THE CORRELATIVITY ANALYSIS OF SIX METHODS OF DETECTING APOPTOSIS

The aim of this study was to compare six methods of detecting apoptosis induced by extraeellular adenmfine triphosphate (ATP) in human leukemic lymphocytes with purlnergic P2Z receptors. These methods used were electron microseopy(EM), detection of internueleoscmal DNA fragmentation by agaxose gel eleetrophoresis, autoradiographic analysis of DNA fragmentation, in situ labeling of DNA mrand breaks with fluoreseein-dUTP and exogenous terminal deoxynucleotidyl transferase (TUNEL), quarttitatinn of 3′-ends of DNA breaks by labeling with α^32PdCTP(TdT assay), and quantitation of apopotic cells with fluorescein-annexin V using flow cytometry(FCA). We found EM and detection of DNA ladder pattern by agarose gel electrophoresis to be specific,but lacking in sensitivity. The combination of autoradiography and gel electrophoresis gave an increase in sensitivity of at least 50 fold although, of all the methods, the TdT ashy was shown to be most sensitive. The four methods for quantifying apoptosis-EM, FCA, TUNEL and TdT assay proved to be reliable and gave statistlcally similar results on apoptotle lymphccytas. These observations indicate it is essential to combine specific, sensitive and quantitative techniques in detecting apoptosis.     

沙眼衣原体感染细胞抗凋亡及Bim的表达

目的:研究沙眼衣原体(D血清型)感染的Hela229细胞Bim蛋白质的表达及抵抗凋亡的情况。方法:Western-blot检测沙眼衣原体感染和未感染的Hela229细胞Bim蛋白质的表达水平。凋亡诱导剂etoposide作用Hela229细胞后,琼脂糖凝胶电泳检测DNA Ladder带;流式细胞仪检测凋亡率。结果:Hela229细胞在未感染沙眼衣原体时可检测到Bim的表达;在感染24小时、48小时后均未检测到Bim的表达。经etoposide作用后,未感染的Hela229细胞检测到DNALadder带;流式细胞仪检测的凋亡率为90.64%。感染24小时的Hela229细胞,未检测到DNA Ladder带;凋亡率为11.50%,与未感染的Hela229细胞诱导后的凋亡率比较有统计学意义(P<0.05)。结论:沙眼衣原体感染的Hela229细胞Bim蛋白质的表达下降;并能抵抗etoposide诱导的细胞凋亡。     

瑞香狼毒诱导HL—60细胞凋亡和调节SGC—7901细胞bcl—2蛋白表达

目的：探索瑞香狼素（SC）抗肿瘤机制。方法：以HL－60和SGC－7901为靶细胞,用MTT比色法测定细胞增殖抑制,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学改变,DNA电泳和流式细胞仪检测DNA断裂,免疫组化检测bcl-2蛋白表达。结果：含SC药物血清处理细胞48h后,HL－60细胞增殖呈剂量依赖性抑制,并表现出典型的凋亡细胞形态学改变及DNA断裂;即染色体聚集,核固缩,断裂及阶梯状DNA电泳条带,G1期前细胞从11．7％增到57．4％;而SGC－7901细胞bcl-2蛋白表达率从78．3％下降到32．9％。结论：SC可诱导肿瘤细胞凋亡,降低bcl-2蛋白表达。     

