miR-378高表达增强宫颈癌细胞的放射敏感性初步研究

研究报道miRNAs与肿瘤细胞放疗敏感性密切相关,调节相关miRNA表达,增强肿瘤放疗敏感性对提高放疗效果具有重要的临床意义^[1]。miR-378被报道在放疗敏感的宫颈癌组织中表达量明显高于放疗抵抗的宫颈癌组织表达量,但对其作用目前尚不清楚,本研究着重探究其对宫颈癌放疗敏感性的影响。     

miR-96通过靶向HERG1对胰腺癌细胞系PANC-1放疗敏感性的影响

HERG₁也被称为KCNH₂或KvlLl,是快速延迟整流的电压门控钾离子通道家族成员之一^[1],有越来越多的证据表明HERG₁在多种肿瘤细胞中高表达^[2-6],对肿瘤细胞增殖、调亡、分化及侵袭密切相关,而在相应正常细胞中不表达^[4-7]。miR-96胰腺癌组织中表达下调,其靶基因HERG₁可通过调控相关信号通路影响细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力。有关研究表明过表达miR-96的胰腺癌细胞PANC-1增殖能力、集落形成能力、迁移和侵袭能力都明显减弱,细胞凋亡增加^[8]。本研究以PANC-1细胞为研究对象,研究miR-96对其放射敏感性的作用,以期为胰腺癌的临床治疗提供新思路。     

miR-15a负调控Bmi-1对胰腺癌细胞系PANC-1放射敏感性影响

研究表明,不同miRNA参与不同肿瘤的发生发展过程,且其表达方式具有特异性^[1]。miR-15a作为一种与肿瘤相关的基因,对癌细胞凋亡的调控发挥关键作用。Bmi-1作为PcG家族中的一种转录因子,对肿瘤的发生发展发挥重要作用^[2-3]。Bmi-1参与胰腺癌细胞的调节过程十分繁杂,可被多种miRNAs调控^[4],而miRNA作为与肿瘤密切相关的一类分子标记物,与肿瘤的发生发展密切相关,主要是通过与其靶基因的3,UTR区结合,发挥相关功能^[5]。这提示由表观遗传学改变而介导的Bmi-1表达量的升高可加快胰腺癌的发生发展过程,但具体研究还很少。本研究在前人工作基础上,以胰腺癌细胞系PANC-1为基质,就miR-15a对Bmi-1的表达调控作一研究,进而探讨其在胰腺癌细胞PANC-1放射敏感性中作用,以揭示其在胰腺癌治疗中的作用机制。     

三羟基异黄酮对胶质瘤细胞放射敏感性影响

三羟基异黄酮(Genistein)是大豆异黄酮的主要成分,属于多酚类化合物,具有抑制心血管疾病发生、抗肿瘤等生物学作用;国外研究表明Genistein与放射联合可增强肿瘤放射敏感性,如肝癌、食管癌、前列腺癌和宫颈癌^[1-4]。但Genistein联合放射对胶质瘤放射敏感性的影响目前尚未有研究报道。本实验通过Genistein联合放射作用于U251细胞,观察其对U251细胞增殖与凋亡影响,研究Genistein对U251细胞放射敏感性影响,为Genistein应用于胶质瘤治疗提供可靠依据,以期提高胶质瘤的放疗效果。     

miR-424-5p通过靶向抑制HMGA1表达提高宫颈癌放射敏感性

目的 探讨miR-424-5p对宫颈癌放射敏感性的影响及作用机制。方法 RT-qPCR检测miR-424-5p在宫颈癌组织和Hela细胞中表达;流式细胞术检测Hela细胞凋亡率;CCK-8检测Hela细胞增殖活性;蛋白印迹法检测Hela细胞中蛋白表达水平。结果 相较于正常组织和细胞,宫颈癌组织和Hela细胞中miR-424-5p表达量降低(1.03∶0.88,P<0.01;1.00∶0.75,P<0.001)。过表达miR-424-5p会抑制经放射处理后Hela细胞增殖活性(P<0.01),同时增加放射处理后Hela细胞凋亡率(24.82%∶49.94%,P<0.001)。过表达miR-424-5p会抑制HMGA1表达(1.01∶0.63,P<0.01),miR-424-5p会直接作用HMGA1进而影响宫颈癌放射敏感性。结论 miR-424-5p通过直接靶向HMGA1提高宫颈癌放射敏感性。     

