原发性胆汁性肝硬化患者调节性T细胞及其与肝功能损伤的研究

目的检测原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis，PBC）患者外周血CD4^＋ CD8^＋ T、CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞亚群，探讨其与肝功能损伤、抗AMA—M2抗体产生的关系。方法采用流式细胞术检测北京协和医院住院和门诊PBC患者（n=27）外周血CD4^＋ CD8^＋ T细胞、CD4^＋ CD25^＋ T细胞群比例，以26例其他肝脏疾病患者作为疾病对照组，30例健康体检者作为正常对照，观察调节性T细胞亚群与患者的肝功能指标及自身抗体如AMA—M2、ANA的关系。结果PBC患者外周血CD4^＋ CD25^＋ T细胞比例与正常对照组比较结果差异无统计学意义（P〉0．05），但显著高于其他肝脏疾病组（P〈0．05）。CD4^＋ CD8^＋细胞群与正常人相比结果差异无统计学意义，其他肝病组明显高于正常对照组（P〈0．05）。PBC患者外周血NK细胞比例显著低于正常对照组（P〈0．05）。肝功严重损伤的PBC患者外周血CD4^＋ CD25^＋ T细胞比例明显高于肝功能轻度损伤者（P〈0．05）。PBC患者外周血CD4^＋ CD25^＋ T细胞数量与肝功能损伤指标ALB呈负相关（r=－0．338，P〈0．05），与TBIL、DBIL呈正相关（r分别为0．362，0．386，P〈0．05）。CD4^＋ CD25^＋ ／CD4^＋比例与GGT呈负相关（r=－0．335，P〈0．05），与TBIL、DBIL呈正相关（r分别为0．333，0．339，P〈0．05）。抗AMA—M2抗体阳性患者外周血CD4^＋ CD25^＋细胞比例明显高于AMA—M2阴性患者（P〈0．01）。未发现CD4^＋ CD25^＋ T、CD4^＋ CD8^＋T细胞比例在ANA^＋和ANA—PBC患者之间差异有统计学意义。结论PBC患者外周血CD4^＋ CD25^＋T细胞群比例与肝功能损害和抗AMA—M2抗体的产生密切相关，因此推测CD4^＋ CD25^＋T细胞的变化可能是导致病情发展以及肝脏损伤的关键环节之一。     

恶性肿瘤患者化疗前后外周血免疫学指标的检测及其临床意义

目的观察恶性肿瘤患者化疗前后外周血免疫学指标的变化，并探讨其临床意义。方法应用流式细胞仪检测103例恶性肿瘤患者静脉化疗前、后外周血T淋巴细胞亚群（CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋）、B淋巴细胞（CD19^＋）及NK细胞（CD3^-／CD16＋56^＋）的表达率。结果所有患者化疗后CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋表达高于化疗前（P〈005），其中化疗有效组（30例），差异有显著性意义（P〈0．01），化疗无效组（40例），差异无统计学意义（P〉0.05）；化疗前后CD19^＋的变化无统计学差异（P〉0．05）；化疗后NK细胞降低明显，有统计学差异（P〈0．05）。结论有效的化疗能够改善恶性肿瘤患者的T淋巴细胞免疫功能。     

幼年特发性关节炎病儿T淋巴细胞CTLA-4表达检测

目的探讨幼年特发性关节炎（JIA）病儿外周血细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）的表达及其临床意义。方法应用流式细胞仪分别检测36例JIA病儿和39例健康儿童（对照组）外周血T淋巴细胞上CTLA-4表达及淋巴细胞亚群变化。结果JIA病儿CD4^＋T和CD8^＋。T细胞上CTLA-4的表达较对照组均显著增高,差异有显著性（t=27．10、26．28,P〈0．01）;CD3＋CD4^＋。T细胞较对照组显著增加,CD3＋。CD8＋T细胞较对照组显著降低,差异有显著性（t=8．01、4．47,P〈O．01）。结论JIA病儿外周血T淋巴细胞CTLA-4的表达异常可能是JIA发病的重要机制之一。     

