微小RNA-200a对肺癌细胞增殖影响及抑癌基因功能分析

目的分析miRNA-200a对肺癌细胞增殖影响及抑癌基因功能影响。方法 Real-time PCR对正常肺支气管上皮细胞16HBE、肺癌细胞SK-MES-1、NCI-H520、A549及25例非小细胞癌癌旁组织与癌组织内miR-200a表达量检测,CCK-8法检测肺癌A549细胞增殖活性受miRNA-200a影响状况,生物信息学对miRNA-200a靶基因进行预测,双荧光素酶联合Western blot及Real-time PCR检验YAP1受miRNA-200a调控影响。CCK-8法检测肺癌549细胞受YAP1增殖影响。结果肺癌细胞株SK-MES-1、NCI-H520及A549内miR-200a表达量均低于正常细胞株16HBE,差异有统计学意义(P0.05)。miR-200a mimics组内A549细胞在48、72及96 h时其吸光度均低于Mimics-NC,差异有统计学意义(P0.05)。肺癌A549转染siRNA-NC或者siRNA-YAP1后,PCR检测显示siRNA-YAP1内YAP1 m RNA表达量为(0.37±0.06),siRNA-NC内YAP1 mRNA表达量为(1.03±0.07),差异有统计学意义(P0.05);Western blot显示siRNA-YAP1内YAP1蛋白表达量比siRNA-NC低;siRNA-YAP1内YAP1细胞吸光度在48、72及96 h时均低于siRNA-NC,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-200a对肺癌细胞增殖的抑制作用主要是经过靶向作用YAP1基因来实现的,进而在肺癌内起到抑癌功能。     

血管内皮钙黏蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的：探讨血管内皮钙黏蛋白（vascular endothelial cadherin,VE-cadherin）在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中的表达及其与临床病理特征之间的关系,并分析其与血管内皮生长因子（vascular endothelial grow factor,VEGF）之间的相关性。方法：应用免疫组化SP法检测72例NSCLC组织及相应癌旁正常组织VE-cadherin的表达情况;其中34例用qRT-PCR法检测mRNA的表达情况,并以 VEGF为阳性参照。Western blot检测肺癌细胞株A549和人正常支气管上皮细胞（nor－mal human bronchial epithelial cells,NHBEC）中VE-cadherin的表达,以及干扰后各细胞株的表达情况。结果：72例NSCLC组织癌细胞和VE-cadherin的阳性表达率分别为69.4%、52.8%,均明显高于对应癌旁正常组织肺泡上皮细胞0%和血管内皮细胞20.8%（P<0.05）;有淋巴结转移组中的表达量均明显高于无淋巴结转移组（P<0.05）;Ⅲ、Ⅳ期的阳性表达率均明显高于Ⅰ、Ⅱ期（P<0.05）。VEGF在NSCLC组织癌细胞和血管内皮细胞中的阳性表达率分别为84.7%、62.5%,均显著高于对应的癌旁正常组织肺泡上皮细胞16.7%和血管内皮细胞29.2%（P<0.05）。经qRT-PCR分析,VE-cadherin mRNA在癌组织和癌旁正常组织中的相对表达量分别为1.15±0.87、0.70±0.57;VEGF mRNA的相对表达量分别为1.39±1.17、0.79±0.65（P<0.05）。两者在蛋白水平和mRNA水平均呈正相关（P=0.001,P=0.008）。Western blot结果示在A549细胞株中可检测到VE-cadherin表达,但在NHBEC中不表达。siRNA可降低VE-cadherin在A549细胞株中的表达。结论：VE-cadherin可能在NSCLC血管生成中起重要作用,且可能与VEGF具有协同作用,siRNA可有效抑制VE-cadherin在肺癌细胞株A549中的表达。     

非小细胞肺癌组织中αVβ3的表达情况及敲低αVβ3对肺癌细胞株A549恶性生物学行为的影响

目的:研究非小细胞肺癌组织中αVβ3的表达情况及敲低αVβ3对肺癌细胞株A549恶性生物学行为的影响.方法:收集100例非小细胞肺癌患者的肺癌组织和癌旁正常组织,检测αVβ3的表达情况;培养肺癌细胞株A549,采用siRNA转染的方式敲低αVβ3的表达,而后检测促增殖和抗凋亡基因、侵入和血管新生基因的表达情况.结果:(1)肺癌组织中αVβ3的mRNA和蛋白含量均高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P＜0.05);(2)促增殖和抗凋亡基因:处理组细胞Bcl 2、Notch1、Cyclin E的mRNA和蛋白含量均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);(3)侵入和血管新生基因:处理组细胞VEGF、ICAM-1、VCAM-1的mRNA和蛋白含量均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:非小细胞肺癌组织中αVβ3表达量升高;siRNA敲低αVβ3表达后,可以抑制肺癌细胞株A549中促增殖和抗凋亡基因、侵入和血管新生基因的表达.     

