抗钠-钙交换体α-1抗体对Langendorff灌流大鼠心脏功能的影响

目的 研究抗钠-钙交换体（NCX）α-1（117-137）肽段抗体对离体灌流大鼠心脏活动的影响,初步探讨其作用机制.方法 用合成的NCXα-1（117-137）重复序列肽段主动免疫大鼠获取抗体,经纯化后通过Langendorff离体灌流装置观察其对心功能的效应;利用膜片钳系统观察抗体对单个心肌细胞钠-钙交换电流的影响.结果 免疫后大鼠体内抗α-1（117-137）抗血清滴度明显增加,纯化后抗体浓度为1.0 mg/mL,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结果只显示一条带,分子量与IgG标准品一致.在浓度为10 nmol/L、20 nmol/L和40 nmol/L 时,该抗体可剂量依赖性地降低离体灌流心脏左室发展压（LVDP）、左室压最大上升/下降速率（±dP/dtmax）.进一步研究发现,在10 nmol/L～40 nmol/L浓度范围内,抗NCX α-1抗体可剂量依赖性地抑制外向和内向钠-钙交换电流.结论 抗NCXα-1（117-137）抗体对心肌收缩和舒张均表现出抑制效应,这一作用与其抑制钠-钙交换活动有关.     

大鼠Langendorff离体心脏灌流模型的制备经验及其影响因素分析

目的:建立稳定有效的大鼠Langendorff离体心脏灌流模型。方法:采用成年SD大鼠腹腔注射麻醉后,开胸取心,使用改良K-H液恒温、恒流灌注,通过传感器、放大器、信号记录仪,监测记录心室压、灌注压、心脏表面心电图和心脏表面温度。结果:制备成功的大鼠Langendorff离体心脏灌流模型,心室内压保持在75mm Hg左右,心率保持在250次/min左右,节律稳定,无或偶尔发生心律失常,10ml/min恒流灌注,灌注压保持在65mm Hg左右,在持续含氧灌流的情况下,心脏自主搏动可稳定保持2小时以上。结论:严格控制实验过程中的各个环节,熟练掌握操作技术,大鼠Langendorff离体心脏灌流模型均可制备成功,并保持稳定。     

Na~＋/Ca~（2＋）交换体α-2（807-844）抗体的制备及其对大鼠心肌细胞Na~＋/Ca~（2＋）交换电流的抑制作用

目的在制备和纯化抗心肌Na＋/Ca2＋交换体α-2（807-844）肽段抗体的基础上,观察抗体对大鼠心肌细胞Na＋/Ca2＋交换电流及L型钙电流（ICa）、瞬时外向钾电流（Ito）和内向整流钾电流（Ik1）的影响。方法利用人工合成的α-2（807-844）多肽免疫兔制备抗α-2（807-844）抗体,抗血清经Protein A亲和柱纯化,利用全细胞膜片钳技术观察纯化后抗体对心肌细胞Na＋/Ca2＋交换电流（INa/Ca）、L型钙电流（ICa）、瞬时外向钾电流（Ito）和内向整流钾电流（Ik1）的影响。结果经主动免疫,抗Na＋/Ca2＋交换体α-2（840-877）抗血清效价达1∶243 000,纯化后抗α-2（840-877）抗体浓度为7.21mg/mL。纯化后的抗体在SDS-PAGE时出现清晰的2条带,其分子量分别为25kD和50kD左右。在1nmol/L～104nmol/L浓度范围内,抗α-2抗体对成年大鼠心肌细胞外向和内向Na＋/Ca2＋交换电流均表现为剂量依赖性的抑制作用;对Ito和Ik1则均未见明显影响。此外,104nmol/L该抗体对L型钙电流亦具有抑制作用。通过氨基酸序列比对发现,α-2（807-844）肽段与L型钙通道第2结构域孔环（697～730位氨基酸）序列相似度为23.7%,可能是抗体对L型钙通道出现交叉反应的原因。结论在1nmol/L～103nmol/L浓度范围内,抗心肌Na＋/Ca2＋交换体α-2（807-844）抗体可特异性抑制大鼠心肌Na＋/Ca2＋交换活动;对L型钙通道电流、瞬时外向钾通道电流和内向整流钾通道电流均未见明显影响。     

