TWEAK通过P38MAPK途径促进大鼠心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原和MMP-1的表达

目的 探讨肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)影响心肌成纤维细胞(CFs)中Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶1(MMP-1)表达的作用机制。方法 取Wistar新生大鼠CFs,加入重组人TWEAK(rhTWEAK)及P38MAPK抑制剂(SB203580)干预,将实验分为① 对照组：不加干预因素;② TWEAK组：加入100ng/mL TWEAK;③ TWEAK+SB203580组：加入100ng/mLTWEAK+SB203580。 采用MTT法检测CFs增殖;Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白及磷酸化P38MAPK(P-P38MAPK)蛋白表达;qRT-PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA表达;ELISA法检测CFs细胞培养液中MMP-1的浓度。结果 加入TWEAK干预后,促进了CFs增殖,Ⅰ型胶原蛋白及P-P38MAPK蛋白表达上调,Ⅰ型胶原mRNA和MMP-1 表达上调。加入SB203580可抑制CFs增殖,部分抑制Ⅰ型胶原mRNA、Ⅰ型胶原蛋白、P-P38MAPK蛋白及MMP-1的表达。结论 TWEAK可通过P38MAPK途径促进CFs 表达Ⅰ型胶原和MMP 1。     

基质金属蛋白酶-9和核因子-κB在颅内动脉瘤中的表达

目的观察基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和核因子-κB(NF-κB)在颅内动脉瘤中的表达情况。方法用免疫组织化学方法对23例经手术和病理证实的颅内动脉瘤标本中的MMP-9、NF-κB的表达进行检测,对照组为20例非血管性疾病的外伤患者正常颅内血管,将所得染色标本在光镜下观察,并用医学图像分析系统进行定量分析。结果颅内动脉瘤的MMP-9、NF-κB阳性表达率分别为69.6%和56.5%,20例正常脑动脉血管组织中无MMP-9、NF-κB阳性表达(P<0.05);MMP-9在动脉瘤壁内、中、外膜中均有表达,其中外、中膜阳性表达较高;NF-κB主要在动脉瘤壁中、外膜表达。结论 MMP-9及NF-κB可能与颅内动脉瘤的发生,增长以及结构维持有关。     

PF4通过NF-κB上调巨噬细胞MMP-9表达

目的观察血小板因子4(PF4)是否通过核因子κB(NF-κB)上调THP-1单核源性巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达。方法佛玻酯诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞。巨噬细胞分别在NF-κB抑制剂(PDTC)缺乏或存在情况下与溶媒或PF4(100μg/L)孵育一定时间,RT-PCR检测MMP-9 mRNA水平;同时,巨噬细胞与PF4(25~200μg/L)单独或结合Toll样受体4(TLR4)阻断剂(抗体HTA125,anti-TLR4)孵育,ELISA法检测NF-κB含量。结果 PF4较对照组上调巨噬细胞MMP-9 mRNA水平。而NF-κB抑制剂抑制PF4诱导的巨噬细胞MMP-9表达上调。PF4呈浓度依赖性增加巨噬细胞的NF-κB含量,最大效应浓度为100μg/L。TLR4阻断剂逆转PF4诱导的巨噬细胞NF-κB含量增加。结论 PF4可能通过NF-κB上调巨噬细胞MMP-9的表达。TLR4可能是PF4-NF-κB通路中NF-κB的上游信号分子。     

