从图们江水中分离出2株不凝集弧菌的报告

〔目的〕对国境口岸水域进行霍乱监测,防止传染病的传入。〔方法〕从图们江沿线6个监测点采集水样15份进行增菌培养;选择可疑菌落进行分离培养,糖发酵、霍乱弧菌血清凝集试验和生化反应试验。〔结果〕检出弗尼斯弧菌1株,辛辛那提弧菌2株。〔结论〕图们江水体有弧菌污染,有适合霍乱弧菌存在和繁殖的条件,出入境检验检疫机关应加强对霍乱弧菌和不凝集弧菌的监测工作。     

进口鳖蛋中首次检出霍乱弧菌

〔目的〕为防止霍乱的传入和传出,防止霍乱弧菌经水生动物通过国境运输传播,保护人体健康。〔方法〕采用霍乱弧菌增菌分离培养法,对入、出白云国际空港的水生动物进行霍乱弧菌检测。〔结果〕从泰国入境的中华鳖蛋中检出O1群埃尔托霍乱弧菌小川型(151)1株。〔结论〕霍乱弧菌可通过水生动物的运输而传播,应加强该类产品的入、出境检测工作,防止霍乱弧菌通过水生动物的运输在国际间传播和流行。     

通用引物PCR扩增创伤感染细菌16S-23S rDNA间区的研究

目的 探讨通用引物PCR扩增多种创伤感染细菌16S-23S rDNA间区的可行性,为开展常见创伤感染细菌基因诊断做好准备.方法 以细菌16S-23S rDNA间区为靶序列,在16S rDNA 3'端与23S rDNA 5'端保守区自行设计通用引物,筛选5种常见创伤感染细菌,提取其基因组DNA并进行PCR扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳和测序.结果 5种细菌基因组DNA PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图谱与预期一致,经测序比对后得到了证实.结论 该通用引物可以实现对多种创伤感染细菌16S-23S rDNA间区进行PCR扩增,为下一步进行基因诊断打下了坚实的基础.     

实时荧光RT-PCR方法检测水及水产品中霍乱弧菌

〔目的〕探索实时荧光RT-PCR方法在霍乱弧菌检验方面是否比传统方法有优势。〔方法〕用深圳太太基因工程有限公司提供的霍乱弧菌实时荧光RT-PCR试剂盒方法进行检验。〔结果〕用实时荧光RT-PCR方法从样品的2次增菌液中检出2个样品为霍乱弧菌通用型阳性。用传统的微生物生理、生化培养法,从上述2个样品中分离出3株菌株。根据血清分型、API鉴定和荧光RT-PCR,确认所分离的菌株有2株是国际检疫传染病的病原—O1群霍乱弧菌;1株是非O1/非O139群霍乱弧菌。〔结论〕实时荧光RT-PCR方法在霍乱弧菌的检验方面具有快速、灵敏、特异性强等优势,有利于提高霍乱弧菌的检出率。     

16S rRNA基因序列分析法在输入性蜚蠊携带病原菌检测中的应用研究

目的 应用16S rRNA基因序列分析法对江苏口岸输入性蜚蠊携带的细菌进行快速检测.方法 用研磨器将蜚蠊研碎,用LB培养基增菌和分离培养,随机挑选细菌单克隆,提取DNA,对16S rRNA基因进行PCR扩增,扩增产物进行序列分析、比对,确定细菌种属.结果 从输入性蜚蠊中共分离鉴定出23种细菌,分属15属.结论 输入性蜚...     

