肺炎克雷伯菌产KPC型β-内酰胺酶研究进展

<正>肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae,K.pneu)是院内感染和社区获得性感染的重要病原菌。由于碳青霉烯类药物的大量使用,现已出现了碳青霉烯类耐药的K.pneu。通常,其对碳青霉烯类耐药的机制主要是:AmpC酶过度表达联合外膜孔蛋白     

大肠杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制的研究进展

大肠杆菌(E.coli)是导致医院感染的一种重要条件致病菌。碳青霉烯类是临床治疗E.coli最为有效的抗生素之一。但是,临床上对该类药物的滥用情况严重,导致E.coli对碳青霉烯类抗生素的耐药率迅速上升。目前,全球对此类抗生素的耐药机制的研究十分紧迫。E.coli对碳青霉烯类的耐药机制主要包括:碳青霉烯酶的水解作用;外排转运系统的增强;青霉素结合蛋白(PBP)的改变;膜孔蛋白缺失合并高产Ampc酶或ESBLs。本文将从这四个方面阐述E.coli对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。     

肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶的研究进展及其治疗策略

肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPCs)对几乎所有的β-内酰胺类抗菌药物耐药。这种对抗菌药物广谱耐药的机制迅速在美国蔓延,在世界各地的报道亦有增加。KPC酶可以水解所有的青霉素类、头孢菌素类、氨曲南及碳青霉烯类。产KPC酶菌株所致感染的治疗选择非常有限。因此,KPC酶介导的耐药机制的出现是全球人类身体健康的重大威胁之一。本文就肺炎克雷伯菌碳青霉烯的研究进展及其治疗策略做一综述。     

碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌耐药机制及其控制

目的探讨碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌耐药机制及其控制方法。方法常规细菌鉴定,药敏试验筛选CRE菌株．琼脂稀释法测定抗菌药对CRE菌株的MlC,改良Hodge试验与PCR检测碳青霉烯酶。结果CRE菌株标本分离率以尿液、痰液较高;药敏试验84．44％菌株对亚胺培南、美罗培南及厄他培南同时耐药;琼脂稀释法分离CRE菌株大多数以对碳青霉烯类高度耐药：改良Hodge检测93．33％菌株为碳青霉烯酶产生株;改良Hodge试验检测碳青霉烯酶的灵敏度与特异度均明显高于PCR方法（P〈0．05）。结论细菌产生碳青霉烯酶是CRE菌株对碳青霉烯类药物耐药的主要机制之一,改良Hodge试验方法检测更为敏感。     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制

目的 探讨临床分离的铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制.方法 收集该院58株耐亚胺培南和美罗培南铜绿假单胞菌,①在M-H琼脂平板中分别加入β内酰胺酶抑制剂和外排泵抑制剂,形成改良K-B法,进行药敏试验;②用改良三相水解试验检测β内酰胺酶;③用聚合酶链反应(PCR)检测金属酶基因(IMP、VIM)以及外膜膜孔蛋白基因(OprD2).结果 58株耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌中,53株主动外排系统过度表达合并持续高产AmpC酶,其中15株伴有外膜膜孔蛋白OprD2缺失,1株产超广谱β内酰胺酶;在5株既不过度表达主动外排系统又不产β内酰胺酶细菌中,有1株OprD2基因缺失;未检出产金属酶菌株.结论 该院铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制是主动外排系统的过度表达并伴有持续高产AmpC酶,其中16株菌株伴有外膜膜孔蛋白OprD2基因缺失.     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制

目的探讨临床分离的铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制。方法收集该院58株耐亚胺培南和美罗培南铜绿假单胞菌,①在M-H琼脂平板中分别加入β内酰胺酶抑制剂和外排泵抑制剂,形成改良K-B法,进行药敏试验;②用改良三相水解试验检测β内酰胺酶;③用聚合酶链反应(PCR)检测金属酶基因(IMP、VIM)以及外膜膜孔蛋白基因(OprD2)。结果58株耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌中,53株主动外排系统过度表达合并持续高产AmpC酶,其中15株伴有外膜膜孔蛋白OprD2缺失,1株产超广谱β内酰胺酶;在5株既不过度表达主动外排系统又不产β内酰胺酶细菌中,有1株OprD2基因缺失;未检出产金属酶菌株。结论该院铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制是主动外排系统的过度表达并伴有持续高产AmpC酶,其中16株菌株伴有外膜膜孔蛋白OprD2基因缺失。     