基质金属蛋白酶促进瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移及其意义

目的 通过研究瘢痕疙瘩中基质金属蛋白酶(MMPs)与成纤维细胞迁移的关系,探索从抑制成纤维细胞迁移角度治疗瘢痕疙瘩的新方案.方法 切取21例已确诊的瘢痕疙瘩组织为实验组,同例标本附带的正常皮肤组织为对照组,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法,定量检测成纤维细胞上清中Ⅰ型前胶原肽(PINP),基质金属蛋白酶-1、-2(MMP-1,MMP-2)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的含量;向实验组或对照组上清中分别添加MMPs抑制剂(GM 6001),利用Transwell细胞小室实验对成纤维细胞的迁移情况进行评估.结果 与正常皮肤成纤维细胞相比,瘢痕疙瘩组织MMP-1、MMP-2、TIMP-1和PINP表达均较高,有显著差异(P＜0.01);瘢痕疙瘩成纤维细胞迁徙活动与正常皮肤成纤维细胞相比,有显著差异(P＜0.01),而这些成纤维细胞的迁徙活动可被广谱MMPs抑制剂(GM 6001)所抑制,有显著差异(P＜0.01).结论 瘢痕疙瘩成纤维细胞高表达基质金属蛋白酶,产生的的基质金属蛋白酶增加了瘢痕疙瘩成纤维细胞的迁徙活动.     

创伤性脑损伤后肠黏膜核因子-κB和基质金属蛋白酶-9的表达

目的：研究创伤性脑损伤（TBI）后肠组织核因子-κB（NF-κB）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达，探讨其在肠黏膜屏障损害中的作用机制。方法：采用自由落体撞击法造成大鼠右侧顶叶脑挫裂伤。Wistar成年大鼠36只。随机分为对照组、TBI后3、12、24、72h和7d组，每组各6只。采用凝胶电泳迁移（EMSA）法测定NF—κB的活性。免疫组化测定MMP-9的表达。结果：TBI后肠组织NF-κB的活性和MMP-9的表达逐渐增强，TBI后72h达高峰，至伤后7d仍保持较高水平。NF-κB和MMP-9在表达时相和强度上基本一致。MMP-9的表达主要位于绒毛固有膜、隐窝和黏膜下层，阳性细胞包括血管内皮细胞、淋巴细胞和中性粒细胞。结论：TBI可引起肠组织NF-κB活性和MMP-9的表达明显增强。可能在肠黏膜屏障损害中起重要作用。     

成纤维细胞生长因子-2和基质金属蛋白酶-9在鼻息肉表达及其意义

目的研究成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在鼻息肉中表达及其意义,探讨其在鼻息肉形成中的作用。方法观察组（30例）经鼻内镜手术治疗的鼻息肉患者的鼻息肉组织;对照组（6例）行鼻中隔矫正术患者（既往无慢性鼻-鼻窦炎病史）,钩突处黏膜作为正常对照。所选患者术前6周未使用全身或局部糖皮质激素及其他鼻用药物,分别用HE染色法和免疫组化法检测两组标本中FGF-2和MMP-9的蛋白表达情况,并对结果进行统计学分析。结果 FGF-2和MMP-9在鼻息肉中表达较正常钩突处黏膜增高。结论 FGF-2和MMP-9在鼻息肉组织中的高表达可能是促进鼻息肉形成和发展的一个重要因素。     

矽肺模型大鼠肺间质成纤维细胞基质金属蛋白酶2的表达

目的探讨肺间质成纤维细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)在肺纤维化中的表达及意义。方法清洁级Wistar大鼠50只,随机分为对照组和实验组,实验组气管内注射SiO2悬液,对照组代以等剂量生理盐水。注射后1,3,7,14,28d分离和提取肺间质成纤维细胞,应用免疫细胞化学和逆转录多聚酶链式反应(RT—PCR)方法,观察其MMP-2蛋白及其mRNA的动态变化。结果①SiO2作用后3d成纤维细胞MMP-2表达增高,达对照组的2.423倍(t=5.205,P<0.01),此后一直维持高水平;②MMP-2mRNA的转录从SiO2作用后1d就开始升高。结论在肺纤维化早中期,肺间质成纤维细胞高表达MMP-2。     