灯盏花注射液对大鼠离体心脏心功能的影响

目的研究灯盏花注射液对正常大鼠离体心脏冠脉流量及血流动力学参数的影响。方法应用Langendorff实验系统。将36只大鼠随机分为6组：溶剂对照组,10-7 mol/L灯盏花组,3×10-7 mol/L灯盏花组,10-6 mol/L灯盏花组,3×10-6 mol/L灯盏花组,10-5 mol/L灯盏花组,每组6只。比较用药前后大鼠离体心脏冠脉流量（CF）、左心室发展压（LVDP）、左心室舒张末期压力（LVEDP）、左心室内压最大上升速率（＋dp/dtMAX）和左心室内压最大下降速率（-dp/dtmax）。结果用台式液灌流时,CF,LVDP,LVEDP,＋dp/dtmax和-dp/dtmax的基础值分别为（7.5±1.1）mL/min,（60±1）mmHg,（11±2）mmHg,（1284±101）mmHg/s,（1021±112）mmHg/s。含灯盏花的台式液浓度依赖性的增加离体大鼠心脏的CF,LVDP,＋dp/dtmax和-dp/dtmax值,当灯盏花浓度为10-5 mmol/L时,各项参数的最大值分别为（12.4±1.0）mL/min,（74±3）mmHg,（1541±124）mmHg/s,（1 398±101）mmHg/s。含灯盏花的台式液对LVEDP值无统计学意义。结论灯盏花浓度依赖性舒张大鼠离体心脏冠状动脉;灯盏花对离体大鼠心脏具有浓度依赖性的正性肌力作用。     

丹红注射液对肾性高血压大鼠离体心脏心功能的影响

目的：观察丹红注射液对肾性高血压模型大鼠离体心脏心功能的影响。方法：30只采用双肾双狭方法制备肾性高血压模型成功的大鼠,随机分为模型组、维拉帕米组及丹红组,3组大鼠均断头取心脏,采用 Langendorff 离体心脏灌流法测定肾性高血压模型大鼠离体心脏在给予丹红注射液灌流10 min 前及灌流后0.5 h,1 h,2 h 左室内压力最大上升／下降速率（±LV dp ／dt max）,左室舒张末期内径（Left Ventricular End －Diastolic Diameter,LVEDD）,左室收缩末期内径（Left Ventricular End Systolic Diameter,LVESD）,左室内压力峰值（Left Indoor Pressure Peak,LVSP）及左室射血分数（Left Ventric-ular Ejection Fraction,LVEF）。并以此评价丹红注射液对肾性高血压模型大鼠离体心脏心功能的影响。结果：在灌流丹红注射液2 h 时后可降低肾性高血压大鼠离体心脏±LV dp ／dt max、LVSP、LVEF,与模型组比较,P ＜0.05,差异有统计学意义;对 LVEDP 及 LVEDP 则无明显影响。结论：丹红注射液对肾性高血压大鼠离体心脏具有降低心脏做功的作用,这与其降低心肌收缩力、减轻心脏负荷而起到保护心肌和改善心功能有关。     

基于“时空特点”探讨电针预处理对脑缺血大鼠钠钙交换体1的影响

目的:观察电针预处理对永久性脑缺血大鼠不同时相、不同缺血区域钠钙交换体1(NCX1)表达的影响,并探讨其可能机制。方法:84只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组再分0、1、2和24 h亚组,每亚组各7只。电针刺激大鼠“百会”、双侧“内关”和“三阴交”,疏密波,频率2/15 Hz,强度1 mA,每次20 min,连续5 d。于末次电针后2 h采用线栓法制备大鼠永久性脑缺血模型,通过免疫组化染色及Western Blot观察电针预处理对不同时相(0、1、2和24 h)、不同缺血区域(缺血区、非缺血区)皮层NCX1阳性细胞数及蛋白表达的调控模式。结果:缺血区,3组间0 h时相NCX1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);模型组NCX1蛋白表达于1、2和24 h均低于同时相假手术组,差异具有统计学意义(P<0.05);电针组NCX1蛋白表达于1 h、2 h显著高于同时相模型组差异具有统计学意义(P<0.05),于24 h降至最低,与同时相模型组,差异无统计学意义(P>0.05)。非缺血区,3组间0 h时相NCX1蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05);与同时相假手术组比较,模型组NCX1蛋白表达于2 h、24 h显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),电针组可上调2 h、24 h时NCX1蛋白表达,与同时相模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:脑缺血后缺血区、非缺血区皮层NCX1蛋白表达均呈现不同程度的降低,而电针预处理可以上调缺血区1 h、2 h NCX1蛋白及非缺血区2 h、24 h NCX1蛋白表达,可能是其脑保护作用的途径之一。     