福建口岸首次截获输入性登革热病例实验室诊断

〔目的〕通过实验室检测发现福建口岸首次截获输入性登革病例,并进行分子追踪溯源。〔方法〕采用实时荧光RT-PCR和RT-PCR检测方法,并对RT-PCR扩增产物进行核苷酸序列分析。〔结果〕从血清样本中检出登革病毒1型核酸,序列分析表明,该病毒株与来自太平洋群岛分离株在系统进化树上最为接近,序列同源性高。〔结论〕福建口岸首次截获输入性登革热病例,病毒株来源于太平洋群岛地区。     

可疑霍乱弧菌的实验鉴定

目的:对4株可疑霍乱弧菌进行种属鉴定。方法:对可疑菌落在传统血清学和系统生化鉴定的基础上进行细菌的分子鉴定:应用16S rDNA的序列分析进行细菌种属鉴定和实时荧光PCR检测O1、O139群霍乱弧菌。结果:16 s rDNA基因序列分析显示041和067为麦氏弧菌,059和074为霍乱弧菌;荧光定量PCR检测结果说明4株菌都不是O1和O139霍乱弧菌。结论:结合血清凝集和系统生化实验,可以确定041和067为麦氏弧菌,059和074为非O1/非O139霍乱弧菌。对于可疑和难鉴别的霍乱弧菌,不能单纯依靠血清学和表型鉴定方法,需要分子诊断方法,尤其是16SrDNA的序列分析,可以从分子水平为弧菌科细菌的种属鉴定提供更为直接的证据。     

上海空港口岸卫生微生物监测结果分析

〔目的〕通过分析上海空港口岸卫生微生物监测结果,讨论口岸卫生监测指标。〔方法〕分析上海空港口岸食品微生物监测结果异常原因。把口岸使用的检测技术和合格判定标准与国内外相应检测试剂和标准比较。〔结果〕上海空港口岸食品、冰和饮水存在的主要微生物问题是菌落总数和大肠菌群超标,仅从养殖水中检出副溶血性弧菌。〔结论〕口岸应积极采用先进技术,完善监测标准,有效阻止携带致病性微生物污染的食品进出国境或在口岸经销食用。     

ERIC-PCR用于珠海口岸霍乱弧菌的分子分型研究

目的针对珠海口岸分离的霍乱弧菌进行分子分型研究。方法选择46株菌株(包括45株霍乱弧菌和1株弧菌属细菌),采用肠杆菌基因间重复一致序列—聚合酶链反应技术(Enterobacteial Repetitive Intergenic Consensuspolymerase chain reaction,ERIC-PCR)扩增细菌的基因组DNA,对产生的指纹图谱进行聚类分析。结果 ERIC-PCR绘制的基因组指纹图条带清晰可辨且有一定的多态性,聚类分析结果显示ERIC-PCR将46株菌株分为22个聚类群,其中从珠海口岸供澳水产品中分离的30株O1群霍乱弧菌非流行株被细分成12个聚类群。ERIC-PCR能有效区分O1群、O139群和非O1/非O139群霍乱弧菌血清群,也能完全区分霍乱弧菌流行株与非流行株。结论 ERIC-PCR是一种有效的、具有高识别力的霍乱弧菌分型方法。本研究获得的霍乱弧菌分子分型数据为珠海口岸霍乱的防控提供了有价值的基础资料。     

汕头机场口岸航空食品卫生监督检验结果分析

〔目的〕掌握汕头口岸航空食品的卫生状况,为加强卫生监管工作提供科学依据。〔方法〕对汕头机场国境口岸1999～2000年航空食品进行了卫生监督检验。〔结果〕共抽检食品268份,合格252份,合格率94.0％;16份不合格食品中,大肠菌群不合格率显著高于细菌总数的不合格率(X~2=4.56,P<0.05);不同季节检验的合格率差异有显著性(X~2=77.59,P<0.005),夏秋季合格率明显低于冬春季。〔结论〕国境口岸出入境检验检疫机关应当加强对夏秋季节航空食品的卫生监督和检验,把改善环境卫生、提高航空配餐人员的个人卫生意识、健康意识和整体大卫生观念,防止致病微生物污染食品作为重点控制环节。     

