血清铁蛋白时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的 血清铁蛋白(sFER)时间分辨荧光免疫(TRFIA)分析试剂盒的研制.方法 采用双抗体夹心法建立sFER-TRFIA试剂盒,并对试剂盒的各项指标进行评价.结果 试剂盒的线性测量范围为2.2～1 070 ng/mL,灵敏度为0.22 ng/mL,批内、批间的精密度分别为4.6%～7.2%、5.4%～8.9%,与癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)和人白蛋白无交叉反应.86份血清样本用本试剂盒与国外其他试剂盒同时检测,其相关系数为0.994.结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒.     

链霉亲和素-生物素化学发光免疫分析血清胰岛素方法建立及临床应用

目的：建立链霉亲和素-生物素双抗体夹心一步法测量人胰岛素化学发光免疫分析方法,并进行临床应用检测。方法：以链霉亲和素包被微孔板,生物素化一株单克隆抗体,辣根过氧化物酶标记另一株单克隆抗体。校准品与胰岛素国家标准品进行溯源,建立免疫分析方法,进行性能参数测试。收集40例正常人、12例1型、29例2型糖尿病人血清,统计整理参考值,并与国外同类试剂盒进行对比。结果：该方法回收率94.13%,线性范围（2～200）μIU/ml,灵敏度0.05μIU/ml,批内、批间变异系数（CV）分别为2.87%～7.06%和3.24%～9.14%,与牛胰岛素、猪胰岛素、人前胰岛素原、胰岛素样生长因子Ⅰ交叉反应率分别为27.2%、19.7%、0.16%、0.07%,与C肽、胰高血糖素、生长抑素无交叉反应。本法与国外同类试剂盒同时检测40份正常人葡萄糖耐量试验血清,r为0.9869,本法37℃7d热稳定性良好,建立一组正常人葡萄糖耐量参考值。结论：本法各项指标均满足临床检测要求,达到国外同类产品水平,反应快速,操作简单,便于临床检验应用。     

癌胚抗原光激化学发光免疫分析法的建立

目的:利用光激化学发光免疫分析技术(Al-phaLISA)建立人血清癌胚抗原(CEA)的快速检测试剂。方法:1株CEA单克隆抗体(mAb)包被受体微球,另1株(mAb)用生物素标记,与链霉亲和素的供体微球共同组成检测试剂,优化反应体系并对试剂的各项性能指标进行评价。结果:自制CEA试剂分析灵敏度为0.11 ng/mL,线性测量范围为0.11～500 ng/mL,分析内和分析间的精密度分别为3.3%～6.8%、5.5%～8.1%,与AFP、CA12-5、CA19-9和人血清白蛋白均无交叉反应,100份临床血清样本用本试剂与罗氏化学发光试剂检测,其相关系数为0.976。结论:自制CEA Al-phaLISA试剂的各项性能指标均能达到临床检测要求,有望替代国外同类试剂应用于临床血清样本CEA浓度的测定。     

C肽光激化学发光免疫分析试剂盒的研制

目的:研制光激化学发光免疫分析技术(AlphaLISA)建立人血清C肽(C peptide)的快速检测试剂盒.方法:采用夹心法建立C peptide AlphaLISA试剂盒.结果:自制C肽试剂盒灵敏度为0.06ng/ml.,可测范围为(0.06～22)ng/ml.批内与批间的精密度分别为4.0%～4.8%,5.6%～...     

血清真胰岛素化学发光免疫分析方法学研究

建立一种高灵敏度真胰岛素临床常规检测方法.采用两株特异的抗胰岛素单抗体,分别抗胰岛素肽链上两个不同的抗原决定簇,用一株制备固相抗体,另一株标记碱性磷酸酶C,以金刚烷衍生物为发光底物建立化学发光免疫分析(CLIA)法.结果表明本方法灵敏度为0.06μIU/mL,标准曲线量程为1.0～150μIU/mL,批内和批间CV分别为5.0%、7.8%,平均回收率为94.4%.分别测定了男、女成人空腹血清各100份,男性实测范围0.52～11.23μIU/mL,平均值为3.86μIU/mL,女性实测范围为0.75～10.66μIU/mL,平均值为3.62μIU/mL.真胰岛素CLIA法简便快速,能真实反应血清胰岛素的水平,对临床糖尿病的诊疗和病理生理研究具有实用价值.     

