miR-424在人骨髓间充质干细胞分化过程中的表达

目的 筛选可作为人骨髓间充质干细胞(MSCs)分子标记物的microRNA(miRNA).方法 以从骨髓中分离培养的MSCs及其诱导分化的成骨细胞和软骨细胞为实验对象,利用基因芯片检测miRNA的表达情况,由芯片显著性分析(SAM)得到MSCs较其诱导分化细胞高表达的miRNA,再由实时定量PCR进行验证.结果 成功分离培养出MSCs,并分别诱导其分化为成骨细胞和软骨细胞;MSCs及由其诱导分化的成骨细胞和软骨细胞经miRNA芯片检测及SAM分析得到8个MSCs较由其诱导分化的成骨细胞高表达miRNA(has-miR-424、has-miR-34a、has-miR-593、has-miR-10a、has-miR-148a、has-miR-602、mmu-miR-709、mmu-miR-665),3个MSCs较由其诱导分化的软骨细胞高表达miRNA(has-miR-424、PREDICTED_MIR189、mmu-miR-665).其中MSCs较成骨细胞和软骨细胞均高表达的人源性miRNA为has-miR-424,差异倍数分别为6.6倍和4.4倍;在原样本中对进行实时定量PCR的验证,结果提示与诱导分化的成骨细胞相比,MSCs中的has-miR-424表达升高约3.6倍,而与诱导分化的软骨细胞相比,MSCs中的has-miR-424表达升高约3.1倍,结果与芯片结果相符合.结论 MSCs较其诱导分化细胞高表达的miRNA有望成为人骨髓间充质干细胞的一种特异性的分子标记物,这些miRNA对MSCs自我更新和未分化状态起着重要的维持作用.     

脐带全层源间充质干细胞分离培养及向成软骨细胞分化的实验研究

目的从人脐带全层中分离培养间充质干细胞(MSCs),并进行成软骨诱导分化,为组织工程软骨和软骨损伤后修复提供种子细胞。方法采用胶原酶消化法从脐带全层中分离培养间充质干细胞,显微镜下观察细胞形态,细胞计数法绘制细胞生长曲线,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞表型,采用微团细胞培养在软骨诱导液中向软骨细胞分化,阿尔辛蓝及甲苯胺蓝染色检测细胞分化情况,RT-PCR法检测诱导后细胞表达聚集蛋白聚糖(ACAN)基因情况。结果人脐带全层来源的MSCs呈成纤维样形态漩涡状贴壁生长,细胞高表达HLA-I类分子、CD73、CD90、CD166及CD105,不表达CD34、CD45、CD14、CD31、CD80、CD86及HLA-DR。细胞诱导分化21d后,阿尔辛兰及甲苯胺蓝染色阳性;RT-PCR检测诱导后的细胞表达ACAN,而对照组无表达。结论人脐带全层为成体MSCs提供一种新而方便的来源,人脐带间充质干细胞(hucMSCs)体外培养能够向软骨细胞分化。     

兔骨髓间充质干细胞获取与特性的实验研究

目的：完善兔骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）体外扩增培养体系并观测其特性。方法：兔骨髓经密度梯度离心获得单核细胞后贴壁培养，光镜、透射电镜观察所获细胞形态，流式细胞术检测细胞周期，体外诱导MSCs向成骨细胞、成脂肪细胞分化并鉴定。结果：原代及传代MSCs为漩涡状贴壁生长的长梭形成纤维细胞样细胞，传代细胞具有类似的生长规律；透射电镜示所获细胞具有较强的自我更新能力；细胞周期分析显示87％以上细胞处于G0／G1期；MSCs经体外诱导可向成骨细胞、成脂肪细胞分化。结论：利用密度梯度离心联合贴壁培养法可分离、纯化MSCs，所获细胞具备成体干细胞特性，于体外可大量扩增，做为种子细胞和载体细胞满足实验需要。     

人骨髓间充质干细胞定向成骨诱导中碱性磷酸酶对其成骨能力的影响

目的 探讨定向诱导人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)分化为成骨细胞过程中,碱性磷酸酶(ALP)对hBMSCs成骨能力的影响. 方法抽取骨髓,梯度离心法分离单个核细胞,在DMEM条件培养基诱导hBMSCs定向分化为成骨细胞;相差显微镜观察成骨细胞形态,MTT法检测成骨细胞增殖,测定成骨细胞ALP分泌量及成骨细胞胞内ALP含量,RT-PCR检测成骨细胞ALP mRNA的表达. 结果梯度密度离心和黏附贴壁法联合使用可得到均一的hBMSCs;体外定向诱导过程中,成骨细胞ALP含量和ALP mRNA的表达在定向诱导10 d左右开始显著升高,成骨细胞的增殖能力明显增强.随着传代次数的增加,成骨细胞的增殖能力和碱性磷酸酶分泌量以及ALP mRNA的表达呈下降趋势,与BM-Purple染色结果一致. 结论 hBMSCs经定向诱导后可以分化为成骨细胞,ALP含量的变化能够显著影响hBMSCs诱导成骨的能力.     

