肺癌抑制免疫功能的靶细胞：树突状细胞

目的：了解肿瘤微环境下肺癌细胞对DC前体细胞产生DC、功能的影响。方法：DC前体细胞为健康人外周血CD14细胞，加入GM－CSF和IL－4，37℃，5％CO2培养7－10天收获，肿瘤细胞株CRL－5815，CRL－5826加入DC前体细胞共培养，健康入外周血为正常对照，FITC或PE交链的单克隆抗体标记DC细胞，流式细胞仪分析检测CD14，CD86，CD80，CD1a阳性表达。Annexin V方法，流式细胞仪分析细胞凋亡，混合淋巴细胞反应（MLR）检测DC检测T细胞反应的能力。结果：肺癌细胞株可诱导DC形成的不同时期产生凋亡，对DC产生的早期（第1、2天）影响较晚期（第6，7天）更明显，肺癌细胞株CRL－5815和CRL－5826与DC共培养时明显抑制DC细胞表型CD80，CD86，CD40的表达，与肺癌细胞株共培养DC其刺激T细胞扩增的能力（MLR）显下降，结论：肺癌细胞株CRL－5815和CRL－5826与DC前体细胞共培养时可导致DC的凋亡显增加，同时DC细胞表面表型表达下降，刺激T细胞扩增的功能减低，提示肿瘤（肺癌细胞）可通过DC细胞数量减少和功能下降影响机体免疫功能。     

天麻素通过抑制细胞凋亡保护谷氨酸诱导的PC12细胞损伤

目的：研究天麻素（Gastrodin）对谷氨酸诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的影响及可能机制。方法：以谷氨酸建立体外培养PC12细胞损伤模型并采用MTT比色法测定细胞存活率;AO/EB双染法经荧光显微镜观察细胞凋亡形态;采用流式细胞术检测细胞内活性氧含量以及Annexin V/PI染色后的细胞凋亡率;Western blot法检测细胞内Caspase-3蛋白表达。结果：天麻素可明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,在0.1～10μmol/L剂量呈一定的量效关系;同时,天麻素可明显抑制谷氨酸引起的活性氧（ROS）的累积,降低谷氨酸诱导的活性Caspase-3蛋白的表达,降低PC12细胞的凋亡率,在0.1～10μmol/L剂量呈量效相关性。结论：在一定剂量范围内,天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与减少ROS的生成,阻止氧化损伤的发生,抑制Caspase-3途径依赖的细胞凋亡相关。     

蒽贝素体外抑制人胰腺癌细胞Mia PaCa-2细胞增殖和诱导凋亡的作用及其机制研究

目的 探讨X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）抑制剂蒽贝素抑制人胰腺癌细胞Mia PaCa-2凋亡的作用及其可能机制。方法 MTT法和流式细胞术检测不同剂量蒽贝素对Mia PaCa-2细胞增殖和凋亡的影响;RT-PCR法对蒽贝素处理前后Mia PaCa-2细胞中XIAP基因的表达进行检测。Western blotting方法检测蒽贝素作用后细胞XIAP、Caspase 3、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2表达的变化。结果 蒽贝素对人胰腺癌细胞增殖具有显著抑制作用（P<0.05）,经不同剂量蒽贝素处理后Mia PaCa-2细胞凋亡率明显增高,与未处理组比较差异具有显著性（P<0.01）;RT-PCR显示对照组细胞中XIAP的-△△CT值是实验组的11.31倍;经蒽贝素作用24 h后,Mia PaCa-2细胞出现Caspase 3裂解片段,且Bax/Bcl-2比值增大。结论 蒽贝素在体外可显著抑制Mia PaCa-2细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过拮抗XIAP的作用,激活Caspase相关性的细胞凋亡内源性途径而诱导人胰腺癌细胞发生凋亡。     