曲古抑菌素A对低氧肺腺癌细胞株A549HIF-1α、VEGF表达的影响

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶1抑制剂曲古抑菌素 A (trichostain A, TSA) 对低氧条件下人肺腺癌细胞株 A549缺氧诱导因子1α(hypoxia induced factor 1α, HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.方法 实验分为:常氧组(对照组)及低氧组(实验组),其中低氧组设4组,即低氧6 h组,低氧6 h前加TSA (1.25 μg/ml) 组,低氧24 h组,低氧24 h前加TSA (1.25 μg/ml) 组.运用免疫组织化学,RT-PCR方法检测HIF-1α、VEGF蛋白质和mRNA的表达.结果 人肺腺癌细胞株A549在低氧6 h和24 h组HIF-1α、VEGF蛋白质和mRNA的表达较常氧组明显增强 (P＜0.05),TSA减弱低氧6 h和24 h组HIF-1α、VEGF蛋白质和mRNA的表达 (P＜0.05).结论 组蛋白去乙酰化酶1参与低氧人肺腺癌细胞血管生成的调节,TSA可能降低低氧条件下肺腺癌新生血管的生成.     

RNA干扰HO-1表达对肺腺癌A549细胞生物学行为的影响研究

目的应用RNA干扰技术特异性抑制血红蛋白加氧酶-1（HO-1）的表达,观察HO-1对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法将体外构建的HO-1小分子RNA（siRNA）转染入肺腺癌A549细胞,分为空白对照组（blank组）、脂质体组（mock组）、阴性对照组（NC组）、HO-1siRNA组;应用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测HO-1mRNA和蛋白表达水平;分别以CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖能力和凋亡率,用Transwell试验检测细胞迁移能力。结果细胞培养48、72h后,与blank组、mock组、NC组比较,HO-1siRNA组细胞存活率均降低（均P＜0.05）,细胞凋亡率均增高（均P＜0.05）,G0期/G1期细胞比例均增高（均P＜0.05）,Transwell试验中穿膜细胞数均减少（均P＜0.05）。结论RNA干扰HO-1基因表达后能有效调控肺腺癌A549细胞的恶性生物学行为,抑制肺腺癌A549细胞的增殖,促进凋亡,降低细胞的侵袭能力。     

RNAi沉默肺癌细胞中VEGF的表达治疗肺癌机制的初步研究

目的：探讨RNAi干涉沉默肺癌细胞中VEGF的表达治疗肺癌机制.方法：将pSilencerTM-3.1-VEGF分别稳定转染入人肺癌细胞株A549,建立稳转细胞系.通过RT-PCR检测Bcl-2和Bax的mRNA的水平.免疫印迹方法检测稳转的人肺癌细胞株A549中P53,Bcl-2和Bax的表达.流式细胞仪检测稳转的人肺癌细胞株A549细胞系的凋亡.结果：稳定转染pSilencerTM-3.1-VEGF的人肺癌细胞株A549细胞系中VEGF的表达明显下调.稳转的人肺癌细胞株A549细胞系中P53,Bcl-2和Bax的表达无明显变化,未观察到明显的细胞凋亡现象.与对照组比较,在人HUVEC细胞系的作用下,稳定转染的人A549细胞虽Bax的表达未发生变化,但P53表达明显增高,Bcl-2表达下调,并且呈现细胞凋亡现象.外源性VEGF能够增加Bcl-2的表达,并导致P53表达下调.结论：RNAi沉默肺癌细胞中VEGF的表达未影响肺癌细胞自身的变化,其对肺癌发展的抑制可能是通过抑制了血管内皮细胞上的VEGF/VEGFR通路,从而引起了肺癌细胞的凋亡.     