人诱导多能干细胞体外多向分化能力的方法验证

 目的 探讨人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSC)体外多向分化能力的方法。方法 iPSC通过形成拟胚体(embryonic body, EB)的阶段,将其诱导为间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSCs)样细胞,倒置显微镜下观察诱导过程中细胞形态的变化,流式细胞术检测iPSC来源的MSCs(iPS-MSCs)表面标志物的表达,并进一步将iPSC-MSC诱导为成骨、软骨细胞;或直接EB接种,将其诱导成神经细胞。通过上述方法验证iPSC的多向分化能力。结果 诱导后的 iPSC-MSC 逐渐向外生长变为长梭形; CD29、CD105在 iPSC -MSCs 中表达阳性, 而 CD34、CD45则为阴性; 碱性磷酸酶、甲苯氨兰染色结果表明iPSC -MSCs 具有成骨、成软骨的能力;iPSC亦可直接从EB阶段诱导成神经细胞。结论 通过上述方法,可成功诱导iPSC 为成骨、成软骨、成神经细胞,为 iPSC进一步的研究与应用提供了技术基础。     

半月板碎片来源间充质干细胞样细胞的分离培养及多向分化潜能

目的:探讨半月板碎片来源间充质干细胞(MSC)样细胞的分离培养和多向分化潜能。方法:通过酶消化的方法分离半月板碎片来源细胞,体外培养至第3代,显微镜下观察其形态和生长状态。取第3代细胞并对其进行向成骨、成脂和成软骨诱导分化。结果:经酶消化的方法分离半月板碎片来源细胞4~6天可见少量的长梭形贴壁,10~14天细胞成簇生长,克隆集落形成。第3代细胞形态较均一,生长增殖良好。成骨诱导14天后ALP和茜素红染色阳性,有矿化结节形成。成脂诱导14天后油红O染色阳性提示细胞内有脂滴形成。采用细胞微团无血清成软骨诱导21天后甲苯胺蓝染色呈阳性,细胞外有蛋白多糖形成;免疫组织化学染色示特异软骨基质Ⅱ型胶原表达阳性。结论:采用混合胶原酶消化的方法分离获得的半月板碎片来源的细胞贴壁生长,呈典型的长梭形的MSC样细胞形态,在体外适当的诱导条件下具有分化成骨、成脂、成软骨的潜能,有望成为半月板再生的种子细胞来源。     

骨髓间充质干细胞的应用研究进展

间充质干细胞 (ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌ,ＭＳＣ)是中胚层来源的具有多向分化能力的干细胞 ,主要存在于全身结缔组织和器官间质中 ,以骨髓组织中含量最为丰富 ,胎儿脐血中亦可分离得到[1 ] 。在一定诱导条件下具有向成骨细胞、成软骨细胞、成肌细胞、肌腱细胞、脂肪细胞以及基质细胞等中胚层细胞分化的能力 ;同时 ,ＭＳＣ还可以向外胚层的神经元细胞和内胚层的肝卵圆性细胞分化[2 5] 。这似乎突破了ＭＳＣ仅为中胚层干细胞的概念 ,展示了ＭＳＣ具有更为重要的理论研究意义和更为广阔的应用前景。笔者就近年来骨髓间充质干细…     

