β淀粉样蛋白1-40对大鼠皮层神经元凋亡的诱导作用

目的　观察 Aβ1 - 40 对大鼠皮层神经元的毒性作用。　方法　原代培养大鼠皮层神经元 ,分别采用AO- EB染色、TU NEL染色和 DNA凝胶电泳 ,观察不同终浓度的 Aβ1 - 40 对培养的神经元凋亡的诱导作用。　结果　在荧光显微镜下可见 ,经 AO- EB染色后凋亡的神经元胞核染色质着绿色荧光呈固缩状、圆珠状或新月状 ,Aβ1 - 40 三个浓度 (2 0 ,4 0和 80μg/ml)作用不同时间的凋亡率依次为 :2 4 h 2 0 .17%± 0 .76 % ,2 5 .17%± 3.82 % ,2 8.33±2 .84 % ;4 8h 2 2 .33%± 1.4 4 % ,38.83%± 1.2 6 % ,36 .6 7%± 1.0 4 % ;72 h 17.5 0 %± 1.80 % ,2 6 .5 0 %± 1.32 % ,30 .6 7%± 1.2 6 %。 TUNEL染色结果显示胞核内散在分布断裂的 DNA片段 ;琼脂糖凝胶电泳呈现典型的“梯状”带等细胞凋亡的特征性改变。　结论　 Aβ1 - 40 可诱导大鼠皮层神经元凋亡 ,以 4 0μg/ml作用 4 8h的诱导效果最为明显     

二氮嗪、环孢菌素A拮抗Aβ1 42致胆碱能神经元凋亡的研究

目的研究ATP敏感性钾离子通道开放剂二氮嗪、环孢菌素A及两者协同对β 淀粉样蛋白（Aβ1 42）致原代培养基底前脑胆碱能神经元凋亡的影响。方法采用2?μmol/L的Aβ1 42对原代培养大鼠胆碱能神经元进行干预,建立阿尔茨海默病（AD）细胞凋亡模型;采用500?μmol/L二氮嗪(预处理1?h)、20?μmol/L环孢菌素A以及两者协同对其干预,作用不同时间（24、72?h）后置于倒置显微镜下观察细胞形态;采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率,Wes tern blot法检测细胞内凋亡相关蛋白表达水平的变化。结果① Aβ1 42作用胆碱能神经元72?h后,Bcl 2表达量降低（P＜0.01）,细胞色素C、Caspase 3、Cleaved caspase 3的表达量增加（P＜0.01,P＜0.001,P＜0.01）,Bax未见明显变化,Bcl 2/Bax比值降低（P＜0.01）,细胞形态发生明显损伤性变化,细胞存活率明显降低（P＜0.001）;② 二氮嗪、环孢菌素A以及两者协同作用24?h后Bcl 2的表达增加（P＜0.05, P＜0.01,P＜0.01）,作用72h能明显增加Bcl 2的表达(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),并提升Bc 2/Bax比率而抑制细胞色素C、Caspase 3、Cleaved caspase 3表达量(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),细胞存活率均增高(P＜0.01,P＜0.001)。结论Aβ1 42作用胆碱能神经元72?h能促使细胞凋亡,二氮嗪与环孢菌素A及两者协同可以明显拮抗Aβ1 42致细胞凋亡作用。     

重组人BDNF对Aβ25-35致原代培养海马神经元损伤的保护作用

目的 观察人脑源性神经营养因子(BDNF)对Aβ 25-35致原代培养海马神经元损伤的保护作用.方法 取新生wistar大鼠海马细胞进行体外培养.分别加入不同浓度的BDNF及聚集态A β 25-35作用于培养的海马神经元,采用MTT法观察BDNF对A β 25-35致海马神经元存活率影响及Hoechst 33342染色观察BDNF对A β 25-35致海马细胞凋亡的影响.结果 显微镜下观察BDNF处理组比A β 25-35模型组细胞损伤小,细胞生长良好.MTT结果显示随着BDNF浓度增高,细胞存活率逐渐增高,在0.6nmol/L时最明显,与A β 25-35模型组比较,细胞存活率显著增高(P＜0.01).Hoechst 33342染色显示随着BDNF浓度增大凋亡率减少,与A β 25-35组比较凋亡率均显著减少(P＜0.01).结论 BDNF对培养海马神经元有神经营养活性,对Aβ致培养海马神经元的损伤有保护作用.     

