大鼠脑缺血再灌注 c-fos 表达与神经细胞凋亡关系研究

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后脑组织中c—fos表达水平与神经细胞凋亡的关系。方法采用大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,参考Longa的5分制法在大鼠麻醉清醒后进行评分;应用免疫组化、TUNEL法检测大鼠脑缺血再灌注后脑组织中c—f08表达水平及神经细胞凋亡情况。结果大鼠脑缺血再灌注后缺血脑组织中c—fos表达明显增加（P〈0．01）,于缺血再灌注12小时后达高峰,且神经细胞凋亡数明显增加（P〈0．01）。结论脑缺血再灌注后神经细胞c—fos表达水平增加,并参与神经细胞凋亡机制。     

针刺对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡的影响

目的研究针刺对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡的影响。方法建立大鼠中动脉阻塞再灌注模型（MCAO）,应用TUNEL法观察神经元凋亡,免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白表达。结果脑缺血再灌注后应用针刺疗法能够降低大鼠神经细胞受损后出珊的Caspase-3蛋白表达,并能减轻神经细胞凋亡。结论针刺疗法能通过有效的抑制脑缺血再灌注后大鼠神经细胞的凋亡起到脑保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后Survivin和Caspase-3表达与细胞凋亡的关系

目的 探讨大鼠脑缺血再灌注损伤后Survivin和Caspase-3表达与细胞凋亡的关系.方法 将42只成年雄性SD大鼠,体重250～280 g,随机分成对照组(n=3)、假手术组(n=3)和缺血再灌注6 h、12 h、1 d、2 d、3 d和6 d组(n=6).采用栓线法制备大脑中动脉缺血90 min再灌注模型,应用免疫组织化学方法观察Survivin和Caspase-3表达,TUNEL方法检测细胞凋亡.结果 对照组及假手术组未见Survivin和Caspase-3表达,仅见凋亡细胞0～2个,缺血再灌注6 h,显示在缺血侧皮层、皮层下纹状体和海马区Survivin和Caspase-3表达增多,凋亡细胞增多,12 h～1 d三者均持续增多,2 d Caspase-3表达及凋亡细胞达到高峰,3～6 d呈下降趋势,而Sur-vivin的表达3 d达高峰,持续至6d有下降趋势(P<0.05).结论 大鼠局灶脑缺血再灌注损伤后诱发Survivin和Caspase-3异常表达.并与细胞凋亡有密切联系.     

大鼠脑缺血再灌注损伤后尼莫地平对神经细胞凋亡影响的研究

目的研究大鼠脑缺血再灌注后尼莫地平对神经细胞凋亡的影响。方法雄性Wistar大鼠120只,随机分为空白对照组、假手术组、脑缺血组和尼莫地平组,后两组按时间分成再灌注1、3、6、12、24、36、48、72h和7d组。制作MACO动物模型致大鼠形成局灶性脑缺血,记录大鼠的神经功能缺损情况,应用TUNEL法检测脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的情况。结果大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡缺血组各时间点同正常对照组、假手术组相比均明显增高,且差异有统计学意义(P0.05);尼莫地平干预后可以显著减少大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡细胞数量(P0.05)。结论尼莫地平可以减少神经细胞凋亡,从而保护大鼠脑缺血再灌注后脑细胞的损害。     

局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质中Caspase-3蛋白的表达

目的：观察局灶性脑缺血再灌注（FCIR）大鼠大脑皮质Caspase-3的表达。方法：雄性SD大鼠42只，分为假手术组和缺血再灌注（IR）组，IR组又分为缺血2h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h组，每组6只。IR组采用线栓法建立FCIR模型，假手术组仅插线1cm；于脑视交叉平面向后7～11mm处取脑组织。HE染色观察各个时间点细胞形态学变化，免疫组织化学SP法观察不同时间Caspase-3的表达，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：脑缺血2h再灌注6hCaspase-3表达升高，再灌注24h达到高峰，再灌注72h开始下降。凋亡细胞数的变化与Caspase-3表达变化一致。结论：Caspase-3参与了脑缺血再灌注神经元的死亡过程，该作用可能与细胞凋亡有关。     

脑心通对大鼠脑缺血后神经细胞凋亡的影响

目的探讨脑心通对大鼠脑缺血后神经细胞凋亡的保护作用。方法应用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型。将大鼠分为假手术组、模型组、低剂量组和高剂量组,各组分别于术前3d和术后给予不同剂量药物灌胃,术后24、48.72、96h,取脑组织进行HE染色、TIC染色、测定Caspase-3表达的动态变化。结果脑心通低、高剂量组均能减少大鼠脑梗死体积（P〈0．05）,减少Caspase-3阳性细胞表达。结论脑心通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡有保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3的表达及胰岛素的影响

