性阻塞性肺疾病大鼠的气管壁增厚和平滑肌增殖。     

基本转录元件结合蛋白2反义基因转染对血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的:探讨基本转录元件结合蛋白2(BTEB2)反义RNA对血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的影响。方法:采用Ⅰ型胶原酶消化法培养大鼠VSMC;通过RT-PCR法检测血清诱导的VSMC表型标记基因(SMαA和SMemb)mRNA表达的变化;用反义BTEB2重组腺病毒转染VSMC后,采用RT-PCR法检测SMαA和SMemb的mRNA表达,用免疫细胞化学技术检测SMαA和SMemb蛋白表达。结果:血清剌激后,SMemb mRNA表达增加,而SMαA mRNA表达减少;BTEB2反义基因转染显著抑制血清诱导的SMemb mRNA和蛋白表达的增加以及SMαA表达的减少。结论:BTEB2反义RNA可显著抑制血清诱导的VSMC表型转化。     

褪黑素抑制人血管平滑肌细胞的巨噬样表型转化

目的探究褪黑素在人血管平滑肌细胞(VSMC)巨噬样表型转化中的作用。 方法VSMC分为对照组、胆固醇组(水溶性胆固醇)、褪黑素组(水溶性胆固醇+褪黑素)。水溶性胆固醇诱导VSMC建立巨噬样表型转化模型。定量PCR检测VSMC巨噬样表型相关基因表达水平；油红O染色观察各组VSMC脂质吞噬能力；Edu染色观察各组VSMC增殖情况；细胞划痕实验观察VSMC迁移情况。 结果10 mg/L水溶性胆固醇显著降低平滑肌收缩表型相关标志基因α-actin和α-tropomyosin mRNA表达,并显著升高巨噬细胞相关标志基因CD68和MAC2 mRNA表达,诱导VSMC巨噬样表型转化。0.5 μmol/L褪黑素可抑制水溶性胆固醇引起的VSMC脂质蓄积和细胞增殖,但对VSMC迁移无影响。 结论褪黑素抑制VSMC的巨噬样表型转化。     

IGF-1Rα在移植物动脉硬化形成过程增生平滑肌细胞中的表达

目的通过大鼠胸主动脉腹腔移植模型,探讨移植物动脉硬化(CAA)形成过程中增生内、外膜平滑肌细胞IGF-1Rα表达情况,并观察表达程度与平滑肌细胞增殖程度的关系.方法雄性健康纯系Wistar和SD大鼠分别作为供体和受体,分为急性排斥(A组)、免疫耐受组和同系对照组.取腹腔移植胸主动脉标本进行Masson和免疫组化染色,比较移植术后不同时间内、外膜VSMC增生和纤维化程度以及IGF1Rα在增生外膜和内膜平滑肌细胞上的表达水平,IGF-1Rα与α-actin和PCNA表达程度的关系.结果CAA发生后,α-actin阳性细胞出现在外膜,外膜增生和纤维化程度与IGF-1Rα和PCNA的表达程度一致,增生内膜表面有α-actin、IGF-1Rα和PCNA表达.术后A组外膜IGF-1Rα的表达程度逐渐增高(P＜0.01).术后第8周IGF-1Rα的表达程度与α-actin和PCNA相当.结论IGF-1Rα在CAA平滑肌细胞中高度表达,表达程度与血管尤其外膜平滑肌细胞增生程度密切相关.     

血府逐瘀汤对动脉粥样硬化兔主动脉内膜增生的影响

目的 探讨血府逐瘀汤对动脉粥样硬化(AS)兔主动脉内膜增生的影响.方法 将21只兔随机分为空白组、模型组、血府逐瘀汤组.采用高腊喂饲复制兔AS模型,用MIASE医学图像分析管理系统测主动脉内膜厚度、内膜厚度中膜厚度、内膜面积,中膜面积;用免疫组化染色法现察兔主动脉平滑肌细胞肌动蛋白(SM α-actin)、增殖细胞按抗原(PCNA)表达.结果 模型组兔主动脉内膜厚度、内膜厚度,中膜厚度、内膜面积,中膜面积均明显增大,兔主动脉SMα-actin表达降低、PCNA表达增强:与模型组比较.血府逐瘀汤组免主动脉内膜厚度、内膜厚度,中膜厚度、内膜面积,中膜面积均明显减小.差异具有统计学意义(P<0.01).主动脉SMα-actin表达增强,差异具有统计学意义(p<0.05)、PcNA表达降低,差异具有统计学意义(p<0.01).结论 血府逐瘀汤具有增强AS主动脉SM α-actin表达,抑制PCNA表达的作用,其抗AS的机制可能与调节平滑肌细胞表型转变和抑制VSMC增殖有关.     

