人卵巢癌细胞与自体或同种异体树突状细胞融合诱导抗肿瘤免疫

目的：探讨人卵巢癌(OVCA)细胞与自体或同种异体树突状细胞(DC)融合后体外诱导特异性CTL的作用。方法：用PEG法将OVCA细胞与自体或异体DC融合，在含GM-CSF的RPNH-1640完全培养基中继续培养7～14d，然后将融合细胞与CA-125特异性T细胞共同培养，用细胞内细胞素染色法检测其诱导CTL活性。结果：人类OVCA细胞表达CA-125、HER2A／neu、MUC1肿瘤相关抗原及MHC-Ⅰ类分子和粘附分子(ICAM)，但不表达MHC-Ⅱ类分子、B7-1和B7-2；DC则表达MHC-Ⅰ类和Ⅱ类分子、共刺激分子和ICAM，但不表达DF3／MUCl或CA-125等OVCA相关抗原，而OVCA细胞与自体或异体DC融合细胞则表达CA-125及MUC1肿瘤相关抗原、MHC-Ⅰ类和Ⅱ类分子、B7-1、B7-2及ICAM。结论：人OVCA与自体或异体DC融合细胞能诱导由MHC-Ⅰ类分子限制的CTL活性和自体肿瘤细胞的溶解作用。     

CⅡTA基因在五种人类恶性血液病细胞株细胞中的表达及意义

目的:探讨5种血液病细胞株细胞的HLA-Ⅱ类抗原表达,以及对IFN-γ诱导HLA分子表达的反应性与MHCⅡ类分子反式激活因子 (CⅡTA) 表达的关系.方法:采用流式细胞术和免疫组化法检测肿瘤细胞HLA分子及CⅡTA 蛋白的表达,RT-PCR检测肿瘤细胞CⅡTA基因表达.混合淋巴细胞反应检测肿瘤细胞刺激外周血T细胞反应的能力.结果:肿瘤细胞HLAⅡ类分子表达与CⅡTA表达一致; 结构型或诱导型表达CⅡTA的肿瘤细胞,经IFN-γ作用后其HLAⅠ、Ⅱ类抗原表达增高;IFN -γ诱导后仍不表达CⅡTA的肿瘤细胞,其对IFN-γ促HLAⅡ表达的作用不反应.Jurkat诱导后刺激T细胞表达高水平的IL-2 mRNA.结论:某些恶性血液病细胞株细胞对IFN-γ不能诱导HLA分子表达与CⅡTA诱导型表达缺陷有关,表明CⅡTA参与调控肿瘤细胞 HLAⅠ、Ⅱ类抗原表达,可能在肿瘤免疫逃逸中起重要作用.     

Notch信号分子在人NK细胞淋巴瘤细胞中的表达及其意义

目的：探讨Notch信号分子及下游靶基因在人NK/T细胞淋巴瘤、NK细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤和B细胞淋巴瘤细胞中的表达,阐明Notch信号分子在NK细胞肿瘤中的作用及意义。方法：选择NK/T细胞淋巴瘤细胞SNK-6、NK细胞淋巴瘤细胞YTS、人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat和人Burkitt’s淋巴瘤细胞 Raji,通过实时荧光定量PCR技术检测上述细胞中Notch信号分子的表达水平。结果：Notch 1,3,4信号分子在YTS和SNK-6细胞中表达量均不同程度高于Raji和Jurkat淋巴瘤细胞（P<0.01）,但是在SNK-6中的表达量均不同程度低于在YTS细胞中的表达（P<0.01）。Notch 2信号分子在YTS、SNK-6细胞中的表达量高于Jurkat细胞（P<0.01）,但是与Raji细胞比较差异无统计学意义（P>0.05）。Notch 下游靶基因Hes1的表达量,YTS细胞高于Raji和Jurkat细胞（P<0.05,P<0.01）,而SNK-6细胞则低于Raji和Jurkat细胞（P<0.01）。结论：在NK细胞肿瘤细胞中Notch 信号分子表达异常,且明显区别于B、T细胞淋巴瘤细胞。     

