抑癌基因P16甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨

目的:通过观察抑癌基因P16异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率,探讨抑癌基因P16异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床意义。方法:分离提取71例慢性宫颈炎患者。76例CIN患者,36例宫颈癌患者标本中的DNA,采用巢式甲基化特异性PCR方法检测P16基因的甲基化状态。结果:在7例宫颈癌患者标本检测到了P16异常甲基化,阳性率为19.4%;在4例CIN癌患者标本中检测到了P16异常甲基化,阳性率为5.3%;健康时照者标本中P16基因无异常甲基化。结论:抑癌基因P16异常甲基化随宫颈瘤样病变的加重而阳性率增高,P16异常甲基化是宫颈发生的过程中的早期事件,对于宫颈癌的早期诊断具有重要意义。     

胃癌中P16基因启动子区甲基化检测的临床意义

目的：探讨P16基因启动子区域甲基化在胃癌发生和发展过程中的临床意义。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）对37例胃癌病人手术切除肿瘤组织及其癌旁组织P16基因启动子区域甲基化状态进行检测。结果：P16基因在手术切除的29．7％的胃癌组织和2．7％的癌旁组织发生了甲基化，且与年龄、性别、淋巴结转移以及分化程度等临床病理指标无相关性。结论：P16基因启动子区甲基化可能是肿瘤特异性的（P〈0．05），可作为胃癌早期诊断的分子标记物。     

不同宫颈病变组织中C-MYC基因与P16蛋白的表达

目的:检测不同宫颈病变组织中C-MYC基因和P16蛋白的表达.方法:选择慢性宫颈炎40例,宫颈上皮内瘤变(CIN)I级108例,CINⅡ级50例,CINⅢ级35例,浸润性宫颈鳞状细胞癌38例,腺癌14例,分别采用荧光原位杂交技术和免疫组化SP技术检测各级宫颈病变组织中C-MYC基因及P16蛋白的表达.结果:随宫颈病变级...     

妇科恶性肿瘤P16基因甲基化研究

目的探讨妇科恶性肿瘤中p16基因甲基化及临床意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)方法．检测不同病理类型和临床分期的206例妇科恶性肿瘤组织中p16基因启动子区域5‘CpG岛甲基化状态，其中包括84例卵巢上皮性癌，62例子宫内膜癌和60例宫颈癌。结果正常对照组织及癌旁p16基因无甲基化；在卵巢上皮性癌、子宫内膜癌和宫颈癌中，甲基化率分别为5．95％(5／84)、24．19％(15／62)和21．67％(13／60)。结论p16基因甲基化在妇科恶性肿瘤发生中起着重要作用。     

膀胱移行细胞癌P16基因5’CpG岛甲基化与肿瘤恶性程度关系分析

目的 :了解P16基因在膀胱移行细胞癌 (TCC)中甲基化改变及这一改变与肿瘤恶性程度的关系。方法 :采用PCR法检测 31例膀胱TCCs标本及 9例正常膀胱粘膜P16基因甲基化。结果 :正常膀胱粘膜无甲基化P16基因外元 1甲基化率为 2 9.0 3% ,外元 2为 35 .48% ;外元 1甲基化与肿瘤恶性程度有显著相关性 (P <0 .0 1) ,外元 2甲基化与肿瘤恶性程度无相关性 (P >0 .0 5 )。结论 :膀胱TCCP16基因存在甲基化 ,外元 1甲基化可使细胞增殖进一步失控而使肿瘤恶性程度增加 ,在P16基因失活中可能起更重要作用。     

宫颈癌p16基因甲基化研究新方法

目的建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测宫颈癌p16基因甲基化的方法，以期达到早期诊断宫颈癌。方法正常基因组DNA经修饰后进行PCR，构建含有DNA甲基化β-aetin的重组质粒，克隆阳性质粒作为标准品用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR进行检测，建立检测的标准曲线。利用建立好的方法进行检测临床60例宫颈癌组织中p16基因启动子区域5’CpG岛甲基化状态。结果结果显示正常对照组织及癌旁p16基因无甲基化，60例宫颈癌标本的甲基化率为28．33％（17／60）。结论SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR用于p16基因甲基化检测为宫颈癌的早期诊断提供了一种有效的方法。     

