中药糖痹康对高糖环境下大鼠雪旺细胞NGF表达的影响

目的:探讨中药糖痹康对高糖环境下大鼠雪旺细胞NGF表达的影响。方法:运用原代培养的方法,在高糖环境下建立大鼠SCs模型,以弥可保药物组作为对照,并使用Western blot检测糖痹康含药血清对高糖环境下大鼠坐骨神经雪旺细胞NGF蛋白的表达,Real-time PCR检测SCs中NGF mRNA的表达,ELISA检测各组雪旺细胞上清NGF的表达。结果:大鼠雪旺细胞在高糖的环境下培养,其增殖的能力受到显著抑制,同时雪旺细胞NGF的合成显著减少,与糖痹康含药血清培养后的细胞对比,经糖痹康组培养的雪旺细胞,其细胞NGF的表达、合成水平和增殖能力均显著提高。结论:中药糖痹康对高糖条件下大鼠雪旺细胞的增殖能力、NGF mRNA表达和NGF合成的抑制性变化具有显著改善作用。     

红景天苷对H2O2和高糖诱导损伤的血管内皮细胞保护作用研究

目的:探讨红景天苷对H2O2和高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,分别以H2O2和高糖诱导内皮细胞损伤,分别给予10-6、10-5、10-4mol/L的红景天苷处理,MTT法测定细胞活力,检测LDH、MDA释放量和SOD活性。结果:结果显示红景天苷10-6、10-5、10-4mol/L组对正常人脐静脉内皮细胞皆无损伤作用;红景天苷10-5、10-4mol/L组对H2O2损伤模型的细胞活力有显著改善(P<0.05或P<0.01),红景天苷10-6、10-5、10-4mol/L组对高糖损伤模型的细胞活力均有显著改善(P<0.01),并且红景天苷10-5、10-4mol/L组能显著降低H2O2和高糖损伤组培养液中LDH和MDA释放量,升高细胞内SOD活性(P<0.05或P<0.01)。结论:红景天苷对H2O2和高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤有明显的保护作用。     

红景天苷对大鼠血液流变学和离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的：研究红景天苷对大鼠血液流变学及离体心脏缺血再灌注损伤的影响。方法：用高分子右旋糖酐制备大鼠急性血瘀模型，观察其对血液流变学指标的影响；通过大鼠离体心脏缺血再灌注实验，观察红景天苷对冠脉流量和心肌收缩力的影响。结果：红景天苷（6、12、24mg·kg^-1）能有效预防急性血瘀模型大鼠全血粘度（高、中、低切变率）、血浆粘度、红细胞压积以及纤维蛋白原含量的升高；红景天苷（1．6、2．0、2．5mg·L^-1）能明显增加缺血再灌注后大鼠离体心脏冠脉流量，增强心肌收缩力。结论：红景天苷能显著改善急性血瘀模型大鼠的血液流变学，对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤有一定的保护作用。     

蒙药珍宝丸药物血清对雪旺细胞增殖的影响

目的 观察蒙药珍宝丸药物血清对体外培养雪旺细胞增殖的影响.方法 选用新生24 h SD大鼠,取双侧坐骨神经,分离、培养并纯化雪旺细胞,用S -100免疫细胞化学染色法鉴定雪旺细胞,将纯化的雪旺细胞分别用胎牛血清、不同给药剂量大鼠血清、以及不含药大鼠血清培养,并分别于培养的第1天、第4天以及第7天用MTT法观察各组雪旺细胞增殖情况.结果 (1)S - 100免疫染色结果显示纯化后的雪旺细胞纯度为93.8％.(2) MTT法测得培养第7天时高剂量含药血清组OD值明显高于正常剂量含药血清组和不含药大鼠血清组OD值(P＜0.05),而全过程中胎牛血清组OD值明显高于不含药大鼠血清组OD值(P＜0.05).结论 蒙药珍宝丸药物血清在适度条件下可促进雪旺细胞的增殖.     

