顺铂联合COX-2选择性抑制剂NS-398对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响

目的 体外观察顺铂(diamminedichloroplatinum, DDP)以及DDP联合环氧合酶-2(cyclooxygenase, COX-2)选择性抑制剂NS-398对人食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响,比较单独应用DDP与DDP联合NS-398应用于食管癌Eca-109细胞的抗肿瘤效应.方法 CCK-8法检测不同浓度的DDP(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00 mg/L)单独作用及DDP联合NS-398(1.00、10.00 μmol/L)作用Eca-109细胞24 h的细胞增殖抑制率.琼脂糖凝胶电泳技术检测DDP(1.25、2.50、5.00 mg/L)单用及联合NS-398(1.00、10.00、80.00 μmol/L)作用Eca-109细胞24 h和48 h的DNA Ladder出现情况.透射电镜观察DDP单用以及联合NS-398作用于Eca-109细胞24 h超微结构的变化.药物未处理组作为对照组.结果 细胞增殖抑制实验表明顺铂、NS-398对Ec-109细胞有剂量依赖性抑制增殖作用(P<0.05).顺铂联合NS-398用药组细胞增殖抑制率明显高于同浓度顺铂单用组,且随添加的NS-398的剂量的增加而增加,DDP联合NS-398用药组对Ec-109细胞的增殖抑制效应和诱导凋亡效应明显高于DDP单药组,二者具有协同效应.结论 与DDP单用相比,添加低剂量NS-398能够增强DDP对Eca-109细胞的增殖抑制效应和诱导凋亡效应.     

NS-398联合顺铂对Eca-109细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察环氧化物酶-2选择性抑制剂NS-398联合顺铂对食管癌Eca-109细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用细胞增殖抑制实验(CCK-8法)检测不同-质量浓度的顺铂(1.25、2.50、5.00和10.00 ms/L)单用及联合小剂量(1.00和10.00 μmol/L)NS-398作用于人食管癌Eca-109细胞24 h后细胞增殖抑制率;采用流式细胞仪检测细胞周期的改变及早期凋亡情况.结果:顺铂、N-398单用及2者联合对Eca-109细胞均有抑制增殖作用(F顺铂=1391.300,FNS-398=642.898,F交互=15.254,P均<0.001),可阻止细胞周期的进程(G0/G1期:F顺铂=1308.300,FNS-398=133.138,F交互=26.692,P均<0.001;S期:F顺铂=1470.300,FNS-398=149.638,F交互=30.000,P均<0.001),诱导细胞凋亡(F顺铂=39.493,P<0.001,FNS-398=0.000,P=0.987;F交互=4.325,P=0.006).顺铂联合NS-398对Eca-109细胞的作用明显强于顺铂单用,且随着NS-398剂量的增高而增高(P<0.01).结论:NS-398能够增强顺铂对食管癌细胞的生长抑制和诱导凋亡效应.     

选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制

目的:研究选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制,探讨NS-398与卡铂在宫颈癌治疗中的协同作用.方法:用NS-398、卡铂及两者联合作用人宫颈癌Hela细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测NS-398、卡铂及两者联合对宫颈癌细胞增殖的影响,流式细胞仪PI染色法分析NS-398、卡铂处理后宫颈癌细胞凋亡率和细胞周期的改变.结果:NS-398、卡铂对人宫颈癌hela细胞的增殖具有抑制作用.卡铂联合NS-398对人宫颈癌hela细胞的增殖抑制作用显著增加,其联合抑制率近似于NS-398和卡铂单药抑制率之和,也近似于2倍卡铂剂量时的增殖抑制率.流式细胞仪检测发现,与对照组比较,NS-398处理组G1期细胞明显增加,而S期细胞明显减少,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);而卡铂处理组G1期细胞明显减少,S期细胞明显增加,两组比较有统计学意义(P＜0.05).NS-398(200 μmol/L)作用Hela细胞48 h后,流式细胞仪检测发现,NS-398处理组凋亡率为3.43%±0.02%,对照组凋亡率为1.48%±0.03%,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).而卡铂(80 mg/L)处理组凋亡率为9.32%±0.02%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的增殖具有抑制作用.NS-398对宫颈癌细胞的作用可能与凋亡无关.NS-398与卡铂在宫颈癌化疗中具有叠加作用.     

