针刺对高脂大鼠主动脉脂联素受体1和2蛋白表达的影响

[目的]探讨高脂饮食对SD大鼠主动脉脂联素信号的影响以及针刺对脂联素信号的调节。[方法]刚断乳的SD大鼠高脂喂养12周后检测血脂、髓过氧化物酶(MPO)和一氧化氮(NO),根据体质量随机分为模型组和针刺组,干预4周后用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清脂联素(APN),用Western blotting法检测主动脉脂联素受体(AdipoR)1和2蛋白表达,设普食对照组。[结果]高脂饮食12周后SD大鼠甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、MPO明显升高,NO明显降低;干预4周后模型组大鼠血清APN、主动脉AdipoR1/2蛋白含量均明显低于对照组,针刺组血清APN水平和主动脉AdipoR2含量明显增加,AdipoR1呈上升趋势。[结论]通过针刺能够增加血清APN水平和主动脉AdipoR蛋白,调整主动脉APN信号的转导,Adipo R2在其中发挥了重要作用。     

大黄素对非酒精性脂肪性肝炎模型大鼠作用及对脂联素、脂联素受体的影响

目的探讨大黄素对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)模型大鼠的治疗作用及对脂联素、脂联素受体的影响。方法雄性SD大鼠40只,随机分为空白组,模型组,大黄素高(40 mg·kg^-1)、低剂量(20 mg·kg^-1)组。空白组予普通饲料,其余各组予高脂饲料建模,时间共10周。造模后,处死动物,取材。观察各组大鼠体质量、肝湿重、肝指数,化学发光法检测大黄素对NASH模型大鼠谷丙转氨酶(glutamic pyruvic transaminase,ALT)、谷草转氨酶(millet straw transaminase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、谷氨酰转肽酶(glutamyl transpeptidase,GGT)、甘油三酯(triglycerides,TG)、胆固醇(cholesterol,TC)的影响,制作石蜡切片行苏木素-伊红染色(HE),油红O染色检测大黄素对NASH大鼠肝组织炎症损伤、脂肪变的影响,Western-blot检测各组大鼠肝脏内脂联素(adiponectin,ADPN)、脂联素受体2(adiponectin receptor-2,AdipoR2)蛋白表达,荧光定量PCR检测各组大鼠肝脏内ADPN,AdipoR2 mRNA表达。结果与模型组相比,大黄素能有效改善NASH模型大鼠肝脏脂质沉积,减轻炎症细胞浸润,减轻大鼠体质量,肝指数;大黄素高剂量组ALT、AST、ALP、GGT、TG、TC均有不同程度下降(P<0.05);相对模型组,大黄素高剂量组大鼠肝组织ADPN,AdipoR2蛋白,mRNA水平升高(P<0.05)。结论大黄素能通过上调NASH模型大鼠ADPN,AdipoR2表达,有效改善肝功能、血脂,改善NASH大鼠肝组织脂肪变程度,减轻肝脏炎症。     

大黄提取片对高脂饮食诱导肥胖大鼠脂代谢及相关基因表达的影响

目的:观察大黄提取片对高脂饮食诱导肥胖大鼠脂代谢、骨骼肌脂联素受体1(AdipoR1)和过氧化物酶体增殖物激活受体a(PPARa)基因表达的影响,以探讨大黄的减肥作用机理。方法:给饮食诱导肥胖大鼠灌服低、中、高剂量(200,400,800mg.kg-1.d-1)大黄提取片,测定血脂、脂联素,应用Real-time PCR检测大鼠骨骼肌中AdipoR1和PPARa mRNA表达水平。结果:大黄提取片呈剂量依赖性的增强降脂作用,高剂量大黄提取片能显著降低肥胖大鼠血总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、游离脂肪酸(FFA),显著增加骨骼肌组织PPARa mRNA表达水平,但3种剂量大黄均不能明显改变脂联素和骨骼肌AdipoR1mRNA水平。结论:大黄提取片可通过增加肥胖大鼠骨骼肌PPARa表达、降低血脂水平而促进机体减肥。     