肺癌患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分布及临床意义

目的检测肺癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分布，探讨其临床意义。方法采用流式细胞术检测45例肺癌患者和30例健康对照者外周血中的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化，并通过体外淋巴细胞增殖实验对肺癌患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞进行鉴定。结果（1）肺癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋T细胞比例明显增高（P〈0．05），但治疗后其比例明显下降（P〈0．05）；（2）肺癌患者CD4^＋CD25^＋T细胞能抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖和干扰素γ的分泌。结论肺癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例明显增高，其动态监测有助于肺癌患者免疫状态及疗效评价。     

胸腺切除对重症肌无力患者外周血淋巴细胞Fas表达及T淋巴细胞亚群的影响

目的研究胸腺切除对重症肌无力（MG）患者外周血淋巴细胞（PBL）中Fas表达及T淋巴细胞亚群的影响,探讨胸腺切除术治疗MG与Fas介导的细胞凋亡的关系。方法采用流式细胞技术检测17例MG患者及13例健康对照组PBL中CD4^＋CD8^＋及Fas表达。结果与对照组相比,无行胸腺切除术组MG患者PBL中CD4^＋CD8^＋细胞比例升高,CD4^＋CD8^＋细胞比例下降,差异有统计学意义（P〈0．05）;行胸腺切除术组CD4^＋CD8^＋细胞比例较无行胸腺切除术组下降,差异有统计学意义（P〈0．05）。无行胸腺切除术组MG患者PBL中Fas^＋、CD4^＋Fas^＋细胞比例以及行胸腺切除术组Fas^＋细胞比例均高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。行胸腺切除术组MG患者PBL中Fas^＋、CD4^＋Fas^＋及CD4^＋Fas^＋细胞比例低于无行胸腺切除术组,但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论MG患者存在外周血T淋巴细胞亚群分布异常,胸腺切除可减少此异常。MG患者PBL表面Fas表达升高,可能反映体内T淋巴细胞的活化及CD8^＋T淋巴细胞介导的细胞毒性作用增强。胸腺切除可降低PBL中Fas的表达,可能与治疗MG的机制有关。     

CD28／CD152：CD80／CD86分子在强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞上的表达

目的探讨共刺激分子CD28／CD152：CD80／CD86在强直性脊柱炎（AS）患者外周血淋巴细胞上的表达及与免疫功能的关系。方法流式细胞仪检测AS患者及健康体检者T细胞表面标志CD3、CD4、CD8、CD19的表达及CD28／CD152和CD80／CD86在外周血T、B淋巴细胞上的表达水平；采用速率散射比浊法、酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM及C-反应蛋白（CRP）和白细胞介素-6（IL-6）水平。结果CD3^＋CD4^＋T细胞及CD4^＋／CD8^＋比值明显高于健康对照组（P〈0．05），而CD3^＋CD8^＋T细胞则明显低于健康对照组（P〈0．05）；CD4^＋和CD8^_T细胞上CD28和CD19^＋B细胞上CD80、CD86的表达均较健康对照组增高（P〈0．05），而CD152在CD4^＋T淋巴细胞上的表达也比健康对照组显著增加，但在CD8%＋T淋巴细胞上的表达却显著降低（P〈0.05）；血清IgG、IgA及CRP、IL-6水平均较健康对照组显著增高（P〈0．05）。结论AS患者外周血淋巴细胞CD28／CD152：CD80／CD86分子的异常表达与其免疫功能紊乱有密切关系。     