β淀粉样蛋白1-40对大鼠皮层神经元凋亡的诱导作用

目的观察Aβ1-40对大鼠皮层神经元的毒性作用. 方法原代培养大鼠皮层神经元,分别采用AO-EB染色、TUNEL染色和DNA凝胶电泳,观察不同终浓度的Aβ1-40对培养的神经元凋亡的诱导作用. 结果在荧光显微镜下可见,经AO-EB染色后凋亡的神经元胞核染色质着绿色荧光呈固缩状、圆珠状或新月状,Aβ1-40三个浓度(20,40和80 μg/ml)作用不同时间的凋亡率依次为24 h 20.17%±0.76%, 25.17%±3.82%, 28.33±2.84%;48 h 22.33%±1.44%, 38.83%±1.26%, 36.67%±1.04%;72 h 17.50%±1.80%, 26.50%±1.32%, 30.67%±1.26%.TUNEL染色结果显示胞核内散在分布断裂的DNA片段;琼脂糖凝胶电泳呈现典型的"梯状"带等细胞凋亡的特征性改变. 结论 Aβ1-40可诱导大鼠皮层神经元凋亡,以40 μg/ml作用48 h的诱导效果最为明显.     

GPR30激动剂对Aβ1-42所致认知功能障碍的治疗作用及其机制研究

目的 探讨G蛋白耦联受体30（G protein coupled receptor 30,GPR30）激动剂对β淀粉样蛋白（amyloid β-protein,Aβ）1-42所致小鼠认知功能障碍的治疗作用。方法 将72只ICR小鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照组、G1低剂量组、G1中剂量组和G1高剂量组。采用双侧海马脑立体定位注射Aβ1-42建立阿尔茨海默病认知功能障碍模型,48h后给予GPR30激动剂G1（1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg）。进行Morris水迷宫实验、避暗实验和新物体识别实验测试小鼠的认知能力,采用蛋白质印迹法检测小鼠海马组织中Bcl-2、Bax、caspase-3、脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）、cAMP效应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein,CREB）、p-CREB的表达水平。结果 Morris水迷宫实验中,G1高剂量组小鼠的目标象限停留时间百分比和穿越平台次数显著高于模型组（P<0.05）;避暗实验中,G1中、高剂量组小鼠的错误次数均显著少于模型组（P<0.05）,避暗潜伏期均显著长于模型组（P<0.05）;新物体识别实验中,G1中、高剂量组小鼠的识别指数均显著高于模型组（P<0.05）。G1高剂量组小鼠海马组织中的p-CREB/CREB、mBDNF/proBDNF、Bcl-2/Bax的比例显著高于模型组（P<0.05）,活化的caspase-3/pro-caspase-3的比例显著低于模型组（P<0.05）。结论 GPR30激动剂可通过激活CREB/BDNF通路对Aβ1-42诱导的小鼠认知障碍和神经元凋亡产生保护作用。     

贯叶连翘衍生物GF1029对Aβ1-42诱导原代大鼠皮层细胞凋亡的保护作用

目的探讨贯叶连翘衍生物GF1029对经Aβ1-42诱导的大鼠原代培养皮层细胞凋亡的保护作用。方法采用老化的Aβ1-42处理大鼠原代培养皮层细胞12 h,用电镜观察细胞的形态变化,MTT法观察细胞活力变化,用荧光实时定量RT-PCR、Western-blot检测细胞中Bcl-2,Bax mRNA和蛋白的水平及GF1029预处理后这些指标的变化。结果老化的Aβ1-42处理可诱导大鼠皮层神经元凋亡,使神经细胞活力下降,降低Bcl-2 mRNA及蛋白表达,增加Bax mRNA及蛋白表达;而经40、80μmol/L的GF1029预处理2 h后,神经细胞活力增加,Bcl-2 mRNA及蛋白表达增加,Bax mRNA及蛋白表达减少。结论贯叶连翘衍生物GF1029对Aβ1-42诱导的大鼠原代皮层神经细胞凋亡有保护作用,其机制可能与Bcl-2表达增加、Bax表达下调有关。     

Alzheimer病神经元凋亡的Aβ级联假说

Alzheimer病(AD)是最常见的一种老年期痴呆综合征，痴呆的发生与神经元的凋亡密切相关。β淀粉样蛋白可诱导神经元凋亡，在AD的发病中起关键作用。本文对β淀粉样蛋白与AD的神经元凋亡的关系进行综述。     