碳青霉烯耐药克雷伯菌耐药机制研究

目的:探讨天津医科大学第二医院分离得到的碳青霉烯耐药克雷伯菌的耐药机制。方法:2013-2014年度临床微生物实验室分离到36株碳青霉烯耐药克雷伯菌,改良Hodge试验、EDTA协同试验及 PCR法检测碳青霉烯酶耐药基因,PCR法检测ESBLs及Ampc酶耐药基因,PCR、实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测外膜蛋白基因Ompk35及Ompk36存在及表达情况。结果:9株改良Hodge试验阳性,EDTA协同试验均阴性,碳青霉烯酶耐药基因均阴性;36株碳青霉烯耐药克雷伯菌至少存在1种β内酰胺酶耐药基因;外膜蛋白基因无缺失,33株存在外膜蛋白表达量下降。结论: 分离的碳青霉烯耐药克雷伯菌耐药机制可能为ESBLs及Ampc酶表达合并外膜蛋白表达下降。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的主要耐药机制研究

目的研究感染性鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因分布与耐药相关性。方法回顾性分析鲍曼不动杆菌在2010年1月~2015年12月期间的药物敏感性变迁,留取200株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌,检测青霉烯酶与外排泵表型,并统计比较200株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌与200株碳青霉烯类敏感组的差异。结果 2010年1月~2015年12月期间鲍曼不动杆菌耐药严峻,碳青霉烯类鲍曼不动杆菌检出率在35.8%~78.9%。其中在200株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌菌株中,检出携带OXA-51基因108株,携带OXA-23基因46株,同时携带OXA-51和OXA-23 26株,其余碳青霉烯酶基因均未检测到;外排泵表型在碳青霉烯类耐药菌阳性株为175株,碳青霉烯类敏感株阳性株为115株,χ~2检验碳青霉烯类敏感组的与耐药组比较,差异有统计学意义(χ~2=45.141,P=0.000)。结论近六年鲍曼不动杆菌耐药机制以OXA-51,OXA-23起主要作用,外排泵机制可能在碳青霉烯类耐药机制起作用。     

碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌耐药机制及分子流行病学研究

目的 分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药情况及耐药基因,为临床治疗提供依据。方法 收集并鉴定临床分离非重复CRKP 27株,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定药敏分析仪鉴定和药敏试验,碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测A类丝氨酸碳青霉烯酶和B类金属β内酰胺酶,聚合酶链反应（PCR）法和基因测序技术检测常见的耐药基因。使用肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)对菌株进行同源性分析。结果 27株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类、头孢菌素类、喹诺酮类等抗生素的耐药率均>96%。碳青霉烯酶抑制剂增强试验显示,26株A类丝氨酸碳青霉烯酶阳性,1株B类金属β内酰胺酶阳性。PCR和基因测序结果显示,26株CRKP携带KPC-2基因,1株携带NDM-1基因。ERIC-PCR将27株CRKP分为8型,以Ⅰ型和Ⅱ型为主。结论 分离的CRKP对临床常用抗生素表现出高水平耐药,其耐药机制主要是该类细菌产KPC-2型碳青霉烯酶。     

产气肠杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制研究

目的 探讨产气肠杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制.方法 收集耐碳青霉烯类抗生素产气肠杆菌16株,采用改良Hodge试验筛选产碳青霉烯酶菌株;采用PCR扩增和基因测序技术检测并验证耐药基因;利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)对菌株的外膜蛋白进行分析.结果 改良Hodge试验结果发现16株产气肠杆菌均产碳青霉烯酶;PCR扩增和基因测序结果显示16株产气肠杆菌均存在KPC-2基因,但未携带IMP-1、IMP-2、VIM-1、VIM-2、NDM-1、OXA-1和OXA-9等其他碳青霉烯酶基因;SDS-PAGE电泳结果显示16株产气肠杆菌中有5株出现Omp36膜孔蛋白的缺失.结论 16株耐碳青霉烯类抗生素产气肠杆菌主要耐药机制可能与产KPC-2型酶且部分菌株合并Omp36膜孔蛋白的缺失有关.     