多种炎性疾病患者外周血CD4＋和CD8＋T淋巴细胞的检测与临床意义分析

目的：探讨恶性肿瘤、肺结核、干燥综合征、葡萄膜炎等多种炎性疾病患者外周血CD4＋和CD8＋淋巴细胞的变化及其临床意义。方法应用BD FACSCanto II流式细胞仪检测上述疾病患者外周血CD4＋、CD8＋ T细胞并计算两者比值,同时检测健康者标本20例作为健康对照组,进行统计分析。结果与健康对照组比,恶性肿瘤组CD4＋ T淋巴细胞、CD4＋/CD8＋均明显降低,CD8＋ T淋巴细胞增高,差异有统计学意义（ P＜0．05）;全身炎性反应综合征组CD4＋ T淋巴细胞、CD4＋/CD8＋均明显降低,CD8＋ T 淋巴细胞增高,差异有统计学意义（ P＜0．05）;葡萄膜炎组CD8＋ T淋巴细胞增高,差异有统计学意义（P＜0．05）;肺结核组CD4＋ T淋巴细胞降低,差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论患者的 CD4＋、CD8＋ T 淋巴细胞异常,表明机体细胞免疫功能异常。流式细胞仪检测CD4＋、CD8＋ T淋巴细胞可以作为患者临床免疫功能的初步诊断指标,辅助疾病治疗和病情观察。     

胃癌患者肿瘤组织和外周血中细胞毒性T细胞的相关性分析

目的研究胃癌患者肿瘤浸润淋巴细胞CD8^＋CD28^＋细胞及CD8^＋CD28^-细胞数量与外周血CD8^＋CD28^＋细胞及CD8^＋CD28^-细胞数量的相关性。方法采用流式细胞术对60例胃癌患者的肿瘤浸润淋巴细胞及外周血淋巴细胞的CD8^＋CD28^＋细胞及CD8^＋CD28^-细胞进行检测，采用直线相关分析两者的相关性。结果胃癌患者外周血淋巴细胞CD8^＋CD28^-、CD8^＋CD28^＋细胞分别为（26．13±8．17）％和（8．15±4．00）％；肿瘤组织中肿瘤浸润淋巴细胞CD8^＋CD28^-、CD8^＋CD28^＋细胞分别为（36．98±15．30）％、（6．02±4．37）％。两者之间具有正相关性（r分别为0．602、0．387，P〈0．01）。结论胃癌患者外周血CD8^＋CD28^-、CD8^＋CD28^＋细胞的检测对了解患者的免疫状况具有一定的价值。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血T淋巴细胞亚群检测的意义

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子的特点及意义。方法 以35倒健康人作为对照组,用流式细胞术分析了35例确诊的PBC患者外周血T淋巴细胞亚群及其分泌IL-4和IFN-γ情况。结果 PBC患者组CD^4＋T细胞升高,CD8^＋T细胞下降,CD4^＋T／CD8^＋T比值上升（P〈0．05）;PBC患者CD4^＋T细胞IFN-1表达显著升高（P〈0．05）,而IL-4水平与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论 在PBC发病机制中,CD4^＋T细胞和TH1亚群细胞超重要作用。     

间充质干细胞对活化T淋巴细胞的免疫调节作用

本研究的目的是探讨骨髓间充质干细胞（MSC）对活化T淋巴细胞的免疫调节作用及其在allo—HSCT相关GVHD防治中的作用。用终浓度为10μg/ml的PHA于不同时间作用T淋巴细胞，以^3H—TdR掺入法检测T细胞增殖功能；以不同数量的MSC分别与活化T淋巴细胞作用，根据MSC数量不同实验分为A组（对照组，不加MSC）、B组（MSC2×10^4）、C组（MSC4×10^4）、D组（MSC8×10^4），用^3H—TdR掺入法检测作用前后T细胞功能，FCM检测细胞免疫表型。结果显示，在终浓度为10μg／ml PHA作用下，T淋巴细胞的增殖能力随培养时间的延长而增强，48小时达高峰。FCM检测MSC细胞表型表明：CD44、CD105、CD29、FIK1表达阳性，不表达CD33、CD34、CD45、HLA—DR。随着MSC数量增加，与共培养前相比，T细胞的SI值逐渐降低（P〈0．05），但C组和D组间比较无差异（P〉0．05）。在低数量MSC作用下，CD3^＋CD4^＋表达低于对照组（P〈0．05），CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD152^＋高于对照组（P〈0．05）；C组和D组与对照组相比，CD3^＋CD4^＋表达明显降低（P〈0．01），CD3^＋CD8^＋、CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD152^＋明显增高（P〈0．01）。结论：丝裂原PHA可以使T细胞活化；骨髓MSC在体外可以使活化T细胞功能和细胞免疫表型发生改变，下调CD3^＋CD4^＋的表达，上调CD3^＋CD8^＋、CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD152^＋的表达。     