人参总皂苷诱导HL-60细胞凋亡作用及对Caspase-3、Fas表达的影响

目的 探讨人参总皂苷诱导HL-60细胞凋亡的作用机制及其对凋亡相关基因Caspase-3、Fas表达的影响.方法 采用人参总皂苷0、100、200及400 μ g/ml作用于HL-60细胞,并在不同时间内用MTT法检测人参总皂苷对HL-60细胞的抑制率;48h后予普通光镜、荧光显微镜检测HL-60细胞形态的变化;予流式细胞仪、DNA凝胶电泳检测HL-60细胞凋亡;予RT-PCR法检测Caspase-3、Fas基因表达的变化.结果 人参总皂苷抑制HL-60细胞生长呈剂量及时间依赖性;在100～400 μ g/ml时,HL-60细胞凋亡逐渐增加,可见典型的凋亡细胞形态和明显的DNA梯度;在该浓度范围内,Caspase-3、Fas表达逐渐增加.结论 一定浓度的人参总皂苷可诱导HL-60细胞发生凋亡,且细胞凋亡率与人参总皂苷浓度呈一定的量效依赖关系,Caspase-3、Fas基因的表达变化在人参总皂苷诱导HL-60细胞凋亡中可能起重要作用.     

紫杉醇诱导食管癌细胞凋亡

目的：研究紫杉醇对食管细胞生长抑制及诱导凋亡的作用。方法：应用ＭＴＴ分析法，形态学观察，琼脂糖凝胶电泳，流式细胞术等方法对紫杉醇诱导的食管癌细胞系Ｅｃａ１０９进行了检测和观察。     

高温对体外培养大鼠海马锥体细胞凋亡的影响

目的：探讨高温下新生大鼠海马锥体神经元凋亡形态学及生物化学变化。方法：建立体外海马神经细胞培养模型，以37，40，42℃3种温度作为环境刺激因素，应用流式细胞仪，荧光染色，琼脂糖凝胶电泳和原位细胞凋亡检测试剂盒对其观察。结果：随作用温度升高细胞凋亡率及凋亡小体数增加，电泳呈现DNA Ladder表面，荧光显微镜观察能够看到凋亡体及其出芽现象，结论：高温能够诱导体外培养的大鼠海马锥体细胞发生凋亡，且不同温度诱导其凋亡的程度时程表现亦不同。     

百草枯诱导大鼠肺微血管内皮细胞凋亡实验研究

【论文特点介绍】百草枯的肺毒性在于通过增加氧化应激导致肺损伤,而氧化应激可能是导致细胞凋亡的最后共同通路。众所周知,百草枯可以在体内外产生氧自由基损伤肺微血管内皮。然而,在百草枯所致的肺损伤中,     

己烯雌酚诱导人T细胞肿瘤Jurkat细胞系凋亡中转录因子Oct-1的表达

建立丙型肝炎病毒包膜区基因的真核表达载体,并通过对其序列分析阐明其作为基因接种的可能性。方法：经常规 ＲＴ－ＰＣＲ法从 ＨＣＶ ＲＮＡ阳性病人的血清中扩增出 ＨＣＶ Ｅ１区的基因片段,经 ＥｃｏＲ Ⅰ和Ｘｂａ Ⅰ双酶切后将其克隆到真核表达载体 ＰｃＤＮＡ３中,阳性克隆经 Ｓｍａ Ⅰ和 Ｘｂａ Ⅰ双酶切鉴定;用双脱氧终止法测序,同时利用计算机软件对其推定的氨基酸序列进行分析。结果：ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物经酶切过夜后与经过同样双酶切的真核表达载体 ＰｃＤＮＡ３连接,阳性克隆经 Ｓｍａ Ⅰ和 Ｘｂａ Ⅰ酶切后产生了预期大小的 １４４ ｂｐ的片段。测序后其核苷酸序列与已经报道的ＨＣＶⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的同源性分别为７２．８％、９３．２５％、６１．９６％和５６．４４％;其推定的氨基酸序列的同源性分别为 ７７． ３％、９５． ７％、５４ ６％和 ５１． ３５％;与已经报道的中国株的同源性为 ９５． ０６％和９３． ２５％;属 ＨＣＶ Ⅱ型;经计算机辅助分析表明该片段内含有４个可能的糖基化位点, ｌ个跨膜区,其氨基端为信号肽序列,在跨膜区的两端分别含有２个和１个抗原决定簇,而每一个抗原决定簇内均含有１个糖基化位点,该片段内还含有 ２个 Ｔ细胞识别位点。 结论：     