神经母细胞瘤p16基因甲基化研究

目的：明确在神经母细胞瘤中p16基因是否发生甲基化及其频率，阐明p16基因在神经母细胞瘤的作用机制，方法：应用PCR技术结合限制性内切酶FnuDII,SacII,HpaII为工具，对14例神经母细胞癌患者的14个原发灶及其中5例肿瘤周围正常组织p16基因第1外显子CpG岛进行了甲基化修饰的研究。结果：5例正常组织的p16基因第1外显子CpG岛未发生甲基化，而4例原发灶在II（1例），III（2例），IV（1例）期有甲基化发生。结论：神经母细胞瘤组织DNA中不存在p16基因的纯合性缺失，p16基因甲基化不可能为期失活的一种形式，II、III、IV期均有发生，可能是肿瘤发生的早期事件，同一患者的原发灶和转移灶，可有不同的甲基化模式，反映了肿瘤的异质性。     

P16基因甲基化与狼疮性肾炎的关系

目的研究P16基因甲基化与狼疮性肾炎的关系。方法选择2017年1月—2018年12月本院收治的26例狼疮性肾炎的患者为狼疮性肾炎组,12例系统性红斑狼疮不合并肾损伤的患者为狼疮非肾炎组,另选取年龄、性别相匹配的20名正常健康成人为健康对照组。收集三组的血液标本,提取全血DNA,甲基化特异PCR(MSP)方法检测P16基因启动子区甲基化表达情况,统计学处理实验数据。结果 26例狼疮性肾炎病例组中P16基因启动子区甲基化率为61.53%(16例甲基化阳性),高于狼疮不伴肾损害甲基化率的41.67%(5例甲基化阳性)(P<0.05),两组均高于对照组的5.00%(1例甲基化阳性)。结论 P16基因启动子甲基化率在狼疮性肾炎组高于狼疮不伴肾损害组,狼疮患者组明显高于健康对照组,P16基因启动子区甲基化状态可能对狼疮性肾炎的发生发展起到一定的作用。     

p16甲基化与宫颈疾病的相关性研究

目的探讨p16基因甲基化与宫颈疾病的相关性。方法分别采用甲基化特异性PCR(MethylationspecificPCR,MSP)法和免疫组化法检测宫颈上皮内瘤样病变组织和宫颈癌组织中p16基因甲基化发生率和P16蛋白表达的缺失率。结果正常宫颈中未检测到p16基因甲基化,低度宫颈癌前病变p16基因甲基化率为3.33%。中度及高度宫颈癌前病变p16基因甲基化率分别为20.0%及26.7%。宫颈癌p16基因甲基化率为44.0%。中、高度病变及宫颈癌组与正常宫颈及低度病变甲基化率相比P<0.05,宫颈癌与中、高度病变组甲基化率相比P<0.05。结论 p16基因甲基化与宫颈疾病的发展具有相关性。     

维吾尔族妇女宫颈病变与RARβ基因启动子甲基化的关系

目的通过对宫颈癌特异性RARβ基因启动子甲基化水平研究,探讨宫颈癌发生与该基因表达的表观遗传学调控的关系。方法收集维吾尔族妇女宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)、宫颈内上皮瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈炎患者的新鲜组织标本56例,应用Sequenom MassARRAY甲基化DNA定量分析平台,对组织DNA的RARβ基因启动子区CpG位点进行甲基化水平定量分析。结果 RARβ基因启动子区的目的CpG片段含有16个CpG位点,通过Sequenom MassArray(质谱)对单一CpG位点的甲基化定量测试,发现CpG-6、CpG-12.13(联合位点)和CpG-14等4个CpG位点甲基化率在宫颈癌与宫颈炎组之间有显著差异(P<0.05),并且各个CpG位点的甲基化水平变化存在密切相关性(r>0.5,P<0.01)。但是,从整体CpG片段的甲基化水平角度分析,不同宫颈病变组织之间无统计学差异(P>0.05)。结论 RARβ基因启动子区CpG岛的特定CpG位点高甲基化是宫颈癌演进过程的重要标志,可能与维吾尔族宫颈癌的关系比较密切。从表观遗传学角度分析,此种甲基化引起基因转录水平下调,继而导致蛋白质表达缺失。     

