半乳糖凝集素-3对垂体腺瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的观察半乳糖凝集素-3(Gal-3)对垂体腺瘤细胞生长的影响并探讨其可能的作用机制。方法采用RNA干扰(RNAi)抑制Gal-3基因的表达,应用Western blot分别检测Gal-3蛋白和细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白的表达情况,然后应用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑(MTT)法和流式细胞仪(FCM)检测大鼠垂体腺瘤细胞系GH3细胞增殖和细胞凋亡的情况。结果①RNAi后24 h、48 h,Gal-3均明显下调(P0.05),至72 h后较48 h略有回升(P0.05),同时伴有Bcl-2表达水平的明显下调(P0.05),而Bax蛋白表达无明显变化(P0.05);②RNAi下调Gal-3表达水平后,在不同时间点(24 h、48 h、72 h)GH3细胞的增殖能力均受到显著抑制(P0.05);③RNAi后GH3细胞的凋亡细胞比例明显增加,由处理前的5.2%上升至21.7%。结论下调Gal-3的表达导致促凋亡基因Bcl-2的表达下调,而抑凋亡基因Bax的表达水平不变,同时导致GH3细胞增殖受抑,细胞凋亡增加,提示Gal-3在垂体腺瘤细胞的增殖和进展中发挥重要作用,有望为垂体腺瘤的防治提供一个新的分子靶点。     

白黎芦醇对GH3细胞增殖和PRL合成的影响

目的 探讨白黎芦醇对垂体腺瘤GH3细胞增殖和泌乳素合成的影响，及其对雌激素的拮抗作用。方法 在无血清无酚红的培养条件下，白黎芦醇单独或与雌二醇联合作用于GH3细胞，用MTT法测定细胞增殖，用免疫荧光法、RT-PCR和Western印迹法测定泌乳素的表达情况。结果 白黎芦醇对GH3细胞增殖具有刺激和抑制双相作用，呈时间一剂量依赖性。并且白黎芦醇使GH3细胞中PRL阳性细胞比例下降。同时，白黎芦醇抑制泌乳素的合成。白黎芦醇对雌二醇诱发的细胞增殖和泌乳素合成均有拮抗作用．但对泌乳素合成的拮抗作用较强，而雌二醇刺激细胞增殖作用较其诱发泌乳素合成作用强。结论 白黎芦醇对GH3细胞增殖和泌乳素合成均有抑制作用，从两方面发挥着抗肿瘤作用。     

白黎芦醇对GH3细胞生长和泌乳素合成分泌的抑制作用及其与雌激素受体的关系

目的探讨白黎芦醇（RE）对垂体腺瘤GH3细胞增殖和泌乳素（PRL）合成分泌的影响，及其与雌激素受体（ERs）的关系。方法RE作用于GH3细胞．用免疫荧光法和Western印迹法测定ERs的表达情况．分别用ELISA法和Western印迹法测定培养基内和细胞内PRL水平，用MTT法测定细胞增殖，同时观察了雌二醇（E2）和特异性雌激素受体激动剂对RE的拮抗作用。结果RE改变ERs表达水平，减少PRL合成分泌，抑制GH3细胞增殖，E2和特异性雌激素受体激动剂对RE有拮抗作用。结论RE通过ERs抑制PRL合成、分泌及细胞增殖，从而发挥抗肿瘤作用，两种效应的信号转导途径不尽相同。     

17β-雌二醇对垂体腺瘤细胞增殖和电压依赖性钾电流的影响

目的　研究 17β 雌二醇 (E2 )对垂体腺瘤GH3细胞增殖和电压依赖性K+ 电流 (IK(V) )的影响 ,探讨IK(V) 与细胞增殖的关系。方法　不同浓度E2作用GH3细胞 ,应用MTT比色法测定细胞增殖 ,流式细胞仪检测细胞周期分布 ,运用全细胞膜片钳技术记录和分析E2对GH3细胞中IK(V) 的作用。结果　E2作用GH3细胞 3d后 ,0 1nmol/L、1nmol/L和 10nmol/LE2组均明显诱导细胞增殖(P <0 0 1) ,并使细胞增殖周期中G0 /G1 期细胞比例下降 ,进入S期细胞增加。E2作用GH3细胞 2 4h后 ,E2以浓度效应关系增加IK(V) 。结论　电压依赖性K+ 通道可能参与E2对GH3细胞的促增殖作用。提示可应用K+ 通道阻断性药物治疗垂体腺瘤。     