LncRNA MEG3靶向miR-181a-5p调控宫颈癌细胞放射敏感性

目的 研究LncRNA MEG3对宫颈癌细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法 运用qRT-PCR法检测放射抗性和放射敏感性宫颈癌细胞中LncRNA MEG3的表达;将过表达对照组(转染pcDNA 3.1)、过表达LncRNA MEG3组(转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3)、抑制miR-NC组(转染anti-miR-NC)、抑制miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、过表达LncRNA MEG3+过表达miR-NC组(共转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3和anti-miR-NC)、过表达LncRNA MEG3+过表达miR-181a-5p组(共转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3和anti-miR-181a-5p),均用脂质体法转染至SiHa细胞;克隆形成实验检测细胞的存活分数;流式细胞术检测细胞的凋亡率;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性;Western blot检测细胞中PTEN、p-Akt、Akt的蛋白表达。结果 与放射敏感组相比,放射抗性宫颈癌组织中LncRNA MEG3的表达明显降低(P<0.05),其表达量与宫颈癌细胞的放射敏感性呈正相关;过表达LncRNA MEG3、抑制miR-181a-5p均可显著增强宫颈癌细胞SiHa放射敏感性,促进凋亡(P<0.05);野生型LncRNA MEG3细胞的荧光活性受miR-181a-5p的抑制。过表达miR-181a-5p逆转了LncRNA MEG3对宫颈癌细胞放射增敏和促凋亡作用及对PTEN/Akt信号通路的调控。结论 长链非编码RNA LncRNA MEG3可增强宫颈癌细胞放射敏感性,其机制可能与靶向miR-181a-5p调控PTEN/Akt 信号通路有关,可为提高宫颈癌的预后提供新方向。     

长链非编码RNA TUG1通过吸附miR-145对XB1702细胞放射敏感性影响

目的 研究长链非编码RNA TUG1对宫颈癌细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法 运用qRT-PCR法检测宫颈癌细胞XB1702及正常子宫内膜基质细胞ESC中TUG1和miR-145表达。实验分为转染si-NC组、转染si-TUG1、转染si-NC并照射、转染si-TUG1并照射、共转染si-TUG1和anti-miR-NC和共转染si-TUG1和anti-miR-145组。用脂质体法转染至XB1702细胞。克隆形成实验检测各组细胞存活分数,流式细胞术检测各组细胞凋亡。双荧光素酶报告基因检测各组细胞荧光活性。结果 与ESC细胞相比,XB1702细胞中TUG1表达升高,miR-145表达降低;沉默TUG1可显著提高XB1702细胞存活分数、促进凋亡,增强放射敏感性。TUG1可靶向调控miR-145表达,抑制miR-145可逆转沉默TUG1对XB1702细胞的增殖抑制、凋亡促进及增敏作用。结论 沉默长链非编码RNA TUG1可增强宫颈癌细胞放射敏感性,其机制可能与靶向miR-145有关,将可为宫颈癌放疗提供靶点。     

长链非编码RNA TUG1通过吸附miR-145对XB1702细胞放射敏感性影响

目的 研究长链非编码RNA TUG1对宫颈癌细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法 运用qRT-PCR法检测宫颈癌细胞XB1702及正常子宫内膜基质细胞ESC中TUG1和miR-145表达。实验分为转染si-NC组、转染si-TUG1、转染si-NC并照射、转染si-TUG1并照射、共转染si-TUG1和anti-miR-NC和共转染si-TUG1和anti-miR-145组。用脂质体法转染至XB1702细胞。克隆形成实验检测各组细胞存活分数,流式细胞术检测各组细胞凋亡。双荧光素酶报告基因检测各组细胞荧光活性。结果 与ESC细胞相比,XB1702细胞中TUG1表达升高,miR-145表达降低;沉默TUG1可显著提高XB1702细胞存活分数、促进凋亡,增强放射敏感性。TUG1可靶向调控miR-145表达,抑制miR-145可逆转沉默TUG1对XB1702细胞的增殖抑制、凋亡促进及增敏作用。结论 沉默长链非编码RNA TUG1可增强宫颈癌细胞放射敏感性,其机制可能与靶向miR-145有关,将可为宫颈癌放疗提供靶点。     