CPI-17调控血管平滑肌表型对动脉粥样硬化形成的影响

目的  研究CPI-17（PKC-potentiated protein phosphatase inhibitory protein-17）通过诱导血管平滑肌细胞表型改变影响动脉粥样硬化形成的作用。方法  载脂蛋白E基因敲除（ApoE-knockout）小鼠经颈动脉套管术诱导形成动脉粥样斑块,以野生型C57BL/6小鼠为对照,分离颈动脉并提取总RNA,采用实时荧光定量PCR技术对比检测斑块组织与对照小鼠颈动脉中CPI-17及血管平滑肌细胞收缩功能相关蛋白-平滑肌肌球蛋白重链（sm-MHC）、α-肌动蛋白（α-actin）的mRNA水平。然后分别用50mg/L氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激及乏氧环境下培养作用于小鼠平滑肌细胞系MOVAS 细胞,实时荧光定量PCR检测两种刺激条件下CPI-17表达的变化。结果  ApoE-knock out小鼠粥样斑块平滑肌细胞的CPI-17 mRNA水平及sm-MHC、α-actin显著低于C57BL/6小鼠,ox-LDL刺激及乏氧培养的MOVAS细胞的CPI-17表达水平显著降低（P均<0.05）。结论  ox-LDL刺激及乏氧培养使MOVAS 细胞的CPI-17表达水平降低,可能通过调控血管平滑肌细胞的收缩特性参与动脉粥样硬化的发生。     

Rho／Rho激酶在哮喘小鼠气道的表达及其对气道重塑的影响

目的研究Rho／Rho激酶（ROCK）信号通路在哮喘小鼠气道中的表达及其对气道重塑的作用。方法清洁级BALB／c雄性小鼠39只,随机分为对照组、哮喘组、Y-27632干预组、地塞米松干预组,每组10只（其中对照组9只）。建立哮喘小鼠模型,并应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632进行干预,光镜观察肺组织结构,Image—proplus图像分析软件测量支气管壁厚度（Wat）和平滑肌厚度（Wam）,免疫组化法测定肺组织ROCKⅡ蛋白含量,RT—PCR法测定RhoA、ROCKⅡ mRNA含量。结果（1）哮喘组小鼠RhoA、ROCKⅡ表达明显增高,应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达。（2）Y-27632干预组小鼠Wat和Wam均明显低于哮喘组小鼠。结论哮喘小鼠肺组织RhoA及ROCKⅡ表达增多,ROCKll受体拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达,明显抑制哮喘小鼠Wat和Wam。     

基于RhoA/Rho信号通路探讨产妇子宫平滑肌组织 Thr38、KCa3.1、KLF4表达水平与产后出血的关系

目的：基于RhoA/Rho信号通路探讨产妇子宫平滑肌组织CPI-17(Thr38)、KCa3.1、Krüppel样因子4(KLF4)表达水平与产后出血的关系。方法：选择80例宫缩乏力性产后出血产妇为观察组,选择同期80例无产后出血产妇为对照组。采用肌条等长张力测定法检测离体子宫平滑肌的自发收缩活动力,以及加入Rho激酶抑制剂(Y-27632)后的子宫平滑肌收缩活动力。采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应法检测子宫平滑肌组织中RhoA、ROCKⅠ以及ROCKⅡmRNA表达水平,采用蛋白质印迹法检测RhoA、ROCKⅠ以及ROCKⅡ以及Thr38、KCa3.1、KLF4表达水平。采用Pearson相关分析RhoA蛋白以及子宫平滑肌收缩活动力与Thr38、KCa3.1、KLF4的关系。结果：观察组的子宫平滑肌收缩活动力、收缩频率以及收缩幅度均低于对照组(P<0.05～P<0.01),加入Y-27632后,2组子宫平滑肌收缩活动力均低于加入前(P<0.05)。观察组RhoA/Rho信号通路相关mRNA以及蛋白(RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ)表达水平均低于对照组(P<0...     