姜黄素对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的探讨姜黄素对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法采用MTT法检测姜黄素对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测姜黄素对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响;Hoechst 33258荧光核染色法观察姜黄素对胃癌BGC-823细胞的形态学改变的影响。结果姜黄素80μmol·L-1和160μmol·L-1剂量在24、48和72 h均可显著抑制胃癌BGC-823细胞对MTT的摄取能力(P0.05或P0.01),并呈现一定的时间依耐性;姜黄素20μmol·L-1和40μmol·L-1剂量在短时间内对胃癌BGC-823细胞摄取MTT的能力无显著作用,但随作用时间的增长,也表现出显著的抑制作用(P0.05);流式细胞术和Hoechst 33258荧光核染色法结果表明姜黄素40、80和160μmol·L-1剂量均可显著提高胃癌BGC-823细胞的凋亡率(P0.05或P0.01)。结论姜黄素可能通过介导胃癌BGC-823细胞凋亡而发挥其抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

H2O2诱导PC12细胞凋亡的作用机制

目的 探讨H2O2诱导PC12细胞凋亡的作用机制。方法用MTT比色法分析细胞存活率，Hoechst—PI荧光染色和流式细胞仪检测分析细胞凋亡情况；通过RT—PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测par-4、NF—KB、caspase-3基因表达水平的变化；用比色法检测Caspase-3相对活性。结果（1）用终浓度分别为0～400nmol／L H2O2处理PC12细胞8h，随H2O2浓度从25～400nmol／l。增加，PC12细胞存活率逐渐降低（P〈0．05）：     

乙醇诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的研究低浓度乙醇对肝癌细胞的影响及作用机制。方法采用噻唑蓝比色法观察乙醇对细胞增殖的影响；采用流式细胞仪法观察乙醇对肝癌细胞内活性氧的影响；采用琼脂凝胶电泳法观察DNA片断化条带。结果低浓度乙醇可明显抑制细胞增殖；乙醇作用于细胞后2h内引起活性氧产生，24h后细胞出现典型的凋亡表现。结论乙醇能够通过诱导细胞内活性氧的产生引起细胞凋亡，呈明显的剂量依赖性。     

胰腺癌化疗后应用DC-CIK细胞对免疫功能影响及临床疗效分析

目的分析晚期胰腺癌患者化疗后联合应用树突状细胞-细胞因子诱导杀伤细胞(DC-CIK细胞)干预对患者免疫功能的影响以及临床疗效。方法 80例接受化疗的晚期胰腺癌患者,通过随机数字表法分为对照组和观察组,各40例。对照组采用常规化疗,观察组采用化疗+DC-CIK细胞治疗。对比两组患者免疫功能的变化和临床疗效。结果治疗后观察组患者CD3、CD4、CD8检出值均明显优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组患者经治疗后1年生存率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论晚期胰腺癌化疗后应用DC-CIK细胞干预能够改善患者免疫功能,可以提高临床疗效,值得临床推广应用。     

苦参碱诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨苦参碱对胰腺癌细胞SW 1990生长抑制和诱导凋亡作用.方法 将不同浓度的苦参碱作用于培养的SW1990细胞,通过MTT比色法、流式细胞仪和DNA凝胶电泳、电子显微镜技术观察检测细胞凋亡,研究分析其对SW1990细胞的生长抑制和诱导凋亡作用.结果 苦参碱浓度为0.5、1.0、1.5g/L时,细胞生长抑制率分别为14.3%、24.8%、41.6%;流式细胞术测定RD横纹肌肉瘤细胞的凋亡率分别为10.3%、18.3%、27.5%;DNA电泳见DNA"梯形"图谱;电镜显示肿瘤细胞的凋亡形态.结论 苦参碱能抑制SW1990细胞增殖,诱导其凋亡.     

