地塞米松和苯妥英钠对癫痫大鼠脑内的GFAP和Fos表达的抑制作用

目的：探讨糖皮质激素（GC）的抗痫效应和抗痫机制。方法：动物行为学观察和免疫细胞化学染色。结果：戊四氮（PTZ）可诱发癫痫大发作,如诺在注入PTZ前30min先注入地塞米松或苯妥英钠（DPH）能减轻或抑制大鼠癫痫发作症状。免疫细胞化学染色结果表明,PTZ致痫组大鼠大脑皮质、海马回、齿状有大量肥大的胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）阳性的星形胶质细胞。GC或DPH抗痫组GFAP免疫反应明显减弱,阳性细胞数量减少,突起短而少,Fos蛋白在PTZ组大鼠致痫后1－1．5h有大量表达,而在上述两抗痫组显著少于PTZ致痫组。结论：1．通过与苯妥英钠（传统抗痫药）的抗痫效果相比较,进一步证明糖皮质激素具有抗痫效应。2．糖皮质激素的抗痫机制可能与抑制星形胶质细胞的活动有关。3．Fos蛋白表达的变化与癫痫活动有直接关系。     

白藜芦醇对戊四氮慢性点燃大鼠行为及脑电图的影响

目的：探讨白藜芦醇（resveratrol,RV）对戊四氮（pentylenetetrazole,PTZ）慢性点燃大鼠行为及脑电图（EEG）的影响。方法：将60只Wistar大鼠随机分为空白对照组（A组）、PTZ致癎组（B组）、RV干预组（C组）,每组20只。B组和C组通过腹腔注射PTZ建立慢性癫癎动物模型,观察大鼠行为、脑电图及海马组织学变化情况。结果：腹腔注射RV可明显抑制大鼠的癎样放电,延长发作潜伏期、缩短发作时间,与PTZ致痂组相比重型发作率降低（P〈0．05）;同时在病理学上还能减轻海马神经元的损伤程度。结论：RV可明显抑制PTZ诱导的大鼠癫癎发作,对致癎海马神经元有一定的保护作用。     

经皮三叉神经电刺激减轻戊四氮诱导的大鼠癫痫发作并抑制海马内IL-1β和TNF-α的表达

 目的:探讨经皮三叉神经电刺激预处理对戊四氮（PTZ）诱发的急性癫痫大鼠的行为学及海马致痫细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法:动物随机分为对照组、致痫组（PTZ组）和经皮三叉神经电刺激组,分别给予7 d、14 d和28 d的假刺激和三叉神经电刺激预处理后,腹腔注射PTZ 建立急性癫痫动物模型,观察给药后大鼠癫痫行为学表现,并分别用免疫组织化学方法及ELISA方法对海马IL-1β、TNF-α进行检测。结果:经皮三叉神经电刺激可以明显减轻大鼠的痫性发作级别,减少癫痫发作持续的时间（P<0.05）, 且海马细胞因子IL-1β及TNF-α的表达明显少于PTZ组（P<0.05或P<0.01）。结论:经皮三叉神经电刺激预处理在PTZ 急性点燃癫痫大鼠模型中不仅具有抗惊厥作用, 还可以减少海马致痫细胞因子IL-1β及TNF-α的表达,可能为癫痫的防治带来新的策略。       

戊四氮慢性致痫大鼠海马星形胶质细胞的激活

目的：研究慢性癫痫大鼠点燃时海马星形胶质细胞的激活情况。方法：采用免疫组化和双重免疫荧光标记法观察戊四氮慢性癫痫大鼠点燃后海马NF-kBp65和胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的变化。结果：癫痫发作1 h,CA1区出现NF-kBp65-IR阳性细胞,4 h胶质细胞p65-IR维持在高水平,并持续至发作后12 h;发作1 h,CA1区GFAP-IR开始增强,4～8 h观察到明显浓染和突起增多的GFAP-IR阳性细胞,并持续至24 h;GFAP/p65一IR阳性细胞发作后1 h可观察到,4 h达最高峰,24 h恢复至对照组水平。结论：戊四氮致痫大鼠点燃时,星形胶质细胞的这种早期而持续的激活提示该细胞在慢性癫痫的复发中可能起到重要作用。     