3D培养人脐带间充质干细胞来源的外泌体对成骨细胞分化的作用

目的 比较三维立体(3D)培养与传统贴壁培养(2D)人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)来源的外泌体促进成骨细胞分化能力的差异，探索前者在促进骨形成相关治疗中应用的可能性。方法 将hUC-MSCs分为2D组与3D组分别进行培养，在普通光学显微镜下观察细胞的形态特征，同时应用钙黄绿素-AM/PI活死细胞双染法检测3D组细胞的活性；通过转录组测序筛选两组差异表达基因并进行GO富集分析。提取2D组与3D组细胞分泌的外泌体并分为2D外泌体(2D-Exo)组与3D外泌体(3D-Exo)组，通过透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析及Western blotting对外泌体进行表征。在体外应用2D-Exo及3D-Exo干预乳鼠颅骨成骨细胞并进行成骨诱导分化，通过茜素红染色、碱性磷酸酶染色及RT-qPCR鉴定2D-Exo、3D-Exo对成骨分化能力的影响。结果 与2D组比较，3D组细胞大小均等，聚拢成球形生长；钙黄绿素-AM/PI活死细胞双染可见3D培养的hUC-MSCs具有较高活性；转录组测序结果显示，与2D组比较，3D组上调基因富集于骨矿化、软骨发育、细胞外基质的组成、成骨细胞分化、血管生成、细胞增...     

AdEasy1/Cbfα1诱导间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的观察核心结合因子α1(Cbfα1)对兔骨髓间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞分化的诱导作用.方法体外分离培养兔骨髓MSCs,用AdEasy1/Cbfα1转染MSCs,在转染后3 d、1、2、3和4周时,组织化学和免疫组化等方法检测成骨标志碱性磷酸酶和骨钙素的表达.结果AdEasy1/ Cbfα1转染后的兔骨髓MSCs表现出与成骨细胞相似的形态,并且表达碱性磷酸酶和骨钙素.结论Cbfα1可诱导兔骨髓MSCs向成骨细胞分化.     

人脐带源和胎盘源间充质干细胞的生物学特性比较

目的：探讨人脐带和胎盘来源间充质干细胞（ MSCs）的分离培养和生物学性状的差异,为MSCs的临床应用提供选择依据。方法利用组织贴壁法分离培养脐带MSCs,酶消化法分离培养胎盘MSCs。传代培养后于倒置显微镜下观察两种不同来源的MSCs的细胞形态,流式细胞仪检测两者表面标志物表达的差异,通过细胞周期和群体倍增时间测定比较两者生长增殖能力,体外成骨和成脂诱导比较其分化能力。结果胎盘MSCs和脐带MSCs为贴壁生长、形态均一的成纤维样或长梭形外观,两种细胞均高表达CD90、CD105,不表达CD34、CD45、HLA-DR。胎盘MSCs的群体倍增时间为40．8 h,52．12％处于G0／G1期,脐带MSCs的群体倍增时间为39．5 h,57．50％处于G0／G1期,表明两者增殖能力旺盛,且无明显差异;两者在体外均可诱导分化成骨细胞和脂肪细胞。结论胎盘源MSCs具有与脐带源MSCs相似的生物学特性,两者均可作为临床治疗用细胞或组织工程的种子细胞。     

不同损伤时期人脑挫裂伤对神经干细胞分化影响的体外研究

目的：将人神经干细胞与不同损伤时期人挫裂伤脑组织（3 d、2月、6月）匀浆上清液体外培养,研究不同时期挫裂伤脑组织对神经干细胞分化的影响,探讨神经干细胞移植的最佳时机。方法：从12周流产胎儿脑组织提取神经干细胞,传代培养。加入不同时期脑挫伤组织匀浆上清液共培养,观察神经干细胞分化情况。结果：胎儿脑组织提取的神经干细胞具有分化增殖能力,与挫伤脑组织共培养后可分化成神经元和神经胶质细胞,越早期的挫伤脑组织诱导神经干细胞分化成神经元细胞的比例越高。结论：脑挫裂伤后早期组织可以诱导神经干细胞分化成更多的神经元,脑挫裂伤后早期行神经干细胞移植可能有助于提高疗效。     

Sprague-Dawley大鼠外周血来源间充质干细胞的动员、分离培养及鉴定

目的:探讨Sprague-Dawley大鼠外周血来源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)的动员、分离培养及鉴定方法,分析其表面标记和多向分化潜能,为运动创伤中的细胞治疗和组织工程产品培育提供新来源的、可以微创获得和自体细胞移植的种子细胞。方法:联合动员大鼠外周血MSC,采集腹主动脉外周血4 ml,使用淋巴细胞分离液结合密度梯度离心方法分离外周血单核细胞,体外培养至第3代,于显微镜下观察其形态和生长状态。取第3代MSC,鉴定其表型并向成骨、成脂和成软骨诱导分化,以证明其干细胞的特性。结果:经淋巴分离液结合密度梯度离心方法分离培养的外周血单核细胞,3~5天可见少量长梭形细胞贴壁,7~9天见细胞成簇生长,并形成克隆集落。第3代细胞形态较均一,生长增殖良好;表达典型的MSC标记CD44和CD90,不表达造血干细胞标记CD34和CD45。成骨诱导21天后,茜素红和ALP染色阳性,有矿化结节形成。成脂诱导21天后,油红O染色阳性,细胞内有脂滴形成。细胞微团无血清成软骨诱导21天后,甲苯胺蓝染色阳性,细胞外有蛋白多糖分泌;免疫组织化学染色示,特异性软骨基质II型胶原表达阳性。结论:采用联合药物动员方法能促进干细胞向外周血释放,分离培养的外周血干细胞经鉴定为MSC,体外具备三系分化潜能,有望成为运动创伤中新的细胞治疗和组织工程产品培育的种子细胞来源。     