黄芪多糖体外干预大鼠骨髓源性内皮祖细胞共培养对雪旺细胞增殖的影响

目的观察黄芪多糖体外干预大鼠骨髓源性内皮祖细胞共培养对雪旺细胞增殖能力的影响。方法采用密度梯度离心法分离、培养、纯化大鼠骨髓源性内皮祖细胞;利用FITC-UEA~(-1)和Dil-ac LDL双染色及流式细胞术检测细胞表型对其进行抽样鉴定;雪旺细胞采用细胞株复苏,当细胞传代培养至所需数量时,将两种细胞通过Transwell共培养体系进行培养,并予以不同浓度的黄芪多糖(0.05mg/m1、0.1mg/ml、0.2mg/m1、0.4mg/m1、0.8mg/m1)干预培养24h,时效关系研究中予以不同时间(0h、6h、12h、24h、48h)干预进行培养。MTT比色法检测雪旺细胞的增殖情况。结果黄芪多糖体外干预大鼠骨髓源性内皮祖细胞共培养能明显促进雪旺细胞的增殖,并呈一定的浓度和时间依赖性。黄芪多糖浓度为0.4mg/ml时增殖能力最为显著(P0.01);时效关系研究中培养24h增殖能力达到最佳效应(P0.01)。结论黄芪多糖体外干预大鼠骨髓源性内皮祖细胞共培养能有效促进雪旺细胞的增殖。     

中药筋脉通对高糖培养雪旺细胞增殖及NGF表达的影响

目的:从细胞生物学水平观察筋脉通含药血清对高糖培养雪旺细胞(SC)的增殖及其分泌神经生长因子(NGF)的影响。方法:体外培养大鼠SC,采用血清药理学方法制备筋脉通含药血清,观察筋脉通含药血清对高糖培养SC增殖活性的影响,检测筋脉通含药血清对高糖培养SC分泌NGF的影响。结果:高糖培养条件下,SC增殖及分泌NGF的能力明显减弱,筋脉通含药血清可增强高糖培养SC的增殖能力,上调NGF的表达水平,作用与神经妥乐平含药血清相似。结论:中药筋脉通可有效促进高糖环境培养的SC的增殖能力及其分泌NGF的水平。     

补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞增的调控作用

目的：比较补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞增殖的调控作用。方法：采用含药血清对衰老的人胚肺二倍体成纤维细胞2BS细胞株进行处理，观察四种中药对细胞寿命，细胞生长曲线，代谢活力（MTT法）以及衰老细胞生物学标志衰老相关半乳糖苷酶活力的影响。结果：补肾和益气方药能够明显延长衰老细胞的传代次数，促进细胞增殖，使细胞MTT的还原量明显升高，抑制细胞衰老相关半乳糖苷酸（SA-β-Gal）活力，而健脾、活血方药对细胞增殖的促进作用不明显。结论：细胞衰老时增殖变慢，活力降低，衰老相关半乳糖苷酶活力增高，补肾，益气中药能改善上述衰老变化，健脾，活血药作用不明显。     

糖络宁对高糖环境中雪旺细胞内质网应激IRE1通路的影响

目的观察中药复方糖络宁对高糖环境下雪旺细胞的抗凋亡保护作用,探讨糖络宁对于内质网应激IRE1信号通路的调控作用。方法在高糖环境中培养雪旺细胞,设置空白对照组、模型组、糖络宁组、不同阻断剂组。培养12、24小时后,应用流式细胞术检测糖络宁含药血清处理下的细胞凋亡水平,应用免疫印迹法(Western blot,WB)检测内质网应激的IRE1-TRAF2-JNK凋亡通路的标志蛋白肌醇依赖酶1(inositol-requiting enzyme 1,IRE1)、X盒结合蛋白(X-box binding protein 1,XBP1)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TNF receptor-associated factor 2,TRAF2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的表达,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测XBP1、TRAF2、JNK的基因表达。结果高糖孵育雪旺细胞12、24小时可显著诱导其损伤,细胞活力下降;与正常组比较,高糖环境下雪旺细胞凋亡水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,糖络宁含药血清能够改善高糖环境下雪旺细胞的凋亡(P<0.05)。在造模后检测时间点12小时、24小时,与空白组比较,模型组IRE1α、TRAF2和JNK表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,糖络宁组含药血清组TRAF2和JNK蛋白的表达显著降低(P<0.05)。在造模后检测时间点12小时,与空白组、模型组比较,糖络宁组含药血清组XBP1蛋白表达显著升高(P<0.05)。PCR结果显示,糖络宁含药血清能够发挥类似于TRAF2 siRNA阻断剂的作用,抑制IRE1途径下游凋亡通路。结论糖络宁可对抗高糖环境引起的雪旺细胞损伤,作用机制与调控内质网应激IRE1信号通路有关。在IRE1通路被激发的初期,可能激活IRE1-XBP1通路,提高高糖环境下雪旺细胞的存活能力;当内质网应激过载时糖络宁抑制IRE1-TRAF2-JNK通路,减轻高糖环境下的雪旺细胞的凋亡。     