3-羟基丁酸衍生物对PC12细胞凋亡的保护作用

目的：观察3-羟基丁酸甲酯和3-羟基丁酸乙酯对PC12缺血清诱导凋亡细胞的保护作用。方法化学法降解聚羟基丁酸酯制备3-羟基丁酸甲酯和3-羟基丁酸乙酯。培养PC12细胞,以含血清培养组细胞为阴性对照组,缺血清培养组细胞为阳性对照组,以在缺血清条件下添加不同浓度3-羟基丁酸甲酯或3-羟基丁酸乙酯细胞为样品组,通过形态学观察法、噻唑蓝（ MTT）法检测各组细胞形态及活性变化。结果与阴性对照组比较,阳性对照组细胞出现大量凋亡,形态变小变细,活性降低。样品处理组细胞活性不同程度提高,低浓度（0.01和0.001 mg·mL-1）3-羟基丁酸甲酯和3-羟基丁酸乙酯对凋亡细胞有保护作用,浓度为1 mg·mL-1时效果最好。结论通过化学法能够制备高纯度3-羟基丁酸甲酯和3-羟基丁酸乙酯,上述两种样品对缺血清诱导凋亡的PC12细胞有保护作用。     

紫杉醇诱导Jurkat细胞凋亡的实验研究

目的：探讨紫杉醇对Jurkat（人T细胞白血病细胞株）细胞增殖抑制丰及细胞周期各时相变化的影响。方法：应用MTT比色法和流式细胞仪检测紫杉醇对Jurkat细胞增殖抑制的时间效应，浓度效应及凋亡率。结果：紫杉醇对Jurkat细胞有明显的抑制作用，且呈剂量依赖性；流式细胞仪分析：G1期细胞增高，S期细胞减少，G2／M期细胞相对增多。结论：紫杉醇能够抑制Jurkat细胞增殖，抑制GT期细胞向S期的进程，促进Jurkat细胞凋亡。     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞体内外抗肺癌的实验效应研究

目的探讨树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）在体内外对肺癌的影响。方法正常人外周血单个核细胞经不同细胞因子作用后培养成DC和CIK细胞,单个核细胞经贴附塑料平皿获得单核细胞,加入GM-CSF,IL-4及TNF-a诱导获得DC,悬浮细胞加入IFN-g,24h后IL-1a,IL-2及CD3McAb诱导获得CIK,将A549制备成肿瘤细胞冻融物,作为肿瘤抗原刺激DC,并将DC与CIK细胞联合培养（DC＋CIK,负载抗原的DC＋CIK）,以CIK细胞单独培养作为对照。用流式细胞仪分析细胞表型,自体混合淋巴细胞反应和异体混合淋巴细胞反应检测其刺激T细胞的的增殖活性。Cytotoxicity TOX96体外杀伤实验测定体外细胞毒活性,同时用A549细胞系建立荷瘤裸鼠模型研究其体内抗肺癌活性。结果在培养的第15d,与负载抗原的DC共同培养的CIK与CIK细胞单独培养细胞相比,增殖速率明显提高[（23.4±2.3）倍vs（16.7±2.7）倍,P〈0.05],CD3＋CD56＋细胞表达水平也明显提高,[（64.3±3.6）%vs（43.9±2.1）%,P〈0.05],同时负载抗原的DC的CIK对A549细胞的体外下细胞毒活性增强,体内实验显示,与单独培养的CIK细胞相比,与负载抗原的DC共同培养的CIK,可明显抑制接种瘤细胞的裸鼠成瘤率,DC＋CIK与负载抗原的DC＋CIK在抗六效应上没有明显差异。结论 DC与CIK细胞共培养后可提高CIK细胞的增殖速率,提高CIK细胞表型的表达水平,增强CIK体内抗肺癌的活性。将来可作为一种临床有效的过继免疫治疗策略。     

