川芎嗪对血管再狭窄大鼠血小板源生长因子受体与细胞外信号调节蛋白激酶表达的影响

目的:观察血小板源生长因子(PDGF)受体与细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)在再狭窄血管中的表达及川芎嗪(TMP)对其的影响,探讨TMP防治血管再狭窄的作用机制。方法:制备大鼠血管再狭窄模型,采用不同浓度的川芎嗪干预,观察颈总动脉形态学改变,免疫组化法检测颈总动脉PDGF-β受体与ERK1/2的表达。结果:假手术组动脉各层结构正常、清晰,无明显血管平滑肌细胞(VSMC)增殖,颈总动脉损伤大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)大量增殖,内膜显著增厚,川芎嗪处理后,血管平滑肌细胞(VSMC)增殖程度降低;与假手术组比较,再狭窄大鼠颈总动脉PDGF-β受体与ERK1/2表达显著增强(P<0.01),中、高剂量川芎嗪明显降低PDGF-β受体及ERK1/2的表达(P<0.01,P<0.05)。结论:TMP抑制血管再狭窄,其机制与抑制血管平滑肌细胞PDGF受体及ERK1/2表达有关。     

氯沙坦对血管损伤后再狭窄大鼠血浆内皮素含量及动脉平滑肌细胞中血小板源生长因子表达的影响

目的观察氯沙坦对颈总动脉损伤后再狭窄大鼠血浆内皮素(ET)和颈总动脉平滑肌细胞(SMC)中血小板衍生生长因子(PDGF)表达的影响。方法采用大鼠颈总动脉挤压术制备再狭窄模型,设假手术组、手术组和氯沙坦组,每组10只。观察颈总动脉形态学变化,放射免疫法测定血浆ET含量,免疫组织化学法观察颈总动脉PDGF-B的表达。结果假手术组颈总动脉各层结构正常、清晰,无明显血管平滑肌细胞增殖;手术组大鼠颈总动脉SMC大量增殖,内膜显著增厚;氯沙坦组SMC增殖程度降低。与假手术组比较,手术组大鼠血浆ET含量显著升高(P<0.01),颈总动脉SMC中PDGF-B表达显著增强(P<0.01);与手术组比较,氯沙坦组大鼠血浆ET含量与PDGF-B表达显著下降(P<0.05)。结论ET、PDGF参与血管再狭窄的形成,氯沙坦可通过降低ET含量与PDGF-B表达实现抗再狭窄的作用。     

辛伐他汀对大鼠损伤后狭窄颈总动脉中碱性成纤维细胞生长因子mRNA与细胞外信号调节激酶1/2mRNA表达的影响

目的观察辛伐他汀对大鼠损伤后狭窄颈总动脉中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)mRNA表达的影响。方法健康雄性SD大鼠80只,随机分为假手术组、模型组、辛伐他汀低剂量和高剂量组,制备颈总动脉狭窄模型,辛伐他汀低剂量组和高剂量组于术前3 d起分别给予辛伐他汀5、10 mg.kg-1.d-1进行灌胃,连续给药17 d后处死,苏木精-伊红染色观察左颈总动脉形态学变化;反转录聚合酶链式反应法测定血管壁组织的bFGF mRNA与ERK1/2 mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组血管中膜血管平滑肌细胞(VSMC)增殖显著,排列紊乱,向管腔及内弹力板方向增生扩展,管腔严重狭窄;辛伐他汀低剂量组血管内膜相对光滑,中膜VSMC排列趋于规整,管腔狭窄程度较轻;辛伐他汀高剂量组血管内膜比较光滑,中膜VSMC增殖程度显著降低,VSMC排列规整,管腔狭窄程度明显减轻。与假手术组比较,其他各组颈总动脉bFGF mRNA、ERK1/2 mRNA的表达均有显著增高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,辛伐他汀低剂量组bFGF mRNA、ERK1/2 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05),辛伐他汀高剂量组则明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);辛伐他汀高剂量组颈总动脉bFGF mRNA和ERK1/2 mRNA表达与低剂量组比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论辛伐他汀可通过抑制bFGF mRNA和ERK1/2 mRNA的表达抑制VSMC增殖,实现其抗血管损伤后狭窄的作用。     