清热中药对高糖培养下肾小球系膜细胞增殖的影响

为研究清热中药治疗糖尿病肾病的作用机理,验证中医理论对糖尿病发病机制的认识,并为临床用药提供依据。采用MTF比色法,观察具有清热作用的中药知母、生地、胡黄连和地骨皮水提物对体外高糖条件下培养的牛肾小球系膜细胞增殖的影响。结果显示,知母、生地和胡黄连对系膜细胞增殖有抑制作用,而地骨皮无明显作用。提示清热中药可能通过抑制系膜细胞的增殖从而对糖尿病肾病的发生产生一定的影响。     

环烯醚萜苷类化合物治疗2型糖尿病及并发症机制研究概述

环烯醚萜苷类化合物是中药有效活性成分之一,目前国内外研究发现其在2型糖尿病及并发症的治疗中发挥积极作用。本文总结近二十年环烯醚萜苷治疗2型糖尿病作用的国内外文献,阐述其相关作用机制。环烯醚萜主要结构类型有环烯醚萜苷、裂环环烯醚萜和环烯醚萜酯,其中环烯醚萜苷是发挥治疗2型糖尿病作用的主要有效成分。本文将从以下四个方面分别论述：环烯醚萜苷可通过调节胰岛素代谢通路蛋白表达以及影响细胞线粒体生物信号改善细胞代谢等方式对2型糖尿病胰岛素抵抗有改善作用;环烯醚萜苷可抑制β细胞中质子载体表达以及促进胰高糖素样肽-1分泌发挥促进β细胞胰岛素分泌作用;环烯醚萜苷可通过降低葡萄糖转运蛋白5抗体的表达以及抑制α-糖苷酶活性起到延缓碳水化合物吸收作用;环烯醚萜苷可通过抑制核因子-κB等转录因子的活性以及清除晚期糖基化终产物,抑制晚期糖基化终末产物通路等途径发挥改善糖尿病炎症水平的作用。本文通过对相关文献进行综述,旨在对环烯醚萜苷治疗2型糖尿病及并发症的临床工作提供理论依据。     

黄芪对周围神经雪旺氏细胞表达的影响

目的:探讨黄芪、甲基强的松龙干预对于检测雪旺氏细胞表达的影响。方法:无菌条件下取SD大鼠的坐骨神经、臂丛神经培养雪旺氏细胞,分三组分别加入黄芪、甲基强的松龙干预,每孔液体总量为500ul;另外一组为单纯雪旺氏细胞,作为对照组。分别培养24,48,72小时后,采用MTT法测细胞数量并作比较分析。结果:黄芪组日细胞平均数量随时间延长不断增长;培养24小时后,黄芪组日细胞数量明显高于对照组,而甲基强的松龙组细胞数量与对照组比较无统计学意义;培养48小时和72小时后,黄芪组日细胞平均数量明显高于对照组,而甲基强的松龙组细胞数量明显低于对照组。结论:作为神经恢复的重要指标,黄芪干预后雪旺氏细胞数量增加、细胞活性提高,说明黄芪对于雪旺氏细胞的表达具有积极意义。     

电针对面神经损伤模型的形态学观察

目的:观察日本大耳白兔在面神经卡压损伤后,电镜下雪旺细胞和髓鞘的形态学变化。方法:把日本大耳白兔分成两个组:模型组和电针组,每组兔子5只,造模完成10天后分别截取模型组和电针组受损面神经并在电镜下观察其形态学变化。结果:通过电镜观察,电针组的雪旺细胞细胞核染色正常,细胞器较丰富,尤其是粗面内质网结构完整清晰可见。髓鞘完整,仅有个别的轻度脱髓鞘情况。模型组同电针组比较有明显的差异,模型组脱髓鞘情况较严重而且雪旺细胞的染色质多出现聚集,粗面内质网多出现扩张,胞浆出现空泡。结论:该情况可以从侧面直接反映出针灸对面神经损伤的恢复起到了一定的作用。     

Effect of the YI QI HUA YU Recipe on Schwann Cell Activity Following Lumbar Nerve Root Compression