针刺对高脂大鼠主动脉脂联素受体基因表达的影响

目的探讨AdipoR的不同亚型在高脂饮食机体主动脉表达的变化以及针刺对该变化的影响。方法将高脂喂养12周的SD大鼠检测血脂、一氧化氮（NO）和髓过氧化物酶（MPO）,根据体重随机分为模型和针刺组,干预4周后检测血脂、NO、MPO、主动脉AdipoR1和AdipoR2基因表达,并设普食对照组。结果干预前,与对照组比较,模型组和针刺组大鼠TG、TC、MPO明显升高,NO明显降低。干预后,模型组TG、TC、MPO、NO无明显变化,主动脉AdipoR1和AdipoR2基因表达明显降低;针刺后TG、TC和MPO明显降低,NO明显回升,主动脉AdipoR2基因表达明显上调,AdipoR1基因表达无明显变化。结论高脂饮食造成机体主动脉AdipoR1和AdipoR2基因表达低下,影响了脂联素信号对主动脉的保护作用;针刺能够上调脂联素信号保护高脂对主动脉的损伤,其作用主要通过AdipoR2介导的。     

针刺上调脂联素信号对高脂饮食大鼠主动脉的影响

目的研究高脂饮食对sD大鼠主动脉脂联素信号的影响以及针刺能否对该影响发挥调节作用,探讨针刺的作用机制。方法高脂饲料喂养17只刚断乳的sD大鼠12周后,根据体重随机分为针刺组和模型组,干预4周后,ELISA法检测血清脂联素,实时荧光RT-PCR和western blotting分别检测主动脉脂联素受体1、2基因和蛋白,免疫组化法检测主动脉bcI-2和bax,硝酸还原酶法测主动脉一氧化碳（N0）含量,精氨酸催化法测主动脉一氧化碳合酶（NOS）活力,黄嘌呤氧化酶法测超氧化物歧化酶（SOD）活力,硫代巴比妥酸法测丙二醛（MDA）含量。并设普通饲料对照组。结果模型组血清adiponectin、主动脉AdipoR1／2mRNA和蛋白、N0、结构NOS（cNOS）、bc1-2和SOD明显低于对照组,MDA和bax明显高于对照组。针刺组血清adiponectin、主动脉AdipoRl／2mRNA和蛋白、NO、cNOS、bc1-2和SOD明显高于模型组,MDA和bax明显低于模型组。结论高脂饮食造成了sD大鼠主动脉脂联素信号转导障碍,针刺通过增加脂联素受体2基因和蛋白的表达增加了主动脉脂联素信号的传递,保护了主动脉。     

中药复方益糖康对糖尿病大鼠白色脂肪中脂联素、脂联素受体1基因表达的影响

目的:观察中药复方"益糖康"对糖尿病大鼠白色脂肪脂联素(Adiponectin)和脂联素受体1(adiponectin receptor1,AdipoR1)的基因表达的影响。方法:大鼠高脂饲料饲养4周后,一次性腹腔注射链尿佐菌素(STZ)造模,将造模成功的大鼠用随机数字表法将其随机分为模型组和益糖康治疗组。空白对照组和模型组以蒸馏水灌胃,治疗组的大鼠用益糖康煎剂灌胃,4周后3组大鼠睾周白色脂肪组织放入液氮中保存,用RT-PCR法检测脂肪中脂联素和脂联素受体1mRNA表达。结果:治疗组的脂肪组织脂联素mRNA含量与空白对照组比较,没有显著差异,模型组较治疗组明显降低(P<0.01)。脂联素受体1mRNA表达与空白对照组的比较没有显著差异,模型组较空白对照组明显降低(P<0.01)。结论:推测中药复方"益糖康"具有上调白色脂肪脂联素和脂联素受体1基因表达的作用,这可能是益糖康治疗糖尿病早期大血管病变的机制之一。     