辛伐他汀对颈总动脉损伤大鼠血管基质金属蛋白酶-2与基质金属蛋白酶抑制因子-2表达的影响

目的观察辛伐他汀对颈总动脉损伤大鼠血管壁基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其特异性的抑制剂基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)表达的影响。方法取18只大鼠采用颈总动脉挤压术制备血管狭窄模型,设假手术组、手术组和辛伐他汀组,每组6只大鼠。术后14 d观察颈总动脉形态学变化,胶原纤维的改变,免疫组织化学方法观察颈总动脉MMP-2及TIMP-2的表达。结果假手术组颈总动脉各层结构正常,清晰,无明显的胶原纤维沉积及血管平滑肌细胞(VSMC)增殖迁移;手术组大鼠颈总动脉中胶原纤维大量增多沉积,VSMC增殖迁移;辛伐他汀组胶原纤维沉积程度降低,VSMC增殖迁移程度也降低。与假手术组相比,手术组MMP-2与TIMP-2表达的平均光密度值升高,MMP-2/TIMP-2比值降低,差别均有统计学意义(P<0.01);与手术组相比,辛伐他汀组MMP-2与TIMP-2表达的平均光密度值降低,MMP-2/TIMP-2比值升高(P<0.01)。结论 MMP-2/TIMP-2比值降低是导致胶原纤维沉积进而引起术后血管再狭窄的重要因素,辛伐他汀能通过提高MMP-2/TIMP-2比值,减轻血管再狭窄的程度。     

降钙素基因相关肽对血管平滑肌细胞脂质代谢及AMPK的影响

目的观察降钙素基因相关肽（CGRP）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖过程中细胞脂代谢的影响,探索影响脂代谢的腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号蛋白在该作用中的变化。方法贴块法体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞（VSMC）,取第3-10代用于实验。分别用CGRP或／和AngⅡ处理细胞。细胞计数法观察CGRP对AngⅡ诱导大鼠VSMC增殖的影响;油红O染色检测细胞内脂质含量;Western blot检测细胞p-AMPK、p-ERK1／2的表达。结果CGRP预处理能减少AngⅡ诱导的大鼠VSMC数目（P〈0．05）和细胞内脂质聚集的作用,在此过程中伴随细胞内p-AMPK、p-ERK1／2表达下调（P〈0．05）;CGRP8—37（CGRP受体拮抗剂）能拮抗CGRP对AngⅡ促增殖和脂代谢作用（P〈0．05）;PD98059（ERK1／2抑制剂）能部分拮抗CGRP对p—AMPK的抑制作用（P〈0．05）。结论CGRP能显著降低AngⅡ诱导大鼠VSMC增殖过程中的脂质代谢,其细胞内信号通路可能涉及到p—ERK1／2和p—AMPK信号蛋白。     

缺氧诱导HIF-1α表达与兔血管平滑肌细胞增殖的关系

目的:探讨动静脉血管吻合口处再狭窄的机制,明确缺氧诱导血管平滑肌的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达与细胞增殖的关系。方法:52只新西兰大白兔行髂动静脉吻合术,随机分入术后常氧组(21%氧)、术后给氧组(30%氧)和假手术组。ELISA法检测兔血浆血小板源性生长因子B(PDGF-B)表达,Western blotting检测吻合口组织HIF-1α、PDGF-B、ERK1/2、Akt表达。以不同处理组的兔血浆培养兔主动脉平滑肌细胞,BrdU增殖试验检测细胞增殖,Western blotting检测细胞中HIF-1α、PDGF-B、ERK1/2、Akt表达。结果:术后常氧组兔血浆中PDGF-B和吻合口组织HIF1-α、PDGF-B、ERK1/2的表达明显增高。术后常氧组兔血浆培养的平滑肌细胞增生显著,其增生效应可被PDGF受体诺氨酸激酶阻滞剂AG1259阻断,缺氧条件下细胞内HIF1-α、PDGF-B、ERK1/2表达均明显增高。结论:局部缺氧是导致动静脉吻合口组织平滑肌细胞增殖、血管再狭窄发生的重要因素,术后氧疗是降低再狭窄发生的重要方法。     

