雄黄纳米微粒对于白血病细胞的诱导凋亡及坏死作用

目的 :考察雄黄纳米微粒对于HL 6 0和K5 6 2细胞的增殖抑制作用与诱导凋亡及坏死作用 ,并初步探寻表现药理活性的化学物种。方法 :采用“溶剂接力”法制备雄黄纳米微粒悬浮液 ,应用MTT法检测雄黄纳米微粒对HL-6 0和K5 6 2细胞的增殖抑制作用 ,通过AnnexinV-PI双染流式细胞术和细胞形态学观察检测细胞凋亡和坏死 ,并以H₃AsO₃(As₂O₃在该溶液中的主要存在形式 )作为阳性对照。结果 :雄黄纳米微粒的平均粒径为 15 9.0nm。MTT实验结果显示 ,该制剂对于这 2种细胞系均有明显的增殖抑制作用。双染实验表明 ,雄黄纳米微粒可诱导这 2种细胞凋亡和坏死 ,此结果得到形态学观察的进一步证实。结论 :雄黄纳米微粒对于HL-6 0和K5 6 2这 2种细胞系均具有诱导凋亡和坏死的双重作用 ,既含有As-O又含有As-S键的硫代亚砷酸盐可能是表现药理活性的主要化学物种之一。     

纳米雄黄对肺癌A549细胞的凋亡诱导作用

目的:研究纳米雄黄对肺癌A549细胞的凋亡诱导作用。方法:采用机械研磨法制备纳米雄黄。以肺癌A549细胞株为靶细胞,采用MTT法检测细胞的增殖活性,AnnexinV/PI双染色法检测A549细胞的凋亡,流式细胞术检测BAX蛋白和Bcl-2蛋白表达、Caspase-3活性、P53蛋白的表达。结果:纳米雄黄可显著抑制A549细胞的增殖,50μg/mL和100μg/mL的纳米雄黄处理48h后,A549细胞凋亡率显著增高为12.53%和69.19%;20μg/mL和50μg/mL的纳米雄黄作用24h,A549细胞中活性caspase-3由对照的(2.25±0.17)%增高到(3.84±0.63)%和(7.35±0.33)%;P53蛋白表达总体增高但加药48h高剂量组也有所降低;Bax蛋白表达由对照的(79.50±0.50)%增高到(92.45±0.35)%和(96.9±0.00)%;Bcl-2蛋白表达由对照的(77.85±2.15)%增高到(87.10±10.5)%和(83.1±4.6)%。结论:纳米雄黄可有效诱导肺癌A549细胞发生凋亡。     

中药雄黄诱导白血病细胞凋亡的研究

目的 探讨雄黄对白血病细胞凋亡及Bcl-2表达水平的影响.方法 分别设雄黄治疗组和阿霉素(ADR)对照组,测定药物作用下细胞株的细胞活力(OD值)及观察凋亡细胞的形态学改变和测定药物作用下细胞株Bcl-2蛋白阳性表达率的变化.结果 雄黄治疗组较ADR对照组的OD值和Bcl-2阳性表达率低(P＜0.05)、凋亡率高(P＜0.05).结论 雄黄可诱导白血病细胞凋亡.     

雄黄纳米微粒对人白血病细胞株HL-60的诱导分化作用

目的：探讨雄黄（As4S4）纳米微粒对于人急性早幼粒白血病细胞HL-60的抑制增殖和诱导分化作用。 方法：采用MTT法观察低浓度雄黄对HL-60细胞增殖的影响,Wright-Giemsa 染色观察细胞形态,硝基四氮唑蓝（NBT）还原反应和流式细胞术抗原检测等鉴定细胞的分化。结果：细胞经雄黄处理后呈现明显的分化形态。经0.25～1.0 μmol·L^-1 雄黄作用24 h 后,NBT阳性率升高。用0.50 μmol·L^-1雄黄处理48 h,细胞表面分化抗原CD11b表达升高,细胞周期阻滞于G1期。 结论：低浓度雄黄对HL-60细胞具有诱导分化作用。     