长链非编码RNA MUC5B-AS1在人肺腺癌细胞系中的功能研究

目的 研究lncRNA MUC5B-AS1基因在肺腺癌中的表达情况及对肺腺癌细胞系生物学行为的影响.方法 利用RT-PCR、qRT-PCR检测肺腺癌细胞系中MUC5B-AS1基因的表达情况;构建MUC5B-AS1过表达载体,通过转染构建MUC5B-ASI过表达细胞系;采用CCK-8检测肺腺癌细胞的增殖情况;应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭的影响.结果 检测了MUC5B-AS1在4株肺腺癌细胞系(A549、SPCA1、H1975和H1299)和1株肺正常上皮细胞系(HBE)中的表达情况,发现MUC5 B-AS1在H1299细胞系中表达最低,同时A549细胞系表达最高;通过转染构建MUC5B-AS1过表达H1299、A549细胞系,利用qRT-PCR检测细胞系中MUC5B-AS1基因的表达,与对照组比较,MUC5B-AS1基因在H1299、A549细胞系均升高,且有统计学差异(P ＜0.05);CCK-8检测细胞增殖,与对照组比较过表达MUC5B-AS1对H1299、A549细胞生长并无影响(P＞0.05);应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭,过表达MUC5B-AS1促进H1299、A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MUC5B-AS1可能在肺癌的迁移和侵袭发挥重要作用,但对肺腺癌细胞的增殖能力没有显著影响.     

非小细胞肺癌细胞株c-erbB-2基因的表达

目的:分析非小细胞肺癌细胞株中人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因的mRNA水平和蛋白水平.方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株c-erbB-2蛋白水平.结果:肺腺癌CALU-3细胞株c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(P＜0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P＞0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(P＜0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:c-erbB-2基因在肺腺癌CALU-3细胞株中的表达均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株.     

miR-200b靶向VEGF抑制肺癌细胞侵袭

目的 探讨miR-200b是否通过靶向调控血管内皮生长因子(VEGF)抑制人非小细胞肺癌细胞侵袭,以揭示miR-200b的抑瘤机制。方法运用qRT-PCR检测miR-200b在非小细胞肺癌和癌旁正常肺组织中的表达;将非小细胞肺癌A549细胞分为miR-200b mimics组、miR-200b inhibitors组、scramble组、VEGF-siRNA组和control-siRNA组,分别将miR-200b mimics、miR-200b inhibitors、scramble、VEGF-siRNA、control-siRNA转染于A549细胞;采用Western blot检测A549细胞中VEGF蛋白表达,采用Transwell侵袭实验分别检测A549细胞侵袭能力。结果qRT-PCR检测结果显示,miR-200b在A549、16HBE细胞的表达分别为0.704±0.053、1.582±0.071,两者比较,差异有显著性(P<0.01);Western blot结果显示,外源过表达miR-200b或沉默VEGF能明显下调A549细胞中VEGF蛋白的表达水平;Transwell侵袭实验显示,转染miR-200b mimics或沉默VEGF 36 h后穿过基底膜的细胞数分别为(127±6)和(136±8),与对照组(189±14)比较能明显抑制A549细胞的穿膜能力(P<0.05),而转染miR-200b inhibitors可拮抗VEGF-siRNA对A549细胞的侵袭抑制作用。结论miR-200b通过靶向调控VEGF抑制人非小细胞肺癌细胞侵袭。     

VEGF逆转miR-200b促进非小细胞肺癌增殖的作用

目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)在miR-200b抑制非小细胞肺癌(NSCLC)增殖中的作用及机制。方法选择2013年2月至2014年5月在本院经手术治疗的65例NSCLC患者的肿瘤组织,qRT-PCR检测NSCLC组织中miR-200b与VEGF的表达,并统计分析NSCLC组织中miR-200b与VEGF表达的相关性;常规培养A549、H460及16HBE细胞,qRT-PCR检测各组细胞中miR-200b与VEGF的表达;将常规培养的A549细胞随机分为四组,即 miR-200b mimics+vector、miR-200b mimics+VEGF组、miR-200b inhibitor+scramble组、miR-200b inhibitor+VEGF-siRNA组,其中miR-200b mimics+vector组与miR-200b inhibitor+scramble组作为阴性对照,采用MTT法检测各组吸光度值(OD值)。结果 qRT-PCR结果显示,miR-200b在NSCLC组织的表达水平为(0.682±0.106),VEGF在NSCLC组织的表达水平为(2.731±0.597),相关性分析显示在NSCLC组织中miR-200b与VEGF的表达呈负相关(r=-0.514,P<0.001);miR-200b在A549、H460细胞中的表达显著低于16HBE细胞,差异有统计学意义(P=0.000),而VEGF在A549、H460细胞中的表达明显高于16HBE细胞,差异有统计学意义（P=0.000）;MTT结果显示,miR-200b mimics+VEGF组A549细胞在48 h、72 h的细胞增殖率明显高于miR-200b mimics+vector组, miR-200b inhibitor+VEGF-siRNA组A549细胞在48 h、72 h的细胞增殖率明显低于miR-200b inhibitor+scramble组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-200b与VEGF在NSCLC组织及细胞中表达呈负相关;VEGF逆转miR-200b对NSCLC细胞增殖的作用。     