藏药柳茶提取物调节肥胖大鼠脂代谢的作用机制研究

目的:探讨藏药柳茶调节单纯性肥胖大鼠脂质代谢的作用机制。方法:复制单纯性肥胖大鼠模型,以藏药柳茶提取物高、中、低不同剂量灌胃给药8 w后,剥离肾周脂肪制作组织切片,显微镜下观察脂肪细胞数量及形态。实时荧光定量RT-PCR法检测脂肪组织中脂联素(Adiponectin)、脂联素受体2(AdipoR2)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator-activated Recep-torsγ,PPARγ)mRNA水平变化。用Western Blot检测脂肪组织AMPK蛋白表达情况。结果:与模型组比较,使用柳茶提取物8 w后400倍显微镜下全视野范围内脂肪细胞直径减小、数量增加。脂肪组织中Adiponectin、AdipoR2、AMPK、PPARγmRNA水平均有不同程度升高。柳茶中剂量组大鼠脂肪组织AMPK蛋白表达量显著高于模型组。结论:藏药柳茶的减肥作用机制可能是通过脂联素的信号转导途径来完成的。     

胡椒碱对HepG2细胞胰岛素抵抗模型糖代谢AMPK信号通路上游靶点干预机制的研究

探讨胡椒碱对胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型糖代谢紊乱的作用及干预AMPK信号通路上游靶点的分子机制。通过脂肪乳诱导HepG2细胞构建胰岛素抵抗模型。葡萄糖氧化酶(GOD-POD)法检测各组葡萄糖消耗量;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测上清液中脂联素(adiponectin,APN)、瘦素(leptin,LEP)的水平;荧光定量PCR法检测APN,LEP mRNA的表达水平,Western blotting法检测AMPKα,р-AMPKα,瘦素受体(LepR),脂联素受体1(AdipoR1)和脂联素受体2(AdipoR2)蛋白的表达。结果显示,胡椒碱与降糖药罗格列酮、AMPK激动剂AICAR均能明显提高胰岛素抵抗细胞模型的葡萄糖消耗量,升高脂联素水平、增加脂联素mRNA、脂联素受体1蛋白的表达,也增加AMPKαmRNA和р-AMPKα蛋白表达;同时降低瘦素mRNA和瘦素受体蛋白的表达。结果表明,胡椒碱能显著改善胰岛素抵抗细胞模型糖代谢紊乱,其作用机制可能通过调控上游脂联素和瘦素的表达,从而激活AMPK信号通路。     

内脂素在心肌细胞中的表达

目的观察新生SD大鼠心肌细胞内脂素的表达情况,为临床心肌病治疗的新靶点奠定理论基础。方法出生2～3 d的SD乳鼠,提取并培养原代心肌细胞,培养48 h后换为无血清的培养基继续培养24 h,之后应用RT-PCR、Western-Blot技术检测心肌细胞中内脂素表达情况。结果心肌细胞中内脂素mRNA和蛋白均有表达。结论除脂肪组织、活化的淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、胎膜上皮细胞以及骨骼肌等细胞以外,心肌细胞也能够表达内脂素。     

艾灸“神阙”“足三里”穴对痴呆大鼠脂联素及受体表达的影响

目的:通过比较艾灸不同腧穴对阿尔茨海默病(AD)大鼠血清及脂肪组织中脂联素及脂联素受体的影响,探讨艾灸"神阙""足三里"对AD大鼠脂质代谢的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、神阙组、足三里组、神阙-足三里组,每组10只。大鼠腹腔注射D-半乳糖、氢溴酸东莨菪碱复制AD模型,各治疗组艾灸相应腧穴,每日治疗1次,每次每穴艾灸3壮,连续5周。用Morris水迷宫定位航行实验检测大鼠记忆能力,用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中脂联素的水平,用荧光定量PCR和Western blot法分别检测大鼠脂肪组织中脂联素mRNA及脂联素受体的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠首次水迷宫定位航行实验的逃避潜伏期显著延长,说明造模成功。干预结束后,与正常组比较,模型组大鼠血清中脂联素含量显著降低(P0.01),脂肪组织中脂联素mRNA显著降低(P0.01),脂肪组织中脂联素受体表达显著下降(P0.01)。与模型组比较,各艾灸组大鼠逃避潜伏期显著缩短(P0.05),血清中脂联素含量明显升高(P0.01),脂肪组织中脂联素mRNA表达明显增多(P0.05),脂肪组织中脂联素受体表达明显升高(P0.01),。各治疗组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论:艾灸"神阙""足三里"穴或两穴合用都能提高AD大鼠血清及脂肪组织中脂联素及脂联素受体水平,进而改善AD的学习记忆能力。     