肺炎克雷伯菌介导致碳青霉烯类耐药的基因检测研究

目的：分析碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因型。方法分离碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌14株,分别采用E-test实验、改良的Hodge试验、脉冲场琼脂糖凝胶电泳分型及多位点序列分型测定其耐药性、耐药基因型及主要流行序列型。结果14株碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌对常用碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南呈中高度耐药,最低抑菌浓度（MIC）分别为8～64 mg/L、16～128 mg/L;对常见头孢类抗生素头孢哌酮、头孢西丁、头孢他啶和头孢吡肟均呈高度耐药,MIC 32～256 mg/L;对喹诺酮类药物环丙沙星呈中度耐药,MIC 3～32 mg/L;对氨基糖苷类抗生素阿米卡星不稳定,MIC〈0.12～256 mg/L。本组碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶表型检测均为阳性,基因型属KPC-2;脉冲电泳分型显示A克隆2株、B克隆9株、C克隆3株,多位点序列分型显示ST119株、ST154株、ST4391株,分型结果基本一致。结论碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌对部分其他种类的抗生素亦有较强耐药性,KPC-2型碳青霉烯酶是本院肺炎克雷伯菌产生青霉烯类耐药性的主要原因,主要流行克隆型和序列型分别为B型、ST11型。     

阴沟肠杆菌对碳青霉烯酶类抗生素耐药机制的研究

目的：研究碳青霉烯类高水平耐药的阴沟肠杆菌临床分离株对碳青霉烯类耐药主要机制。方法：筛选对碳青霉烯类高水平耐药的阴沟肠杆菌临床分离株21株,同时采用微量肉汤稀释法测定这些细菌对不同抗生素的最小抑菌浓度（minimal in－hibitory concentration,MIC）,改良Hodge实验、Carba NP试验检测是否产碳青霉烯酶;PCR检测碳青霉烯酶类型（blaKPC、blaIMP、blaNDM、blaVIM、blaIMI、blaSPM、blaNDMOXA-23、blaNDMOXA-24、blaNDMOXA-48、blaNDMOXA-58）。结果：药敏试验显示碳青霉烯类高水平耐药阴沟肠杆菌具有多重耐药性。改良Hodge实验、Carba NP试验阳性率分别为61.9%（13/21）、90.5%（19/21）;PCR扩增碳青霉烯酶基因,21株试验阴沟肠杆菌19株有扩增产物,IMP、KPC、NDM阳性率分别为23.8%（5/21）、9.5%（2/21）、61.9%（13/21）,其中一株阴沟肠杆菌既产IMP又产NDM。结论：产碳青霉烯酶是临床分离碳青霉烯类高水平耐药阴沟肠杆菌的主要耐药机制,应当引起院感控制人员的高度重视。     

泛耐药鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素机制研究

目的研究鲍曼不动杆菌对碳青霉烯耐药的表型和分子机制。方法采用KB法及琼脂稀释法从临床分离的84株泛耐药鲍曼不动杆菌中随机选取8株,采用外排泵抑制试验筛查外排泵表型阳性菌株,EDTA协同实验筛选金属β-内酰胺酶表型,改良三维试验检测ESBLs和AmpC酶,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,PCR扩增耐药菌株的KPC酶、碳青霉烯酶和ESBLs基因,并测序分析。提取外膜蛋白行SDS-PAGE。结果 PAβN抑制试验显示亚胺培南MIC值下降均≤4倍,而美罗培南MIC值下降≥4倍者占50%(4/8)。EDTA协同试验结果显示阴性。改良Hodge试验检测8株耐药菌结果阳性。耐药基因PCR扩增和测序证实8株耐药菌中7株有blaOXA-23基因,5株含blaTEM-1基因,8株耐药菌均含有KPC-2酶基因;耐药菌株的外膜蛋白电泳条带在25 ku处出现明显缺失。结论鲍曼不动杆菌对碳青霉烯耐药机制主要是产生KPC-2酶、blaOXA-23酶,外膜蛋白25 ku表达的缺失所致,外排泵过度表达可能参与美罗培南的耐药。     