丹参注射液对大鼠离体灌流肝及门静脉血管条的影响

丹参注射液对CCl₄损伤的大鼠离体灌流肝具有保护作用,可降低灌流液中GPT,减轻肝脏的病理损伤;对大鼠体外SGPT活力及门静脉血管条则无明显影响。     

茶色素在低钙及高钙浓度下对离体蟾蜍心肌收缩力的影响

目的 观察不同浓度茶色素(Tea pigment,TP)溶液在低钙和高钙条件下对离体蟾蜍心肌收缩力和心率的影响。方法 50只蟾蜍随机分为正常任氏液组,任氏液+茶色素组,低钙任氏液+茶色素组,高钙任氏液+茶色素组。采用斯氏法制备离体蛙心灌流标本。正常任氏液组离体蟾蜍心脏只灌流任氏液,任氏液+茶色素组在离体蟾蜍心脏灌流任氏液中加入茶色素溶液,低钙任氏液+茶色素组在离体蟾蜍心脏灌流低钙任氏液中加入茶色素溶液,高钙任氏液+茶色素组在离体蟾蜍心脏灌流高钙任氏液中加入茶色素溶液。通过蟾蜍心室外加药,利用心室收缩波动,心室吸收药物的方法给药,心室外容积固定为1.0 mL,分别以不同浓度的茶色素进行灌流,每次加入茶色素后记录40 min。应用BL-420F生物机能实验系统记录离体蟾蜍心肌收缩曲线,并进行心肌收缩力和心率的统计学分析。结果 在低钙条件下,灌流茶色素溶液浓度为50 μg·mL-1时,心肌收缩力开始增强,差异有统计学意义(P < 0.05);在高钙条件下,灌流200 μg·mL-1茶色素时,心肌收缩力受到抑制,差异有统计学意义(P < 0.01)。结论 在低钙任氏液条件下,一定浓度的茶色素对离体蟾蜍心脏活动有明显的兴奋作用,而在高钙任氏液条件下则茶色素对心肌收缩力有明显的抑制作用。     

番茄红素对离体蟾蜍心功能影响的实验研究

目的:观察番茄红素(lycopene)溶液对离体蟾蜍心脏心率和心肌收缩力的影响。方法:根据斯氏蛙心插管方法,用不同浓度的番茄红素对离体蟾蜍心脏进行灌流,采用BL-420生物机能实验系统记录心率和心肌收缩力的变化。结果:灌注0.001g/ml的番茄红素溶液时,对离体蟾蜍的心脏收缩力和心率影响不大;分别灌注0.002 g/ml和0.004g/ml的番茄红素溶液时,离体蟾蜍的心脏收缩力和心率下降均较为明显(P<0.05);灌注0.008g/ml的番茄红素溶液时,心脏收缩幅度更为明显(P<0.05),心率明显减慢(P<0.05),心脏甚至停止跳动;结论:番茄红素溶液降低离体蟾蜍心肌收缩力,但减少心率不明显。     