伤肌宁胶囊对抗阿霉素所致心肌细胞凋亡及其相关基因BCL-2 BAX蛋白表达影响

目的：观察含伤肌宁胶囊的大鼠血清（SJNXQ）,对阿霉素（ADR）所致心肌细胞凋亡的抑制作用及其对相关基因BCL-2、BAX蛋白表达的影响。方法：血清药理学方法制备＂伤肌宁胶囊＂含药血清（SJNJN）;SD乳鼠心肌细胞做原代培养,复制ADR损伤心肌细胞模型,并运用流式细胞仪检测细胞凋亡及其相关BAX和BCL-2蛋白的表达。结果：心肌细胞给予ADR后,心肌细胞凋亡指数明显升高,BAX蛋白表达升高;BCL-2蛋白表达明显降低。含伤肌宁胶囊的血清,能显著抑制心肌细胞凋亡,降低BAX蛋白表达,提高BCL-2蛋白的表达水平,其效应呈剂量依赖关系。结论：伤肌宁胶囊具有拮抗阿霉素所致心肌细胞凋亡作用,其机制可能与SJNXQ提高BCL-2/BAX比值特性有关。     

薯蓣皂苷含药血清抗氧化损伤致心肌细胞凋亡的研究

 目的 采用血清药理学方法探讨薯蓣皂苷含药血清对氧化损伤心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法 以血清药理学方法采集含药血清。培养原代乳鼠心肌细胞,建立氧化损伤模型,以含药血清进行干预, MTT法检测细胞存活率。Hoechst33258荧光染色法观察药物作用后心肌细胞形态学变化。caspase-3活性测定方法探讨薯蓣皂苷抗凋亡途径。Western blot方法测定薯蓣皂苷对Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。结果 MTT法作用结果显示,将原始收集血清稀释为相当于灌胃0.4、 0.8、1.2 g（生药）·kg^-1浓度时,相对于H₂O₂单纯损伤组和空白血清组心肌细胞有较高的存活率（P     

四逆汤在过氧化氢引起的心肌细胞氧化应激性损伤中的保护效应

目的:观察四逆汤对乳鼠心肌细胞在过氧化氢损伤中的保护效应,探讨Bcl-xL/xS mRNA在四逆汤抗过氧化氢损伤保护心肌细胞中的作用.方法:采用过氧化氢诱导损伤制备乳鼠心肌细胞氧化应激性损伤模型,分别用含不同浓度的四逆汤含药血清DMME培养基培养细胞,应用流式细胞仪检测培养细胞的存活率,筛选合适的四逆汤含药血清培养细胞的浓度;用1 mmol/L过氧化氢处理心肌细胞,分别在处理0.5 h,1 h,2 h,3 h,4 h,8 h后检测细胞内丙二醛(MDA)和过氧化物歧化酶(SOD)的活性,并用流式细胞仪检测不同作用时间的细胞凋亡率和坏死率;在过氧化氢处理心肌细胞1 h和8 h后,收获细胞,检测细胞胞浆Bcl-xL和Bcl-xSmRNA的表达情况.结果:采用含15%四逆汤含药血清的DMEM培养基是心肌细胞生长的合适浓度;过氧化氢对心肌细胞的损伤程度与处理时间成正相关;与单纯过氧化氢处理组相比,四逆汤含药血清组细胞内MDA的含量降低,SOD的活性增加,细胞的凋亡率和坏死率降低,Bcl-xL mRNA表达增加,Bcl-xS mRNA表达减少.结论:四逆汤含药血清有较好的抗氧化应激性损伤保护心肌细胞的作用,这种保护作用可能通过增加Bcl-xL mRNA的表达,降低Bcl-xS mRNA的表达来实现.     