放射性肝纤维化的实验研究中TNF-α、NF-κB p65和TGF-β1动态变化及表达意义

近年来随着放疗技术发展,放疗越来越多地应用于中晚期肝癌患者^[1-2],然而放射诱导的肝损伤却成为放疗的瓶颈,放射诱导的RILF是放射性肝损伤的最终转归,因此减轻和治疗放射性晚期损伤在放射生物学的研究中越来越重要^[3]。目前用于评价及预测RILF的新型特异性细胞因子鲜少报道,本研究通过观察RILF模型大鼠不同时期TNF-α、NF-κB p65及TGF-β₁的动态变化,探讨其在RILF发生发展中的作用机制及意义。     

LncRNA ANRIL靶向miR-195对HCT116细胞及裸鼠移植瘤放射增敏实验研究

目的 探究LncRNA ANRIL对结直肠癌HCT116细胞体外体内放射增敏作用及机制。方法 qPCR检测ANRIL表达。将阴性对照siRNA、ANRIL siRNA、miR-NC mimic、miR-195 mimic、miR-NC inhibitor、miR-195 inhibitor转染至HCT116细胞中分别记为阴性对照、沉默ANRIL、过表达miR-NC、过表达miR-195、抑制miR-NC、抑制miR-195组,以不做任何处理的HCT116细胞为空白对照组。克隆形成实验检测放射敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡,StarBase预测ANRIL下游miRNAs,双荧光素酶报告基因实验进一步验证。裸鼠皮下移植瘤实验检测ANRIL对照射后移植瘤生长影响。结果 沉默ANRIL组细胞存活分数较阴性对照组降低(P<0.05),其放射增敏比为1.52。沉默ANRIL+4Gy组细胞凋亡率较阴性对照+4Gy组增加[(27.86±2.78)%︰(12.06±1.46)%,P<0.05]。裸鼠皮下移植瘤实验结果显示在13、16、19、22、25天时阴性对照组肿瘤体积比沉默ANRIL组降低[(234±66)、(273±63)、(296±72)、(321±85)、(403±94) mm³与(357±79)、(485±124)、(617±143)、(764±174)、(985±221) mm³,P<0.05]。miR-195是ANRIL靶基因,抑制miR-195可逆转沉默ANRIL对HCT116细胞放射增敏和凋亡促进作用及移植瘤生长抑制作用。结论 LncRNA ANRIL通过调控miR-195表达来调节HCT116细胞放射敏感性,可能为临床结直肠癌放疗提供一个新的增敏靶点。     

miR-106b靶向调控PTEN促进结直肠癌细胞放射抵抗

目的 阐明miR-106b在结直肠癌细胞放射敏感性中的作用及机制。方法 构建稳定过表达和干扰miR-106b结直肠癌细胞系,通过免疫荧光和平板克隆实验探讨miR-106b对结直肠癌细胞放射敏感性的影响;Western blot检测Caspase-3和γ-H2AX的表达;生物信息学预测miR-106b下游调控的靶基因,双荧光素酶报告系统、荧光定量PCR及Western blot进一步验证。在稳定过表达miR-106b的结直肠癌细胞系中转染pCDNA3.0-PTEN,探讨细胞放射敏感性变化,明确miR-106b是否通过靶向调控PTEN增加结直肠癌细胞放射抵抗。结果 在结直肠癌细胞系过表达miR-106b,经过同等条件的照射处理后,与对照组相比,过表达miR-106b组细胞存活分数升高,放射抵抗增强(P<0.05),Caspase-3及γ-H2AX表达降低。在稳定过表达miR-106b的细胞中上调PTEN后能逆转miR-106b引起的放射抵抗。结论 miR-106b通过靶向抑制PTEN从而诱导结直肠癌细胞放射抵抗,预示着miR-106b-PTEN位点可能为临床提高结直肠癌放疗效果寻找相关靶点提供理论依据。     