雄黄抗白血病细胞多药耐药及其凋亡诱导关系的研究

目的：研究抗白血病细胞耐药与细胞凋亡的关系。方法：采用ＭＴＴ法测定细胞的敏感性,流式细胞仪测定细胞摄取ＤＮＲ的荧光强度,以及ｂｃｌ－２和Ｐ－ｇｐ 的表达。采用Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ 细胞凋亡试剂盒,分析雄黄与ＤＮＲ的协同作用。结果：雄黄对Ｋ５６２及Ｋ５６２／ＡＤＭ 的ＩＣ５０无显著差异,且增加细胞内ＤＮＲ含量,增强ＤＮＲ的细胞毒作用,下调ｂｃｌ－２和Ｐ－ｇｐ 的表达。结论：雄黄与化疗药物间无交叉耐药性,而其抗细胞耐药有可能与ｂｃｌ－２和Ｐ－ｇｐ 下调有关。     

雄黄诱导K562细胞凋亡的研究

目的检测雄黄诱导Ｋ５６２细胞的能力。方法应用形态学观察、ＤＮＡ电泳和流式细胞仪（ＦＣＭ）检测细胞凋亡。利用ＦＣＭ分析细胞周期并测定Ｋ５６２细胞线粒体膜ＡＰＯ２．７蛋白表达。结果雄黄可以诱导Ｋ５６２细胞产生凋亡现象,并导致Ｓ期细胞降低。结论雄黄具有诱导Ｋ５６２细胞凋亡的作用     

纳米雄黄对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖抑制及诱导凋亡作用的研究

目的:探讨纳米雄黄对人皮肤鳞癌A431细胞株增殖抑制及诱导凋亡作用及作用机制.方法:应用MTT比色法、流式细胞仪观察纳米雄黄体对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞的增殖及凋亡情况、RT-PCR检测纳米雄黄对生存素(Survivin) mRNA,Caspase-3 mRNA表达的影响.结果:MTT实验及流式细胞仪提示纳米雄黄具有诱导皮肤鳞癌A431细胞凋亡和抑制细胞增殖作用,且随着纳米雄黄剂量的增加作用增强,与顺铂联合应用有协同作用;对照组,5％,10％,20％纳米雄黄组,DDP组,DDP+ 10％纳米雄黄组的Survivin相对表达量依次为(68.74±1.96)％,(63.93±3.57)％,(57.12±3.93)％,(47.64±6.44)％,(41.44±4.83)％及(32.18±4.10)％;Casepase-3相对表达量依次为(26.26±2.07)％,(32.660±4.42)％,(35.29±5.26)％,(38.52±8.37)％,(45.69±4.19)％及(52.98±6.52)％;纳米雄黄剂量增加可促进Caspase-3的表达,降低Survivin的表达.结论:纳米雄黄可通过诱导肿瘤细胞凋亡和抑制其增殖发挥抗肿瘤作用;其作用机制可能与上调Caspase-3的表达和下调Survivin的表达有关.     

低剂量雄黄诱导NB4细胞凋亡的研究

目的：探讨复方黄黛片中主要成分雄黄治疗急性早幼粒细胞白血病的作用机理。方法：应用台盘蓝排染法、流式细胞仪、DNA电泳、免疫印迹等多项方法,体外研究雄黄对NB4细胞的促凋亡作用。结果：雄黄时NB4细胞的生长有抑制作用,并有促凋亡效应,对细胞周期的影响表现为G2/M期的阻滞,药物处理的早期细胞凋亡,未见伴有bcl-2的下调。结论：雄黄作用的早期主要以细胞凋亡为主,并且可能通过其他途径诱导细胞凋亡。     