一株耐碳青霉烯阴沟肠杆菌金属β-内酰胺酶的检测

目的初步探究一株耐碳青霉烯阴沟肠杆菌的耐药机制。方法采用K-B法检测该菌株对碳青霉烯类及其他常用抗菌药物的耐药性,采用改良Hodge实验和EDTA双纸片协同试验对碳青霉烯酶进行初筛,并用4对金属酶基因引物进行PCR扩增,同时进行AmpC酶的检测。结果药敏试验显示,该菌株对碳青霉烯和三代头孢耐药,并不被传统β-内酰胺酶抑制剂所抑制(对阿莫西林-克拉维酸和头孢哌酮-舒巴坦耐药),但对单环类的氨曲南敏感。改良Hodge试验和组合纸片法金属酶的初筛试验均为阳性,PCR检测结果显示该菌株携带Vim-2及Vim-5型金属酶基因。AmpC酶检测结果表明受试菌产诱导型AmpC酶。结论产Vim-2和Vim-5型金属酶是此株阴沟肠杆菌对碳青霉烯类耐药的重要原因,产诱导型AmpC酶可能参与其多重耐药机制,同时提示碳青霉烯类耐药性有向肠杆菌科扩散的趋势。     

A study on mechanism of carbapenem resistance on pan-drugresistant Acinetobacter baumannii

目的 研究鲍曼不动杆菌对碳青霉烯耐药的表型和分子机制.方法 采用KB法及琼脂稀释法从临床分离的84株泛耐药鲍曼不动杆菌中随机选取8株,采用外排泵抑制试验筛查外排泵表型阳性菌株,EDTA协同实验筛选金属β-内酰胺酶表型,改良三维试验检测ESBLs和AmpC酶,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,PCR扩增耐药菌株的KPC酶、碳青霉烯酶和ESBLs基因,并测序分析.提取外膜蛋白行SDS-PAGE.结果 PAβN抑制试验显示亚胺培南MIC值下降均≤4倍,而美罗培南MIC值下降≥4倍者占50%(4/8).EDTA协同试验结果显示阴性.改良Hodge试验检测8株耐药菌结果阳性.耐药基因PCR扩增和测序证实8株耐药菌中7株有blaOXA-23基因,5株含blaTEM-1基因,8株耐药菌均含有KPC-2酶基因;耐药菌株的外膜蛋白电泳条带在25 ku处出现明显缺失.结论 鲍曼不动杆菌对碳青霉烯耐药机制主要是产生KPC-2酶、blaOXA-23酶,外膜蛋白25 ku表达的缺失所致,外排泵过度表达可能参与美罗培南的耐药.     

不动杆菌属多重耐药及泛耐药的分子机制研究

目的 调查B内酰胺酶、整合子、外膜蛋白（Omp）及外排泵在多重耐药和泛耐药不动杆菌属中所起的作用。方法 收集1999至2004年北京、广州和福州对碳青霉烯类耐药的非重复的90株菌。脉冲场凝胶电泳（PFGE）和随机引物多态性DNA（RAPD）分型确定这些耐药株的亲缘关系，选取7个不同克隆深入研究其机制。等电聚焦电泳测定酶的等电点；碱裂解法提取质粒；对各种B内酰胺酶TEM、SHV、PER、OXA-、IMP-、VIM-进行聚合酶链反应（PCR）及序列分析；对整合子基因进行PCR及序列分析。结果 2004年北京协和医院发生泛耐药株P克隆的暴发流行，此克隆株对常用广谱抗菌药物均不敏感。7个不同克隆株均产多种B内酰胺酶：TEM-1酶、高产AmpC酶、SHV型酶、OXA-23型碳青霉烯酶（6株）及IMP-8型金属酶（1株），1个克隆株还产PER-1型酶。这7个克隆株对大多数超广谱6内酰胺类（包括碳青霉烯类）、红霉素、氯霉素、利福平均耐药，2个克隆株对头孢哌酮／舒巴坦、阿米卡星敏感，4个克隆株对左氧氟沙星敏感。所有7株对米诺环素、黏菌素敏感。发现5种不同结构的整合子，携带水解氨基糖苷类、利福平、氯霉素及碳青霉烯类（bla1MR-8）的耐药基因。结论 不动杆菌产生OXA-23型碳青霉烯酶或IMP型金属酶、通过基因重组获得各种携带不同基因盒的整合子，共同介导其多重耐药性或泛耐药性。泛耐药株对个别不常用的抗菌药物如黏菌素、米诺环素仍敏感。     