黄连干预心肌缺血损伤的体内外实验研究

目的利用体内、体外实验模型研究单味黄连对心肌(细胞)缺血、缺氧的保护作用及机制。方法结扎左冠状动脉复制大鼠心肌缺血模型,灌胃给予黄连粗提物61.27 mg/(kg.d),每日1次,7 d后测定心电图、血清酶学指标;建立缺氧复氧心肌细胞模型,给予黄连粗提物(25μg/mL),测定细胞培养液中乳酸脱氢酶的漏出和细胞活力。结果黄连能对抗心肌缺血引起的Ⅱ导联心电图ST-T段的抬高(P0.05),降低血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶、丙二醛(P0.05),升高超氧化物歧化酶(P0.05);减少缺氧复氧心肌细胞乳酸脱氢酶的漏出(P0.05),而不影响细胞相对活力。结论黄连具有保护心肌(细胞)作用,其机制是通过改善心肌(细胞)缺血、氧化损伤状态而实现。     

四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞细胞凋亡的影响,探讨其心肌细胞保护作用。方法采用胰蛋白和胶原酶联合消化的方法原代培养的SD乳鼠心肌细胞,利用高纯氮气建立心肌细胞缺氧／复氧模型。实验分为正常组、模型组和药物干预组（予四妙勇安汤合生脉饮）。采用流式细胞术AnnexinV-FITC／PI双染法检测心肌细胞凋亡率。结果与正常组比较,模型组及药物干预组心肌细胞凋亡率均升高（P〈0．05）。与模型组比较,药物干预组心肌细胞凋亡率下降（P〈0．05）。结论四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧后心肌细胞凋亡有保护作用。     

姜黄素对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞细胞外信号调节激酶表达的影响

目的从细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）激活角度研究姜黄素（curcumin）对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心肌肥大反应的作用。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,分为AngⅡ组（10-6mol/L AngⅡ）、姜黄素组（10-6mol/L AngⅡ＋2.5×10-8g/L姜黄素）及对照组（正常培养的心肌细胞）。3组分别培养24h,收集心肌细胞,[3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白合成速率,免疫印迹法测定ERK1/2表达。应用SPSS11.0软件进行统计学分析。结果①3组间心肌细胞蛋白合成速率比较有统计学意义（F=20.68,P〈0.01）,AngⅡ（10-6mol/L）处理24h,心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入率明显增加,姜黄素能明显抑制AngⅡ介导心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入率的增加;②AngⅡ（10-6mol/L）处理心肌细胞10min,磷酸化ERK1/2蛋白（p-ERK1/2）表达明显增加,预先以姜黄素2.5×10-8g/L处理心肌细胞30min,发现姜黄素可明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达。结论姜黄素可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞ERK1/2的表达,这可能是姜黄素治疗心肌肥厚的重要机制之一。     

青藤碱抑制H2O2诱导乳鼠心肌细胞凋亡

目的:探讨青藤碱对H2O2诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制.方法:在原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞上建立H2O2损伤模型,观察不同剂量青藤碱(10,30,100 μmol·L-1)对心肌细胞凋亡率、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性及NF-KB蛋白表达的影响.结果:H2O2组与空白对照组相比,心肌细胞凋亡率显著增加(P<0.01),并随着时间的延长其凋亡率不断增高;青藤碱明显抑制H2O2所诱导各个时问段的心肌细胞凋亡率(P<0. 01),降低MDA含量,增加SOD,LDH活性,抑制NF-KB蛋白表达.结论:青藤碱对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞凋亡有抑制作用,其作用机制可能与其抗脂质氧化、抑制心肌细胞表达NF-KB有关.