雄黄诱导维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞(MR2细胞)凋亡的体外研究

目的 :深入了解雄黄治疗急性早幼粒细胞白血病 (APL)的机理。方法 :以对全反式维甲酸 (ATRA)耐药的APL细胞株MR₂ 细胞为体外模型 ,用不同剂量的雄黄处理细胞一定时间后 ,利用MTT实验观察细胞的存活、增殖状态 ,应用细胞形态学、基因组DNA电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡 ,利用流式细胞仪分析细胞周期及细胞膜AnnexinⅤ的表达。结果 :一定浓度范围内雄黄对MR₂ 细胞的生长、增殖有剂量、时间依赖性抑制作用 ;Wright’s及HE染色均可见凋亡细胞 ,透射电镜下可见核染色质边集、核碎裂及凋亡小体 ;基因组DNA电泳出现“梯形”条带 ;流式细胞仪分析出现低于G1期DNA含量的亚二倍体细胞峰 ;经雄黄处理后AnnexinⅤ FITC⁺/PI^-的凋亡细胞逐渐增多。结论 :雄黄可诱导ATRA耐药的APL细胞发生凋亡 ,提示雄黄治疗APL的效应途径可能不同于ATRA。     

雄黄纳米粒的制备及其靶向Survivin蛋白诱导A549细胞凋亡的研究

目的 制备雄黄纳米粒并考察其理化性质,研究雄黄纳米粒对人肺癌细胞A549增殖凋亡的影响.方法 以聚乙烯吡咯烷酮K30 (PVP)为载体,通过生物模板法制备雄黄纳米粒.采用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)、红外光谱分析、紫外光谱分析以及粒度分析等方法对所制备的纳米...     

辣椒素诱导白血病和肝癌细胞凋亡的比较研究

目的:比较合成辣椒素(N-Vanillylnonanamide)诱导白血病细胞K562及其多药耐药K562/ADM、肝癌HepG2细胞凋亡的作用.方法:以K562细胞、K562/ADM细胞和HepG2细胞为靶细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,流式细胞法测定细胞周期和Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡.结果:MTT示合成辣椒素可抑制白血病细胞和HepG2细胞的增殖,根据同时期半数抑制浓度(IC50)示HepG2细胞最敏感,K562细胞较K562/ADM细胞敏感.合成辣椒素可阻滞细胞周期.合成辣椒素诱导24小时后Annexin V/PI双染色显示白血病细胞和肝癌细胞凋亡率升高;白血病敏感细胞株和耐药细胞株的对舍成辣椒素敏感性相似.结论:合成辣椒素可抑制白血病和肝癌细胞的增殖并诱导其凋亡;辣椒素对药物敏感和耐受的白血病细胞的作用相似.     

冬凌草乙素对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及机制研究

目的:探讨冬凌草乙素(ponicidin,PON)对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法:以不同浓度的PON(10~50μmol.L-1)作用于体外培养的K562细胞24,48,72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,收集药物作用72h后的细胞Annexin V染色并通过流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞凋亡时的形态学变化。应用免疫印迹法(Western blot)检测caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP的表达水平,并对MAPKs(mitogen-acti-vated protein kinase)信号转导通路相关蛋白(p-P38,p-ERK和p-JNK)以及PI3K(磷脂酰肌醇-3-激酶)/AKT信号通路中的p-AKT,p-P85蛋白的表达水平进行检测。结果:30μmol.L-1以上的PON可显著抑制细胞的生长,并呈现出明显的量-效与时-效关系,FCM检测结果表明,不同浓度的药物作用72 h后,随药物浓度的增加细胞凋亡率逐渐升高,50μmol.L-1的PON作用不同时间后在瑞氏-姬姆萨染色下可见典型的核浓缩及核碎裂等细胞凋亡现象。Western blot检测结果表明,药物作用48 h后caspase-3被活化出现17 kD的亚单位,同时PARP被裂解出现89 kD的亚单位片段。Western blot检测结果进一步显示药物作用48 h后MAPKs信号途径中p-P38,p-ERK和p-JNK蛋白的表达水平无明显变化,而PI3K/AKT信号通路中的p-AKT,p-P85蛋白的表达水平则随着药物浓度增加而逐渐下降。结论:PON可以通过诱导白血病K562细胞调亡而发挥体外抗白血病作用。PON对K562细胞的诱导凋亡作用机制与caspse-3的活化以及降低PI3K/AKT信号通路中p-AKT及p-P85蛋白的表达水平有关,而与MAPKs信号通路中的相关调节蛋白无关;这些研究结果为进一步研究冬凌草素的抗白血病作用提供了有力的实验依据和技术平台。     