胰岛素光激化学发光免疫分析法的建立

目的建立血清中胰岛素(INS)光激化学发光免疫分析的定量检测方法。方法用2株配对的INS单克隆抗体,一株INS单克隆抗体包被受体微球,另一株INS单克隆抗体用生物素标记,与链霉亲合素的供体微球共同组成检测试剂检测人血清中的INS。结果 INS-AlphaLISA的灵敏度为0.753μU/ml,线性测量范围为0.753～180μU/ml,分析内和分析间的精密度分别为7.46%～9.74%、5.24%～7.31%,与C肽无明显交叉反应、与胰岛素原有轻微交叉反应,125份临床血清样本用本试剂与罗氏化学发光试剂检测,其相关系数为0.983。结论本法建立的INS-AlphaLISA是一个各项指标均能达到临床要求的、可靠的检测,有望替代国内外同类产品用于临床。     

进出口植物产品中甲霜灵残留量酶联免疫检测试剂盒的研究

目的本研究采用直接竞争ELISA法对进出口植物产品中甲霜灵残留量进行快速筛选.方法将甲霜灵转化成甲霜灵酸,利用适当的方法将其与辣根过氧化物酶(HRP)进行偶联,制备酶标半抗原.采用传统的盐析法提取IgG并建立了甲霜灵直接竞争ELISA快速检测方法.结果抑制试验表明其检测范围在(0.78～50.0)ng/mL之间,可用于进出口植物产品中甲霜灵的定量检测.该方法与气相色谱检测符合率为94%.样品的平均回收率为94%.交叉反应显示该抗体仅与甲霜灵、甲霜灵酸起反应,不与结构相似的毒草胺、甲草胺、异丙甲草胺、新燕灵和己酰甲草胺起交叉反应.结论本试剂盒具有操作简便、快速、灵敏等特点.     

金黄色葡萄球菌肠毒素阵列ELISA检测方法的建立及评价

目的为实现对5种经典肠毒素的准确、快速鉴定及分型,本研究基于ELISA和芯片技术,建立金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)阵列ELISA(Array-ELISA)检测方法。方法通过原核表达、亲和纯化制备SE蛋白,利用杂交瘤腹腔注射制备腹水,纯化SE单克隆抗体,通过ELISA对抗体的灵敏度、特异性进行评价,点制Array-ELISA阵列,评价Array-ELISA对SE检测的灵敏度和特异性。结果采用Array-ELISA,在PBS中SE的检测限除葡萄球菌肠毒素C(SEC)为10 ng/mL外,其余均为0.0001 ng/mL,液态牛奶中SE的检测限为(0.001～10)ng/mL。在PBS和牛奶中SE检测的特异性均为100%,各型SE之间无交叉反应。同时显示与肉毒毒素也无交叉反应。结论成功建立Array-ELISA检测方法,能够灵敏、准确鉴定同一份样本中5种经典SE。     

分支DNA技术检测血浆游离DNA方法的建立及在急性心肌梗死患者中的初步应用

目的采用分支DNA(bDNA)信号放大定量技术建立检测血中游离DNA(cf-DNA)-ALU基因表达的方法并分析其在急性心肌梗死(AMI)患者血浆中的含量。方法根据ALU基因序列特点设计探针,建立检测血ALU的bDNA信号放大定量方法,并对其线性、灵敏度及精密度进行评价;根据标准曲线计算出AMI患者血浆中ALU的含量,并与肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同功酶MB(CK-MB)和肌红蛋白(MYO)进行相关性分析。结果线性范围为0～400 ng/mL,相关系数为0.99,批内变异系数(CV)为7.85%～11.75%,批间CV为10.05%～14.32%。AMI患者和健康对照组血浆ALU的含量分别是中位数4 223 ng/mL和118 ng/mL,四分位数区间(2 285～7 864)ng/mL和(81～218)ng/mL(P0.001),提示AMI患者血浆ALU含量上调,但与cTnI、CK-MB和MYO浓度无相关性。ALU的ROC曲线下面积为0.99,敏感度98.8%,特异性100.0%。结论本研究建立的检测方法具有灵敏、重复性好等优点,升高的ALU含量与AMI存在一定相关性。     

C-肽双标记液相IRMA方法的实验研究

本文探讨应用两株高特异性配对C-P McAb分别标记125I和异硫氰酸荧光素(FITC),采用抗FITC磁性微粒子固相抗体作为分离剂,建立血清C-P IRMA检测法。结果表明,本法标准曲线范围为0.125~4.0pmol/mL,灵敏度为0.06 pmol/mL,批内批间CV分别为5.6%和8.7%,回收率为92.1%~96.0%,和胰岛素交叉反应为零。各项技术参数表明本法操作简便快速,为今后开发肽类的IRMA检测提供了特异性更高的手段。