TSG-6促进瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡及其NF-κB信号通路影响的实验研究

目的 探讨TSG-6预处理对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡及NF-κB信号通路的影响.方法 标本人瘢痕疙瘩共3例,采用酶消化法分离纯化得到人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs),MTT法检测rhTSG-6蛋白对KFs的增殖抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50),流式细胞术检测KFs(空白对照组)与接近IC50 rhTSG-6蛋白处理组(rhTSG-6实验组)细胞凋亡情况.Western blot检测各组细胞中IκBα、p-IκBα、活化caspase3及caspase8的表达.凝胶电泳迁移率实验(EMSA)检测各组细胞NF-κB DNA结合活性.结果 rhTSG-6在体外对KFs增殖有明显抑制作用(IC50接近300 ng/ml),细胞凋亡率增高,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot法检测显示rhTSG-6实验组KFs中IκBα表达增加,p-IκBα表达减少,活化caspase3和caspase8表达明显增多.EMSA结果显示rhTSG-6实验组NF-κB DNA结合活性明显降低.结论 TSG-6在体外可能通过抑制NF-κB信号通路活性进而抑制KFs增殖并促进其凋亡.     

人脑胶质瘤中核转录因子-κB p65和基质金属蛋白酶-9的表达及临床意义

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)p65和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在人脑胶质瘤中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测45例人脑胶质瘤及32例瘤旁正常脑组织中NF-κB p65和MMP-9蛋白的表达情况。结果 NF-κB p65在正常脑组织、低度恶性及高度恶性人脑胶质瘤组织中的阳性表达率分别为9.4%、37.5%、71.4%;MMP-9在正常脑组织、低度恶性及高度恶性人脑胶质瘤组织中的阳性表达率分别为21.8%、54.2%和95.2%;NF-κB p65和MMP-9的阳性表达率随人脑胶质瘤恶性程度的增高而增高(P<0.05)。结论 NF-κB p65和MMP-9在人脑胶质瘤的生物学行为中起重要作用,且可能与其侵袭性有关。     

鼠大脑内出血后脑组织MMP-9、NF-κB表达的实验研究

目的 研究大鼠实验性大脑内出血后脑组织基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)及核转录因子-κB(NF-κB)的表达及变化规律.方法 采用立体定向技术将自体不凝血注入大鼠尾状核区制备不同时间段的大脑内出血模型,用免疫组化染色法检测不同出血时间周围脑组织MMP-9及NF-κB的表达.结果 MMP-9的阳性细胞表达数在出血后3h出现第一个表达高峰,之后递减,出血后1d再次升高并于出血后2d达到最高峰,之后又下降.NF-κB在出血后12h上升,2d达高峰,之后下降.MMP-9与NF-κB呈低度相关.结论 MMP-9在大脑内出血后显著表达并与脑水肿的发生发展有关,NF-κB对MMP-9的表达进行调节.     

矽肺模型大鼠肺间质成纤维细胞MMP-2和MMP-9的表达

目的:探讨肺间质成纤维细胞MMP-2和MMP-9在SiO2致肺纤维化中的表达及意义. 方法: 清洁级Wistar大鼠50只,随机分为对照组和实验组,实验组气管内注射SiO2悬液,对照组代以等剂量生理盐水. 注射后1,3,7,14和28 d分离和提取肺间质成纤维细胞,应用免疫细胞化学和逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法,观察其MMP-2,MMP-9蛋白及其mRNA的动态变化. 结果:①SiO2作用后1 d成纤维细胞MMP-2表达增高,7 d达高峰,为对照组的3.887倍(t=23.667,P<0.001);MMP-9在SiO2作用后1 d表达增高,7 d达对照组的3.103倍(t=11.399,P<0.001);②MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA的转录从SiO2作用后1 d就开始升高. 结论:受SiO2刺激后,肺间质成纤维细胞上调MMP-2和MMP-9的表达,损伤肺泡基底膜,启动肺纤维化的发生.     