目的探讨Caspase-3在缺血再灌注大鼠脑皮质神经元中的表达及胰岛素干预的影响。方法将动物随机分为假手术组、缺血组及干预组,参照ZeaLonga线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞（MCAO）局灶性脑缺血再灌注模型,干预组大鼠在脑缺血即刻给予胰岛素及葡萄糖腹腔注射,分别在缺血2小时再灌注后不同时间点断头取脑,免疫组化法测定脑皮质神经元Caspase-3的表达。结果缺血组大鼠脑皮质Caspase-3的表达较假手术组显著增强（P〈0.01）,给予胰岛素处理后,Caspase-3的表达较缺血组减弱（P〈0.05）,但仍显著高于假手术组（P〈0.01）。结论短暂的脑缺血再灌注可导致脑皮质神经元Caspase-3的表达增加,胰岛素可抑制脑皮质神经元Caspase-3的表达。     

血栓通对脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡影响的研究

目的 研究血栓通在脑缺血再灌注过程中对神经细胞的作用机理,特别是血栓通与细胞凋亡的关系。方法 利用末端标记法,测定血栓通干预后脑缺血鼠脑组织中神经细胞的凋亡情况。结果 血栓通能明显降低神经细胞凋亡百分率,降低凋亡神经细胞积分光密度,减轻病理损害。结论 血栓通可显著抑制缺血再灌注诱导的脑神经细胞凋亡,起到一定程度的神经保护作用。     

二苯乙烯苷对脑缺血再灌注大鼠神经生长因子表达及神经细胞凋亡的影响

目的探讨二苯乙烯苷 (TSG) 对缺血再灌注大鼠的神经保护作用及分子机制。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,再灌注后 6 h、24 h、48 h、7 d 观察动物神经行为学变化并评分,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法 (TUNEL) 检测神经细胞凋亡;免疫组化法检测神经生长因子 (NGF) 蛋白表达。结果神经功能评分显示模型组各时间点均有明显的神经功能缺损症状,除 6 h 时间点外,两个剂量 TSG 治疗组其余各时间点神经功能评分明显低于模型组,差异显著 (P＜0.05);与模型组相比,除 7 d 时间点外,两个剂量 TSG 组其余各时间点凋亡细胞数均减少,差异非常显著 (P＜0.01);与模型组相比,两个剂量 TSG 组各时间点 NGF 表达均升高,差异非常显著 (P＜0.01)。结论TSG 能够增加脑缺血再灌注大鼠缺血周边区 NGF 蛋白表达,拮抗神经细胞凋亡,改善神经功能。     

脑缺血再灌注后c-fos基因表达与神经细胞凋亡关系的研究进展

c-fos基因的表达在脑缺血再灌注过程中起到重要作用,研究c-fos基因在脑缺血再灌注过程的表达和神经细胞凋亡的关系,并进行脑缺血后神经病理损害的探讨,将为脑血管病治疗提供理论依据。     

大鼠脑创伤后ERK信号转导通路对神经细胞凋亡的影响

目的探讨细胞外调节激酶（ERK）信号转导机制对大鼠脑创伤后神经细胞凋亡的作用。方法建立重型弥漫性脑损伤（TMI）模型,70只雄性SD大鼠分为创伤组和对照组,其中创伤组分为伤后10、30 min、3、6、24、48、72 h 7个时相点,采用免疫组化法检测细胞凋亡相关基因ERK、caspase-3的表达,原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡。结果创伤组海马CA1区P-ERK1/2和caspase-3蛋白表达在伤后3 h较对照组显著升高（P〈0.05）,伤后6 h达高峰（P〈0.01）,后逐渐下降,P-ERK1/2在伤后24 h表达量仍明显高于对照组（P〈0.05）,caspase-3在伤后72 h仍有大量表达;镜下对照组未见TUNEL阳性细胞,创伤组在伤后3 h凋亡细胞数明显增多,伤后48 h达高峰,均显著高于对照组（P〈0.01）。结论大鼠脑创伤后ERK信号转导通路激活,可能通过诱导caspase-3蛋白表达,进而导致神经细胞凋亡。     