LRIG3基因过表达对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞生物学行为的影响

目的 探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白3（LRIG3）基因过表达对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞生物学行为的影响。方法 体外培养人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞,分成空白对照组（A组,不转染任何载体或质粒）、载体组（B组,转染载体）和LRIG3过表达组（C组,转染含LRIG3基因过表达质粒）。 荧光定量PCR和免疫印迹法检测LRIG3、Caspase-3和Caspase-9的mRNA和蛋白表达水平。Transwell试剂盒检测细胞侵袭能力,AV-PI试剂盒检测细胞凋亡水平,CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力。结果 C组Caspase-3和Caspase-9的mRNA和蛋白表达水平以及细胞凋亡率明显高于A组和B组（P<0.05）,细胞增殖率和细胞侵袭能力明显低于A组和B组（P<0.05）,而A组和B组之间均无统计学差异（P>0.05）。结论 LRIG3过表达可以抑制人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞增殖和侵袭,促进其凋亡,其机制可能与促进Caspase-3和Caspase-9表达有关     

STAT3信号通路影响人胶质瘤细胞株存活和凋亡的研究

目的 了解STAT3在星形细胞瘤中的表达情况并研究STAT3通路在胶质瘤细胞株生长、凋亡过程中的作用和相关机制。方法 通过免疫组化的方法显示星形细胞瘤手术标本中STAT3的表达情况。用AG490作用于体外培养的人胶质瘤细胞株U251、U87，通过Western blot了解STAT3蛋白在肿瘤细胞株中的表达和AG490对STAT3通路的阻断情况。观察AG490作用后胶质瘤细胞存活率的变化，并用流式细胞分析技术检测STAT3阻断后肿瘤细胞的凋亡情况。通过RT-PCR了解STAT3通路阻断后部分相关基因mRNA表达的改变。结果 STAT3在星形细胞瘤中有广泛表达，瘤内表达明显高于瘤周组织（P〈0．01）。STAT3在不同病理分级、性别、年龄组之间，差异无统计学意义（P〉0．05）。AG490作用胶质瘤细胞株后可使细胞内p-STAT3表达下降，同时肿瘤细胞存活率明显下降，肿瘤细胞凋亡比例明显升高。AG490对U251细胞存活率和凋亡的影响与AG490的浓度和作用时间有关。在AG490阻断STAT3信号通路的过程中，Mcl-1、Bcl-XL和Survivin的mRNA表达有所下降。结论 STAT3在星形细胞瘤中有广泛表达并与肿瘤细胞生长凋亡的生物学特性有着内在联系，STAT3通路有可能成为胶质瘤治疗的有用靶点。     

下调BAG3表达对胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨下调BAG3表达对胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养U87细胞,转染pEGFP-BAG3-shRNA质粒构建BAG3低表达胶质瘤U87细胞株（低表达组）,转染pEGFP-shRNA对照质粒为对照组;利用RT-PCR和免疫印迹法鉴定;利用CCK8和EdU检测U87细胞增殖,利用流式细胞术检测U87细胞凋亡。结果 与对照组相比,RT-PCR和免疫印迹法检测结果显示低表达组BAG3 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）,低表达组24、48、72 h细胞增殖水平均明显降低（P<0.05）,低表达组细胞凋亡率明显增高（P<0.05）。结论 下调胶质瘤U87细胞BAG3表达显著抑制其增殖、促进其凋亡。     

腺病毒介导D2S基因联合溴隐亭治疗对GH3细胞生长的抑制作用

目的 探讨腺病毒介导多巴胺2型受体短链亚型基因(D2S)联合溴隐亭对大鼠垂体生长激素腺瘤GH3细胞株体外生长活性的影响.方法 应用携带人D2S基因及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的复制缺陷型腺病毒载体pAd - D2S - EGFP感染大鼠GH3细胞,RT - PCR、Western - blot法检测转染后细胞D2S mRNA及蛋白的表达,并采用CCK -8法检测转染D2S基因后联合溴隐亭药物干预治疗,对GH3细胞生长抑制及诱导凋亡作用,运用光镜及荧光显微镜检测联合作用后细胞形态变化.结果 GH3细胞转染D2S基因后检测到D2S基因的转录及蛋白表达较对照组增高.腺病毒转染D2S基因联合溴隐亭干预后第2天,体外培养的GH3细胞存活率明显下降(32.76±3.88)％,与单纯加药组的(101.78±2.05)％及空载体组的(91.79±3.80)％相比,差异有统计学意义(P＜0.01).光镜下及荧光显微镜结合Hoechst核染色观察到细胞形态出现皱缩脱落、死亡、核碎片等改变.结论 腺病毒介导D2S基因联合溴隐亭能有效抑制GH3细胞的增殖.     