TWEAK/Fn14蛋白在胰腺癌组织中的表达

目的 通过检测并比较肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导剂（TWEAK）和人成纤维细胞生长因子诱导型14（Fn14）在正常胰腺组织、慢性胰腺炎及胰腺癌组织中的表达,分析探讨TWEAK/Fn14通路在胰腺癌发展过程中的作用。方法 收集在四川大学华西医院胰腺外科行手术治疗、切除的胰腺组织标本,并经病理检察证实,胰腺癌标本50例,慢性胰腺炎标本40例,正常胰腺组织标本30例。采用免疫组化检测胰腺组织中TWEAK和Fn14的表达,并分析TWEAK表达与胰腺癌临床病理特征的关系。结果 TWEAK阳性表达率在胰腺癌为36.0%（18/50）,高于慢性胰腺炎17.5%（7/40）及正常胰腺组织13.3%（4/30）,组间差异有统计学意义（ P<0.05）,表达强度亦为胰腺癌组织＞慢性胰腺炎＞正常胰腺组织（ P<0.05）。Fn14在胰腺癌组织（4.0%）和正常胰腺组织（7.0%）阳性表达率低,胰腺炎组织中未发现阳性表达。TWEAK阳性表达率和高表达率在Ⅱ期患者中随着肿瘤疾病分级增加而增加（ P<0.05）。而各病理分级中,TWEAK阳性表达率、高表达率和EI评分的差异均无统计学意义。结论 TWEAK/Fn14参与了胰腺癌的发生发展过程。TWEAK在胰腺癌中高表达,Fn14呈低表达。     

清肺化痰通络方对肺纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的探讨清肺化痰通络方对博莱霉素A5（BLMA5）所致肺纤维化大鼠的干预作用及可能机制。方法将Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、干预组。模型组和干预组通过气管插管灌注BLMA5复制大鼠肺纤维化模型,对照组给予等量生理盐水气管灌注;对照组和模型组给予生理盐水灌胃,干预组给予清肺化痰通络方药物灌胃。灌胃后3、7、14、28d分别处死大鼠,采用HE和Masson染色观察肺组织病理变化,免疫组化染色检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-9在肺组织的表达水平。结果清肺化痰通络方能显著改善大鼠的一般身体状况．减轻肺泡炎及肺纤维化的程度。干预组和模型组肺内MMP-2表达在第14天达到高峰,MMP-9的表达在第7天达到高峰,且两组同时期MMP-2、MMP-9的表达均高于对照组（P〈0．05）;干预组MMP-2、MMP-9表达低于同时期模型组（P〈0．01）。结论清肺化痰通络方可能通过抑制MMP-2、MMP-9在肺内的表达,对BLMA5致肺组织纤维化起到一定的防治作用。     

基质金属蛋白酶7及基质金属蛋白酶9的表达与结直肠癌侵袭转移的相关性研究

目的 观察基质金属蛋白酶7(MMP-7)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)在结直肠癌组织中的表达情况,分析二者的表达与结直肠癌侵袭转移的相关性.方法 应用免疫组化SP法,采用组织芯片技术分析98例结直肠癌、30例癌旁正常组织中MMP-7、MMP-9蛋白表达.结果 MMP-7、MMP-9在结直肠癌组织中表达的阳性率(分别为79.6%和77.6%)均显著高于癌旁正常结直肠组织(分别为10.0%和13.3%),差异均有统计学意义(P＜0.01).MMP-7和MMP-9在结直肠癌组织中的表达在不同性别、年龄、肿瘤的瘤体大小患者中比较,差异无统计学意义(P＞0.05);而不同肿瘤的分化程度、TNM分期、浸润程度及淋巴结转移与否、腹腔微转移与否患者结直肠癌组织中,MMP-7和MMP-9的表达水平比较差异有统计学意义(P＜0.05).结直肠癌组织中MMP-7的表达与MMP-9的表达呈正相关(r=0.532,P＜0.01).结论 MMP-7、MMP-9在结直肠癌组织中高表达,且与肿瘤的浸润、转移密切相关,可作为判断结直肠癌进展的生物学标记物.     

基质金属蛋白酶2和9在实验性肝纤维化过程中的动态变化及表达

目的 :检测大鼠实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶 2(ＭＭＰ 2 )、基质金属蛋白酶 9(ＭＭＰ 9)在实验性肝纤维化发生发展过程中的表达量及动态变化 ,探讨ＭＭＰ 2、ＭＭＰ 9与肝纤维化的关系。方法 :用皮下注射ＣＣＬ4的方法复制大鼠化学性肝纤维化模型。于 4、8、12周末处死大鼠 ,模型组每次 7只 ,对照组每次 5只。肝组织病理检查用ＨＥ染色及胶原纤维特殊染色。免疫组织化学染色采用ＳＰ法 ,以肝脏细胞胞浆内有棕色颗粒为阳性。每张切片选取四周及中央 5个区域 ,取该区域中阳性反应最多的视野 ,10倍物镜下测定阳性反应面积比 (阳性面积 /…     