氯喹对癫痫大鼠海马区神经元自噬的影响

目的:研究戊四氮诱导大鼠癫痫发病过程中出现的神经元自噬现象,探讨氯喹对神经元自噬现象的影响,探讨氯喹缓解癫痫的作用机制。方法:Wistar大鼠24只随机分为对照组、戊四氮致痫组及氯喹干预组。观察各组大鼠行为表现和脑电图变化,用HE、Nissl染色检测各组大鼠海马区神经元的损伤程度,应用免疫组化检测各组海马自噬标记物微管相关蛋白l轻链3(LC3)的表达。结果:对照组无痫样发作,脑电图波形正常,神经元处于正常状态,自噬处于低水平;戊四氮致痫组有重型的痫样发作,脑电图记录呈高频高幅的癫痫波形,并且出现神经元的大量死亡(P0.05),LC3较对照组表达增高(P0.05);氯喹干预组有轻型痫样发作,与戊四氮致痫组对比,脑电图记录癫痫波形减少,神经元的损伤明显减轻(P0.05),LC3的表达显著升高(P0.05),自噬过程被抑制。结论:氯喹可以有效的抑制癫痫发作过程中出现的神经元自噬现象,减少神经元的死亡,从而达到缓解癫痫发作的作用。     

黄体酮对戊四唑致痫大鼠海马内GABA能神经元影响的形态学研究

本实验采用免疫组织化学方法,研究了黄体酮对戊四唑(PTZ)致痫大鼠的发作情况和海马内γ-氨基丁酸(GABA)能神经元的影响,旨在从形态学角度探讨黄体酮对抗癫痫作用的可能机制。实验中采用成年去卵巢(OVX)雌性SD大鼠,随机分成空白对照、实验对照和实验给药3组。空白对照组和实验对照组经腹腔注射生理盐水(NS),实验给药组经腹腔注射黄体酮,每天一次。3 d后,空白对照组经腹腔注射NS,实验对照和实验给药组经腹腔注射PTZ致痈。注射PTZ 1 h后,灌流固定,取脑,做振动切片。取含背侧海马的脑片,ABC法免疫组化染色。图象分析计数海马齿状回门区内GABA免疫阳性细胞数。结果:(1)实验给药组大鼠均未出现癫痫发作;(2)三组间齿状回门区内GABA免疫阳性细胞数存在显著差异(P<0.01);实验给药组的GABA免疫阳性细胞数明显增加(P<0.05)。结果显示,黄体酮可对抗PTZ致痫的行为发作和门区GABA能中间神经元的损伤,并提示黄体酮可能具有增强GABA能系统的作用。     

自体脑外转道模式下青霉素致痫大鼠海马C-fos、C-jun表达的影响

观察在脑内置入引导电极接自体脑外肌肉组织对青霉素致痫大鼠行为学、脑电图(EEG)及海马C-fos、C-jun的表达,探讨其对大鼠痫性发作的影响。实验动物随机分为三组,每只6只,分别为致痫组(海马内微注射青霉素制备痫性发作模型)、脑电转道组(致痫灶置入引导电极并接自体脑外肌肉组织)及对照组(脑内置入引导电极,不致痫)。观察各组大鼠行为学、EEG变化并应用免疫组化方法检测海马C-fos、C-jun的表达。实验中观察到致痫组、脑电转道组大鼠痫性发作次数无显著差别;脑电转道组EEG放电次数较致痫组显著减少(P<0.05);4 h点脑电转道组注药侧海马CA3、CA1区C-fos、C-jun表达明显低于致痫组注药侧(P<0.05)。本实验证实了自体脑外转道模式下,引导电极置入减少了致痫大鼠痫性放电次数,下调了致痫大鼠海马C-fos、C-jun的表达。     

布洛芬对戊四氮点燃癫痫大鼠星形胶质细胞的影响

目的:探讨不同剂量布洛芬对戊四氮(PTZ)点燃癫痫大鼠的影响及其作用机制。方法:雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、PTZ组和PTZ+布洛芬组(按布洛芬剂量分为4组),分别对其进行干预,观察记录各组大鼠行为学及脑电图变化,同时观测布洛芬的不良反应,采用免疫荧光染色及Western Blot检测GFAP的表达情况。结果:PTZ组与对照组相比,痫样发作和星形胶质细胞增生明显(P 0. 05); PTZ+布洛芬各组痫样发作和星形胶质细胞增生情况较PTZ组降低,且剂量越高抑制作用越明显(P 0. 05),但不良反应的发生也越多。结论:布洛芬可通过抑制星形胶质细胞增生影响癫痫发作,且剂量越高抑制作用越强,但其不良反应也随剂量的增加而增加。     