乳腺癌多药耐药细胞人类白细胞抗原和B7分子表达的体外调节

OBJECTIVE: To study the modulation of the expressions of human leucocyte antigen (HLA) and co-stimulatory molecules B7 (CD80, CD86) in multidrug-resistant (MDR) breast cancer cells. METHODS: The MDR phenotype MCF-7/ADR cells were treated with recombinant human interferon (IFN)-alpha2b (rhIFN-alpha2b) at different doses for varied length of time, and the expressions of HLA and B7 were determined by flow cytometry (FCM) and compared with those of non-treated cells. Statistical analysis was performed using SPSS10.0 software. RESULTS: At the doses smaller than 1x10(3) IU/ml, rhIFN-alpha2b did not exhibit significant inhibition on MCF-7/ADR cell growth, but HLA and B7 expressions were enhanced in a dose- and time-dependent fashion and significant up-regulation occurred 24 h after 400 IU/ml rhIFN-alpha2b treatment. Treatment with rhIFN-alpha2b at the doses of 100, 400, 800 IU/ml respectively for 24 h produced significant increases in the positive cell ratios for HLA class I expression (P<0.05), HLA-DR expression (P<0.005) and B7-2 expression (P<0.05), while changes in B7-1 expression was not obvious (P>0.05). The mean relative linear fluorescence intensity (RLFI) of HLA class I was also significantly increased (P<0.001) but alterations in the mean RLFI of HLA-DR and B7 were not significant. CONCLUSIONS: rhIFN-alpha2b within the dose range from 400 to 800 IU/ml can effectively enhance the expression of HLA and B7 molecules, suggesting that it may have the potential to reverse immune tolerance of breast cancer cells. Cytokine treatment may be effective in reversing immune tolerance caused by down-expression of HLA and B7.     

人类白细胞抗原-DRβ1特异性低T细胞反应性肽对T细胞激活的抑制作用

目的　研究人类白细胞抗原 (HLA) DRβ1特异性Ⅱ型胶原 (CII)多肽的T细胞受体(TCR)结合表位改变对T细胞激活的影响。探讨通过抑制T细胞对抗原肽的识别治疗类风湿关节炎的新途径。方法　利用AutoDock3 0系统设计非T细胞结合肽 ;以激光共焦显微镜及流式细胞仪观察荧光标记的CⅡ 2 6 3 2 72修饰肽的细胞内转运及其在细胞膜上的表达 ;应用HLA DR1转基因抗原呈递细胞和特异性T细胞的激活体系 ,研究替换TCR识别氨基酸的CII修饰肽在T细胞激活中的作用。结果　计算机模拟显示CII第 2 6 3位苯丙氨酸 (F)、2 6 6位谷氨酸 (E)是与HLA DR1结合的关键位点 ,而 2 6 7位谷氨酰胺 (Q)、2 6 9位脯氨酸 (P)和 2 70位赖氨酸 (K)是T细胞识别的主要功能氨基酸。用甘氨酸 (G)、和 /或丙氨酸 (A)替换上述位点可去除功能性侧链。CⅡ修饰肽可被HLA DR1转基因抗原呈递细胞摄取并与膜表面的HLA DR1分子结合。CⅡ 2 6 3 2 72原型肽可激活T细胞 ,而用A或G单一替换 2 6 7、2 6 8、2 6 9、2 70位氨基酸或连续替换 2 6 8 2 70位氨基酸的修饰肽对T细胞的激活能力明显降低 (P <0 0 1)。低反应性修饰肽 2 70A、sub2 6 8 2 70对CⅡ诱导的T细胞激活有显著抑制作用。结论　通过替换CII中TCR特异性氨基酸可减弱或消除其对T细胞的结合能力及激     

CD 80(B7-1) expression on human tumor cell lines and its costimulatory signals for T cell proliferation and cytokine production.