姜黄素诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡

目的：研究姜黄素（Cur）诱导人胃癌BGC－823细胞凋亡的作用。方法：细胞增殖抑制采用MTT法,细胞凋亡采用流式细胞仪检测。结果;Cur27－168μmol/L呈剂量依赖性抑制人胃癌BGC－823细胞增殖（r＝0．994,P＜0．01）。Cur 27μmol／L浓度开始出现BGC－823细胞Apo峰,68－136μmol/L出现明显的Apo峰,细胞凋亡峰在24－72h内随作用时间延长逐渐增高。结论：姜黄素可诱导BGC－823细胞凋亡,该作用有时间和剂量依赖性。     

罗仙子提取物诱导白血病细胞凋亡作用研究

目的：观察中药罗仙子提取物体外对白血病细胞的凋亡诱导作用。方法：罗仙子提取物处理人白血病HL-60细胞24 h后,MTT法检测细胞活率;采用光学显微镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：不同浓度罗仙子提取物可抑制HL-60细胞增殖同时诱导典型的细胞凋亡形态学变化,与对照组相比细胞凋亡率显著升高。结论：罗仙子提取可显著抑制白血病细胞增殖、诱导细胞凋亡。     

小白菊内酯对白血病K562细胞及其干细胞的作用

目的:研究小白菊内酯(parthenolide,PTL)对白血病K562细胞及其白血病干细胞(leukemia stem cells,LSC)的作用.方法:以白血病K562细胞为靶细胞,四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活性,Annexin V/PI染色法测定细胞凋亡;流式细胞术检测LSC相对含量,甲基纤维素集落形成法检测细胞的自我更新和增殖能力.结果:PTL显著抑制K562细胞的增殖,24,48,72 h的IC_(50)分别为17.1,8.67,9.42μmol·L~(-1).5,10 μmol·L~(-1)PTL处理48 h,K562细胞的凋亡率分别为(49.56±5.11)%,(71.88±2.12)%.结合干细胞免疫标志分析,K562细胞中LSC样(CD34~+ CD38~-)细胞的凋亡率分别为(52.63±4.14)%,(57.50±4.47)%.K562细胞中LSC的相对含量仅轻度增高,但高浓度(15 μmol·L~(-1))PTL处理,LSC含量则增高15倍.0.5～4.0 μmol·L~(-1)PTL显著抑制K562细胞的集落形成能力,集落数降低24.1%～89.2%;5～15 μmol·L~(-1)PTL预处理,存活K562细胞的集落形成数增高5.0%～50.0%.结论:小白菊内酯可抑制K562细胞及其干细胞的增殖活性,并诱导其凋亡.     

双吲哚马来酰亚胺衍生物L6诱导白血病细胞凋亡机制的研究

目的探讨双吲哚马来酰亚胺衍生物L6诱导白血病细胞的凋亡作用及其分子机制。方法采用MTT比色法检测L6对白血病细胞HEL、K562、KG1a的杀伤作用。流式细胞术检测L6对HEL细胞凋亡、周期和分化的影响。Western blotting法检测细胞凋亡相关蛋白的表达。通过体内实验研究L6治疗小鼠白血病的作用效果。结果 MTT比色法结果显示L6对HEL、K562、KG1a细胞具有比阳性对照米哚妥林(PKC412)更显著的抑制活性,半数抑制浓度(IC50)分别为(0.05±0.03)、(0.32±0.01)、(0.19±0.10)μmol/L。L6可以诱导HEL细胞发生凋亡和G2/M期阻滞,诱导HEL细胞向巨核细胞方向分化,且呈剂量效应。Western blotting检测结果表明L6主要通过激活Caspase-3执行细胞凋亡。小鼠肝组织苏木精-伊红(HE)染色显示肝组织内HEL细胞浸润有所减轻,但L6组减轻的效果更明显,表明其可延缓白血病细胞的转移,且效果优于米哚妥林。结论双吲哚马来酰亚胺衍生物L6有较强的抗白血病活性,为新型白血病药物的研发提供参考。     