糖皮质激素对致痫大鼠的行为、脑电图和代谢型谷氨酸受体1α的影响

目的探讨糖皮质激素的抗痫效应。方法应用脑电图仪和免疫细胞化学方法,分别研究地塞米松对马桑内酯或戊四氮致痫大鼠的脑电图（ＥＥＧ）和代谢型谷氨酸受体１α（ｍＧｌｕＲ１α）免疫反应性的影响,并观察大鼠行为的改变。结果大鼠注射马桑内酯或戊四氮前３０ｍｉｎ经静脉注入地塞米松,能防止严重的癫痫发作症状和脑电图中高电位的痫波发放,并能减少ｍＧｌｕＲ１α在海马区的表达。结论地塞米松具有抑制马桑内酯或戊四氮诱发癫痫的作用,海马内的ｍＧｌｕＲ１α可能在癫痫活动中起一定作用,地塞米松的抗痫效应可能与降低ｍＧｌｕＲ１α的表达有关。     

氯喹对戊四氮慢性致痫大鼠海马GluR2及nNOS表达的影响

目的:观察氯喹对戊四氮慢性致痫大鼠海马α-氨基羟甲基异恶唑丙酸(amino-3-hydroxy-5-methylisox-azole-4-propionic acid,AMPA)受体(GluR2)及神经型一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,nNOS)表达的影响,探讨氯喹在癫痫发生发展中的作用。方法:30只健康雄性SD大鼠,随机分为3组:对照组(10只)、戊四氮致痫组(10只)、氯喹干预组(10只),观察大鼠行为表现和脑电图的改变。应用Western Blot检测大鼠海马GluR2含量的改变,免疫组化检测nNOS的变化。结果:对照组无癫痫发作,戊四氮致痫组癫痫发作严重(III~Ⅴ级),氯喹干预组痫样发作与戊四氮致痫组相比较轻(Ⅰ~III级,P<0.05);戊四氮致痫组脑电记录呈频发高幅的痫样波,氯喹干预组痫样波幅低且缓;与对照组相比,癫痫组GluR2表达减弱(P<0.05),氯喹干预组与对照组比较差异有显著性(P<0.05);nNOS在戊四氮致痫组表达强,以海马为著,与对照组比较差异有显著性(P<0.05),氯喹干预组与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:氯喹可以通过调节GluR2的含量和抑制nNOS的表达,表明氯喹可能是预防和治疗癫痫的理想药物。     

戊四氮点燃大鼠癫痫发作和癫痫形成过程中海马5-HT水平的变化

目的：研究戊四氮（PTZ）点燃大鼠癫痫形成过程中行为、脑电及海马5-羟色胺（5-HT）水平的变化。方法：对大鼠腹腔注射PTZ35mg／（kg·d）,观察行为变化,在不同时间点（第7、14、21、28天）,进行脑电记录,微透析取海马组织间液,活体观察24只自由活动大鼠在点燃过程和诱发发作前后脑电、海马5-HT及其代谢产物5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）水平及其5-HT转化率（5-HIAA／5-HT）的变化。结果：开始PTZ注射后,发作潜伏期逐日缩短,发作程度逐日加重,点燃时间在10～14d。在制模过程中有一只鼠死亡。海马脑电随着发作的加重而出现癫痫波潜伏期缩短,癫痫波量增加,发作间期出现自发放电。点燃早期（第7天）,发作间期大鼠的海马5-HT水平略有升高,随着点燃时间延长,5-HT水平逐渐降低,在点燃后（第14天）维持点燃（第21、28天）5-HT水平持续下降,与点燃前5-HT水平比较,差异无显著意义（P〉0．05）;5-HT转化率在点燃过程变化差异无统计学意义;5-HIAA水平在点燃时期和维持点燃时期呈逐步降低,点燃期、维持点燃期与对照组比较差异有显著意义（P〈0．05）。结论：PTZ点燃大鼠癫痼形成过程中,在点燃前,发作间期的海马5-HT水平呈阶段性升高,点燃后,发作间期的海马5-HT水平逐渐降低;点燃后,发作间期的海马5-HT水平明显低于正常水平;随着维持点燃时间延长,发作间期的海马5一HT水平呈进行性下降。     

醒脑静对戊四氮致癎大鼠行为学及脑电图的影响

目的：探讨中成药醒脑静（XingNaoJing,XNJ）对戊四氮慢性点燃癫癎大鼠行为学及脑电图的影响。方法：将健康雄性SD大鼠50只随机分成5组（每组10只）：正常对照组、单纯模型组、制模并药物干预的醒脑静组、苯巴比妥组及中西药合用（醒脑静＋苯巴比妥）组,观察分析醒脑静对戊四氮点燃癫癎大鼠首次出现发作时间、各阶段发作级别、发作潜伏期及持续时间和脑电图的影响。结果：醒脑静组首次出现癫癎发作时间较模型组延迟（P〈0．01）,发作级别降低（P〈0．05,P（0．01）,发作潜伏期明显延长（P（0．01）,发作持续时间明显缩短（P〈0．01）,癫癎发作波频率和波幅降低。醒脑静组与苯巴比妥组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。中西药合用组各指标与醒脑静单用组或苯巴比妥单用组比较差异均有统计学意义（P（0．05）。结论：醒脑静具有抑制戊四氮诱发癫癎的作用,与抗癫癎西药合用抗癫癎作用更强。     