TSLC1基因甲基化与宫颈癌HeLa细胞凋亡相关性的研究

目的研究天花粉蛋白诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中肿瘤抑制基因TSLC1的甲基化的变化情况,并探讨其在宫颈癌的发生发展中的作用及细胞凋亡和抑癌基因甲基化的相关性,寻找新型的去甲基化药物。方法应用MTT法检测对HeLa细胞增殖抑制的影响;流式细胞仪分析天花粉蛋白对宫颈癌HeLa细胞诱导凋亡作用;甲基化特异性PCR技术(MSP)检测天花粉蛋白处理前、后宫颈癌HeLa细胞中TSLC1基因启动子区CpG岛的甲基化的变化情况。结果宫颈癌HeLa细胞中TSLC1基因启动子区CpG岛是呈高度的甲基化状态,经天花粉蛋白处理后,HeLa细胞生长明显受抑,流式细胞仪分析出有特征性的亚二倍体凋亡峰,TSLC1基因启动子区CpG岛无异常甲基化表现。结论天花粉蛋白诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中对TSLC1基因有明显的去甲基化作用,可能是新型的甲基化抑制剂,肿瘤细胞凋亡与抑癌基因的甲基化失活之间可能存在某些相关性。并且TSLC1基因甲基化的检测有可能成为宫颈癌的早期诊断和指导临床治疗的又一指标。     

P16基因甲基化检测对恶性胸腔积液的诊断价值

目的 检测胸腔积液中沉渣细胞p16基因启动子的甲基化状态,探讨p16基因甲基化检测在良、恶性胸腔积液鉴别诊断中的意义.方法 利用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测66例原因不明的胸腔积液患者胸水沉渣细胞p16基因的甲基化状态.结果 66例胸腔积液患者中36例确诊为恶性胸腔积液,30例为良性胸腔积液.恶性胸腔积液沉渣细胞p16基因启动子甲基化阳性率为69.4%(25/36);在良性胸腔积液中为13.3%(4/30);经统计学检验良、恶性胸腔积液组胸水沉渣细胞的p16基因甲基化阳性率差异有统计学意义(x2=20.915,P<0.01).恶性胸腔积液组沉渣细胞的p16基因异常甲基化阳性率明显高于良性胸腔积液组.恶性胸腔积液组沉渣细胞p16基因甲基化检测的敏感性为69.4%,特异性为86.7%,准确性为77.3%.恶性胸腔积液沉渣细胞p16基因甲基化阳性表达与肿瘤的组织细胞类型及细胞分化程度无关(P均>0.05).结论 MSP检测胸腔积液中沉渣细胞p16基因启动子的甲基化状态,是一种有潜力的鉴别胸腔积液良、恶性的辅助诊断方法.     

甲基化特异PCR方法对p16肿瘤抑制基因的研究

目的：研究肺癌、结肠癌组织中p16肿瘤抑制基因甲基化状态及其临床意义。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法,特异扩增分析甲基化和非甲基化两种状态。结果：p16基因在人胚肺组织处于非甲基化状态;在人肺巨细胞癌细胞系（PLA801-D）呈甲基化状态;在检测的肿瘤标本中,60%肺癌组织及70%结肠癌组织出现甲基化状态。结论：p16基因的甲基化状态是肺癌、结肠癌组织中p16基因异常形式之一,有可能成为肿瘤分子诊断的重要标志,MSP方法有临床普及应用前景。     

骨髓增生异常综合征的染色体异常和p16基因外显子1甲基化研究

目的：研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者染色体异常和p16基因外显子1甲基化情况。方法：采用骨髓细胞即刻低渗法和G显带技术检查15例MDS患者染色体异常情况，应用限制性内切酶酶切法和FOR技术检测MDS患者p16基因外显子1甲基化情况。结果：13例MDS患者4例染色体异常，其中2例为染色体数目异常，2例为染色体结构异常；15例MDS患者中．发现有1例p16基因外显子l发生甲基化。结论：MDS患者有较高比例的染色体异常，染色体异常以单体性为主；p16基因外显子1甲基化可能不参与MDS发病，但有可能参与MDS向急性白血病的转化。     