血脂康对不稳定性心绞痛患者基质金属蛋白酶-9及肿瘤坏死因子水平的影响

目的：探讨血脂康胶囊对冠心病不稳定性心绞痛患者血清基质金属蛋白酶-9及肿瘤坏死因子水平的影响。方法：入选60例冠心痛不稳定性心绞痛患者随机分为试验组和对照组，试验组予血脂康胶囊0．6g日2次口服；对照组予安慰荆，在用药前及用药8周后分别测定血清基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及肿瘤坏死因子（TNF-α）水平。结果：试验纽及对照组在用药前血清基质金属蛋白酶-9及肿瘤坏死因子水平相比无统计学意义；在用药后。试验组与对照组相比，血清基质金属蛋白酶-9及肿瘤坏死因子水平明显降低，有统计学意义。结论：血脂康胶囊可降低冠心病患者血清基质金属蛋白酶-9及肿瘤坏死因子水平。     

NF-κB的激活及基质金属酶-9的表达在腹主动脉瘤形成中的意义

目的探讨核转录因子NF-κB(nuclear factor-kappaB)的激活及基质金属酶9(MMP-9)的表达在腹主动脉瘤形成中的作用。方法成年雄性WISTER大鼠24只,随机分为腹主动脉瘤组、正常对照组(每组各12只)。用弹力酶灌注法建立大鼠腹主动脉瘤模型,免疫组织化学分析NF-κB,MMP-9的蛋白表达,RT-PCR方法检测其mRNA的表达。结果腹主动脉瘤组可见明显炎症细胞浸润,NF-κB被激活,同时伴有MMP-9表达增高。正常对照组未见明显炎症细胞浸润,仅有少量NF-κB的表达。结论NF-κB的激活、MMP-9表达增加在腹主动脉瘤病变的发生与发展过程中起着重要作用。     

重组骨桥蛋白通过抑制核因子κB和基质金属蛋白酶2和9减轻高氧急性肺损伤

目的研究吸入重组骨桥蛋白（r-OPN）对高氧急性肺损伤的作用及其机制。方法将96只小鼠按随机数字表法分为PBS处理组和r—OPN处理组,每组中12只小鼠置于室内空气中作为对照,其余小鼠置于浓度大于95％的氧气室中,各组分别于24、48和72h取出12只小鼠评价肺损伤严重程度;逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）法检测肺组织核因子κB（NF-κB）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9及其抑制剂TIMP-1、TIMP-2的mRNA表达;免疫组化染色检测肺组织NF-κB蛋白的表达和组织分布。结果长时间暴露于高氧能够引起急性肺损伤。暴露于高氧环境72h后,PBS处理组小鼠较r．OPN处理组小鼠发生更严重的肺损伤。RT—PCR结果显示PBS处理组小鼠肺组织NF．κBmRNA在暴露于高氧48h和72h后表达量较同时段r-OPN处理组明显增加（0．54±0．03比0．21±0．08,0．57±0．07比0．34±0．01,均P〈0．05）。r—OPN处理组小鼠在暴露于高氧72h后TIMP-1mRNA表达较PBS处理组明显增加（0．89±0．09比0．62±0．12,P〈0．05）,在暴露于高氧48h和72h后TIMP-2mRNA表达较PBS处理组明显增加（0．85±O．11比0．59±0．23,P〈0．01;0．88±0．16比0．56±0．13。P〈0．01）。免疫组化结果显示PBS处理组小鼠在暴露于高氧72h后气道上皮NF·κB蛋白表达明显高于r-OPN处理组（53．26±4．70比32．53±7．28,P〈0．05）。结论r-OPN可通过抑制NF-κB表达及促进TIMPs的表达来抑制MMPs的释放和激活,从而减轻高氧所致的急性肺损伤。