白三烯受体拮抗剂对毛细支气管炎外周血CD4^＋CD25^＋Treg的影响及疗效观察

目的探讨白三烯受体拮抗剂（孟鲁司特）对毛细支气管炎患）DJ＇b周血CD4^＋ CD25^＋ 调节性T细胞（Treg）的影响并观察其疗效。方法将48例毛细支气管炎患儿按入院顺序分成孟鲁司特干预组和常规治疗组,常规治疗组采取综合治疗,孟鲁司特于预组在综合治疗的基础上加用孟鲁司特4mg,每晚1次口服。检测2组患者治疗前后外周血中CD4^＋CD^25＋Treg的水平,并观察2组患者咳嗽、喘憋、肺部体征的持续时间。结果治疗前2组患儿外周血CD4^＋CD25^＋Treg占CD4^＋T细胞的百分比均明显低于健康对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;治疗后孟鲁司特干预组外周血中CD4^＋CD25^＋Treg水平较常规治疗组显著上升（P〈0．05）,同时咳嗽、喘憋、肺部体征持续时间与常规治疗组比较有统计学意义（P〈0．01）。结论孟鲁斯特纳可缩短病程,提高毛细支气管炎患儿外周血CD4^＋CD25^＋Treg的水平,在毛细支气管炎的治疗中起重要作用。     

白血病患儿外周血T细胞亚群检测的临床意义

本研究观察急性白血病患儿外周血T细胞在不同病程阶段的变化,了解白血病患儿的免疫状况。应用流式细胞术检测42例急性白血病患儿,另选取50例正常儿童（对照组）外周血CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋/CD8^＋比值、CD3^＋以及NK细胞在不同病程阶段的动态变化。结果表明：急性淋巴细胞白血病（ALL）与急性髓系白血病（AML）初诊患儿的CD3^＋,CD4^＋、CD8^＋细胞比例和CD4^＋/CD8^＋比值均值显著低于对照组（P〈0.05）,初诊时急性白血病患儿的NK细胞值显著低于对照组（P〈0.05）;ALL与AML患儿完全缓解期（CR）3、6和12个月时的NK细胞水平虽然缓慢上升,但与对照组比较仍具有统计学差异（P〈0.05）。结论：急性白血病患儿在病情发生以及治疗过程中细胞免疫功能存在紊乱,经治疗获CR后患儿病情好转,细胞免疫渐渐恢复,但恢复速率慢,该结果为患儿后续使用免疫调节剂治疗提供依据。     

EB病毒相关性噬血细胞综合征患儿T淋巴细胞CD69的表达及意义

目的探讨外周血T淋巴细胞CD69表达在EB病毒相关性噬血细胞综合征（epsteinbarr virus—associated hemophagocytic syndrome，EBV—AHS）患儿中的变化及意义。方法应用流式细胞术检测EBV—AHS患儿（急性期28例，缓解期21例）及30例健康对照儿童外周血CD3^＋CD4^＋CD69^＋及CD3^＋CD8^＋CD69^＋的表达水平，对检测结果进行统计学分析。结果三组受试者间CD3^＋CD4^＋CD69^＋及CD3^＋CD8^＋CD69^＋的表达水平差异均有统计学意义（P均〈0．01）；急性期组CD3^＋CD4^＋CD69^＋及CD3^＋CD8^＋CD69^＋的表达水平明显高于缓解期组及对照组，且差异均有统计学意义（P均〈0．01）；缓解期组CD3^＋CD4^＋CD69^＋及CD3^＋CD8^＋CD69^＋的表达水平明显高于对照组，且差异均有统计学意义（P均〈0．01）。结论T淋巴细胞的过度活化在EBV—AHS发病过程中起重要作用，是EBV—AHS重要的发病机理之一。检测T淋巴细胞CD69的表达有利于临床判断治疗效果，并为应用免疫调节剂提供理论依据。     