NS-398对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响

目的 研究环氧合酶-2（COX-2）特异性抑制剂NS-398对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响.方法 用含NS-398和顺铂的细胞培养液作用于Hela细胞,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测作用后的Hela细胞对顺铂敏感性的变化;采用流式细胞仪分别检测经过NS-398和顺铂作用的细胞与顺铂联合单独作用的细胞的COX-2蛋白表达情况.结果 NS-398和顺铂联合作用后的Hela细胞COX-2表达量较顺铂单独作用后的减少,差异有统计学意义（P〈0.05）;在转染48h后,Hela细胞对顺铂的半数抑制量（IC50值）从（10.475±1.713）μg/ml提高到（0.194±0.021）μg/ml,Hela细胞对顺铂的敏感性增加了53.88倍.结论 NS-398能增加宫颈癌Hela细胞对顺铂的敏感性.     

环氧合酶-2选择性抑制剂对乳腺癌细胞株生长及凋亡的影响

目的观察环氧合酶-2(COX-2)的特异性抑制剂NS-398对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制和凋亡作用,及其对阿霉素(ADM)诱导的MCF-7细胞凋亡作用的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析NS-398对MCF-7细胞的生长抑制作用,进一步用NS-398和ADM单独及联合作用于MCF-7细胞,流式细胞术检测细胞的凋亡,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Pax的表达。结果40μg／ml的NS-398就可抑制MCF-7细胞生长、诱导其凋亡,下调Bcl-2蛋白表达;和ADM联用凋亡率显著增高。结论NS-398可抑制MCF-7细胞生长、诱导其凋亡,并且和阿霉素有协同作用,其诱导凋亡与Bcl-2表达下调有关。     

重组人p53腺病毒联合顺铂对肺腺癌A549细胞基因表达的影响

目的 研究重组人p53腺病毒(rAd-p53)联合顺铂对肺腺癌A549细胞基因表达的影响,探讨rAd-p53增强顺铂对A549细胞抑制作用的机制.方法 通过基因芯片检测技术,比较rAd-p53联合顺铂与单独顺铂处理后的肺腺癌A549细胞肿瘤相关基因表达的差异,采用SAM软件对结果进行分析.结果 rAd-p53联合顺铂与单独顺铂处理的A549细胞比较,15个基因表达显著上调,28个基因表达显著下调.结论 rAd-p53增强顺铂对A549细胞的抑制作用与导入外源性p53基因后,p53基因表达上调并引起调控细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡的一系列基因的表达变化.     

槲寄生碱联合顺铂对人肺腺癌A549细胞的生长抑制及诱导凋亡作用

目的 探讨槲寄生碱、顺铂及两者联用对人肺腺癌细胞A549增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法 MTT法观察槲寄生碱、顺铂及两者联用对人肺腺癌A549细胞增殖的影响;DAPI染色观察槲寄生碱、顺铂及两者联合作用时A549细胞凋亡形态,流式细胞术检测槲寄生碱、顺铂和两者联合应用对人肺腺癌A549凋亡和细胞周期的影响.结果 ①槲寄生碱、顺铂均能抑制人肺腺癌细胞A549的生长,并表现为浓度和时间的依赖性:槲寄生碱0.0625、0.125mg/mL分别与顺铂1、2mg/L联合24、48、72 h的抑制率显著高于单用顺铂、槲寄生碱组(均为P<0.01),两者呈现出相加的抗瘤效果.②DAPI染色后槲寄生碱纽、顺铂纽和联合用药组A549肺癌细胞均表现出典型的细胞凋亡特征.③槲寄生碱和顺铂均可在一定程度上诱导细胞凋亡,两种药物联用后,诱导细胞凋亡作用显著增强(P<0.01).④槲寄生碱将细胞周期阻滞在G0/G1期,顺铂将细胞周期阻滞在S期.结论 槲寄生碱、顺铂均可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡,槲寄生碱可明显提高顺铂对A549细胞的杀伤效果.两者具有明显的相加作用.     

顺铂联合低分子柑橘果胶对肺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨顺铂联合低分子柑橘果胶(LCP)对人肺癌细胞的增殖及凋亡通路的影响.方法采用四甲基偶氮唑盐法检测各浓度顺铂单药(单药组)、顺铂联合LCP(联合组)对人肺癌细胞A549增殖的影响,用流式细胞仪检测半抑制浓度顺铂单药及联合用药处理A549细胞的凋亡比例,采用Western blot分析凋亡相关蛋白procaspase-3、8、9的变化.结果顺铂单药与联合LCP用药对A549细胞生长均有抑制作用,其效应呈时间和浓度依赖性;联合组对A549细胞的生长抑制作用更为显著(P<0.01).单药与联合用药均能使A549细胞凋亡比例增加,联合组较单药组细胞凋亡更加显著.单药组与联合组A549细胞的凋亡相关蛋白procaspase-3、8、9蛋白的表达均下调,联合组较单药组procaspase-3、9蛋白表达下调更为显著,但两组procaspase-8蛋白表达无明显差异.结论LCP能增加顺铂的细胞增殖抑制和诱导凋亡能力,该效应可能与活化线粒体凋亡途径有关.     