MEG3a和MEG3基因与无功能性垂体腺瘤的研究进展

MEG3a是功能未知的母本印记基因MEG3的新型转录产物，研究表明MEG3a在正常垂体组织中高表达．而几乎在全部无功能性垂体腺瘤、大部分功能性垂体腺瘤中不表达。同时，该基因的异位表达能抑制许多癌细胞株的增殖。包括Hela细胞．MCF-7和H4组蛋白等，因而它可能是一种抑癌基因，其生物学功能与细胞增殖有关。本文就MEG3和MEG3a基因与无功能性垂体腺瘤的关系作简要综述。     

阻断STAT3磷酸化对人脑胶质瘤体外增殖抑制的实验研究

目的 研究磷酸化STAT3抑制剂Cucurbitacin Ⅰ阻断STAT3信号转导通路对人脑胶质瘤细胞系A172增殖和凋亡的影响并探讨机制.方法 使用Cucurbitacin Ⅰ处理人脑胶质瘤细胞系A172,CCK-8方法检测细胞增殖状态,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测STAT3磷酸化水平,RT-PCR检测STAT3下游基因C-myc、Survivin和Mcl-1的mRNA水平的改变.结果 Cucurbitacin Ⅰ作用于A172后,细胞增殖速度明显下降(P＜0.05);细胞凋亡比率显著升高;Western blot结果显示A172细胞中磷酸化STAT3(p705-STAT3)蛋白水平明显降低;C-myc、Survivin和Mcl-1在mRNA水平明显下降(P＜0.05).结论 阻断STAT3信号转导通路可抑制脑胶质瘤细胞增殖,促进其凋亡;靶向STAT3信号转导通路的治疗策略可以作为胶质瘤治疗的一种新方法.     

Effects of fulvestrant on biological activity and Wnt expression in rat GH3 cells

The present study investigated the influence of anti-estrogen treatment (fulvestrant) on pituitary adenoma cell line GH3 biological activity, the estrogen receptor α pathway, the WnT pathway, and mechanisms of decreased Wnt inhibitory factor-1 expression in GH3 cells. Results showed that fulvestrant suppressed GH3 cell proliferation and reduced hormone secretion in a dose-dependent manner. Estrogen receptor α and Wnt4 expression decreased, but Wnt inhibitory factor-1 expression increased in a dose-dependent manner following fulvestrant treatment, and β-catenin expression remained unchanged. Inhibitors of DNA methylation and histone modification upregulated Wnt inhibitory factor-1 expression. Results suggested that fulvestrant suppressed biological activity of GH3 cells via the estrogen receptor α and Wnt pathways. These results suggested that decreased Wnt inhibitory factor-1 expression in GH3 cells played a role in epigenetic mechanisms. Anti-estrogen therapies could provide novel treatments for growth hormone adenomas.     

Mitogen-activated protein kinase mediates epidermal growth factor-induced morphogenesis in pituitary GH3 cells

Epidermal growth factor (EGF) causes pituitary GH3 cells to change from their normal predominantly rounded morphology to much more elongated cells with extensive filopodia, and this effect is accompanied by a parallel increase in cell volume. In view of this, and because EGF receptor expression is increased in some pituitary tumours, we examined the mechanism of this EGF-induced morphological effect as it may play a role in tumour invasiveness. The effect of treatment of the cells with EGF (1 nm, 4 days) was determined visually (expressed as percent non round cells) and by measuring the cell volume by Coulter Counter analysis. EGF treatment caused the cells to change their morphology with percent non round cells increasing from 37% in control cells to 74% in EGF-treated cultures; this was accompanied by a parallel increase in cell volume. Treatment of the cells with EGF in the presence of the MEK1 inhibitor (PD98059) completely blocked the EGF-induced morphological changes, showing that activation of the mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathway is necessary to mediate this effect. Transfection of the cells with a constitutively activated mutant of MEK1 produced a similar morphological change to that produced by EGF treatment, with the proportion of non round cells increasing to 62% with a parallel increase in cell volume compared to cells transfected with the empty vector, demonstrating that direct activation of MAPK pathway is sufficient to mediate the observed morphological effects. The effects produced by activated MEK1 transfection could be blocked by PD98059. EGF had opposing effects on prolactin and growth hormone (GH) secretion by the cells, increasing prolactin release and inhibiting GH release. Transfection of the cells with activated MEK1 produced similar effects on hormone release as EGF treatment. In conclusion, the morphological effects of EGF on GH3 cells are mediated by activation of the MAPK pathway as blockade of this pathway abolished the observed effect, and direct activation of this pathway by transfection with an activated mutant of MEK1 was able to duplicate these effects. This mechanism may contribute to the growth and possibly local invasiveness of some pituitary tumours that express the EGF receptor.     