血管周围脂肪组织中AngⅡ介导VSMCs增殖的机制

  目的 探讨血管周围脂肪组织(PVAT)中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）介导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的相关机制。方法 培养大鼠平滑肌细胞,MTT试验检测AngⅡ处理后细胞增殖率,检测AngⅡ处理后活性氧（ROS）、H2O2及HOCL水平; 预先给予NADPH抑制剂（apocynin）、H2O2水解酶（catalase）、ERK1/2抑制剂（PD98059）分别作用于AngⅡ处理的细胞,观察其对细胞总蛋白、细胞周期的影响,并检测H2O2及HOCL含量的变化。结果 AngⅡ（终浓度100 nmol/L）处理24 h后细胞与未予AngⅡ处理比较可明显诱导细胞增殖（P＜0.05）,且ROS随着升高;预先给予NADPH抑制剂apocynin、H2O2水解酶catalase、ERK1/2抑制剂PD98059分别作用于AngⅡ处理的细胞与单用AngⅡ处理的细胞比较可抑制细胞增殖（P＜0.05）;预先给予NADPH抑制剂（apocynin）、H2O2水解酶（catalase）与单用AngⅡ处理的细胞比较可降低H2O2及HOCL含量（P＜0.05）,但ERK1/2抑制剂（PD98059）与单用AngⅡ处理组比较无此效应（P>0.05）。结论 在PVAT中ROS在介导AngⅡ诱导VSMCs增殖的通路可能为Nox/H2O2/HOCL/ERK1/2。     

血管紧张素转换酶2基因转染抑制平滑肌细胞增殖

目的 通过血管紧张素转换酶2(ACE2)基因转染大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),观察其对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)促VSMC增殖的影响.方法 将大鼠VSMC分为正常细胞组、AngⅡ组、空载体+AngⅡ组及pm-ACE2+AngⅡ组,通过CCK8细胞计数试剂盒和流式细胞仪检测各组细胞周期,观察ACE2基因转染对AngⅡ促VSMC增殖效应的影响.结果 与正常细胞组相比,AngⅡ组细胞计数明显增高,pm-ACE2+AngⅡ组与AngⅡ组相比显著降低(0.535±0.004比0.866±0.026,P＜0.05);同时,AngⅡ组在G0/G1期细胞的百分率明显降低(58.80%±2.00%,P＜0.05),S期的则显著增高(35.90%±1.00%,P＜0.05),与AngⅡ组相比,pmACE2+AngⅡ组在G0/G1期的百分率明显升高(63.90%±1.40%,P＜0.05),S期则显著降低(27.80%±0.46%,P＜0.05).结论 ACE2基因转染能抑制AngⅡ的促VSMC异常增殖效应.