神经生物反馈治疗难治性癫痫的临床研究

目的：观察神经生物反馈（又称脑电图生物反馈,EEG biofeedback,EBF）治疗难治性癫痫的临床疗效。方法：采用随机、单盲、对照方法。试验组进行EBF训练来强化Ca导联12～15Hz的感觉运动节律（SMR）而同时抑制θ节律,共30次为一疗程。对照组患者进行空白对照。对试验前后的临床发作情况和脑电图进行观察。结果：共56例完成了30次的EBF训练,其中36例为试验组患者,20例为对照组。经EBF治疗后,试验组癫痫发作明显减少,总有效率为69％,对照组中总有效率为25％。试验组重度异常脑电图所占的比例由47％降至28％,总好转率为56％（20／36）。结论：难治性癫痫患者进行EBF训练,在强化C4导联SMR节律的同时抑制θ节律,可以减少癫痫发作。     

COX-2抑制剂对幼鼠反复痫性发作后神经发生的影响

目的：研究环氧合酶-2（COX-2）在痫性发作活化后的表达特点,探讨COX-2抑制剂塞莱昔布（eeleeoxib,Cel）对痫性活动后海马区神经发生的影响。方法：模型制作：随机将120只体重为50～60g的3周龄健康Wistar幼鼠分为匹鲁卡品致痫组（EPOnly组）（n=45）和Cel干预致痫组（EP—Cel）（n=45）和生理盐水正常对照组（NS组）（n=30）3组。随机在EP—only及EP—Cel组各取10只匹鲁卡品成功诱导急性发作幼鼠进行腹腔注射溴脱氧尿核苷（BrdU）：（1）行为学观察：根据Racine分级评价急性期和慢性期痴性发作行为;（2）形态学检测：各实验组分别在急性发作后第14天,第28天处死大鼠制备组织切片进行免疫组化检测COX-2阳性细胞在各组的表达变化趋势,以及BrdU＋神经元特异性核蛋白（NeuN）和BrdU＋星形胶质细胞胶原纤维酸性蛋白（GFAP）荧光免疫双标阳性细胞的表达,观察神经前体细胞的增殖及分化在各组的差异。结果：（1）动物行为学观察：在急性期,EP-only组全身性自发反复性癫痫发作（SRS）发作率（90％）明显高于EP—Cel组（560）（P〈0．01）;EP—only组痫性发作Racine分级强度（3．7±1．3）明显高于EP—Cel组发作强度（2．5±1．1）（P〈0．05）;在慢性期,EP—Only组SRS发生率（500）明显高于EP—Cel组（30％）（P〈0．05;岔检验）;EP—Only组平均每天SRS发生的频率（1．9±0．58）明显高于EP=Cel组（0．6±0．3）（P〈0．01,t检验）;（2）形态学检测免疫组化结果：①COX-2免疫反应阳性细胞的表达：匹鲁卡品致痫第14天后,海马区COX-2阳性细胞表达在EP—Only组明显高于EP-Cel组[（158±18）vs（118±20）]（P〈0．01）;②BrdU＋NeuN和BrdU＋GFAP免疫双标结果：急性期发作第28天后,BrdU＋NeuN免疫双标阳性细胞在EP-Only组明显高于EP—Cel组[（36±4）vs（22±3）];同时EP-Only组门区有BrdU＋GFAP免疫双标阳性的新生的胶质细胞明显比EP—Cel组高[（26±3）vs（14±2）3。结论：COX-2在痂性发作后被迅速诱导表达,COX-2抑制剂Cel能抑制痫性发作激活的异常神经发生和星形胶质细胞增生,减少慢性期SRS。     

癫痫大鼠海马谷氨酰胺合成酶的变化

目的观察戊四氮点燃慢性癫痫模型海马星形胶质细胞谷氨酰胺合成酶的变化,探讨谷氨酰胺合成酶在癫痫发生中的作用。方法通过免疫组织化学染色法和酶活性测定法,研究海马内谷氨酰胺合成酶表达细胞差异以及酶活性改变。结果慢性癫痫大鼠海马星形胶质细胞被激活,细胞体积增大,突起粗大,谷氨酰胺合成酶的表达阳性,但较正常组明显减少,而GFAP表达增高;慢性癫痫大鼠海马谷氨酰胺合成酶的活性明显降低。结论谷氨酰胺合成酶缺乏可能是癫痫发生的一个分子基础。     