C-myc小干扰RNA对HL-60细胞凋亡的影响

目的:研究c-myc小干扰RNA对白血病细胞凋亡的影响,探寻白血病基因治疗的新方法。方法:应用针对c-myc的小干扰RNA转染HL-60细胞48 h后,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,琼脂糖凝胶电泳法检测DNA梯形带和流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡。结果:c-myc小干扰RNA作用后,HL-60细胞生长受抑,可见细胞核固缩,胞桨内出现凋亡小体。阴性对照组和空白对照组没有明显变化。DNA电泳干扰组出现典型的梯状条形带,对照组未出现明显凋亡梯形带。流式细胞仪分析干扰组细胞凋亡率可达26.21±0.75%,明显高于阴性对照组的4.58±0.48%和空白对照组的3.76±0.30%。结论:c-myc小干扰RNA对HL-60细胞有明显的抑制作用,可抑制细胞增殖,导致细胞凋亡,有望成为白血病靶向基因治疗的新工具。     

4HPR对人宫颈癌细胞凋亡的影响

目的 研究Ｎ-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺（4HPR）对人宫颈癌细胞凋亡的影响。方法 应用光学显微镜、激光共聚焦显微镜、电子显微镜、荧光显微镜从细胞形态学方面观察4HPR对人宫颈癌细胞凋亡的影响;应用流式细胞仪、细胞DNA琼脂糖凝胶电泳法分析4HPR诱导人宫颈癌细胞凋亡的细胞特征、生物化学特征及凋亡细胞百分率。结果 电子显微镜和激光共聚焦显微镜镜下可见细胞固缩,核膜扭曲,核染色体聚集成块并靠近核膜等凋亡细胞特征;光学显微镜和荧光显微镜下可见凋亡小体;细胞DNA被降解,在琼脂糖凝胶电泳中呈现典型的“阶梯状”图谱;流式细胞仪检测结果显示二倍体核型的特征,在DNA直方图上,G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型;凋亡百分率结果显示4HPR可诱导宫颈癌细胞凋亡,且呈时间和浓度依赖性（P＜0.01）。结论 4HPR可诱导人宫颈癌细胞凋亡, 且呈时间和浓度依赖性。     

抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对Jurkat细胞作用研究

目的:观察抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单克隆抗体—mDRA-6对Jurkat细胞的凋亡作用。方法:制备抗人DR5单抗-mDRA-6;检测Jurkat细胞表面DR5表达率;荧光显微镜下观察mDRA-6作用下Jurkat细胞形态变化;MTT法计算mDRA-6对Jurkat细胞存活的影响;FITC-AnnexinⅤ及PI双染流式细胞仪检测mDRA-6对Jurkat细胞凋亡率影响;琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6对Jurkat细胞DNA片段化的作用。结果:Jurkat细胞表面DR5表达率为94.8%;mDRA-6使Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;MTT法显示mDRA-6具有明显的Jurkat细胞杀伤作用,1.563 mg/L的mDRA-6可使Jurkat细胞死亡60.50%;AnnexinⅤ及PI双染显示0.3mg/L的mDRA-6作用10 h,Jurkat细胞凋亡率达43.22%;10 mg/L mDRA-6作用HL-60细胞3h,DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显的“梯形”条带。结论:抗DR5单抗-mDRA-6能够诱导Jurkat细胞凋亡。     

地塞米松诱导幼龄大鼠胸腺细胞凋亡模型

目的：建立一个比较实用且成型时间短的地塞米松诱导大鼠胸腺细胞凋亡模型。方法：给幼龄大鼠（４周￣５周）腹腔注射地塞米松（０．０２ｇ／ｋｇ）采用形态学（光镜和电镜）、ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度分析等方法研究３、６、９、１５、２４ｈ等不同注射时间胸腺细胞凋亡变化。结果：在１５ｈ内,地塞米松诱导的大鼠胸腺细胞凋亡百分率随时间延长,凋亡发生率从６．２％逐渐增至５８．５％,注射地塞米松１５ｈ,在光镜和     