Abstract：

Objective To investigate the effect of Ang Ⅱ on the proliferation of vascular smooth muscle cell (VSMC) in rats after the transfection of ACE2 gene. Methods pm-ACE2 was transfected into the cultured VSMC by Lipofectamine 2000. The normal cell group, Ang Ⅱ group and pcDNA3. 1/Hygro( + )transfected + Ang Ⅱ group were taken as controls respectively. After the transfection of ACE2 gene, the cell proliferative effect of Ang Ⅱ on VSMC was investigated by cell counting kit-8 (CCK8) and cell cycle detection by fluorescence activated cell sorter (FACS). Results The (optical density) OD value of Ang Ⅱgroup was obviously higher than that of other groups. And it was obviously lower in the pm-ACE2 + Ang Ⅱgroup than the Ang Ⅱ group (0. 535 ± 0. 004 vs 0.866 ± 0.026, P ＜ 0. 05 ). Compared with other groups, the G0/G1 stage percentage of VSMC was obviously lower in the Ang Ⅱ group(58. 80% ±2. 00%, P ＜0. 05)while the percentage of S stage was obviously higher ( 35.90% ± 1.00%, P ＜ 0.05 ). Compared with the Ang Ⅱ group , the G0/G1 stage percentage of VSMC was obviously higher( 63. 90% ± 1.40%, P ＜ 0. 05 ) in the pm-ACE2 + Ang Ⅱ group while the percentage of S stage was obviously lower( 27.80% ± 0. 46%, P ＜0. 05 ). Conclusion The over-expression of ACE2 gene can inhibit the proliferation of Ang Ⅱ-induced VSMC.     

冠通方及其拆方含药血清对大鼠血管平滑肌细胞C-myc癌基因表达的影响

[目的]观察冠通方及其拆方含药血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC) C-myc癌基因表达的影响.[方法]选用大鼠VSMC,采用AngⅡ诱导其增殖,以冠通方及其拆方含药血清分别作用于大鼠VSMC,采用逆转录-聚合酶链反应(R.T-PCR)方法,测定冠通方及拆方含药血清对AngⅡ诱导的VSMC C-myc癌基因表达的情况.[结果]AngⅡ组VSMC的C-myc/β-actin比值显著增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);冠通方组及其拆方各组均可使C-myc比值显著下降,与AngⅡ组比较差异均有统计学意义(P＜0.01);冠通方组与其拆方各组比较差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);各拆方组组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).[结论]冠通方抑制VSMC增殖的作用与其可下调VSMC的调控基因C-myc表达有关,且冠通方组作用优于其拆方组.     

血管紧张素Ⅱ对肝星状细胞早期生长反应因子-1通路的调控作用

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肝星状细胞(HSC)早期生长反应因子-1(EGR-1)信号转导通路的影响.方法 采用HSC-T6细胞株.分别予AngⅡ 1 μmol/L处理10 min、30 min,Western blot检测磷酸化P42/44蛋白的表达.另外,观察AT-1受体阻滞剂-irbesartan、ERK1/2特异性阻断剂-U0126、抗氧化剂-乙酰半胱氨酸(NAC)(均预处理60 min,再予AngⅡ刺激)和TNFα对磷酸化P42/44蛋白表达的影响.此外,予AngⅡ、irbesartan、U0126、NAC和ACEI处理后,电泳迁移率变更分析(EMSA)检测EGR-1 DNA结合活性的变化;Western blot检测血小板衍生生长因子-B(PDGF-B)蛋白的表达.免疫组化检测AugⅡ对HSCPDGF-B蛋白表达的影响.结果 AngⅡ可诱导磷酸化P42/44的表达.U0126和irbesartan可抑制磷酸化P42/44的表达.EMSA结果显示:AngⅡ干预HSC 0.5h后,EGR-1 DNA结合活性开始增加,1 h达到峰值,然后逐渐减低.U0126和irbesartan处理后可显著抑制AngⅡ诱导的EGR-1活性增强.较高浓度的ACEI可抑制EGR-1的活性.当ACEI浓度为0.1 nmol/L时EGR-1的活性增强.NAC对EGR-1的活性无抑制作用.AngⅡ可诱导HSC PDGF-B蛋白表达.irbesartan可抑制AngⅡ诱导的PDGF-B表达.U0126、NAC和ACEI对PDGF-B表达无抑制作用.结论 AngⅡ可经ERK1/2通路诱导HSC EGR-1活性增强.AngⅡ可经EGR-1通路调控PDGF-B的表达.