海马区注射Aβ1～42对不同年龄大鼠记忆能力和脑内Aβ1～42沉积的影响

目的:探讨不同年龄大鼠海马区注射同等量β-amylod protein 1～42(Aβ1～42)后记忆能力和Aβ1～42沉积情况的变化.方法:SD雄性幼年鼠(月龄1个月)、成年鼠(月龄3个月)、老年鼠(月龄12个月以上)各21只,每个年龄段大鼠分别随机平均分入正常对照组、假手术组和模型组3个组.模型组选择双侧海马区注射Aβ1～42,制备AD模型.假手术组操作同模型组,但注入等体积生理盐水.正常对照组不做任何处理.采用Y型电迷宫和改进的甲醇刚果红染色分别观察大鼠的记忆能力和海马区Aβ1～42沉积情况.结果:与正常对照组比较,模型组成年和老年鼠记忆能力减退,海马部位出现大量的Aβ1～42沉积,并伴有神经元的皱缩或丢失以及胶质细胞的浸润.而幼年鼠未出现记忆障碍,Aβ1～42沉积程度较轻,神经元的形态数目基本正常.结论:不同年龄的大鼠对Aβ1～42的代谢能力不同,这可能与AD发病有关.     

人参皂苷Rg1经线粒体通路抗Aβ25-35致原代大鼠皮层神经元凋亡

目的:通过人参皂苷Rg1与原代培养大鼠皮层神经元预培养,评价抗β淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)所致神经元损伤,并探讨Rg1的神经保护作用及相关分子机制。方法:原代神经元培养7 d成熟后,分别以1、10、20μmol/L Rg1预处理24 h,加入Aβ毒性片段Aβ25-3510μmol/L模拟阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)脑组织局部微环境。孵育72 h后,光镜观察细胞形态学改变,评价Rg1是否具有神经保护作用及相关量效关系。采用JC-1染色,考察神经元线粒体膜电位(ΔΨm)变化,并运用Western blot技术,检测凋亡相关蛋白的表达变化。结果:Aβ25-35作用72 h严重损伤原代皮层神经元,引起神经元碎裂和死亡。Rg1预处理能对抗Aβ25-35的细胞损伤作用,显著提高神经元存活率,并呈现剂量依赖性,其中Rg1(20μmol/L)活性最强。Aβ25-35处理24 h能降低神经元的线粒体ΔΨm,下调Bcl-2/Bax的比值,引起细胞色素c从线粒体释放入胞浆,活化caspase 3和caspase 9,从而引起神经元凋亡。而Rg1预培养能保护原代神经元,减轻或避免上述损伤作用,且其抗凋亡效应可被雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182,780和糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU486部分拮抗。结论:Rg1在1μmol/L至20μmol/L浓度具有抗Aβ25-35损伤原代培养大鼠皮层神经元作用,该活性与抑制线粒体凋亡通路相关联。     

阿魏酸钠抗Aβ25-35诱导的皮层神经元凋亡作用的PI-3K/Akt通路

目的观察磷脂酰肌醇3位羟基激酶(PI-3K)的特异性阻断剂LY294002对阿魏酸钠抗β淀粉样蛋白(25-35)(Aβ25-35)诱导培养的皮层神经元凋亡作用的影响。探讨磷脂酰肌醇3位羟基激酶/Akt(PI-3K/Akt)信号转导通路是否参与了阿魏酸钠的抗凋亡作用。方法以Aβ25-35诱导大鼠皮层神经元凋亡模型,用倒置显微镜观察细胞形态变化,用Hoechst33258核染色分析神经元凋亡,并计算神经细胞的凋亡率。结果阿魏酸钠对Aβ25-35诱导的皮层神经元凋亡有保护作用,使神经细胞凋亡率下降。LY294002可以抑制阿魏酸钠的抗凋亡作用。结论在Aβ25-35诱导大鼠皮层神经元凋亡模型中,PI-3K/Akt信号转导通路参与了阿魏酸钠的抗凋亡作用。     

β- 淀粉样蛋白 31-35片段对离体培养皮质神经元的致凋亡作用(英文)