Successful regeneration following neuronalinjury requires the induction of a regenerative re-sponse in the injured neurons and an environ-ment favorable for growth.The distal of nerve ,once axonal degeneration has occurred,providesthe appropriate cell - cell,cell - matrix andtrophic support necessary for axonal growth[1] .in mammals.Schwann cells have a unique role inregulating the growth of axons during regenera-tion and development.During degeneration,theterminal Schwann cells guide axonal g…     

电针对面神经损伤兔面神经超微结构的影响

目的:观察电针对面神经损伤后面神经雪旺细胞形态学的影响,探讨电针治疗周围性面瘫的可能机制。方法:日本大耳白兔分为空白组6只;模型组、假手术组和电针组,每组18只,根据治疗时间分为1、2、3个疗程3个亚组,每组6只。面神经压榨造模后,电针组选取"地仓"颊车"翳风"和"合谷"穴进行电针治疗(疏密波,3Hz/60Hz,30min),5d为一疗程,共治疗3个疗程。运用电镜观察受损面神经和雪旺细胞的形态学改变。结果:正常面神经纤维髓鞘结构完整,髓鞘密集,鲜见脱髓鞘情况;模型组在各时间段面神经出现不同程度的脱髓鞘情况,雪旺细胞结构不完整,细胞器缺失,在髓鞘数量、厚度上显著低于空白组(P<0.01,P<0.05);假手术组脱髓鞘情况以及各时间段髓鞘数量和厚度均优于模型组同期水平;电针组在电针治疗1个疗程后,面神经纤维充血水肿情况与模型组相比较轻,雪旺细胞结构相对较完整,细胞器丰富,髓鞘化程度(髓鞘数量、厚度)明显优于模型组同期水平,第2、3疗程后,髓鞘数量、厚度较前有所减少,面神经修复进程受阻。结论:面神经损伤急性期电针可以加快神经髓鞘化进程,促进受损面神经快速修复,而电针治疗效应不随刺激时长的增长而增加,电针治疗需要把握"中病即止"的原则。     

桂辛通对糖尿病大鼠山梨醇及神经传导速度的影响

目的:观察中药复方桂辛通对糖尿病大鼠山梨醇和神经传导速度的影响并探讨其作用机理。方法:采用链脲佐菌素糖尿病大鼠模型,给予中药复方桂辛通灌胃,并以氨基胍作为对照,观察对大鼠坐骨神经传导速度、坐骨神经组织和红细胞山梨醇(SNS) 浓度及醛糖还原酶(AR) 活性的影响。结果:用桂辛通治疗后,糖尿病大鼠坐骨神经传导速度增快,坐骨神经组织SNS 浓度降低,与糖尿病未治疗组及氨基胍组比较有显著差别。红细胞SNS,AR 与糖尿病未治疗组比较亦明显降低,但与氨基胍组比较无显著差别。结论:桂辛通对防治糖尿病神经病变有一定的作用,可能与抑制多元醇代谢途径的激活有关     

桂辛通对糖尿病大鼠山梨醇及神经传导速度的影响

目的:观察中药复方桂辛通对糖尿病大鼠山梨醇和神经传导速度的影响并探讨其作用机理。方法:采用链脲佐菌素糖尿病大鼠模型,给予中药复方桂辛通灌胃,并以氨基胍作为对照,观察对大鼠坐骨神经传导速度、坐骨神经组织和红细胞山梨醇(SNS) 浓度及醛糖还原酶(AR) 活性的影响。结果:用桂辛通治疗后,糖尿病大鼠坐骨神经传导速度增快,坐骨神经组织SNS 浓度降低,与糖尿病未治疗组及氨基胍组比较有显著差别。红细胞SNS,AR 与糖尿病未治疗组比较亦明显降低,但与氨基胍组比较无显著差别。结论:桂辛通对防治糖尿病神经病变有一定的作用,可能与抑制多元醇代谢途径的激活有关。     