EXPRESSION DIFFERENCES OF VASCULAR GROWTH FACTORS IN HUMAN LUNG ADENOCARCINOMA CELL LINE A549 AND CISPLATIN-RESISTANT HUMAN LUNG ADENOCARCINOMA CELL LINE A_(549)~(DDP)

Objective To elucidate the expression differences of vascular growth factors in human lungadenocarcinoma cell line A549 and cisplatin-resistant human lung adenocarcinoma cell line A549DDP . Methods RT-PCR and immunohistochemistry was used to detect the mRNA and protein expressions of vascular endothelial growth factor ( VEGF) and basic fibroblast growth factor ( bFGF) in A549 and A549DDP . Results VEGF and bFGF mRNA were expressed in A549 and in A549DDP VEGF and bFGF mRNA expression levels in A549DDP were significant higher than those in A549 (P< 0 .025 ). VEGF and bFGF protein expressions were all strong positive in A549 and A549DDP. Conclusion There are certain differences between VEGF and bFGF expressions in A549 and A549DDP . Drug-resistance of lung cancer is associated with those above genes over-expressions. Over-expression of vascular growth factors are related to drug resistance of lung cancer.     

RNA干扰对VEGF在人卵巢癌细胞中表达及细胞增殖的影响

目的:探讨小发夹RNA(shRNA)载体介导抑制人卵巢癌细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达和对卵巢癌细胞增殖的影响.方法::采用脂质体介导的方法将抗VEGF小发夹状双链RNA真核基因表达载体转染到人卵巢癌细胞(HO-8910)中,用G418 筛选获得阳性克隆.用Western印迹法、RT-PCR检测VEGF基因在卵巢癌细胞中的表达;通过MTT及细胞周期分析观察其对卵巢癌细胞增殖的影响. 结果:转染特异性小发夹RNA质粒表达载体的HO-8910细胞中VEGF表达量明显减少;HO-8910细胞生长减慢,阻滞于G1期的增多,S期细胞减少.结论:VEGF小发夹RNA质粒载体可显著抑制HO-8910细胞中的VEGF基因的表达,抑制卵巢癌细胞的增殖,该研究为应用RNAi进行肿瘤的基因治疗提供了实验依据.     

环氧化酶-2在肺癌血管生成中的作用及机制

目的　探讨环氧化酶-2 (COX- 2) 在肺癌血管生成中的作用及可能机制。方法　应用免疫组织化学法研究79例人肺癌组织COX 2、血管内皮生长因子(VEGF) 的表达; 建立裸鼠肺癌细胞株A549 移植瘤模型, 观察选择性COX- 2抑制剂尼米舒利(NIM) 对肿瘤生长的影响, 并用RT-PCR及免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤组织的VEGF基因及蛋白表达。结果　在人肺癌组织中COX -2表达的阳性率为65. 8%, VEGF阳性率为72 .2%, COX -2 与VEGF显著相关(P<0 .01)。在裸鼠移植瘤体内实验中, NIM可有效抑制肿瘤的生长; 与对照组相比, NIM处理组肿瘤组织中VEGF mRNA及蛋白的表达均明显下调(均P<0. 01)。结论　COX -2与肺癌血管生成密切相关, 其作用机制可能是上调促血管生成因子VEGF的表达。关键词　肺癌; 　环氧化酶2; 　血管内皮生长因子     