阳离子脂质体DOTAP介导报道基因转染骨关节病滑膜细胞的实验研究

目的：探索阳离子脂质体ＤＯＴＡＰ介导目的基因转染骨关节病滑膜细胞的最佳条件。方法：分离培养骨关节病滑膜细胞,使用荧光质粒pＥＧＦＰ－Ｃ３作为报道基因,与阳离子脂质体ＤＯＰＡＰ一起转染骨关节病滑膜细胞;通过设立不同转染时间组、不同表达时间组以及不同ＤＯＴＡＰ剂量组,观察绿色荧光蛋白的表达。结果：使用阳离子脂质体ＤＯＴＡＰ介导荧光质粒转染骨关节病滑膜细胞,转染时间在 ６ｈ左右, ＤＯＴＡＰ（μｌ）／ＤＮＡ（μｇ）比值在 ７：１左右,可于转染后４８ｈ左右表达出的蛋白量最大。结论：阳离子脂质体ＤＯＴＡＰ介导荧光质粒转染骨关节病滑膜细胞转染条件的优化,为今后骨关节病滑膜细胞非病毒基因转移的研究提供实验依据。     

Spontaneous recurrent hemarthrosis of the knee joint in elderly patients with osteoarthritis: an infrequent presentation of synovial lipoma arborescens

Synovial lipoma arborescens (SLA) is a rare, benign, fat-containing synovial proliferative lesion that is typically known to affect the knee joint in adults, although it has also been described in other joints. SLA usually presents as a painless swelling and recurrent joint effusion, and the laboratory test results, including aspirated synovial fluid, are usually normal. We present here two cases of SLA of the knee, which presented as spontaneous recurrent hemarthroses in elderly patients with osteoarthritis (OA) with bloody aspirated synovial fluid. Magnetic resonance imaging (MRI) and arthroscopic synovectomy suggested the diagnosis of SLA; the histopathologic examination confirmed the diagnosis. One year later, both patients remain symptom-free and report no new episodes of hemarthrosis. We postulate that SLA should be included in the differential diagnosis of patients with recurrent joint effusions with hemarthrosis in elderly patients with OA. The clinical presentation, MRI findings, and treatment of SLA are described, and the entity is briefly reviewed.     

滑膜骨软骨瘤病的X线诊断(附84例分析)

目的:探讨滑膜骨软骨瘤病的X线诊断特点,提高对本病的诊断水平。方法:对经病理及临床综合确诊的84例滑膜骨软骨瘤病的X线表现进行回顾性分析。结果:本组84例中,踝关节3例,膝关节47例,髋关节11例,肘关节9例,肩关节14例,关节内均表现为多个圆形或卵圆形密度增高的钙化或骨化结节影,大小不一、数目不等。结论:滑膜骨软骨瘤病的X线表现具有一定特征性,结合临床具有较高诊断价值。     

Intra-articular calcifying synovial sarcoma mimicking synovial chondromatosis

 A case of intra-articular calcifying synovial sarcoma of the right knee joint in a 27-year-old man is reported. Prior to admission the patient had been suffering pain in the right knee for 5 years. Plain radiographs showed multiple calcified densities in the anterior aspect of the right knee closely mimicking synovial chondromatosis. Histological examination revealed that the lesion was a synovial sarcoma with extensive calcification subjacent to the synovial surface. Although intra-articular calcifying synovial sarcoma is very rare, it is important to be aware of the fact that synovial sarcoma, as well as synovial chondromatosis, can be present as a calcified lesion in the joint cavity.     