骨膦脂质体诱导巨噬细胞凋亡的实验研究

目的:利用薄膜法制备的骨膦脂质体诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡.方法:利用骨膦脂质体体外诱导不同时间阶段的小鼠腹腔巨噬细胞凋亡,然后利用DNA琼脂糖凝胶电泳检测.结果: 经1.2%琼脂糖凝胶电泳显示,骨膦脂质体诱导腹腔巨噬细胞,3 h即有梯状带,但不甚明显;12 h梯状带比较明显;24 h出现清晰的特征性梯状带.结论:骨膦脂质体能够诱导腹腔巨噬细胞凋亡.     

Generation of bcl-2 antisense RNA promotes apoptosis of human promyelocytic leukemia cell line HL-60

SupportedbytheNationaINaturalScienceFoundationofChina,No.3957o79ONotonlydoesapoptosisplayakeyroleinhomeostasis,butalsohascloserelationshipwithtumorigenesisandtumorregression,aswellaswiththechemotherapeuticandradiotherapeuticef-fectsontumors[lJ.Justasthecellproliferation,thecellapoptosisisalsomodulatedbymanygenes,includingsomeoncogenesandtumorsup-pressorgenes(p53,bcl-2,c-my,etc.)[2].Forex-ample,thehighexpressionofbcl-2inleukemiacellscanobviouslyinhibittheapoptosisinducedbytheremovalofgrowth…     

Antineoplastic mechanism of Octreotide actionin human hepatoma

Objectives To investigate whether apoptosis can be induced by Octreotide in human hepatoma cells in vitro and elucidate the antineoplastic mechanism of Octreotide in hepat oma. Methods A cultured human hepatoma cell line, BEL-7402, was exposed to Octreotide and ap optosis was evaluated by cytochemical staining (Hochesst 33 258), transmiss ion electron microscopy, agarose gel electrophoresis and flow cytometry (FCM).Results After exposure to 0.2 μg/ml Octreotide, apoptosis with nuclear chromatin cond ensation as well as fragmentation, cell shrinkage and the formation of apoptotic bodies was observed using cytochemical staining and transmission electron micros copy. A DNA ladder in agarose gel electrophoresis was also displayed. FCM show ed that the apoptotic cell number rose with an increase in the concentration of Octreotide (0-2 μg/ml). There was a positive correlation between Octreotide concentration and apoptotic rate in BEL-7402 cells (r=0.809, P&lt;0.05) .Conclusion Apoptosis in human hepatoma cells can be induced by Octreotide, which may be rel ated to the mechanism of antineoplastic action ofOctreotide in hepatoma.     

全反式维甲酸对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的：观察全反式维甲酸(ATRA)对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞（HTCFs）增殖及凋亡的影响。方法：体外培养HTCFs,采用流式细胞仪检测细胞周期改变、细胞凋亡率、抗凋亡基因bcl-2的水平,琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA,研究不同浓度的ATRA对体外培养的HTCFs增殖及凋亡的影响,同时与丝裂霉素C（MMC）作比较。结果：用ATRA和MMC处理后,HTCFs细胞周期的分布发生了明显的变化,表现为G⁰/G¹期细胞数增多,S期细胞数减少;1×10_-9mol/L的ATRA即可诱导细胞的凋亡,随着浓度的增加,凋亡率显著增高;ATRA组bcl-2的水平比空白对照组大约低了一倍;DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示：ATRA组为呈一定间隔的DNA梯形条带,MMC组呈现弥漫的片状图谱,无明显的条带。结论：ATRA可有效抑制体外培养的HTCFs的增殖,但与MMC的作用方式不同。MMC主要造成细胞坏死,而ATRA则主要诱导细胞凋亡,无明显细胞毒作用。     