刺丹注射液对大鼠离体心脏的作用

目的:观察刺丹注射液对大鼠离体心脏的保护作用。方法:将SD大鼠随机分为4组,雌雄各半,每组8只,分别为空白组(生理盐水,0.09 g·L-1),刺五加注射液组(10 m L·L-1)、丹参注射液组(10 m L·L-1)和刺丹注射液组(8 m L·L-1)。采用Langendorff离体心脏灌流模型,用8通道生理信号记录分析系统测定左心室收缩压(LVSP),左心室舒张末期压(LVEDP),左心室发展压(LVDP=LVSP-LVEDP),左室内压最大上升速率(+dp/dtmax),左室内压最大下降速率(-dp/dtmax),心率(HR)的变化情况。将刺丹注射液各指标的增加量与刺五加注射液和丹参注射液各指标的增加量进行比较。并将刺丹注射液分为1,2,4,8,16 m L·L-1营养灌流液5个剂量组,进行量效关系考察。结果:刺丹注射液能增加大鼠离体心脏的LVSP,LVDP,+dp/dtmax,减小HR,LVEDP,-dp/dtmax,与刺五加注射液组和丹参注射液相比较,各指标增加量有显著性差异和极显著性差异(P0.05~P0.01)。刺丹注射液在1~8 m L·L-1表现出一定的量效关系,在8 m L剂量下药效最显著。结论:刺丹注射液具有减慢心率,增强心脏的收缩和舒张功能的作用,且作用优于刺五加注射液和丹参注射液,并在一定剂量范围内呈现量效关系。     

参附注射液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察参附注射液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用Langendorff大鼠离体心脏灌流技术制备心脏缺血再灌注损伤模型,用不同浓度氮饱和参附注射液灌流心脏。观察记录复灌20min和40min时的心率,灌流量及酶指标的变化。结果参附注射液可提高心脏缺血再灌期的心率和冠脉流量,明显降低灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的水平。结论参附注射液对缺血再灌注损伤心脏具有保护作用。     

蟾酥对豚鼠离体心脏的毒性作用和物质基础研究

目的:研究蟾酥对豚鼠离体心脏的毒性作用和其物质基础。方法:通过Langendorff灌流研究蟾酥对豚鼠离体心脏的毒性作用,HPLC测定灌流后心脏中蟾蜍甾烯的含量。结果:蟾酥诱导豚鼠离体心脏出现房室传导阻滞、室速、室颤多种心律失常现象。当给药量累积达(60±11.5)μg时致其停跳。采用HPLC在灌流心脏中测到9种蟾蜍甾烯类化合物,其与心脏亲和力增加的顺序为:沙蟾毒精>蟾毒灵>远华蟾毒配基>嚏根草苷元>日蟾毒它灵>华蟾毒灵>蟾毒它灵>脂蟾毒配基>去乙酰蟾毒它灵。结论:蟾酥对豚鼠心脏具有显著毒性,其物质基础可能是脂蟾毒配基、蟾毒灵、蟾毒它灵、日蟾毒灵等9种蟾蜍甾烯类化合物。     

冰片对大鼠离体心脏冠脉流量的影响

目的通过观察冰片对大鼠离体心脏冠脉流量的影响,判断冰片能否直接作用于心肌组织扩张冠状动脉,其作用的靶点是否在心肌。方法Wistar大鼠,随机分为3组,分别为溶剂组、冰片组、丹七组,应用Langendorff系统进行离体心脏恒压灌流,冰片组按0.4 mg/心脏给药、丹七组按20 mg∶30 mg/心脏一次性给药,记录给药前及给药后10 min内冠脉流量变化情况。结果恒压灌流条件下,溶剂组和冰片组给药前后冠脉流量保持稳定,丹七组有使冠脉流量增加作用,给药后冠脉流量升高相对值为20.34%,与溶剂组相比有显著性差异(P<0.05)。结论冰片本身未能升高大鼠离体心脏冠脉流量,其作用可能在于促进丹参、三七的吸收,增加丹参、三七血药浓度。     

电针内关穴对家兔离体心脏急性缺血的保护作用及机制

目的 探索电针“内关穴”对垂体后叶素（Posterior Pituitary injection,PPI）致家兔离体心脏急性缺血的保护作用及机制,并为深入观察电针治疗心肌缺血的效应物质奠定实验基础.方法 用PPI复制家兔离体心脏急性心肌缺血Langendorff灌流模型,给予不同频率电针后的心脏冲洗液灌流,分别测定左心室血流动力学、Ⅱ导联心电图、冠脉流量、心肌酶、SOD、MDA及心肌组织学变化,然后进行组间比较.结果 高频组心率（HR）、ST段、T波、冠脉流量、LVSP、LVEDP、＋dp/dtmax、-dp/dtmax以及CK、CK-MB、SOD、MDA和组织学形态观察,与模型组有显著性差异.结论 高频组的心脏冲洗液中有针灸效应物质存在,该效应物质对PPI诱导兔离体心脏急性心肌缺血Langendorff灌流模型有明显保护作用,该作用与提高心肌组织SOD活性、降低MDA含量有关.     