ＣＤ８０（Ｂ７１）ｅｘｐｒｅｓｉｏｎｏｎｈｕｍａｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｉｎｅｓａｎｄｉｔｓｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｓｉｇｎａｌｓｆｏｒＴｃｅｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｃｙｔｏｋｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＹａｎＪｕｎ严俊，ＭａＢａｏｌｉ马宝骊...     

青蒿琥酯对人淋巴细胞白血病/淋巴瘤细胞抑制作用及机理的研究

目的 观察青蒿琥酯(ART)对白血病/淋巴瘤细胞株Raji、Jurkat和急性淋巴细胞白血病(ALL)原代细胞的增殖抑制作用,以及ART与长春新碱(VCR)、阿糖胞苷(Ara-C)的细胞毒协同效应,并探讨其作用机制.方法 MTT法观察ART对Raji、Jurkat、ALL原代细胞的增殖抑制效应及ART与VCR、Ara-C的协同效应.Wright-Giemsa染色光镜下及透射电镜观察细胞凋亡的形态变化,Rhodamine-123检测线粒体跨膜电位(MMP)变化,比色法检测细胞内caspase-3浓度变化.结果 ART在体外能显著抑制Raji、Jurket细胞的增殖,对ALL原代细胞亦具有增殖抑制作用.低浓度ART与VCR、Ara-C联合,能增加VCR、Ara-C的细胞毒作用.ART作用后B/T淋巴细胞白血病/淋巴瘤细胞光镜及电镜均表现出凋亡形态学改变,线粒体跨膜电位下降,细胞内caspase-3的表达增加,呈浓度依赖性.与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 ART对淋巴细胞白血病/淋巴瘤细胞具有抑制作用,且与VCR、Ara-C联用具有协同效应,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关.ART有望开发成治疗ALL/淋巴瘤的新药.     

不同血液肿瘤细胞株survivin基因和蛋白表达及意义的研究

目的：研究survivin在不同血液肿瘤细胞株(Jurkat, Raji, EL 4, K562, K562/AO2)的表达，并探讨其与相关因素的关系。方法：应用RT PCR技术检测survivin mRNA在各细胞株的表达，用免疫组化法检测survivin 蛋白的表达，流式细胞仪检测细胞周期。结果：survivin mRNA在4种人源性细胞株(Jurkat, Raji, K562, K562/AO2)中均有表达，耐药株K562/AO2高于其他细胞株；免疫组化结果显示survivin蛋白在胞核与胞浆均有表达，且表达水平与mRNA水平一致；细胞周期结果显示，survivin表达较高的细胞株G2/M期细胞比例和增殖指数较高。结论：survivin基因在血液肿瘤细胞株中普遍表达，survivin 高表达可能与肿瘤细胞增殖及耐药有关。     

分泌抗HLA Class Ⅰ单态性单克隆抗体杂交瘤细胞的建株和鉴定

本文报道了应用杂交瘤技术制备抗 HLA-I 类抗原单态性单克隆抗体,命名为CJH-F6,经流式细胞间接免疫荧光分析,放射免疫沉淀 SDS-PAGE 测定,微量淋巴细胞毒实验和血小板吸收试验均证明为抗 HLA-I 类抗原单态性单克隆抗体,Ig 类别为 IgM,文内讨论了此单抗的应用。     