转染EGFRL858R的肺腺癌细胞中IL-6和VEGF表达水平及其意义

目的: 探讨肿瘤细胞癌基因表皮生长因子受体(EGFR)L858R型突变与肺腺癌恶性转移患者癌细胞中白细胞介素6(IL-6)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的关系及其意义。方法: 将含EGFRL858R全长基因质粒的载体转染EGFR野生型肺腺癌细胞系H460(EGFRL858R-H460组),空载体转染H460细胞作为对照组(Vec-H460组),QRT-PCR法检测2组细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平。将含IL-6siRNA的载体转染带有EGFRL858R型突变的细胞系H1975(IL-6siH1975组),转染空载体的H1975细胞作为对照组(Vec-H1975组),QRT-PCR法检测2组细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平,Western blotting法检测2组细胞中VEGF蛋白表达水平。结果: 与Vec-H460组比较,EGFRL858R-H460组细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平明显升高(P<0.01);与Vec-H1975组比较,IL-6siH1975组细胞组IL-6和VEGFmRNA表达水平明显降低(P<0.01),VEGF蛋白表达强度明显降低。结论: 肺腺癌细胞系中EGFRL858R型突变可升高肺腺癌患者癌细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平,其中IL-6mRNA水平升高可能是VEGFmRNA表达水平升高的原因,这些变化可能是EGFRL858R型突变参与肺腺癌恶性转移进程的途径之一。     

地塞米松抑制卵巢癌HO-8910细胞增殖机制的研究

目的 探讨地塞米松（dexamethasone,Dex)抑制人卵巢癌HO－8910细胞增殖的可能机制。方法 采用细胞计数法检测细胞增殖、流式细胞术测定细胞周期，同位素掺入半定量RT－PCR检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21/WAF1的表达水平。结果 Dex诱导HO－8910细胞发生G0／G1期停滞，使p21/WAF1 mRNA表达上调；糖皮质激素受体拮抗剂RU486可逆转细胞增殖和p21/WAF1表达的变化。结论 Dex对HO－8910细胞增殖的抑制可能与诱导p21/WAF1表达有关。     

丁酸钠对宫颈癌HeLa细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响

目的观察丁酸钠对宫颈癌HeLa细胞的数量及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达水平的影响,探讨丁酸钠对HeLa细胞增殖的作用及相关机制。方法体外分组培养的HeLa细胞分别加入不同浓度的丁酸钠作用72h后,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞生长情况,逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测各组细胞VEGFmRNA表达情况。结果经不同浓度的丁酸钠作用后,宫颈癌HeLa细胞增殖水平及VEGFmRNA表达水平较对照组均有明显降低,在一定范围内呈现浓度依赖性。结论丁酸钠不但能够抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,还可抑制宫颈癌HeLa细胞VEGF基因的表达水平。丁酸钠抑制VEGF基因表达水平的作用可能是其抑癌机制之一。     

千金藤碱抑制非小细胞肺癌A549细胞生长和转移以及对血红素加氧酶-1和表皮生长因子受体基因表达的影响

目的探讨千金藤碱抑制肺癌细胞A549生长、迁移和侵袭的作用以及对血红素加氧酶-1(heme oxy-genase-1,HO-1)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因表达的影响。方法甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测千金藤碱对肺癌细胞的细胞毒性,观察其对A549细胞生长的抑制作用,并用倒置显微镜观察千金藤碱处理不同时间内A549细胞的形态变化;Transwell和侵袭实验检测A549细胞迁移和侵袭能力;RT-PCR和Western blot法分别检测A549细胞内HO-1和EGFR基因的mRNA和蛋白表达水平。结果千金藤碱能够抑制肺癌细胞A549细胞的生长,细胞活力随着作用浓度的增加和时间的延长明显降低;10g/ml千金藤碱处理24h后,A549细胞发生体积变小、皱缩变圆和染色体固缩等现象;与对照组相比,千金藤碱(5.0g/ml)可使穿过隔膜和穿过基质胶的A549细胞数明显减少(P0.05)。10.0g/ml千金藤碱明显降低A549细胞中HO-1和EGFR基因的mR-NA和蛋白表达水平(P0.05)。结论千金藤碱可抑制肺癌细胞的增殖,降低A549细胞的迁移和侵袭能力,下调A549细胞的HO-1和EGFR基因的表达水平,且作用效果具有一定的时间和浓度依赖性。     