不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制和治疗进展

不动杆菌已成为医院感染的主要致病菌.随着碳青霉烯类抗生素的广泛应用,其多重耐药菌尤其是碳青霉烯类耐药菌株的出现,给临床治疗带来了很大的难题.研究发现,不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制主要是灭活酶的产生,其中以染色体或质粒介导的各种碳青霉烯酶最为重要.而舒巴坦和β-内酰胺类药物合用对不动杆菌有一定的治疗协同作用.     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药基因分析

目的分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药情况及其耐药基因,为该菌感染的治疗和预防提供参考。方法收集临床分离非重复耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌50株,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定药敏分析仪进行常规药敏试验,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)检测碳青霉烯酶,乙二胺四乙酸(EDTA)协同法检测金属酶,PCR扩增和基因测序技术检测其耐药基因。结果药敏结果显示,肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类及氨曲南等抗生素的耐药率高达80%以上。50株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,mCIM试验结果阳性37株,其中EDTA协同试验阳性有3株。PCR结果显示,37株mCIM试验阳性耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,检测出33株KPC-2型耐药基因,未检测出IMP、VIM、NDM-1、OXA-48等耐药基因。结论耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对常用抗生素表现出高水平耐药,耐药机制主要为产碳青霉烯酶,耐药基因型主要以KPC-2型为主。     

黑龙江地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌表型检测及同源性分析

目的：对黑龙江地区耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌（ carbopenems antibiotics resistance acinetobacter baumannii ,CRAB）表型检测及同源性分析,了解该地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药机制及耐药菌株的克隆动向。方法采用改良Hodge试验,多底物-多抑制剂协同法分类检测碳青霉烯酶（carbapenem-hydrolyzing β-lactamases,CHBLs）;应用PCR扩增OXA-23、OXA-24、OXA-58、OXA-51等对收集的菌株进行分子分型,分析其耐药菌株之间的亲缘性关系。结果319株CRAB的临床分离株中,286株改良Hodge试验阳性即产碳青霉烯酶,其中187株CRAB产丝氨酸类碳青霉烯酶（SCHBLs）,无金属类碳青霉烯酶（ MCHBLs）。187株CRAB碳青霉烯类酶基因扩增显示OXA-51为阳性扩增,OXA-23基因阳性率为98％,OXA-24和OXA-58基因未扩增出特异条带。结论 OXA-23基因是在黑龙江地区流行的CRAB主要基因型。     

肠杆菌科细菌高产AmpC合并膜孔蛋白改变与碳青霉烯类耐药的关系

目的研究碳青霉烯类抗生素敏感性下降的肠杆菌科细菌的分子生物学及其临床感染特征。方法采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪进行抗菌药物敏感试验测定最小细菌浓度（MIC）,用酶提取物头孢西丁三维试验检测AmpC酶,用PCR扩增AmpC耐药基因和膜孔蛋白基因,并进行序列分析。结果在55株碳青霉烯类敏感性下降的肠杆菌科细菌中,AmpC酶三维试验阳性菌为30株,PCR结果中AmpC耐药基因DHA阳性9株（16．36％）．CIT阳性16株（29．09％）,未见MOX阳性株。膜孔蛋白基因的测定结果：55株肠杆菌科细菌中有34株（61．82％）膜孔蛋白基因OMPK35缺失,52株膜孔蛋白基因OMPK36缺失。膜孔蛋白基因OMPK35缺失对碳青霉烯类药物的耐药具有一定的统计学意义。结论肠杆菌科细菌由于高产AmpC酶以及膜孔蛋白的缺失而对碳青霉烯类药物耐药,这对临床控制病情及抗感染是极大的困难与挑战。