对氨基水杨酸钠对铅诱导体外培养PC12细胞凋亡的影响

目的探讨对氨基水杨酸钠(PAS-Na)对铅诱导PC12细胞凋亡的影响。方法 PC12细胞培养至其对数生长期后,正常对照组和正常+PAS-Na 500μmol·L~(-1)组细胞于正常培养液中培养24 h后弃培养液,前者加入正常培养液、后者加入PAS-Na继续培养24 h。醋酸铅模型组及醋酸铅+PAS-Na 20,100和500μmol·L~(-1)组先与醋酸铅(终浓度10μmol·L~(-1))共培养24 h后弃培养液,再加入相应浓度PAS-Na继续培养24 h。用MTT法测定细胞存活率,试剂盒方法测定细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量,Hoechst33342荧光染色检测凋亡率,AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测PC12细胞早期凋亡率,Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax和P53蛋白水平。结果与正常对照组比较,醋酸铅模型组细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡形态变化典型,细胞早期凋亡率增高(P<0.05),细胞内GSH含量降低(P<0.01),P53蛋白水平升高(P<0.01),Bax/Bcl-2比值升高(P<0.01);正常+PAS-Na 500μmol·L~(-1)组上述指标未见明显变化。与醋酸铅模型组比较,醋酸铅+PAS-Na组细胞存活率增高(P<0.05),细胞凋亡率和早期凋亡率均降低(P<0.05),细胞内GSH含量增高(P<0.01),P53蛋白水平和Bax/Bcl-2比值降低(P<0.05)。结论 PAS-Na对铅致PC12细胞凋亡有一定的拮抗作用,其机制可能与PAS-Na抗脂质过氧化损伤和降低Bax/Bcl-2比值有关。     

微米中药胰腺康诱导人胰腺癌SW1990细胞凋亡的研究

目的：观察不同浓度的微米中药胰腺康对胰腺癌SW1990细胞作用的影响。方法：将微米中药胰腺康以不同浓度和时间作用于胰腺癌SW1990细胞,采用MTT比色法观察细胞毒性;应用HE染色法观察凋亡细胞的形态;采用免疫组化方法检测caspase-3蛋白的表达。结果：微米中药胰腺康以剂量依赖和时间依赖的方式抑制SW1990细胞的生长。HE染色观察到凋亡细胞的形态学改变。caspase-3蛋白高表达。结论：微米中药胰腺康与其提取液相比,能更有效地抑制SW1990细胞增殖,其抗瘤作用与诱导细胞凋亡有关。为临床治疗胰腺癌提供理论依据。     

鼻咽癌患者树突状细胞体外诱导的初步研究

目的探讨不同进展阶段鼻咽癌患者的树突状细胞体外诱导效果。为临床免疫治疗提供的成熟树突状细胞。方法本研究选取临床不同分期鼻咽癌患者的外周血分离单核淋巴细胞,体外诱导培养。通过光学显微镜和流式细胞仪检测树突状细胞的体外诱导效果。结果体外诱导获得的树突状细胞具有典型的形态,其细胞表面表达CD83、CD86和CD-DR树突状细胞的标识分子。结论不同进展阶段鼻咽癌患者外周血均可以体外诱导出树突状细胞。     

凋亡抑制蛋白在TRAIL诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的探讨凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis pro-teins,IAP)在调节胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)敏感性方面的作用。方法 PI染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测caspase-3、PARP、XIAP、Survivin、cIAP1和cIAP2的表达。结果 TRAIL能诱导胃癌细胞凋亡,BGC-823细胞较SGC-7901细胞对TRAIL更敏感。caspase-3的活化及PARP的裂解在TRAIL作用早期即出现,且BGC-823细胞较SGC-7901细胞发生得更快。4种IAP蛋白在两株胃癌细胞中都组成性地高表达,Survivin和cIAP1在TRAIL处理前后无变化。而XIAP在BGC-823细胞中明显下降,在SGC-7901细胞中无改变。cIAP2在TRAIL作用后两株细胞中均有所降低。结论 TRAIL诱导胃癌细胞凋亡可能在活化的caspase-3水平受调控,XIAP能保护胃癌细胞免于凋亡。     