苦参碱诱导淋巴细胞白血病L1210细胞凋亡的实验研究

目的在体外培养条件下,观察苦参碱对L1210细胞的损伤效应,探讨苦参碱的作用机制,期待为临床白血病治疗提供新的思路。方法取对数期生长的L1210细胞,在细胞培养板每孔接种1×105/孔,培养24 h后,加入终浓度为0.5 g/L、1.0 g/L、2.0 g/L的苦参碱,对照组加入等体积的培养液。收集24 h、48 h和72 h的L1210细胞标本,台盼蓝染色观察直接损伤的作用,TUNNEL法观察诱导细胞凋亡的情况。结果苦参碱浓度越高,作用时间越长,L1210细胞台盼蓝拒染率越低,与对照组相比有显著性差异。高浓度的苦参碱(0.5 g/L)对L1210细胞细胞凋亡才会有显著的影响(P0.05),随着时间的延长,较高浓度的苦参碱也会显著影响L1210细胞的凋亡。结论苦参碱有杀伤白血病L1210细胞的作用,其机制可能是诱导细胞凋亡和直接损伤细胞膜。     

MAPK信号转导通路在人参多糖诱导白血病K562细胞凋亡中的作用

目的 探讨人参多糖诱导白血病K562细胞凋亡的机制.方法 将对数生长期K562细胞分成对照组和人参多糖组,对照组细胞常规培养,人参多糖组细胞培养体系中加入人参多糖0.4 g/L.各组细胞培养48 h后,流式细胞术和Hoechst33258染色法检测K562细胞凋亡情况;RT-PCR检测细胞p38、JNK基因表达;采用免疫荧光实验检测细胞中p-p38、p-JNK蛋白表达,测定Caspase-3的活性;Western blotting检测细胞中p38、JNK、p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3蛋白的变化.结果 与对照组比较,人参多糖组K562细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),出现明显的细胞核固缩现象,K562细胞p38 mRNA与JNK mRNA明显增多.免疫荧光检测显示,p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3表达明显增强且向胞核转移;Western blotting检测显示,人参多糖组K562细胞p38、JNK总蛋白无明显变化(P＞0.05); p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3有增加的趋势(P＜0.05).结论 人参多糖能促进K562细胞凋亡,其作用可能是通过影响MAPK信号传导通路实现的.     

六神丸诱导NB4细胞凋亡的实验研究

目的 :观察六神丸诱导 NB4白血病细胞凋亡的作用。方法 :应用 TUNEL法和 Annexin V/ PI双染法检测不同浓度和不同时间段六神丸诱导 NB4细胞的凋亡率。结果 :TU NEL法表明凋亡率与剂量呈正相关性 ,10 0μg/ ml六神丸凋亡率最高。 Annexin V / PI双染法表明 5 0μg/ ml六神丸作用 32 h凋亡率最高。结论 :六神丸可诱导白血病细胞凋亡。     

黄芩苷体外对白念珠菌凋亡的影响

目的探讨中药有效成分黄芩苷对白念珠菌凋亡的影响。方法采用Hoechst33258染色荧光显微镜检测白念珠菌细胞凋亡的形态;Rh123染色流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化;DHR染色流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果 1 000,100μmol/L的黄芩苷能诱导白念珠菌细胞核固缩与碎裂,并降低白念珠菌MMP;1 000,100,10μmol/L的黄芩苷均能提高细胞内ROS水平。结论黄芩苷可通过线粒体途径诱导白念珠菌凋亡。