本实验在于观察目前合成的AβP的最短片段 31 35 (Aβ31 35 )是否能诱导神经元凋亡。我们用 2 5 μmol/L我们和前人实验中确定的AβP及其片段致凋亡作用的最佳浓度 )的Aβ31 35加入到原代培养 2d的新生小鼠大脑皮质神经元中 ,用形态学、生物化学、和流式细胞测量技术进行检测。结果显示 :①用台盼蓝排斥细胞记数和MTT线粒体功能测定法检测Aβ 31 35处理后 2、4、2 4和 48h的细胞存活情况 :在台盼蓝检测中观察到神经元用Aβ 31 35处理后 2～ 4h内出现细胞存活下降 ,到 2 4h变得非常明显。48h和 2 4h相比不再有明显增高 ;在MTT测定中 ,线粒体活性也随处理时间而下降 ,但此时下降得出现比细胞记数下降出现得较晚 ,这一点符合凋亡过程的特性 ;②在透射电镜和扫描电镜下 ,用Aβ 31 35处理 4h的神经元出现不同步的细胞变性 ,可见细胞膜出泡 ,核染色质凝集 ,核裂沟和核片块化 ;③提取对照组核Aβ 31 35处理 4、2 4和 48h的神经元DNA片段 (每个样品取 3× 10 6细胞 ) ,进行琼脂糖凝胶电泳 :除对照组外 ,在Aβ 31 35处理的各个时间点都出现凋亡的特征性改变阶梯型DNA ,并随着处理时间的延长 ,DNA梯形变得越来越明显 ;④用流式细胞仪检测 :每个样品分析 10 0 0 0细胞 ,获得DNA含量直方图 ,观察到分别用 10、2 5和     

NGF对Aβ1-40舶诱导海马神经元周期素A、B1异常表达的影响

目的研究NGF对Aβ1-40诱导海马神经元周期素（Cyclin）A、B1异常表达的影响。方法原代培养新生大鼠海马神经元7d后，分别在Aβ1-40作用前后加入神经生长因子（NGF），采用免疫组化法、免疫荧光法检测胆碱乙酰化转移酶（ChAT）活性和周期蛋白表达变化。结果①Cyclin A、B1免疫荧光检测：Aβ1-40组、NGF1组、NGF2组海马神经元内均出现蓝色颗粒（Cyclin A）和红色颗粒（Cyclin B1），但Aβ1-40组最多，NGF2组较NGF1组明显；对照组未出现上述颗粒。Cyclin A、B1免疫荧光阳性信号IA值：Aβ1-40组较对照组显著增高（P〈0．01），NGF1组较Aβ1-40组明显降低（P〈0．05），NGF2组与Aβ1-40组比较无明显降低。②ChAT免疫组化染色：Aβ1-40组仅见少量海马神经元内有棕褐色颗粒，而NGF1组、NGF2组及对照组可见较多含棕褐色颗粒的ChAT免疫阳性细胞，但对照组较NGF1组明显，NGF1组较NGF2组明显。ChAT免疫阳性信号IA值：Aβ1-40组较对照组显著降低（P〈0．01），NGF1组较Aβ1-40组明显增高（P〈0．05）；NGF2组与Aβ1-40组比较无明显增高。结论NGF能有效阻止Aβ1-40诱导海马神经元损伤，对Aβ引起大鼠海马神经元内异常表达细胞周期蛋白有一定的逆转作用，为阿尔茨海默病（AD）的防治提供了一定的实验依据。     

侧脑室注射链脲霉素引起大鼠脑Aβ1-40和Aβ1-42表达增加

目的:探讨大鼠侧脑室注射链脲霉素(Streptozotocin,STZ)阻断脑内胰岛素信号传导与Aβ表达的关系.方法:24只SD大鼠随机等分为手术组和对照组(n=12),手术组双侧侧脑室注入STZ 3 mg/kg,第3日重复此剂量,对照组只手术操作但不注射药物.21 d后,采用免疫组化方法观测各组大鼠大脑皮层和海马区的Aβ1-40和Aβ1-42阳性表达.结果:与对照组相比,手术组皮层、海马Aβ1-40和Aβ1-42阳性细胞明显增多.结论:侧脑室注射STZ可以引起脑内Aβ表达增多,提示胰岛素/胰岛素受体系统障碍与阿尔茨海默病(AD)发病有密切关系.     

糖皮质激素促β-淀粉样蛋白致海马神经元损伤的机制

目的探讨糖皮质激素(GCs)促进β-淀粉样蛋白(Aβ)引起海马神经元损伤的机制。方法地塞米松(DEX)和Aβ与胎鼠海马神经细胞共同孵育后,通过LDH释放法检测细胞活力,用激光共聚焦显微镜检测神经元[Ca2 ]i的变化,用RT-PCR来检测cdk5、p53在细胞内的表达情况。结果DEX促进Aβ25～35引起海马细胞活力的下降(P<0.05),促进Aβ25～35引起上升的[Ca2 ]i的水平(P<0.05),上调Aβ25～35引起的上升的cdk5mRNA的水平(P<0.05),但DEX未能进一步促进Aβ25～35引起的上升的p53mRNA水平(P>0.05)。结论DEX可促进Aβ的海马神经元毒性,DEX可能通过上调[Ca2 ]i的水平、上调cdk5mRNA的水平促进Aβ引起海马神经元tau异常磷酸化,导致海马神经元损伤。     