lncRNA PTPRG-AS1通过靶向miR-124-3p调控肝癌细胞凋亡和放射敏感性的研究机制

目的:探讨lncRNA PTPRG-AS1对肝癌细胞凋亡和放射敏感性的影响及作用机制。方法:培养正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2、SMMC-7721和BEL-7402,qRT-PCR检测细胞中PTPRG-AS1和miR-124-3p表达水平。转染si-PTPRG-AS1、miR-124-3p mimics至HepG2细胞,抑制HepG2细胞中PTPRG-AS1表达或过表达miR-124-3p,流式细胞术检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞放射敏感性,Western Blot法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。生物信息学软件预测PTPRG-AS1与miR-124-3p存在互补的核苷酸序列,双荧光素酶报告基因实验验证PTPRG-AS1与miR-124-3p之间的调控关系。结果:与正常肝细胞L02相比,肝癌细胞HepG2、SMMC-7721和BEL-7402中PTPRG-AS1表达显著升高（P＜0.05）,miR-124-3p表达显著降低（P＜0.05）。抑制PTPRG-AS1或过表达miR-124-3p均可促进肝癌HepG2细胞的凋亡,增强肝癌HepG2细胞的放射敏感性,抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax蛋白表达。PTPRG-AS1负调控miR-124-3p表达。抑制miR-124-3p表达可部分逆转抑制PTPRG-AS1表达对肝癌HepG2细胞凋亡的促进作用以及放射敏感性的增强作用。结论:抑制PTPRG-AS1表达可能通过上调miR-124-3p表达促进肝癌细胞的凋亡并提高其放射敏感性,是肝癌治疗的潜在作用靶点。     

miR-34a对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响

骨肉瘤是儿童和青少年中最常见的骨原发性恶性肿瘤,具有侵袭性强,预见性差,致死和致残率高的特点^[1-2]。放射是目前骨肉瘤治疗的主要手段之一,可以有效治疗转移性骨痛和复发、不宜手术或拒绝手术者。然而放射抵抗是放射的主要瓶颈,如何提高放射敏感性是骨肉瘤治疗面临的主要问题。microRNAs (miRNAs)是一类内源性非编码单链RNA分子,对细胞的生长分化、增殖凋亡和肿瘤发生具有重要调控作用^[3]。相关研究表明miRNAs还可通过抑制目标基因相关信号转导通路的活化,提高细胞凋亡率,降低肿瘤放射抵抗,有潜力成为靶向提高骨肉瘤放射敏感性的新靶点。     

人喉癌细胞Hep2线粒体DNA缺失模型建立及放射生物学观察

放疗主要机制是放射线直接或间接造成细胞DNA损伤,而线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)比核DNA(nuclear DNA)缺少组蛋白保护,位于氧化呼吸链附近,更易受到损伤且损伤后缺乏有效修复^[1]。笔者通过构建Hep₂ mtDNA缺失的ρ⁰细胞模型,观察其放射敏感性、增殖、周期、ATP及活性氧族(reactive oxygen species,ROS)变化,探讨mtDNA与放射敏感性的关系及可能机制。     