新型重组免疫抑制蛋白B7-2-L-PE40KDEL的分子构建与生物活性及结构特性

目的：构建重组B7－2－L－PE40KDEL融合蛋白,特异性杀伤CD28高表达的T细胞,选择性阻断T淋巴细胞活化过程中的B7：CD28／CTLA－4共刺激信号系统,由此诱导免疫耐受,特异性防治移植物抗宿主疾病（GVHD）和宿主抗移植物疾病（HCGD）。方法：采用基因融合序列重叠延伸（SOE）策略,构建新型重组pRSETA-B7-2-L-PE40KDEL外毒素融合蛋白的原核表达载体,实现融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,利用亲和层析等方法进行蛋白质纯化。对该融合蛋白的结构特征诸如等电点、柔性等进行模拟分析。采用MTT法对其特异性杀伤高表达CD28受体的T细胞的活性进行测定。结果：构建并高效表达了B7－2－L－PE40KDEL融合蛋白,所获融合蛋白的纯度大于95％。该融合蛋白的结构特征模拟分析的结果显示,其柔性及抗原性、亲水性表位均未显著改变。活性测定显示,该重组融合蛋白能有效特异性地杀伤高表达CD28的人T淋巴瘤细胞系,而对未来表达CD28的人白血病细胞系则无任何杀伤。结论：具有靶向性免疫抑制活性的新型重组B7－2－L-PE40KDEL毒素融合蛋白的构建、表达对特异性防治GVHD和HVGD可能产生积极的影响。     

沙利度胺调节多发性骨髓瘤共刺激分子表达的研究

目的探讨B7共刺激分子在人类多发性骨髓瘤细胞上的表达及沙利度胺对其表达的调节作用。方法通过细胞培养研究沙利度胺对人骨髓瘤细胞系B7.1分子表达的调节作用,用流式细胞仪检测B7分子的表达。结果人类多发性骨髓瘤细胞系及患者骨髓瘤细胞缺乏B7.1分子的表达,阳性细胞百分比分别为0.8及2.19&#177;2.13,B7.2分子的表达分别为26.4及30.28&#177;28.11。与阴性对照组相比,除0.1μg/ml组外,随着沙利度胺浓度的增加,CD80分子表达的阳性细胞百分比明显提高（P〈0.01）,5μg/ml浓度组为（17.7&#177;1.53）%,达到最高。结论多发性骨髓瘤细胞不表达或低表达B7.1分子,上调B7.1分子的表达可能是沙利度胺治疗多发性骨髓瘤有效的机制之一。     

4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系的表达

目的:研究共刺激分子4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系的表达及其生物学意义。方法:流式细胞仪检测4-1BBL分子在不同的人恶性血液病细胞系的表达;用可介导4-1BBL逆向信号的鼠抗人4-1BBL单抗(mAb1F1)作用于8个不同的人恶性血液病细胞系,细胞计数法和3H-TdR掺入法评价细胞系的体外生长和增殖。结果:FACS结果显示4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系上有不同程度的表达,其中髓性白血病细胞系U937、HL60及B淋巴瘤细胞系Raji、Daudi上呈现较高水平的表达。细胞计数和3H-TdR掺入实验结果表明mAb1F1对髓性白血病细胞系U937和HL60,具有较强的促增殖效应。结论:共刺激分子4-1BBL分子在髓性白血病细胞系和B淋巴瘤细胞系上表达率较高;4-1BBL分子可通过介导逆向信号促进髓性白血病细胞系U937和HL60的生长和增殖。     

腺病毒介导多基因在胆管癌细胞中的表达

研究腺病毒介导的多基因（ＧＭ－ＣＳＦ,Ｂ７－１,ｐ５３、ＩＬ－２）在胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９中的表达及对其生长的影响。方法：构建同时含ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、ｐ５３、ＩＬ－２ ４种目的基因的重组腺病毒载体Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ,应用流式细胞仪、ＥＬＩＳＡ、免疫组化等方法。     