阿帕替尼联合顺铂对食管癌ECA109细胞抑制作用及机制探讨

目的:探讨阿帕替尼(Apatinib)联合顺铂对食管癌细胞ECA109的抑制作用及其可能的分子机制。方法:对人食管癌细胞株ECA109,单独或联合给药后采用MTT法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡,Western blot观察VEGF、AKT的表达情况。结果:Apatinib及顺铂单药对食管癌细胞株ECA109细胞均有增殖抑制作用,且结果呈时间剂量依赖关系;与对照组相比,Apatinib联合顺铂作用后有协同诱导凋亡作用,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot检测显示对照组与Apatinib单药组,联合用药组与单药组比较,AKT及VEGF表达均显著下调(P<0.05),而顺铂单药组与对照组相比较,AKT及VEGF表达下调不显著。结论:Apatinib和顺铂联合应用能够在体外协同抑制食管癌ECA109细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与下调AKT、VEGF有关。     

紫杉醇联合顺铂对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖抑制作用及其机制

目的:研究紫杉醇联合顺铂对人乳腺癌细胞MCF-7增殖抑制作用,探讨药物作用过程中与MAPK通路?Bcl-2基因家族关系及相关机制?方法:采用CCK-8试剂盒检测不同浓度紫杉醇?顺铂单独或联合作用MCF-7细胞48 h后对细胞增殖的50%抑制浓度(IC50),以及紫杉醇?顺铂分别联合ERK通路阻断剂(U0126)?JNK通路阻断剂(sp600125)对细胞增殖的抑制率;采用流式细胞仪检测紫杉醇?顺铂作用细胞48 h后的细胞周期分布情况;应用Western blot分别检测紫杉醇?顺铂及两药联合作用MCF-7细胞48 h后MAPK通路蛋白及Bcl-2?Bax蛋白表达?结果:紫杉醇(0.025~0.400 μmol/L)?顺铂(1~16 μmol/L)联合作用细胞时呈协同作用(CI < 0.95)?sp600125对MCF-7细胞增殖具有明显的抑制作用,sp600125联合紫杉醇?顺铂的抑制作用强于紫杉醇?顺铂单独作用细胞时的抑制作用?两药联合时处于G2期的细胞较紫杉醇单独作用时减少,较顺铂单独作用增加?紫杉醇?顺铂联合作用细胞48 h后p-ERK?Bcl-2蛋白表达较两药单独作用时降低,p-JNK/SAPK?p-p38蛋白表达较对照组明显增加?结论:紫杉醇联合顺铂作用MCF-7细胞时具有协同作用,两药与JNK通路阻断剂联用时对细胞的抑制作用强于单独用药时?紫杉醇联合顺铂时可以减少细胞在G2/M期的积聚,同时可以激活JNK?p38通路,抑制ERK通路的激活?     

5-氟尿嘧啶对肺腺癌A549细胞生长抑制作用机制的研究

目的研究5-氟尿嘧啶抑制人肺腺癌细胞生长的作用方式。方法用不同浓度的5．氟尿嘧啶处理体外培养的人肺癌A549细胞,应用MTT法、倒置相差显微镜和吖啶橙染色法分析检测A549细胞存活率的变化及细胞形态结构的变化。结果不同浓度的5-氟尿嘧啶处理A549细胞,随着药物浓度的增加和处理时间的延长,细胞存活率明显下降;且低浓度使细胞呈铺展状态,细胞质内空泡增多,吖啶橙染色显示酸性膜泡增多,高浓度使细胞变圆,出现凋亡状态。结论5-氟尿嘧啶能明显抑制A549细胞的生长,低浓度诱导细胞发生自噬,高浓度引起细胞凋亡。     

DADS对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446增殖的影响

目的 探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)体外抑制人肺癌细胞株NCI-H446细胞增殖作用.方法 采用MTT、细胞计数、细胞活力检测DADS对体外培养的人肺癌H446细胞的抑制增殖作用;倒置显微镜观察DADS对体外培养的人肺癌H446细胞的形态学改变.结果 MTT结果显示,DADS作用H446细胞后,明显抑制细胞增殖且抑制率呈现浓度时间依赖性关系;细胞计数结果表明,DADS作用H446细胞后其细胞群体倍增时间延长;形态学变化观察,随着DADS浓度递增,细胞逐渐稀疏,数量明显减少.结论 DADS对人小细胞肺癌H446细胞株具有抗增殖作用,且与药物浓度及作用时间相关.     