蒙药广枣中3种黄酮类成分对离体心功能的影响

采用Langendorff灌流法,观察广枣中3种黄酮类成分对离体心功能的影响,为找到一种抗心律失常作用较强的主要化学单体或简单复合物打下基础.结果表明：样品1和样品2减慢心率作用在0.027g生药1/ml～0.22g生药/ml范围内,具有明显的浓度依赖性,当浓度大于0.22g生药/ml时,减慢心率作用反而随着剂量增加而减小;样品3减慢心率作用与剂量成反比.在0.027g生药1ml～1.72g生药/ml范围内,样品1、样品2和样品3使心肌收缩幅度的变化均无统计学意义.结论：广枣中3种黄酮类成分均可减慢心率,对心肌收缩力影响不明显.     

广枣总黄酮对离体大鼠心脏cAMP含量和腺苷酸环化酶活性的影响

为探讨广枣总黄酮（TFC）抗心律失常的作用机制,采用竞争性蛋白结合分析法,测定心肌组织cAMP含量和腺苷酸环化酶（AC）活性,结果表明,TFC50,100,200ug/ml均可明显抑制离体大鼠心肌组织中的AC活性,TF100mg/L可使CAMP含量明显下降。     

复方丹参滴丸对豚鼠离体心脏心电图的影响

目的 观察复方丹参滴丸及其组成药物丹参、三七对豚鼠离体心脏心电图的影响,研究其心脏毒性作用.方法 应用Langendorff离体豚鼠心脏灌流装置,将复方丹参滴丸浸膏和丹参浸膏(给药质量浓度均以丹参素计)、三七浸膏(给药质量浓度以人参皂苷Rg1计)均按3、0.3、0.1、0.03 μg/mL灌注,观察离体豚鼠心脏心电图的变化.结果 复方丹参滴丸浸膏和丹参浸膏对豚鼠离体心脏心电图无明显影响,三七浸膏在低质量浓度(0.3、0.1、0.03 μg/mL)对豚鼠离体心脏心电图没有影响,但在3 μg/mL时可轻微延长PR、RR间期,减慢心率,与对照相比差异显著(P＜0.05).3种药物对校正后的QT间期(QTc)及T波峰到T波结束间期(Tp-e)均无显著影响.结论 复方丹参滴丸及其组成药物丹参、三七在实验质量浓度范围内不诱发心室肌细胞复极化延长及严重心律失常.     

沙棘黄酮对离体蛙心功能的影响及机制研究

目的:研究沙棘黄酮对离体蛙心心肌收缩力的影响并探讨其可能机制。方法:用保险粉(Na2S2O4)造成H9C2心肌细胞缺氧损伤,分别用沙棘黄酮高、中、低浓度作用于H9C2细胞缺氧损伤模型,以细胞存活率为指标探究沙棘黄酮对心肌细胞的保护作用。随后采用八木氏法制备离体蛙心灌流标本,分别加入不同浓度沙棘黄酮,研究不同浓度下沙棘黄酮对蛙心肌收缩力、心率和心输出量的影响。通过给予乙酰胆碱、阿托品、肾上腺素及低钙、高钙和正常任氏液,探究沙棘黄酮影响蛙心收缩功能的作用及机制。结果:沙棘黄酮可明显提高心肌细胞的存活率,可使蛙心心肌收缩力、心输出量明显降低(P<0.01),心率减慢(P>0.05);M受体阻断剂阿托品不能拮抗沙棘黄酮抑制心肌收缩的作用,沙棘黄酮也不能完全拮抗肾上腺素增强心肌收缩力的作用;沙棘黄酮在低钙、高钙和正常任氏液中抑制离体蛙心的作用随细胞外钙离子浓度的升高而增强(P<0.01)。结论:沙棘黄酮对心肌细胞具有保护作用,对离体蛙心心肌收缩具有抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞外钙离子内流有关。     