Pin1在恶性血液病细胞和细胞周期中的表达

目的:研究Pin1(肽酰脯胺酰顺反式易构酶)在髓系、淋系10种恶性血液病细胞株中的表达情况以及其与不同细胞周期的关系.方法:利用Realtime-PCR检测血液病细胞株的Pin1表达,同时用Thymidine和Nocodazole将细胞阻断在不同的细胞周期,用Realtime-PCR及Western Blot的方法,检测Pin1的mRNA和蛋白的表达水平.结果:Pin1在恶性血液病细胞株中mRNA的表达明显高于正常人骨髓单个核细胞的表达(F=10.508,P＜0.01),其在髓系血液病细胞株和淋系恶性血液病细胞株中的表达均较正常人骨髓单个核细胞明显增高(分别为F=13.584,P＜0.01;F=5.339,P＜0.05).Pin1在G1期mRNA的表达水平显著高于S期(F=40.572,P＜0.05),S期与M期比较没有明显差异(F=8.309,P＞0.05).但在蛋白水平上来看Pin1的变化不明显.结论:Pin1的mRNA在恶性血液病细胞中呈高表达,其表达水平与细胞周期有关,其中以G1期为最高,S期最低.     

KBv200细胞株耐药逆转前后HLA、B7抗原的表达

目的 探讨肿瘤多药抗性细胞的免疫逃避机制。方法 利用特异性切割mdr1的核酶为工具,以表达Mdr1的耐药细胞株KBv200为靶细胞,采用脂质体转染技术,将含核酶的质粒pHβApr-1neo/5mR3及空载体pHβApr-1neo导入KBv200及其亲本KB细胞内,运用Northern-blotting、免疫组化方法观察核酶对mdr1 mRNA及P-gp的影响,运用流式细胞仪技术检测各种不同细胞亚株HLA-Ⅰ、HLA-Ⅱ、B7-1、B7-2的表达。 结果 含核酶的质粒pHβApr-1neo/5mR3及空载体pHβApr-1neo可以在KB、KBv200细胞中稳定表达,核酶可以特异性地切割mdr1,导致KBv200/5mR3的mdr1 mRNA含量下降,P 糖蛋白（P-gp）表达减低,各种不同细胞亚株均表达较强的HLA-Ⅰ类抗原,而HLA-Ⅱ、B7-1、B7-2的表达较低。各亚株HLA-Ⅰ表达无明显差异,但HLA-Ⅱ、B7-1、B7-2的表达变化较大,KB的HLA-Ⅱ、B7-1、B7-2的表达较KBv200强,经化疗药物作用后KB的HLA-Ⅱ、B7-2进一步表达增强,核酶逆转后,KBv200/5mR3 HLA-Ⅱ、B7-1、B7-2的表达趋于接近KB水平。 结论 mdr1-核酶在细胞内具有一定的逆转肿瘤多药抗性的生物学效应;多药耐药细胞和敏感株细胞有着不同的免疫逃避特点,与敏感株相比,KBv200较易逃避机体的免疫反应。     

共刺激分子CD28单克隆抗体制备的新策略

目的发展一种制备抗人ＣＤ２８单克隆抗体的新方法。方法构建编码人ＣＤ２８基因的逆转录病毒表达系统,感染 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨髓瘤细胞ＮＳ－ｌ,使其细胞膜表达ＣＤ２８抗原并用于免疫小鼠,制备单克隆抗体。结果获得分泌抗人 ＣＤ２８单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为Ｅ６６－３Ｓ,ＩｇＧ亚类鉴定为ＩｇＧ１。该株单抗能够特异性识别ＣＤ２８阳性的Ｔ细 胞,并完全阻断标准ＣＤ２８抗体与细胞表面ＣＤ２８抗原结合。在亚剂量分裂原的共刺激下,具有促进Ｔ淋巴细胞活化和 增殖作用。结论Ｅ６６－３Ｓ具有高度特异性和共刺激活性,为临床免疫治疗奠定了基础,同时,也为进一步制备其它膜抗 原的单克隆抗体提供了一种新途径．     

A novel approach to human leukocyte antigen-mismatched transplantation in patients with malignant hematological disease