ISLC1基因甲基化与宫颈癌HeLa细胞凋亡相关性的研究

目的研究天花粉蛋白诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中肿瘤抑制基因TSLC1的甲基化的变化情况，并探讨其在宫颈癌的发生发展中的作用及细胞凋亡和抑癌基因甲基化的相关性，寻找新型的去甲基化药物。方法应用MTT法检测对HeLa细胞增殖抑制的影响；流式细胞仪分析天花粉蛋白对宫颈癌HeLa细胞诱导凋亡作用；甲基化特异性PCR技术（MSP）检测天花粉蛋白处理前后宫颈癌HeLa细胞中TSLC1基因启动子区CPG岛的甲基化的变化情况。结果宫颈癌HeLa细胞中TSLC1基因启动子区CPG岛是呈高度的甲基化状态，经天花粉蛋白处理后，HeLa细胞生长明显受抑，流式细胞仪分析出有特征性的亚二倍体凋亡峰，TSLC1基因启动子区CPG岛元异常甲基化表现。结论天花粉蛋白诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中对TSLC1基因有明显的去甲基化作用，可能是新型的甲基化抑制剂，肿瘤细胞凋亡与抑癌基因的甲基化失活之间可能存在某些相关性。并且TSLC1基因甲基化的检测有可能成为宫颈癌的早期诊断和指导临床治疗的又一指标。     

肺癌组织微卫星不稳定性及p16基因甲基化与肺癌发生、发展关系的研究

目的 :探讨微卫星标志物D3S12 5 5 ,C13 1169,IFNA ,D9S171改变及p16的异常甲基化与肺癌发生发展的关系 ,以及其在肺癌早期诊断和转移判断方面的价值。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)结合微卫星银染分析方法检测肺癌组织微卫星标志物的改变。结果 :5 6例肺癌组织标本中 3p上微卫星改变 2 6例 (4 6% ) ,9p上有微卫星改变的2 3例 (4 1% ) ,17p上有微卫星改变 15例 (2 6 8% )。 3p、9p和 17p上微卫星改变的总检出率 69.6% (3 9/ 5 6)。 44 .6%(2 5 / 5 6)的肺癌组织标本检出p16基因异常甲基化。 5 6例肺癌标本中 ,43 (76.8% )例至少检出一个以上的微卫星改变或p16基因异常甲基化。 2 3例肺部良性疾病的组织标本中 3p、9p和 17p上均没有发现微卫星标志物的改变及p16基因异常甲基化。结论 :3p ,9p和 17p上微卫星改变和p16基因异常甲基化是肺癌发生、发展过程中较早出现的遗传性改变之一 ,且与肺癌转移密切相关 ,有望应用于肺癌的早期诊断和转移判断。     

无机砷对人支气管上皮细胞p16基因甲基化及表达的影响

目的 观察亚砷酸钠（NaAsO2)和胂酸肽（Na3AsO4)对人支气管上皮BEP2D细胞p16基因甲基化及表达的影响。方法 采用甲基化特异性PCR（MSP）及RT－PCR等技术观察分析BEP2D细胞p16基因甲基化和表达水平。结果 （1）NaAsO2(0.016-2μmol/L）和高浓度组Na3aSo4(80和160μmol/L）具有促进BEP2D细胞p16基因二核苷酸CpG岛甲基化作用;而低浓度组Na3AsO4(20和40μmol/L）不能使BEP2D细胞p16基因CpG岛发生甲基化。（2）无机砷可使BEP2D细胞p16基因表达下降,且NaAsO2较Na3AsO4更为明显。结论 无机砷可引起BEP2D细胞p16基因CpG岛甲基化程度增高和表达水平下降,提示p16基因高甲基化是无机砷致癌的可能途径之一。     

基因甲基化与急性淋巴细胞白血病的关系

目的：探讨p16基因甲基化在急性淋巴细胞白血病(ALL)发生机制中的作用。 方法：采用限制性内切酶酶切结合多聚酶链反应方法检测82例ALL患者白血病细胞p16基因部分启动子和外显子1 CpG岛甲基化的情况。 结果：31例ALL患者存在p16基因的甲基化,1例p16基因纯合缺失;p16存在甲基化与纯合缺失的患者初次化疗完全缓解率和平均生存时间低于p16基因正常表达者。 结论：p16基因甲基化在ALL发生机制中有一定的作用,可作为评估ALL预后的一个指标。