保妇康栓对人乳头状瘤病毒抑制作用的实验研究

目的:探讨中药制剂保妇康栓对人乳头状瘤病毒(HPV)16亚型的抑制作用。方法:以不同浓度的含保妇康栓培养基体外培养宫颈癌细胞系CaSki和宫颈永生化细胞H8,相差显微镜下观察活细胞形态学变化;采用四甲基偶氮唑蓝比色法以及流式细胞术技术检测不同浓度保妇康栓对细胞增殖的影响;应用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测人乳头状瘤病毒HPV16亚型E6E7的表达。结果:不同浓度的保妇康栓可以抑制细胞的增殖;在药物作用下,CaSki细胞G1期细胞增加(P<0.05),G2、S期细胞减少(P<0.05),CaSki细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),而对H8细胞周期和凋亡率影响不明显;两种细胞HPV16E6E7基因片段mRNA表达均明显低于对照组(P<0.01)。结论:保妇康栓在体外抑制宫颈癌细胞系CaSki和宫颈永生化细胞H8增殖,其机制可能是通过抑制HPV16E6E7表达而抑制肿瘤细胞生长。     

二烯丙基二硫化物诱导人肺癌细胞凋亡机制

目的研究大蒜提取物二烯丙基二硫化物(DADS)诱导人非小细胞性肺癌细胞H1299凋亡及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)对此过程的影响,探讨DADS抗肿瘤的可能机制。方法用MTT法检测DADS处理24 h后H1299细胞活性;用蛋白质印迹法测定H1299细胞内磷酸化-p42/44 MAPK的表达。结果与对照组相比,DADS呈浓度依赖性诱导H1299细胞凋亡;蛋白质印迹法分析显示,DADS可激活p42/44 MAPK,且磷酸化-p42/44 MAPK的表达呈浓度依赖性增加。结论DADS能诱导H1299人非小细胞性肺癌细胞发生细胞凋亡,并呈浓度依赖性诱导磷酸化-p42/44 MAPK表达。     

RNA干扰INK4位点反义非编码RNA抑制人肺癌细胞系生长的分子机制

目的探讨INK4位点反义非编码RNA(ANRIL)下调对CDKN2B-CDKN2A-ARF基因簇的调控及对人肺癌细胞生长的影响。方法通过RNA干扰下调人肺鳞状细胞癌细胞系H520中ANRIL的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测RNA干扰前后细胞中ANRIL mRNA的表达变化,绘制细胞生长曲线;实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测RNA干扰前后细胞中细胞同期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(CDKN2B)、CDKN2A、ARF mRNA和蛋白的表达变化。结果 RNA干扰可显著下调ANRIL mRNA的表达(P<0.05),ANRIL下调能抑制人肺鳞状细胞癌细胞系H520的生长(P<0.05),引起CDKN2B、CDKN2A、ARF mRNA和蛋白的表达升高(P<0.05)。结论 RNA干扰AN-RIL能抑制人肺鳞状细胞癌细胞的生长,ANRIL可能通过调控CDKN2B-CDKN2A-ARF基因簇起作用。     

阿魏酸抑制A549肺癌移植瘤生长及其机制研究

目的探究阿魏酸对A549裸鼠肺癌移植瘤的抑制作用及其可能机制。方法将40只构建成功的肺癌移植瘤BALB/c裸鼠采用随机数字表法分为模型对照组、阿魏酸25mg/L组、阿魏酸50mg/L组和阿魏酸100mg/L组4组,每组10只,通过腹腔注射给药。通过计算肿瘤的瘤体积,称重瘤体质量,计算各组抑瘤率;qRT-PCR检测移植瘤组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的mRNA表达水平,Westernblot法和免疫组化法检测移植瘤组织中mTOR、增殖蛋白Ki-67和凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的蛋白表达水平。结果与模型对照组相比,不同剂量的阿魏酸（25、50和100mg/L）组裸鼠的移植瘤组织生长受到抑制,抑瘤率分别为32.82%、43.75%和62.51%。与模型对照组相比,不同剂量的阿魏酸组mTOR的mRNA和蛋白表达水平均下降（均P＜0.05）,Ki-67蛋白表达水平均下降（均P＜0.05）,Caspase-3蛋白表达水平均升高（均P＜0.05）。结论阿魏酸对A549肺癌移植瘤生长具有显著抑制作用,可能与下调mTOR表达,抑制Ki-67蛋白表达和促进Caspase-3蛋白表达有关。     