外膜炎症及炎症因子与大鼠移植物动脉硬化早期发病关系

目的 探讨外膜炎症及血清炎症因子与移植物动脉硬化早期发病的关系.方法 把36只同种异体胸主动脉腹腔移植大鼠及16只同系移植对照大鼠随机分成4组(每组实验组9只,对照组4只):A组,术后1周处死;B组,术后2周处死;C组,术后3周处死;D组,术后4周处死.术前及处死时抽血分离留取血清,使用酶联免疫吸附法检测血清炎症因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)水平,处死后留取血管标本,HE染色观察血管外膜炎症细胞浸润程度及病理改变;用免疫组织化学法检测α-肌动蛋白(α-actin)、周期蛋白依赖性激酶1(cyclin dependent kinase-1,CDK1)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在血管壁中的表达.对比各组与术前血清炎症因子水平变化及各组间观察指标的变化.结果 术后7 d,外膜大量炎症细胞浸润;术后14 d,外膜有轻度胶原纤维增生伴炎症浸润;术后28 d,外膜明显增厚,内有大量增生的平滑肌细胞、胶原纤维及炎症细胞,血管中层断裂,可见外膜平滑肌细胞迁移至内膜,内膜亦出现明显纤维化及平滑肌细胞增生.在血管外膜平滑肌细胞中,α-肌动蛋白、PCNA和CDK.表达愈来愈高(均P<0.05),且早于内膜.移植术后A、B、C、D组血清炎症介质水平均高于术前基础水平.IL-6水平,B实验组高于术前(P<0.05),A、C、D实验组显著高于术前(均P<0.01),A、B、C对照组也高于术前基础水平(均P<0.05);A、C、D实验组显著高于对照组(均P<0.01).TNF-α水平,A、B、C实验组高于术前(均P<0.05),D实验组显著高于术前(P<0.01),A、B、C、D对照组与术前无明显变化,各实验组均明显高于对照组(均P<0.01),差异有统计学意义.结论 大鼠同种异体胸主动脉移植模型建立后,随着外膜炎症加重,移植血管外膜及内膜出现明显动脉硬化;血清炎症介质水平呈持续升高,提示外膜炎症细胞浸润及炎症因子均参与移植物动脉硬化的早期发生.     

辛伐他汀对大鼠损伤后狭窄颈总动脉中碱性成纤维细胞生长因子mRNA与细胞外信号调节激酶1/2mRNA表达的影响

目的观察辛伐他汀对大鼠损伤后狭窄颈总动脉中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)mRNA表达的影响。方法健康雄性SD大鼠80只,随机分为假手术组、模型组、辛伐他汀低剂量和高剂量组,制备颈总动脉狭窄模型,辛伐他汀低剂量组和高剂量组于术前3 d起分别给予辛伐他汀5、10 mg.kg-1.d-1进行灌胃,连续给药17 d后处死,苏木精-伊红染色观察左颈总动脉形态学变化;反转录聚合酶链式反应法测定血管壁组织的bFGF mRNA与ERK1/2 mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组血管中膜血管平滑肌细胞(VSMC)增殖显著,排列紊乱,向管腔及内弹力板方向增生扩展,管腔严重狭窄;辛伐他汀低剂量组血管内膜相对光滑,中膜VSMC排列趋于规整,管腔狭窄程度较轻;辛伐他汀高剂量组血管内膜比较光滑,中膜VSMC增殖程度显著降低,VSMC排列规整,管腔狭窄程度明显减轻。与假手术组比较,其他各组颈总动脉bFGF mRNA、ERK1/2 mRNA的表达均有显著增高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,辛伐他汀低剂量组bFGF mRNA、ERK1/2 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05),辛伐他汀高剂量组则明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);辛伐他汀高剂量组颈总动脉bFGF mRNA和ERK1/2 mRNA表达与低剂量组比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论辛伐他汀可通过抑制bFGF mRNA和ERK1/2 mRNA的表达抑制VSMC增殖,实现其抗血管损伤后狭窄的作用。     

eNOS对大鼠颈动脉球囊损伤后平滑肌细胞增殖的影响

目的研究内皮型一氧化氮合酶(eNOS)对大鼠球囊损伤后平滑肌细胞增殖的影响。方法构建腺病毒-eNOS(AdCMV-eNOS)质粒,以脂质体介导转染293细胞,扩增后转染SD大鼠球囊损伤后平滑肌细胞(实验组),以转染Ad-LacZ重组质粒的平滑肌细胞作为对照组。RT-PCR技术观察转染后平滑肌细胞eNOS mRNA的表达;细胞计数法分别检测实验组、对照组、正常组和单纯球囊损伤组平滑肌细胞的增殖能力。。结果RT-PCR检测发现实验组平滑肌细胞表达eNOS mRNA,而对照组无表达。各时间点细胞计数结果显示,正常组均明显少于单纯球囊损伤组(P<0.05),而实验组均明显少于单纯球囊损伤组和对照组(P<0.05)。结论重组腺病毒表达载体构建正确;eNOS可以抑制平滑肌细胞增殖。为eNOS预防经皮腔内冠状动脉成形术术后再狭窄基因转染奠定了基础。     