散结抗瘤方体内和体外抑瘤作用的实验研究

目的 探讨散结抗瘤方体内和体外抗肿瘤的可能机制。方法体内实验：对荷瘤小鼠（SRS-82瘤株）用散结抗瘤方煎剂灌胃,计算抑瘤率,电镜下观察肿瘤细胞形态,并提取肿瘤细胞DNA做琼脂糖凝胶电泳。体外实验：传代培养SRS-82细胞,用散结抗瘤方含药血清干预细胞后,检测活细胞数、细胞凋亡率、Bcl-2蛋白MMP-2mRNA的表达强度。结果与空白对照组比较,散结抗瘤方组瘤重显著减轻,电镜下可见肿瘤细胞出现凋亡特征性改变;细胞活力明显降低．细胞凋亡率明显升高,细胞Bcl-2蛋白的表达强度降低。结论散结抗瘤方在体内有明显的抑瘤作用。在体外对肿瘤细胞也有明显的抑制增殖作用。该方抑瘤作用可能与其诱导肿瘤细胞凋亡密切相关,机制可能与下调抑制凋亡基因Bcl-2的表达有关。散结抗瘤方对肿瘤细胞MMP-2的表达没有影响。     

单核细胞增多型李氏忒菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡

The murine thymocyte apoptosis induced by Listeria monocytogenes(LM) was detected with morphology, FCM, and DNA electrophoresis. The results were that LM elicited typical morphological changes of thymocyte apoptosis; the typical apoptosis peak was displayed with FCM, and typical "ladder pattern" with agarose gel electrophoresis. The apoptotic cells were found at 8 h after the mice had infected LM and reached climax at 48 h. The thymus weight significantly reduced at 16 h, and reached the lowest at 48 h after the mice had infected LM. The percentage of apoptotic cells was raised with the increasing of LM. These results suggest that LM induces thymocyte apoptosis in dose- and time-dependent manner.     

姜黄素类化合物的抗肿瘤活性

目的：研究姜黄素类化合物诱导HeLa细胞凋亡及其构效关系。方法：MTT法、Hoechst染色法、DNA凝胶电泳法。结果：姜黄素类化合物可抑制HeLa细胞的生长，诱导HeLa细胞凋亡；琼脂糖凝胶电泳可见典型的DNA带状泳道。结论：姜黄素类化合物可明显地诱导HeLa细胞凋亡，且与其结构有密切关系。     

氟伐他汀对HL-60细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：研究氟伐他汀（Flu）对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞（HL-60细胞）凋亡的诱导作用及可能的机制,为其临床应用提供理论依据。方法：体外培养的HL-60细胞分为空白对照组、阳性对照组［全反式维甲酸（ATRA）,10  μmol·L^-1］、Flu组（20  μmol·L^-1）和Flu（20  μmol·L^-1）加［甲羟戊酸（Mev）,100  μmol·L^-1］组。HL-60细胞被处理后,应用ACETM分析系统检测caspase-3活性以确定细胞凋亡,Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪分析细胞凋亡,DNA凝胶电泳评价DNA碎片阶梯状条带及透射电镜观察细胞的超微改变。结果：处理24 h后,Flu组HL-60细胞caspase-3活性（A405,30.68±1.57）显著高于对照组（12.05±2.15,P<0.01）,Flu加Mev组HL-60细胞caspase-3活性明显降低（14.62±1.36）,接近对照组细胞的水平（P>0.05）。Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪检测
,与对照组比较,Flu组HL-60细胞凋亡率明显增加（4.24%  vs  10.76%,P<0.01）,Flu加Mev组HL-60细胞凋亡率降低到5.11%,与对照组细胞凋亡率(4.24%)比较差异无显著性（P>0.05）。处理72 h后Flu组HL-60细胞在琼脂糖凝胶电泳图上可观察到DNA碎片梯状条带。透射电镜观察显示：Flu组HL-60细胞胞体缩小,胞质浓缩,核染色质凝聚,呈块状聚集于核膜内侧,胞膜及细胞器完好。结论：Flu能诱导HL-60细胞凋亡,这种作用是Mev途径依赖的,提示抑制Mev途径可能是Flu诱导HL-60细胞凋亡的分子机制之一。