哮喘患儿外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化及其与过敏体质和IgE水平的关系

目的探讨哮喘患儿外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Tr）的变化及其与过敏体质和IgE水平的关系。方法应用流式细胞术检测70例哮喘患儿的Tr细胞数变化,采用酶联免疫法（ELISA）检测血清中IgE含量。结果急性发作期组患儿外周血Tr水平[（6．17±1．72）％]明显低于缓解期组患儿[（7．56±1．48）％]和对照组儿童[（7．13±1．48）％]（均P〈0．05）;而缓解期患儿外周血Tr水平与对照组儿童比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。有过敏体质患儿外周血Tr水平[（5．53±1．18）％]明显低于无过敏体质患儿[（6．40±2．00）％]（P〈0．05）。哮喘组患儿外周血Tr水平[（6．17±1．72）％]与其外周血IgE水平[（144．86±14．74）IU／ml]呈负相关（rP=-0．435,P〈0．05）。结论外周血Tr水平在哮喘患儿发作期显著降低,而在有过敏体质的患儿更低,并与外周血IgE水平呈显著的负相关性。     

过敏性紫癜病儿急性期免疫细胞功能变化

目的探讨过敏性紫癜（HSP）病儿急性期免疫细胞功能变化及其意义。方法以53例HSP急性期病儿为研究对象,并根据有无尿检异常分为。肾炎（HSPN）组和非肾炎（NHSPN）组,以30例正常儿童作为对照组。采用流式细胞术检测3组外周血CD3^＋细胞、CD4^＋细胞、CD8^＋细胞、CD4^＋／CD8^＋比值、CD4^＋CD25^＋细胞、NK细胞（CD16^＋CD56^＋）和B淋巴细胞（CD19^＋）水平。结果HSPN组和NHSPN组外周血CD3^＋细胞、CD4^＋细胞、CD4^＋／CD8’比值、CD4^＋CD25^＋细胞和NK细胞水平较对照组显著降低,CD8^＋细胞和B淋巴细胞水平较对照组显著增高（F=6．80～46．40,q=2．81～4．25,P〈0．01、0．05）,而HSPN组和NHSPN组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。HSP病儿CD4^＋CD25^＋细胞水平与CD4^＋细胞、CD4^＋／CD8^＋比值呈正相关（r=0．369、0．285,P〈0．01、0．05）,与CD19^＋细胞呈负相关（r=-0．279,P〈0．05）,而与CD8^＋细胞和CD16^＋CD56^＋细胞无相关性（r=0．009、-0．104,P〉0．05）。结论HSP病儿急性期存在免疫细胞功能异常,T细胞亚群紊乱,CD4^＋CD25^＋T细胞和NK细胞数量降低,导致B细胞呈多克隆活化,在HSP发病机制中具有重要作用。     

溃疡性结肠炎大鼠C04^＋CD25^＋T细胞的改变

目的 探讨CD4＋CD25^＋T细胞的异常在大鼠溃疡性结肠炎动物模型发病机制中的作用。方法 40只Wistar大鼠分为正常对照组和溃疡性结肠炎模型组，应用三硝基苯磺酸／乙醇法建立溃疡性结肠炎的大鼠模型，进行粪便细菌培养，流式细胞仪分析其外周血单个核细胞（PBMC）和肠系膜淋巴结（MLN）中的CD4^＋CD25^＋T细胞和CD4^＋T细胞的比例，实时荧光PCR测定Foxp3 mRNA的含量。结果 （1）溃疡性结肠炎模型组大鼠PBMC中CD4^＋CD25^＋T细胞的比例明显高于正常（P〈0．05），CD4^＋T细胞的比例明显下降（P〈0．05），MLN中CD4^＋CD25^＋T细胞的比例明显低于正常（P〈0．05），CD4^＋T细胞的比例明显增高（P〈0．05）；（2）模型组大鼠PBMC中Foxp3 mRNA的含量明显增高（P〈0．05）；而MLN中Foxp3 mRNA的含量明显下降（P〈0.05）；（3）模型纽大鼠肠道菌群较正常对照有显著改变（P〈0．05）。结论 CD4^＋CD25^＋T细胞的异常在溃疡性结肠炎的发病机制中起重要作用，其异常可能与肠道菌群的改变有关。