雷帕霉素联合紫杉醇诱导卵巢癌细胞A2780和SKOV3凋亡及其分子机制

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白在恶性肿瘤发生发展中起重要作用。本研究观察特异性mTOR抑制剂雷帕霉素联合紫杉醇对卵巢癌细胞A2780和SKOV3的作用及内在的分子机制。方法：A2780和SKOV3细胞经雷帕霉素和紫杉醇处理后，以MTT法检测细胞的增殖情况，金正均法计算q值判断两药的相关作用。以流式细胞仪检测细胞凋亡，逆转录聚合酶链反应检测survivin的表达。结果：雷帕霉素联合紫杉醇可抑制A2780和SKOV3细胞的增殖，且随时间延长抑制作用越显著，[第一段]     

二十二碳六烯酸对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察二十二碳六烯酸(DHA)对人胰腺癌细胞株生长的抑制作用.方法 将DHA与胰腺癌细胞混合培养,采用MTT、流式细胞技术分析细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期以及凋亡相关蛋白Bcl-2含量.结果 50μg/ml DHA作用人胰腺癌细胞株后,Patu8988、SW1990增殖率24 h为(46.89±5.99)、(46.03±7.69),48 h为(35.92±2.91)、(25.70±5.60),肿瘤细胞增殖受到明显抑制(P<0.01).同时细胞凋亡率明显升高,效应呈现时间-剂量依赖关系,72 h后Patu8988、SW1990凋亡率分别为53.2%、13.7.G0～G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降.DHA作用24 h后,Patu8988、SW1990 Bcl-2蛋白表达率明显低于对照组(P<0.05).结论 DHA能抑制胰腺癌细胞增殖,并通过下调Bcl-2在细胞中表达来诱导胰腺癌细胞凋亡.     

海风藤对氯化钴诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的研究海风藤对氯化钴(CoCl2)诱导的PC12细胞凋亡的分子机制,从而确定海风藤对缺氧诱导的神经细胞凋亡的保护作用。方法设立海风藤保护组,CoCl2诱导组和正常细胞对照组;倒置相差显微镜观察细胞形态变化,四甲基偶氮噻唑蓝法(MTT)检测细胞存活率,分光光度法检测培养基中乳酸脱氢酶(LDH)含量和活性氧(ROS)生成量水平变化;化学发光法检测细胞三磷酸腺苷(ATP)生成量和Caspase-3表达量的变化;RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-xl的表达。结果海风藤预保护的PC12细胞在CoCl2诱导后,与CoCl2诱导组相比,细胞形态有明显改善,细胞存活率显著上升,由28.7%变为65.1%(P<0.01);培养基中LDH含量和ROS生成量明显下降,相应吸光度分别由29.8和18.3变为18.33及7.8(P<0.01);细胞ATP释放量明显增加,保护组为诱导组的1.2倍(P<0.01);基因bcl-xl表达上升;Caspase-3在细胞凋亡中的活性被抑制,保护组为诱导组的81%(P<0.01)。结论海风藤能通过抑制氧化应激损伤对线粒体功能破坏,增强bcl-xl的表达,抑制Caspase-3激活等机制提高细胞存活率,达到抑制CoCl2诱导PC12细胞凋亡作用。     

空载树突状细胞注射对荷瘤鼠肿瘤的免疫作用研究

目的研究树突状细胞(DC)不负载肿瘤抗原时对肺部肿瘤的免疫抑制作用.方法黑色素瘤细胞(MO5)静脉注射诱导同源C57BL/6小鼠肺部转移瘤,鼠趾间分别皮下注射磷酸盐缓冲液、载与未载肿瘤抗原(SI-INFEKEL)的GM-CSF DC,观察对肺肿瘤的免疫抑制作用;并分析其相应的效应细胞.结果同载有肿瘤抗原的GM-CSF DC一样,未载抗原的GM-CSF DC注射同样对小鼠肺内转移瘤产生了抑制作用[(89.1±6.2)vs(1 573.5±23.5),P＜0.01].但作用于用缺乏唾液酸基的单唾液酸四己糖神经节苷脂的抗体(anti-asialo-GM1)治疗后的小鼠则此保护作用消失,而应用anti-CD8治疗的小鼠则不影响保护作用.结论空DCs对C57BL/6小鼠肺部转移癌具有很好的保护作用,此保护作用需有NK细胞存在介导.