罗格列酮抑制垂体腺瘤GH3细胞及促凋亡作用的研究

目的探讨罗格列酮对GH3细胞增殖的影响及其促细胞凋亡的机制。方法不同浓度罗格列酮作用GH3细胞后,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,Elisa法分析罗格列酮对生长激素合成的影响,Western blot法分析GH3细胞Cyclin D3、bcl-2和bax的变化。结果罗格列酮作用GH3细胞48 h后,以浓度效应关系抑制GH3细胞增殖、并使细胞增殖周期中G0-G1期阻滞,S期和G2-M期百分率降低;Western blot法示罗格列酮作用GH3细胞提高了Cyclin D3和bax的表达,而bcl-2的表达降低。结论罗格列酮促GH3细胞凋亡并抑制GH分泌,可能成为垂体生长激素腺瘤病人新的治疗方法。     

白黎芦醇对垂体腺瘤GH3细胞的抑制作用

目的 探讨选择性雌激素受体调节剂白黎芦醇对垂体腺瘤GH3细胞中电压依赖性K^ 电流(IK(V))和细胞增殖的影响。方法 不同浓度白黎芦醇作用GH3细胞，应用MTT比色法测定细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期分布，运用全细胞膜片钳技术记录和分析白黎芦醇对GH3细胞中IK(V)的作用。结果 白黎芦醇作用GH3细胞3d后，以浓度效应关系抑制GH3细胞增殖，并使细胞增殖周期中G0／G1期阻滞，S期和G2／M期百分率降低。全细胞膜片钳结果显示，白黎芦醇以浓度和时间效应抑制IK(V)。结论 白黎芦醇抑制GH3细胞增殖可能是通过阻断电压依赖性K^ 通道起作用。提示可应用选择性抗雌激素药物治疗垂体腺瘤。     

Expression of galectin-3 correlates with apoptosis in pituitary adenoma cells

Objective To investigate the expressions of Galectin-3 （Gal-3）, Bcl-2 and Bax in human pituitary adenomas, and to explore the interrelation among them. Methods RT-PCR and immunohistochemistry were applied to detect the mRNA and protein expressions of Gal-3, Bcl-2 and Bax in surgically excised human pituitary adenoma tissues, including invasive and non-invasive pituitary adenomas, and the correlation analysis was performed. Results The Gal-3 and Bcl-2 expressions in the invasive pituitary group were significantly higher than those in the non-invasive group, and the expression of Bax had no significant difference between the two groups. Pearson＇s correlation analyses showed that the Gal-3 expression was posi- tively correlated with Bcl-2, but was not correlated with Bax, which was inversely correlated with expression of Bcl-2. Conclusion Gal-3 may function through a cell death inhibition pathway involving Bcl-2 to enhance cell proliferation, which result in the invasive growth of pituitary adenoma. These results indicate that Gal-3 has an important role in pituitary tumor cell proliferation and may serves as a possible therapeutic target in treatment of pituitary tumors.     

垂体腺瘤中半乳糖凝集素-3的表达及其与细胞凋亡关系

目的 探讨垂体腺瘤中半乳糖凝集素-3(Galectin-3,Gal-3)和凋亡相关基因Bcl-2、Bax的内在联系.方法 RT-PCR检测20例垂体腺瘤Gal-3、Bcl-2和BaxmRNA的表达;免疫组化染色检测78例垂体腺瘤中Gal-3、Bcl-2和Bax蛋白表达,分析侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤中Gal-3、Bcl-2和Bax表达的差异及其相关关系.结果 侵袭组垂体腺瘤Gal-3和Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平较非侵袭组显著增高,而Bax mRNA和蛋白在两组中的表达水平无显著差异.等级相关分析显示Gal-3蛋白与Bcl-2蛋白之间有正直线相关关系(r=0.291,P=0.01);Gal-3蛋白与Bax蛋白之间无直线相关关系(r=-0.023,P＞0.05);Bcl-2蛋白与Bax蛋白表达之间的Pearson相关系数为r=-0.267,P＜0.05(双侧),呈负相关关系.结论 Gal-3可能主要是通过与Bcl-2协同作用,发挥其抗凋亡效应,相对促进垂体腺瘤细胞增殖,导致垂体腺瘤的侵袭性生长.这些结果提示Gal-3在垂体肿瘤细胞增殖过程中发挥重要作用,有望作为垂体腺瘤的一个治疗靶点.