粉防己碱对戊四唑致(癎)大鼠皮层电图和海马超微结构的影响

目的:探讨钙拮抗剂粉防己碱(tetradrine,Tet)对戊四唑(Pentylentetrazol,PTZ)诱导的大鼠癫(癎)模型的作用.方法:健康SD大鼠24只,随机分为4组,对照组和Tet 3个剂量组(15 mg/kg,30 mg/kg,60 mg/kg)各6只.观察大鼠腹腔注射PTZ前后癫(癎)发作的情况,按Racine分级标准分级,同时记录皮层电图(ECoG),观察PTZ注射后到出现(癎)样放电的潜伏期及1 h内(癎)样放电累加的持续时间.电镜观察海马神经元超微结构的改变.结果:对照组给PTZ后均出现癫(癎)发作,程度均为5级,Tet组发作程度明显减轻.ECoG上出现(癎)样放电的潜伏期延长,(癎)样放电在1 h中的持续时间缩短.同时,Tet也能明显减轻PTZ致(癎)大鼠海马CA1区锥体细胞线粒体的损伤程度.结论:Tet对PTZ诱导的癫(癎)大鼠的发作有明显的对抗作用,对海马锥体神经元的拟伤具有保护作用.     

癫痫发作类型与EEG的相关性

目的：分析各种发作类型癫痫及其与脑电图（EEG）表现的关系。方法：对352例确诊癫痫患者行规范的病史询问及长程EEG监测（描记时间10～15h）,并按照1981年ILAE分类和名词委员会推荐的癫痫发作的分类方案进行发作症状的分类,按照1989年II,AE推荐的癫痫和癫痫综合征的分类作出诊断,分析其发作类型和EEG之间的相关性。结果：在352例中,EEG异常246例,异常率为69．9％,24例（6．8％）记录到临床发作。EEG异常率与发作频率相关,每月发作大于4次者较每月发作少于4次者EEG异常率显著升高（P=0．014）。部分性发作和全面性发作的患者异常率比较差异无显著意义（P=0．929）,但前者更多表现为EEG局限性异常（P=0．014）。结论：规范的长程EEG检查异常率较高,EEG异常率与发作频率相关,不同癫痫发作类型患者的EEG表现有差异。     

甜菜碱对戊四氮致痫大鼠海马GFAP、甘氨酸和甘氨酸受体表达的影响

 目的：研究甜菜碱对癫痫大鼠海马胶质细胞原纤维酸性蛋白（GFAP）、甘氨酸(Gly)及甘氨酸受体(GlyR)表达的影响。方法：将健康雄性Wistar大鼠随机分为：正常对照组（腹腔注射生理盐水,1.0 mL生理盐水灌胃);癫痫组（腹腔注射戊四氮,1.0 mL生理盐水灌胃）;甜菜碱高、中、低浓度组（腹腔注射戊四氮,甜菜碱灌胃）;丙戊酸钠组（腹腔注射戊四氮,丙戊酸钠灌胃）。实验结束后大鼠眼眶取血检测血清中同型半胱氨酸的含量;在低温条件下迅速取脑组织,分析Gly含量的变化,免疫荧光检测GFAP的水平,兔疫荧光和Western bloting检测海马区GlyR表达的变化。结果：各组大鼠大发作潜伏期无显著差异(P＞0.05),但是甜菜碱治疗组较癫痫组的首次大发作持续时间显著缩短(P<0.01)。癫痫组同型半胱氨酸的含量与正常组比较显著降低（P<0.01）,甜菜碱高、低浓度组同型半胱氨酸含量与癫痫组比较明显降低（P<0.05）。癫痫组甘氨酸的含量与正常对照组相比显著下降（P<0.01）。甜菜碱高、中、低浓度组甘氨酸的含量与癫痫组比较显著增高（P<0.01）。免疫荧光检测GFAP结果,癫痫组与正常组比较显著增高（P<0.01）,而甜菜碱高中低浓度与癫痫组相比显著降低（P<0.01）。免疫荧光与Western bloting检测GlyR结果,癫痫组GluR的表达与正常对照组相比显著降低（P<0.01）,甜菜碱高、中、浓度组较癫痫组显著升高（P<0.01）。结论：甜菜碱具有较好的抗癫痫作用。