PM2.5诱导大鼠肺组织miRNAs表达谱失调及相关信号通路变化研究

目的 探讨PM2.5诱导大鼠血清miRNAs表达谱失调及相关信号通路变化。方法 将40只6周龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组和PM2.5干预组［低剂量组(2.5 mg/kg)、中剂量组(10 mg/kg)、高剂量组(20 mg/kg)］,每组10只。麻醉满意后,PM2.5干预组大鼠分别经气管内滴注PM2.5混悬液2.5、10、20 mg/kg,对照组注射50 μL生理盐水,每3 d一次,连续干预70 d。实验结束后处死大鼠,收集肺组织进行病理学检查,并进行miRNA的RNA-seq 高通量测序。培养人支气管上皮细胞16 HBE,用100 μg/mL浓度的PM2.5处理16 HBE细胞24～48 h,模拟慢性暴露。利用miR-296-5p inhibitor及其阴性对照转染16 HBE细胞12 h后,进行PM2.5干预。Western blot检测Notch信号通路的改变。结果 与对照组比较,PM2.5干预组大鼠肺组织差异表达 miRNAs有67个,其中上调48个,下调的19个,表达量差异倍数高于5倍的有 4 个,即miR-296-5p、miR-27a、miR-182、miR-92a-1-p5,其中miR-296-5p上调了7.85倍,是表达差异最大的miRNA。与对照组比较,经PM2.5干预后,细胞中的Notch1蛋白、HES1蛋白表达量降低,Beclin1蛋白、cleaved-Caspase3蛋白表达量升高(P＜0.05);与miRNA阴性对照组相比较,转染miR-296-5p inhibitor后,细胞中的Notch1蛋白,HES1蛋白、Beclin1蛋白的相对表达量均明显升高(P＜0.05)。结论 暴露于PM2.5环境中,大鼠肺组织中miRNAs的表达谱发生了紊乱,以miR-296-5p的表达失衡最明显,且miR-296-5p的表达失衡可通过Notch信号通路发挥效应,影响肺上皮细胞功能。     

体外顺铂诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡时细胞信号转导因子活性变化

目的体外使用顺铂诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡,检测细胞转导因子MAPKs及转录因子(JUN,CREB)活性的变化. 方法采用免疫细胞化学法和流式细胞术法. 结果 15 mg*L-1顺铂作用肝癌SMMC-7721培养细胞48 h可观察到明显的凋亡峰,72 h免疫细胞化学染色发现胞质或(和)胞核中MAPKs(JIN/SAPKs,p38MAPK,ERK)及转录因子(JUN, CREB)均有明显表达. 结论在体外顺铂诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡过程中,MAPKs途径(JIN/SAPKs,p38MAPK,ERK)及转录因子(JUN,CREB)参与诱导了细胞凋亡.     

心肌缺血再灌注损伤中细胞凋亡及其信号转导通路的研究进展

心肌缺血再灌注损伤中存在着不同程度的心肌细胞凋亡现象,但有关引发心肌细胞凋亡的具体机制目前尚不十分明确,本文就缺血再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡主要相关因素、参与调节的主要相关基因以及信号转导通路的研究进展综述如下。     

姜黄素对大鼠视网膜缺血再灌注后细胞凋亡及p53表达的影响

目的 探讨姜黄素对大鼠视网膜缺血再灌注后细胞凋亡及凋亡相关基因p53表达的影响。方法制作大鼠视网膜缺血再灌注模型,并随机分为假手术组（SH组）、缺血再灌注组（IR组）、姜黄素处理组（CU组）和对照组（SC组）,分别于再灌注后2、6、24、72h和7d时观察大鼠视网膜和视网膜毛细血管细胞的凋亡情况,并检测视网膜Caspase-3酶的表达活性及p53基因的表达情况。结果各组模型均制作成功,细胞组织学检查可见CU组损伤明显轻于其他组。CU组视网膜和视网膜毛细血管的细胞凋亡数量均显著多于SH组（均P〈0.01）,但显著少于IR组（P〈0．01）;CU组p53表达水平及Caspase-3酶活性均显著强于SH组（均P〈0.01）,但显著弱于IR组（P〈0．01）。结论姜黄素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤具有保护作用,调控凋亡相关基因p53蛋白的表达可能是其作用机制之一。     

颅内动脉瘤信号转导相关基因的研究

目的：检测颅内动脉瘤信号转导相关基因的差异表达,探讨其与颅内动脉瘤发生的关系。方法：选取颅内动脉瘤标本3例,以3例正常颞浅动脉标本作对照,抽提总RNA,经线性扩增,再与人类全基因组芯片Ⅱ杂交,进行信号转导相关基因差异表达谱分析。结果：发现颅内动脉瘤差异表达的信号转导基因22条,且均为上调表达。结论：信号转导相关基因的差异表达可能与颅内动脉瘤的发生有关。     