A case of intra-articular synovial lipoma of the knee joint causing patellar dislocation

Intra-articular synovial lipoma is rare and clinically manifested mostly by mass effect and occasionally by torsion of the stalk. Patellar dislocation rarely occurs owing to a mass effect of intra-articular tumor of the knee joint. The authors present a case of large intra-articular synovial lipoma at the lateral gutter of the knee joint, which presents as patellar dislocation. A 19-year-old man visited our clinic due to pain and limitation of motion owing to mass at his left knee. MRI revealed an intra-articular soft tissue mass at the lateral gutter of the knee joint with considerable mass effect displacing patella from the trochlear groove. Excisional biopsy confirmed the diagnosis of lipoma, and the final diagnosis was intra-articular synovial lipoma with clinical information. The final radiograph showed well-aligned patella on the trochlear groove. After marginal excision, there was no recurrence or tumor-related morbidity.     

滑膜组织中MMP-13与β-catenin对于骨关节炎严重程度的评估价值

 目的 探讨滑膜组织中基质金属蛋白酶13(MMP-13)与β-catenin在骨关节炎(osteoarthritis,OA)严重程度中的评估价值。方法 选取解放军联勤保障部队第九二二医院2017-04至2019-04收治的OA患者92例,根据疾病严重程度将其分成轻度组(n=47)、中/重度组(n=45)。利用免疫组化法测定所有患者滑膜组织中MMP-13、β-catenin的阳性、阴性表达情况,并采用逆转录检测法测定MMP-13、β-catenin在滑膜组织中的表达量。绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析MMP-13、β-catenin表达量对OA严重程度的预测价值。结果 轻度组的MMP-13、β-catenin阳性率分别为68.09%、55.32%,显著低于中/重度组的88.89%、75.56%(P＜0.05)。轻度组的MMP-13、β-catenin阴性率分别为31.91%、44.68%,显著高于中/重度组的11.11%、24.44%(P＜0.05)。轻度组MMP-13、β-catenin的表达量显著低于中/重度组(P＜0.05)。MMP-13、β-catenin表达量预测OA严重度的曲线下面积分别为0.656、0.683。以MMP-13＞0.887、β-catenin＞1.975时,病情发展为中/重度的风险越高。结论 随着OA患者病情越严重,MMP-13与β-catenin阳性率越高,且二者在滑膜组织中的表达量越高,MMP-13与β-catenin表达量对OA严重度具有一定预测价值。     

新生大鼠肌源性干细胞跨胚层分化为胰岛素分泌细胞的研究

目的探讨新生大鼠肌源性干细胞(MDSCs)在体外跨胚层转分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)的可能性。方法提取新生大鼠MDSCs原代细胞,差速贴壁培养后行Desmin免疫细胞化学鉴定。然后将细胞分为3组:胰腺提取液诱导组、化学方法诱导组、空白对照组,分别诱导并同期观察细胞的生长形态,采用双硫腙(DTZ)染色鉴定胰岛素分泌细胞,RT-PCR方法检测诱导后细胞的基因表达情况。结果获得高纯度的MDSCs,且Desmin免疫细胞化学鉴定呈阳性。胰腺提取液诱导组诱导后4d,相差显微镜下可见细胞团结构,诱导后6d呈半贴壁状态,诱导后12d形成典型的胰岛样细胞团,较化学方法诱导组诱导时间缩短3d。RT-PCR检测显示:胰腺提取液诱导组诱导6d后可检测到胰岛前体细胞相关基因Ngn3、nestin、PDX-1的表达;诱导12d后可检测到胰岛素基因的表达,但未检测到Ngn3、nestin、PDX-1的表达。结论胰腺提取液可模仿胰岛细胞发育的微环境,并诱导大鼠MDSCs跨胚层分化为胰岛素分泌细胞。     

MR findings in knee osteoarthritis

Knee osteoarthritis (OA) is a leading cause of disability. Recent advances in drug discovery techniques and improvements in understanding the pathophysiology of osteoarthritic disorders have resulted in an unprecedented number of new therapeutic agents. Of all imaging modalities, radiography has been the most widely used for the diagnosis and management of the progression of knee OA. Magnetic resonance imaging is a relatively recent technique and its applications to osteoarthritis have been limited. Compared with conventional radiography, MR imaging offers unparalleled discrimination among articular soft tissues by directly visualizing all components of the knee joint simultaneously and therefore allowing the knee joint to be evaluated as a whole organ. In this article we present the MR findings in knee OA including cartilage abnormalities, osteophytes, bone edema, subarticular cysts, bone attrition, meniscal tears, ligament abnormalities, synovial thickening, joint effusion, intra-articular loose bodies, and periarticular cysts. Electronic Publication