蜂王浆对离体蟾蜍及离体家兔小肠心肌收缩力、频率的影响

目的:观察蜂王浆对离体蟾蜍心肌和离体家兔离体小肠平滑肌收缩力、频率的影响并探讨其作用机制。方法:分别应用离体心脏灌流方法及体外麦氏浴管法观察蜂王浆对离体蟾蜍心肌及离体家兔小肠收缩力、频率的的影响。结果:①在1∶1000-1∶100范围,蜂王浆抑制离体蟾蜍心肌收缩力、心率,呈剂量依赖关系。阿托品(1μmol/L)可拮抗蜂王浆(1∶800)对离体蟾蜍心肌收缩幅度的抑制。②在1∶400-1∶100浓度之间,蜂王浆促进离体家兔小肠平滑肌的收缩幅度和收缩频率,呈剂量依赖关系。而在1∶1000,1∶800,1∶600浓度之间,蜂王浆确抑制离体家兔小肠平滑肌的收缩幅度和收缩频率;阿托品(1μmol/L)可拮抗蜂王浆(1∶100)对离体家兔小肠平滑肌心肌收缩幅度、频率的抑制,呈剂量依赖关系。③在低钙情况下,蜂王浆对离体蟾蜍心肌收缩力、心率的影响与正常钙情况下相类似。结论:蜂王浆对离体蟾蜍心肌及离体家兔小肠收缩力、频率的影响与蜂王浆中的乙酰胆碱的作用有关。     

Urotensin Ⅱ对心功能的影响及其作用机制探讨

 目的应用Langendorff离体心脏灌注的方法,观察不同浓度尾加压素II(Urotensin Ⅱ,UII)对正常与心衰大鼠心功能的影响,及特异性的PKA抑制剂(KT5720)对UII作用于大鼠心脏效应的影响,探讨UII作用于心脏的可能机制。方法在langendorff离体心脏灌注的模型上,观察:①UII处理组:给予不同浓度的UII后,正常及心衰大鼠心功能的变化;②KT5720+UII处理组:在灌流KT5720基础上给予UII(IC₅₀),正常与心衰大鼠心功能指标的变化;③KT5720对照组:给予KT5720后正常与心衰大鼠心功能的变化。结果①UII处理组:给予不同浓度的UII(10^-10、10^-9、10^-8和10^-7mol·L^-1),①灌注正常大鼠心脏后,左心室压最大上升速率(+dp/dt_max)分别降低16.48%、25.53%、31.53%、34.47%,左心室压最大下降速率(-dp/dt_max)分别降低22.78%、33.63%、46.09%、51.73%;②灌注心衰大鼠心脏后,+dp/dt_max分别降低19.01%、26.05%、34.36%、37.27%,-dp/dt_max分别降低27.71%、38.72%、53.41%、60.12%。心衰大鼠的抑制率大于正常大鼠。⑵KT5720+UII处理组:KT5720基础上灌注UII(IC₅₀),①正常大鼠+dp/dt_max降低5.37%,-dp/dt_max降低7.59%;②心衰大鼠+dp/dt_max降低3.27%,-dp/dt_max降低3.15%。+dp/dt_max、-dp/dt_max抑制率与UII组(IC₅₀)比较,均有统计学差异(正常大鼠P<0.01;心衰大鼠P<0.01)。③KT5720对照组:给予KT5720后,①正常大鼠+dp/dt_max降低5.99%,-dp/dt_max降低7.63%;②心衰大鼠+dp/dt_max降低2.84%,-dp/dt_max降低2.96%;与KT5720对照组的±dp/dt_max抑制率比较无统计学差异(正常及心衰大鼠P值均>0.05)。结论UII对正常大鼠及心衰大鼠心脏功能均呈剂量依赖性抑制,KT5720可以阻断UII对大鼠心脏的抑制作用,UII对心功能的抑制作用可能是通过PKA途径起作用。