survivin反义寡核苷酸诱导人肝癌细胞凋亡的相关信号转导途径

目的 利用人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,探讨survivin基因诱导肝癌细胞凋亡的相关信号转导途径。方法 采用脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞。采用Western印迹及原位杂交检测细胞内survivin蛋白及mRNA的表达。采用流式细胞仪及TUNEL染色检测细胞凋亡的变化。采用western印迹,免疫沉淀,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及激酶活性检测方法测定细胞内丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)及半胱氨蛋白水解酶3表达及活性的变化,观察p38MAPK与半胱氨蛋白水解酶3活性变化之间的关系。结果 脂质体介导转染survivin反义寡核苷酸后,SMMC-7721肝癌细胞内survivin蛋白及mRNA表达可分别被下调84.6%及69.7%。凋亡细胞比率由转染前的0.70%增加至31.51%。转染后细胞内p38MAPK及半胱氨蛋白水解酶3表达无明显变化。但其活性显著升高,其中p38MAPK活性升高发生于半胱氨蛋白水解酶3活性升高之前。结论 转染survivin反义寡核苷酸可以有效诱导肝癌细胞发生凋亡,其诱导肝癌细胞凋亡的信号通过顺序激活p38MAPK-半胱氨蛋白水解酶3信号途径传导。     

NF-κB信号通路在失血性休克缺血-再灌注肺组织中的变化

目的 :探讨核因子 κB(NF κB)信号通路在失血性休克缺血 再灌注 (I/R)损伤肺组织中的变化及意义。　方法 :建立失血性休克I/R家兔模型。采用原位杂交、免疫组化结合图像分析以及酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测实验动物I/R肺组织损伤前后I κB激酶 β(IκK β)mRNA表达和NF κB的活性以及支气管肺泡灌洗液 (BALF)中肿瘤坏死因子 α(TNF α)、白细胞介素 6 (IL 6 )的含量变化。并进行肺组织病理学光镜检查。　结果 :模型组上述指标显著升高 (P均 <0 .0 1) ;I/R损伤动物肺组织明显呈炎症病理改变。　结论 :IκK β激活 /NF κB核移位 /细胞因子释放在失血性休克I/R并发急性肺损伤 (ALI)的病理机制中发挥重要作用。     

Apelin-13对在体大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响及其信号转导途径

目的研究心血管活性肽Apelin-13对在体大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响,并探讨其信号转导途径。方法将雄性SD大鼠随机分为对照组（n=17）和Apelin-13组（n=15）,建立在体大鼠心肌缺血-再灌注模型,对照组在再灌注前5min给予生理盐水颈静脉注射,Apelin-13组给予0．1mg／kgApelin-13颈静脉注射,用伊文思蓝和TTC双重染色法测定心肌梗死区（IS）面积和缺血危险区（ARR）面积,计算IS面积占ARR面积的百分比（IS／ARR）;TUNEL法测定心肌细胞凋亡;Western blotting法检测ERKl／2蛋白的表达。结果Apelin-13组的IS／AAR和心肌细胞凋亡指数均显著低于对照组[（38．33&#177;12．95）％vs（52．61&#177;11．00）％,（0．21&#177;0．02vs0．31&#177;0．05]（P〈0．05）;Apelin-13组P—ERK1／2的表达较对照组明显增加（1．15&#177;0．16vs0．63&#177;0．07）（P〈0．05）。结论Apelin-13具有心肌保护作用,能够缩小心肌梗死面积,减少心肌细胞凋亡,其作用机制可能与ERK1／2 MAPK激酶途径激活有关。     

Apelin-13对在体大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响及其信号转导途径

目的 研究心血管活性肽Apelin-13对在体大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响,并探讨其信号转导途径.方法 将雄性SD大鼠随机分为对照组(n=17)和Apelin-13组(n=15),建立在体大鼠心肌缺血-再灌注模型,对照组在再灌注前5 min给予生理盐水颈静脉注射,Apelin-13组给予0.1 mg/kg Apelin-13颈静脉注射,用伊文思蓝和TTC双重染色法测定心肌梗死区(IS)面积和缺血危险区(ARR)面积,计算IS面积占ARR面积的百分比(IS/ARR);TUNEL法测定心肌细胞凋亡;Western blotting法检测ERK1/2蛋白的表达.结果 Apelin-13组的IS/AAR和心肌细胞凋亡指数均显著低于对照组[(38.33±12.95)% vs (52.61±11.00)%,(0.21±0.02 vs 0.31±0.05](P<0.05);Apelin-13组p-ERK1/2的表达较对照组明显增加(1.15±0.16 vs 0.63±0.07)(P<0.05).结论 Apelin-13具有心肌保护作用,能够缩小心肌梗死面积,减少心肌细胞凋亡,其作用机制可能与ERK1/2MAPK激酶途径激活有关.