限定骨髓剂量的调强放疗对减轻同期放化疗急性血液毒性的研究进展

同期放化疗是目前部分腹盆腔肿瘤的标准治疗,比如大肿块宫颈癌^[1]、Ⅱ期和Ⅲ期直肠癌^[2]、肛管癌^[3-4]、局部晚期胃癌^[5-6]。但是,在增加疗效的同时急性血液毒性(hematologic toxicity,HT)也显著增加^[7-9],并进而增加了感染、输血、使用集落刺激因子机会和延长住院时间。更主要的是,严重的骨髓(bone marrow,BM)抑制还会延迟或中断化疗和放疗的实施^[7-9],有可能降低疗效。此外,局部晚期患者的疗效仍不乐观,可能需要加强治疗强度。因此,如果能降低血液毒性,可能会使患者接受更强的同期放化疗,以期进一步改善疗效。调强放疗(intensity-modulated radiation therapy,IMRT)在提高靶区剂量和降低正常组织剂量方面相对于常规放疗具有绝对优势^[10,11]。既往研究显示盆腔肿瘤接受IMRT时,骨盆BM和腰骶椎BM接受10、20 Gy照射体积(V₁₀、V₂₀)与发生急性HT明显相关^[3,12-14]。因此,减少BM受量体积可减少HT发生和严重程度。因此,运用IMRT剂量学优势,定量研究BM保护IMRT(BM-sparing IMRT,BMS-IMRT)以减轻同期放化疗不良反应是目前研究的热点。     

微小RNA与宫颈癌放疗敏感性的研究进展

宫颈癌为妇科高发肿瘤,放疗是宫颈癌的主要治疗方法之一,然而部分患者放疗疗效不佳。体内外研究发现微小核糖核酸（miRNA）表达水平与宫颈癌放疗敏感性有关。本文对近年来miRNA与宫颈癌放疗敏感性的研究成果及其相关作用机制进行简要概述。     

HPV、p16及p53与头颈部肿瘤患者的预后分析

头颈部肿瘤是目前世界上第6位常见肿瘤,也是第8位引起死亡的常见肿瘤^[1],其中约85%头颈部肿瘤为鳞癌^[2]。国外研究表明HPV阳性头颈部鳞癌患者预后更好,HPV阳性患者放疗后的生存率明显好于阴性患者^[3]。鉴于国内研究报道少见,故开展此项研究。     

lncRNA MEG3通过调控miR-21表达增加肺癌细胞放射敏感性

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA) MEG3对肺癌细胞H1299的放射敏感性调控机制。方法 运用qRT-PCR法检测具有放射抗性的H1299细胞中MEG3、miR-21-5p的表达。将过表达对照组(转染pcDNA3.1)、过表达MEG3组(转染pcDNA3.1-MEG3)、抑制miR-NC组(转染anti-miR-NC)、抑制miR-21-5p组(转染anti-miR-21-5p)、过表达MEG3+过表达miR-NC组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-NC)、过表达MEG3+过表达miR-21-5p组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-21-5p mimics)均用脂质体法转染。克隆形成实验检测细胞存活分数,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MEG3与miR-21-5p的结合力。结果 与正常肺上皮细胞相比,H1299细胞中MEG3表达明显降低,miR-21-5p表达明显升高;过表达MEG3或抑制miR-21-5p均可促进H1299细胞凋亡,增强放射敏感性;MEG3可靶向调控miR-21-5p的表达。过表达miR-21-5p可逆转MEG3对H1299细胞放射增强作用。结论 lncRNA MEG3可增强H1299细胞放射敏感性,其机制也许可能与靶向miR-21-5p有关。     

Hsacirc0000392靶向miR－145－5p/CRKL轴调控细胞外调节蛋白激酶通路影响宫颈癌的辐射敏感性

目的探讨hsa_circ₀000392(circ₀000392)对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响及其潜在作用机制。方法收集2016—2019年于河南大学淮河医院首次经病理诊断明确的42例宫颈癌患者的宫颈癌组织和癌旁正常组织, 根据患者对放射治疗的反应, 将癌组织分为放疗敏感和放疗耐受。采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测宫颈癌放疗敏感和放疗耐受肿瘤组织及宫颈癌Hela、SiHa细胞中circ₀000392、miR-145-5p、CT10激酶调节子样蛋白(CRKL)的表达。将siRNA circ₀000392、miR-145-5p mimic、miR-145-5p inhibitor、pcDNA 3.1-CRKL及其阴性对照分别转染至Hela和SiHa细胞, 细胞经辐射诱导后, 采用克隆形成实验检测细胞存活能力, 流式细胞术检测细胞凋亡情况, Western blot检测Bax和Bcl-2、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK) 1/2和细胞外调节蛋白激酶(ER...