淀粉样蛋白Aβ1-42在阿尔茨海默病中的意义

目的 :探讨老年人阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease ,AD)脑脊液淀粉样蛋白Aβ1 - 42 的含量及其意义。方法 :采用ELISA法检测 30例AD ,非AD痴呆患者 2 5例和对照组 2 1例患者脑脊液中Aβ1 - 42 的浓度。结果 :AD患者脑脊液中Aβ1 - 42 水平明显低于非AD痴呆和对照组。结论 :Aβ1 - 42 在AD的发病中起重要作用 ,脑脊液Aβ1 - 42 值对AD的诊断具有一定的临床应用价值     

人参蛋白对β淀粉样蛋白1-40和H2O2损伤神经元的保护作用及其机制

目的：探讨人参蛋白(GP)对β淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）和过氧化氢（H2O2）诱导神经元损伤的影响,阐明GP对神经元的保护作用及其机制。方法：从新生乳鼠大脑皮层中分离纯化神经元,培养12 d后,分别采用Aβ1-40（30 μmol•L-1）和H2O2 （200 μmol•L-1）诱导神经元损伤,并随机分为模型组（Aβ1-40模型组与H2O2模型组,不加药物）、GP组和GP含药血清组。采用MTT法检测各组神经元存活率;试剂盒法检测细胞培养上清液中一氧化氮合酶（NOS）活性和一氧化氮（NO）水平;Hoechst 33342/PI荧光染色检测细胞凋亡与坏死率。结果：倒置荧光显微镜,Aβ1-40和H2O2处理后,神经元数量明显减少,轴突缩短或消失,
胞体变圆、缩小,大小不等,核固缩,核染色质聚集;Heochst 33342染色呈现高蓝光;部分细胞PI染色呈现高红光。加入GP及其含药血清后,神经元数量增多,胞体增大,细胞核着色形态为圆形、淡蓝色,PI阳性细胞数量减少。MTT法,GP组细胞存活率明显高于模型组（P<0.05或P<0.01）,GP含药血清组与模型组无显著差异（5％GP含药血清组除外,P>0.05）;试剂盒法,GP组细胞培养上清液中NOS活性与NO水平明显低于模型组（P<0.05　或P<0.01）
;Hoechst 33342/PI法,GP及其含药血清组细胞凋亡率低于模型组,以GP组差异更明显（P<0.05或P<0.01）,GP及其含药血清组细胞坏死率与模型组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：GP具有神经保护作用,作用机制与减少NOS活性、降低NO水平、抑制神经元凋亡有关。
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Aβ_(1-40)诱导皮层神经元凋亡和人参二醇的保护作用

目的:研究β-淀粉样肽(Aβ1-40)对原代培养的小鼠大脑皮层神经细胞凋亡的诱导和人参二醇(panoxadiol)的保护作用. 方法:通过形态学观察,MTT法检测,DNA琼脂糖凝胶电泳,Western-blot等方法研 究Aβ1-40对皮层神经元的损伤及人参二醇(由浙江省中医院提供)的保护作用.结果:原代培养的小鼠大脑神经细胞经12 μmol/L Aβ1-40作用48 h后 ,Aβ1-40损伤组神经细胞出现明显的凋亡特征,OD值降低,DNA电泳出现DNA片段, 凋亡细胞数目增多.Western-blot显示Aβ1-40损伤组bcl-2表达下降(P<0. 05),而40 mg/L人参二醇预处理24 h后可明显改变上述凋亡特征.结论:4 0 mg/L人参二醇可减缓12 μmol/L Aβ1-40诱导培养皮层神经元凋亡,对凋亡细胞 有一定的保护作用.     

Phloretin对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨Aβ25-35(β-amyloid)诱导PC12细胞凋亡过程中氯通道阻断剂Phloretin的保护作用及其机制.方法:采用MTT比色,LDH(lactate dehydrogenase)活力检测、Hoechst33258染色和琼脂糖凝胶电泳比较正常对照组、Aβ25-35损伤组和Aβ25-35 PMoretin组的PC12细胞存活与凋亡;Western Blot印迹检测3组的JNK,P-JNK蛋白表达.结果:10 mmol/L Phloretin可明显抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,提高细胞存活率,减少LDH释放,减少PC12细胞核固缩、碎裂,降低P-JNK蛋白的表达(P<0.01).结论:小剂量氯通道阻断剂Phloretin对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡具有保护性抑制作用,其机制与下调JNK的磷酸化激活有关.