去卵巢大鼠端脑皮质和海马病理改变及氨基胍和补肾方药的防治效应

目的探讨去卵巢大鼠端脑皮质和海马病理改变及氨基胍和补肾方药的防治效应,为阿尔茨海默病防治药物筛选提供参考。方法将36只雌性SD大鼠随机分为假切除组、去卵巢组、氨基胍防治组和补肾方药防治组,各9只。去卵巢组、氨基胍防治组和补肾方药防治组行背部切口切除双侧卵巢,假切除组切除腹腔等体积的脂肪组织。切除卵巢4周后氨基胍防治组饮用1‰盐酸氨基胍水溶液,剂量为盐酸氨基胍50mg/(kg·d);补肾方药防治组予补肾方药灌胃,剂量为生药6.3g/(kg·d);去卵巢组和假切除组予与补肾方药防治组相应容积自来水灌胃。喂养16周后,取脑组织观察端脑皮质和海马的病理改变。结果去卵巢组大鼠端脑皮质及海马组织出现神经元颗粒变性和神经原纤维缠结等,氨基胍防治组和补肾方药防治组神经元的变性现象及神经原纤维缠结明显改善,且在受损区周围有致密的神经纤维网出现。结论去卵巢大鼠可出现阿尔茨海默病样脑病理改变,氨基胍和补肾方药均可防治上述病理改变且促进脑受损区周围致密神经纤维网形成。     

电针“环跳”穴对腰椎间盘突出症家兔坐骨神经超微结构的影响

目的:观察电针"环跳"穴对实验性腰椎间盘突出症(LIDP)家兔步态、触觉功能和坐骨神经超微结构的影响,探讨电针对LIDP的修复作用。方法:40只新西兰家兔随机分为正常组、模型组、环跳组和非穴组。采用LIDP动物病理模型造模器将家兔腰6、7的椎间盘组织推出到后纵韧带右前方建立模型。环跳组和非穴组予电针治疗,每次20min,每日1次,共7d。神经功能评分法检测家兔治疗前后步态、触觉功能的变化,透射电镜检测坐骨神经超微结构。结果:造模后家兔步态、触觉功能减弱;环跳组的步态、触觉功能治疗前后积分值的差值显著高于正常组、模型组、非穴组(P<0.01)。模型组坐骨神经纤维广泛洋葱状变性,雪旺氏细胞坏死、水肿;环跳组神经纤维大多数趋于正常,雪旺氏细胞丰富;非(组)旺氏细胞线粒体广泛水肿、空泡化。结论:电针"环跳"穴对实验性LIDP的损伤具有很好的修复作用。     

Differentiation of bel-7402 human hepatocarcinoma cells induced by aqueous extracts of fresh gecko (AG) and its anti-tumor activity in vivo

Ethnopharmacological relevance

Gecko, a kind of reptile, has been widely used as a traditional Chinese medicine to treat various diseases including cancer in China for thousands of years. The aim of this study was to investigate the anti-tumor effect of AG (aqueous extracts of fresh gecko) on human hepatocellular carcinoma cell Bel-7402 in vitro and mouse H22 hepatocellular in vivo. Further to underlie the molecular mechanism of AG inducing the differentiation of Bel-7402 cells.

Materials and methods

AG was obtained by water extracting method and qualitatively analyzed through High Performance Liquid Chromatography. The total protein concentration of AG was measured by BCA (bicinchoninic acid disodium) assay. The anti-tumor activities in vivo were analyzed through H22 (mouse hepatocellular carcinoma cell line H22) tumor xenografts mice. The cytotoxic activity of AG on Bel-7402 cells was evaluated by MTT assays. AFP (alpha fetoprotein) was detected by radioimmunoassay. ALB (albumin), ALP (alkaline phosphatase) and γ-GT (γ-glutamyl transpeptidase) were detected by biochemical methods with commercial kits. While morphological changes were observed through an inverted microscope. Moreover, the expression level of the proteins involved in MAPK (mitogen-activated protein kinase) signal pathway which was closely related to cellular differentiation was assessed by Western blot.

Results

AG showed obviously anti-tumor activity in vivo and anti-proliferative activity on Bel-7402 cells in vitro both dose-dependently. The number of clones of Bel-7402 cells treated with AG reduced and the cells were displaying differentiation state such as relatively bigger size and dispersed growth. The biochemical function markers of the cells were significantly changed after being treated with AG. The data showed that AFP secretion of the cells decreased 42.5%, ALB secretion increased 58.9%, the activity of ALP and γ-GT markedly decreased 67.0% and 48.5% separately when the concentration of AG was 10 μl/ml, and those effects were all in a dose-dependent manner. The major original and phosphorylated signal proteins (ERK1/2 (extracellular sigal-regualted kinase 1/2), P38 (p38 MAPK) and JNK1/2 (c-Jun N-terminal kinase 1/2)) involved in MAPK signal pathway were measured and the results showed that AG activated the ERK1/2 of Bel-7402 cells.

Conclusions

AG has anti-tumor activity in vivo and inhibits Bel-7402 cell proliferation in vitro through inducing cell differentiation, and the mechanism involves the activation of ERK1/2.