JAK2-STAT3信号通路在白介素-1β经动脉外膜给药致平滑肌细胞增殖迁移中的作用

目的研究白细胞介素-1β经血管外膜给药导致动脉平滑肌细胞发生的改变及其与JAK2-STAT3信号通路的关系,明确JAK2-STAT3信号通路在血管增殖性病变中的作用。方法 6～8周龄SD雄性大鼠24只,分离左侧颈总动脉,实验组(n=18)血管外膜包裹含白介素-1β2.5μg的琼脂缓释悬液,对照组(n=6)包裹不含白介素的琼脂悬液,术后2、8、24、48 h,1、2周分别处死实验组大鼠3只,对照组1只,血管标本经切片HE染色观察形态,Western blot法检测JAK2、STAT3、磷酸化JAK2以及磷酸化STAT3的表达,免疫组化标记定位磷酸化JAK2及磷酸化STAT3;另取SD雄性大鼠9只,分离两侧颈总动脉,左侧滴加JAK2抑制剂AG490缓释凝胶,右侧滴加等量空白凝胶后两侧均包裹等量白介素-1β,术后8、48 h,1周处死动物分别行HE染色及Western blot检测。结果白介素-1β包裹血管外膜后出现血管平滑肌细胞的增殖、迁移,通道蛋白JAK2、STAT3在不同时间点出现不同程度的磷酸化,经Western blot检测并行灰度分析,p-JAK2相对灰度值对照组(0.337±0.216),8 h组(1.764±0.513),1周组(0.451±0.229);p-STAT3相对灰度值对照组(0.125±0.870),24 h组(1.909±0.309),2周组(0.448±0.516),各组间有明显差异(P<0.05)。加用抑制剂后,8 h组p-JAK2相对灰度值实验侧(0.085±0.031),对照侧(1.416±0.468),48 h组p-STAT3相对灰度值实验侧(0.460±0.065),对照侧(2.425±0.638),提示JAK2、STAT3的磷酸化水平被明显抑制(P<0.05),平滑肌细胞变化程度下降。结论炎性因子白细胞介素-1β经动脉外膜给药可致动脉平滑肌细胞增殖、迁移,这种改变与JAK2-STAT3信号通路有直接关系。     

基质金属蛋白酶3在实验性大鼠腹主动脉瘤模型中的表达

目的：检测基质金属蛋白酶3（MMP－3）在大鼠正常动脉及腹动脉瘤模型组织中的表达，以探讨其在腹主动脉瘤发病机制中的作用。方法：建立大鼠腹主动脉瘤灌注模型，应用免疫组织化学和分子原位杂交技术检测MMP－3的表达。结果：正常动脉壁组织MMP－3蛋白表达为弱阳性或阴性，而动脉瘤组织中MMP－3蛋白表达显著增高，阳性率为8／8／MMP－3阳性染色主要位于中膜的平滑肌细胞和外膜的炎症细胞，其中炎症细胞浸润的区域染色明显增强，MMP－3 mRNA在动脉瘤组织中呈阳性表达，在动脉外膜炎症细胞浸润的区域和小血管聚集区呈强阳性；对照组动脉组织未见MMP－3 mRNA阳性表达。结论：腹主动脉瘤组织中MMP－3蛋白及mRNA较正常动脉组织表达显著增高，尤其在炎症细胞浸润的区域表达明显增强；提示MMP－3可能在腹主动脉瘤发生发展过程中起到关键的起始因子的作用。     

莲子心新碱对肠系膜血管平滑肌收缩的抑制作用及分子机制

目的?研究莲子心新碱（Neo）对小鼠肠系膜血管及血管平滑肌细胞（VSMCs）收缩的抑制作用；并通过观察其对肌球蛋白轻链（MLC₂₀）磷酸化和RhoA相关蛋白激酶（ROCK1）表达的影响，初步探讨引起该抑制的作用机制。方法?采用离体微血管张力测定仪观察高钾溶液（KCl）对经Neo预处理后肠系膜血管收缩的影响，并通过Urea/glycerol-PAGE法检测其MLC₂₀磷酸化水平的变化。同时，利用成像分析技术考察高钾溶液对经Neo预处理后VSMCs收缩的影响，并通过细胞免疫荧光法测定VSMCs中ROCK1蛋白的表达水平。结果?经Neo预处理后的肠系膜血管能明显抑制高钾溶液引起的收缩，其IC₅₀值为6.019?μmol/L；且可阻断高钾溶液产生MLC₂₀磷酸化。另外，与模型组（KCl）VSMCs的长度（40.94±1.94）μm相比，药物组（Neo+KCl）VSMCs的长度（44.95±5.15）μm显著延长（P＜0.01），其ROCK1蛋白的表达也明显下降。结论?Neo对肠系膜血管平滑肌收缩具有明显的抑制作用，其作用机制可能与阻断平滑肌MLC₂₀磷酸化和下调其ROCK1蛋白表达有关。