VES体外抑制Raji细胞增殖及机制的初步研究

目的：观察维生素E琥珀酸酯（VES）体外对人单核细胞白血病Raji细胞的抗增殖作用及对细胞周期和细胞周期素依赖性激酶2（CDK2）的影响。方法：应用荧光显微镜、流式细胞仪、免疫细胞化学染色等技术方法，体外观察VES对Raji细胞的作用。结果：VES对Raji细胞的生长抑制作用与诱发细胞凋亡的明显增加同步发生，具有剂量疚和时间效应关系，同时VES作用后，细胞内CDK2蛋白表达下降，细胞周期发生变化，细胞阻滞于C1期。结论：VES通过影响细胞周期调控因子CDK2的表达从而干扰细胞周期可能是其抗肿瘤的途径之一。     

罗格列酮增强顺铂对人肺腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)配体罗格列酮(ROZ)与顺铂(DDP)联合应用对人肺腺癌细胞系A549裸鼠移植瘤的作用及机制。方法建立人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型,28只荷瘤裸鼠随机分为7组,A组(对照组),B组(DDP1mg/kg),C组(DDP4mg/kg),D组(ROZ10mg/kg),E组(ROZ30mg/kg),F组(DDP1mg/kg+ROZ10mg/kg),E组(DDP1mg/kg+ROZ30mg/kg)。隔天腹腔注射给药,共10次,给药期间每4日测量皮下移植瘤的最长经和最短经,按标准公式:移植瘤体积(V)=最长径×最短径2×0.52计算瘤体积,绘制肿瘤生长曲线。实验末处死裸鼠,剥离皮下移植瘤,称量重量,计算瘤重抑制率;移植瘤组织标本SP免疫组织化学检测PPARγ、NFκB、Bcl-2蛋白的表达。结果罗格列酮和顺铂单独应用均能抑制裸鼠移植瘤的生长,呈剂量依赖性(P<0.01)。罗格列酮(30mg/kg)与低剂量顺铂(1mg/kg)联合应用具有协同效应(q=1.29)。ROZ处理后裸鼠移植瘤细胞PPARγ蛋白表达上调,NFκB、Bcl-2蛋白表达下调(P<0.001)。结论罗格列酮...     

灵巴菌质碱性醇提物体外抑制A549细胞增殖的作用及机制

目的 通过体外细胞培养探讨灵巴菌质的碱性醇提物对人肺癌细胞A549增殖的抑制作用及相关机制.方法 对灵巴菌质的甲醇提取部位采用酸溶碱沉-溶剂萃取等方法处理,得到其碱性醇提物,HPLC法定性鉴定巴豆苷的存在.进而通过MTT比色法、软琼脂克隆形成法、PI单染法和免疫荧光染色法观察其对A549细胞的增殖抑制、成瘤能力、生长周期分布及细胞骨架损伤程度的影响.结果 灵巴菌质的碱性醇提物含有抗癌活性成分巴豆苷,它能够显著抑制A549细胞的增殖,降低细胞克隆形成的能力,能将这种细胞的生长阻滞在G2期,并对其细胞骨架造成一定的损伤.结论 灵巴菌质的碱性醇提物具有体外抑制A549细胞增殖的效应,其作用机制可能与降低细胞克隆形成能力及损伤细胞骨架有关.     

槲皮素对人肺癌细胞和小鼠Lewis肺癌移植瘤细胞增殖的抑制作用及机制探讨

目的：研究槲皮素对人肺腺癌细胞株A549和小鼠Lewis肺癌移植瘤细胞增殖的抑制作用，并探讨其可能的机制。方法：①以不同剂量的槲皮素作用于人肺腺癌细胞株A549，用噻唑蓝(MTT)试验观察槲皮素对人肺癌细胞株增殖的影响。②将移植有Lewis肺癌的ICR小鼠随机分为模型对照组、槲皮素组及顺铂组，均采取腹腔内注射方式给药。给药结束后，测定各组小鼠的瘤重，计算抑瘤率；用免疫组化方法测定肿瘤的增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平。结果：①槲皮素对3．549细胞增殖有明显的抑制作用，对细胞增殖的抑制率呈剂量效应关系。②槲皮素对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长有明显的抑制作用，并显著下调小鼠Lewis肺癌移植瘤的PCNA表达水平。结论：槲皮素对人肺腺癌细胞A549和小鼠Lewis肺癌移植瘤细胞增殖有明显的抑制作用，其机制可能与抑制PCNA蛋白的表达有关。