非小细胞肺癌组织中angiostatin与VEGF mRNA的转录表达及临床病理意义

目的探讨血管抑素(AS)与血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)发展过程中的作用及意义。方法采用RT-PCR方法检测48例NSCLC癌组织及癌旁肺组织中AS和VEGF mRNA的转录表达,探讨其表达水平与NSCLC临床病理特征的关系。结果AS和VEGF mRNA在肺癌组织中的表达均高于癌旁肺组织(P<0.05)。AS mRNA的表达与NSCLC的淋巴结转移及临床分期呈负相关(P<0.05)。VEGF mRNA的表达与NSCLC淋巴结转移及临床分期呈正相关(P<0.01),与组织分化程度呈负相关(P<0.05)。AS与VEGF间的表达无相关性(P>0.05)。结论NSCLC中AS和VEGF mRNA转录水平的增高,可以反映肺癌的恶性程度及癌细胞的侵袭转移能力,与NSCLC的发生及进展过程相关。     

血管生成素-1在体外对人胃癌细胞生物学作用的研究

目的:探讨人血管生成素-1(Ang1)及其与血管内皮生长因子165(VEGF165)共同作用对人胃癌细胞的生物学作用,研究其在肿瘤发生中的作用机制。方法:应用复制缺陷型腺病毒(Ad)-绿色荧光蛋白(GFP)、Ad-Ang1、Ad-VEGF165和Ad-Ang1 Ad-VEGF165/2转染人胃癌细胞株MGC-803,使用MTT比色法分析它们对胃癌细胞增殖的影响;通过流式细胞仪分析血浆饥饿时其对凋亡的影响;使用免疫细胞化学法检测Ki-67的表达;应用RT-PCR方法半定量检测bcl-2 mRNA、bax mRNA的表达情况。结果:MTT结果显示24、48和72 h Ad-Ang1转染组、Ad-VEGF165转染组和Ad-Ang1 Ad-VEGF165/2转染组吸光度均明显高于Ad-GFP组及对照组(P<0.05);Ad-GFP组与对照组相比无显著差异(P>0.05);Ad-Ang1 Ad-VEGF165/2转染组吸光度明显高于Ad-Ang1转染组和Ad-VEGF165转染组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示Ad-Ang1、Ad-VEGF165及Ad-Ang1 Ad-VEGF165/2处理组与对照组及空转染组相比均能够显著抑制细胞凋亡(P<0.01)。免疫细胞化学法显示各转染组Ki-67表达强度均显著高于对照组和Ad-GFP组(P<0.01)。RT-PCR结果显示bcl-2 mRNA在各转染组中的表达要明显高于对照组(P<0.05);bax mRNA在各转染组中的表达要明显低于对照组(P<0.05)。结论:Ang1、VEGF165和Ang1 VEGF165/2能够明显促进人胃癌细胞MGC-803增殖,抑制血浆饥饿时的凋亡,Ang1 VEGF165/2组的作用要显著强于Ang1组和VEGF165组。     

姜黄素对铜绿假单胞菌诱导人肺上皮细胞产生细胞因子的影响及其分子机制研究

目的 探讨姜黄素对铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,Pa）感染的肺上皮细胞的体外抗炎效应.方法 体外培养肺上皮细胞系NCI-H292,加入姜黄素和培养的Pa感染不同时间.Western blot检测和实时定量PCR分别检测NCI-H292细胞中红素氧合酶1（Heme oxygenase-1,HO-1）mRNA和蛋白表达情况;ELISA检测IL-1β和IL-8的产生.同时采用RNA干扰HO-1表达后,观察对Pa诱导IL-1β和IL-8产生的影响.结果 Pa感染NCI-H292细胞后,IL-1β和IL-8含量分别为（87.52±7.96）pg/mL和（205.63 ±34.25） pg/mL,50 μg/mL姜黄素孵育8h后,其含量分别降至（15.78±10.74）pg/mL和（49.82±14.28）pg/mL,处理前后差异有统计学意义（P＜0.05）.同时,姜黄素能在转录翻译水平分别调控HO-1 mRNA和蛋白表达,其中50 μg/mL姜黄素能将HO-1 mRNA增高19倍,蛋白表达水平提高4.8倍（P＜0.05）.HO-1 siRNA沉默HO-1表达后,与Pa组相比,IL-1β和IL-8分泌进一步增高.结论 姜黄素可能通过上调HO-1的表达而发挥对肺上皮细胞的抗炎作用.