Background Many patients requiring allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) do not have an human Ioukocyte antigen (HLA)-matched donor. Alternative donors, such as HLA mismatched family donors, are associated with higher rates of graft rejection and acute graft versus host disease (aGVHD) if T cells are not first depleted. We developed a new technique for HLA mismatched allogeneic HSCT using G-CSF primed bone marrow plus G-CSF-mobilized peripheral blood stem cells without ex vivo T cell depletion.Methods In this study, 58 patients, including 33 with high-risk or advanced leukemia, were transplanted with cells from an HLA-haploidentical family donor with 1-3 mismatched loci. After conditioning, patients received G-CSF-primed bone marrow grafts that had not been depleted ex vivo of T cells, in combination with G-CSF-mobilized peripheral blood stem cells, as well as GVHD prophylaxis.Result All patients achieved sustained, full donor-type engraftment. The incidence of grade Ⅱ-Ⅳ aGVHD was 37. 9%, including 3 patients with grade Ⅲ-Ⅳ aGVHD. The development of aGVHD was not associated with the extent of HLA disparity. Chronic GVHD was observed in 30 of 51 evaluable patients (65.4%). Fourteen patients died among whom 7 died of recurrent disease and 7 of transplant-related complications. Forty-four of the 58 patients survived, and 42 remained disease free at the time of a median follow-up of 12 months (3. 5 to 39. 5 months). The 2-year probabilities of disease-free survival were 74. 8% and 69. 3% for standard- and high-risk patients, respectively.Conclusion We developed a new method to use bone marrow from haploidentical family donors without ex vivo T cell depletion, in combination with G-PBSCs, as a source of stem cells even in cases of HLA mismatched transplantation.     

TMTP1, a novel tumor-homing peptide,specifically targets hematological malignancies and their metastases

TMTP1,a 5-amino acid peptide NVVRQ,obtained by using the flagella peptide library screening in our previous studies,can be used for the labeling of malignant in situ and metastatic lesions,and even mic...     

HEffects of adenoviral vector-mediated transduction of human p53, B7-1 and GM-CSF genes on liver cancer cells

Hepatocarcinomaisoneofthemostcommonmalignancieswithpoorprognosis.Itafflictsabout1.25milIionpeopleworldwide.ThereareatleastlOOOoomorbidityand1lOOOOmortalityeachyearinChinaLl].Althoughmultipletreatmentmodali-tieshavebeenappliedtolivercancer[2],thecancerremainsoneofthetumorsthataredifficulttobecured.Itbecomesevenmoredifficulttobecuredwhenmultiplefocioftumoranddistantmetastasisoccur[a]-Sincethemajorityofpatientswithlivercancerarenotcandidatesforcurativesurgery,chemotherapyandradiotherapy['J,t…     

人食管癌Eca-109细胞膜肿瘤抗原的筛选

目的:从人食管癌Eca109细胞入手,筛选出食管癌高效细胞膜肿瘤抗原的大致范围。方法:采用敏感的序列特异性引物聚合酶链反应(PCRSSP)来确定Eca109细胞人主要组织相容性复合体(HLA)基因分型,用HLA血清学分型技术筛选健康志愿者;改良的Neville法结合超滤法纯化膜蛋白并分组:<3000、3000～10000、<10000、10000～30000、30000～100000、>100000、总膜蛋白共7个组,各组抗原负载树突状细胞(DC),以DC激活的T淋巴细胞为效应细胞,Eca109细胞为靶细胞,设效靶比为81、161、321,用MTT法检测效应细胞杀伤率。结果:Eca109细胞HLA的基因分型为A03,A24;B35,B37;DRB101,DRB112;DR52;DRB3;筛选到1例表型为A03杂合子的健康志愿者。根据MTT检测,在效靶比为81、161和321时,膜蛋白相对分子质量小于10000组的肿瘤细胞杀伤率与未使用去垢剂的总膜蛋白组相比差异无统计学意义(P>0.05),而相对分子质量小于3000组的杀伤率最高,与各组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Eca109细胞膜蛋白中存在能引起特异性的抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞免疫反应的肿瘤抗原,相对分子质量小于3000的膜蛋白成分中可能存在人食管癌的高效肿瘤抗原。