国际船舶压载舱沉积物中病原微生物检测分析

目的检测辽宁省大连市海湾停靠坞修的国际船舶压载舱沉积物中病原微生物的种类,探讨压载舱沉积物排放管理和卫生处理方法,为制定相应预防控制措施提供参考依据。方法压载舱沉积物按照0.5 mg/0.5 mL样品接种10 mL增菌液的比例将压载舱淤泥分别接种到营养肉汤和碱性蛋白胨水中,37℃过夜震荡摇菌。增菌后划线接种在选择培养基上,过夜培养挑取阳性菌落纯培养后鉴定。结果从45艘国际航行船舶采集的48份压载舱沉积物样品中共检出15种细菌,其中12种具有致病性。结论必须加强国际船舶压载舱沉积物的排放监管和卫生学处理。     

盐田港船舶压载水致病微生物入侵风险分析

目的了解盐田港港区海水及船舶压载水致病微生物种类和数量,分析压载水致病微生物的入侵风险,为船舶压载水管理提供依据。方法采用实验室技术对港区海水及船舶压载水水样进行检测分析,采用一般性统计描述、χ2检验、秩和检验等对数据进行比较研究。结果近处水域海水水质较远处水域海水水质差;船舶压载水水质明显较港区海水水质差;不同来源地压载水水质相差不大。港区海水共检出8种致病性弧菌,其中优势弧菌为溶藻弧菌(39.13%)、创伤弧菌(17.39%)、鲨鱼弧菌(13.04%)。船舶压载水样本共检出12种致病弧菌,其中优势弧菌为溶藻弧菌(34.69%)、副溶血性弧菌(28.57%)。结论船舶压载水存在致病性微生物入侵性风险,必须采取预防性消毒处理后方可排放;港区海水日常监测主要采集浅层海水,增加对优势弧菌的监测内容。     

16S rRNA基因测序分析技术在食品污染菌监测中的应用

目的 将16S rRNA基因测序分析技术应用于食品安全风险监测中非目标(相似、少见或非典型)致病菌的鉴定,为食源性疾病防控提供更多病原学证据。方法 采集18份畜类、18份禽类和9份鱼类共45份生鲜样品,目标致病菌按照GB4789标准检测,非目标菌进行16S rRNA基因测序,将全长序列在GenBank中比对确定细菌种属,通过MEGA6构建细菌16S rRNA基因进化树,判定细菌种属间的亲缘关系。结果 45份生鲜样品中检出19株目标致病菌,包括沙门氏菌、空肠弯曲菌、单增李斯特菌和副溶血弧菌,而34株非目标菌16S rRNA基因全长序列能分别比对出13种细菌,其中8种19株菌属于致病或条件致病菌,包括霍乱弧菌、溶藻弧菌、结肠弯曲菌、奇异变形杆菌、粪肠球菌和铜绿假单胞菌,以及在深圳乃至省内首次报道的布氏弓形菌和海藻希瓦氏菌。结论 深圳市售生鲜食品受到多种食源性致病菌污染,特别是非目标检出的致病菌,对此认为16S rRNA基因测序分析技术是一套有效的细菌监测适宜技术,能提高食源性疾病和食物中毒的防控水平。     

Sampling and detection methods of bioaerosols for the risk assessment of microorganisms in work environments]

Bioaerosols including bacteria and fungi have been almost unrecognized as pollutants of work environments in Japan. The combination of filter sampling and DNA staining by ethidium bromide (EtBr) was examined for the detection and evaluation of total numbers of bioaerosols, including viable and dead microorganisms, for risk assessment in work environments. With direct counting of microorganisms by EtBr concentrations of total cells were obtained in a shorter time than plate culture, the traditional method for detection of microorganisms. Total cell concentrations (cells/m3) were about 100 times greater than colonized cell concentrations (CFU/m3) in all samples. In some microscopic fields, macro conidia produced from some kinds of fungi were observed, but they were not detected by plate culture. Airborne bacterial 16S rDNA amplified by PCR were determined for their base sequences by DNA sequence analysis and classified by sequence-based homologies. Base sequences from 2 samples each contained 6 common groups of phylum. The combination of filter sampling and direct counting by EtBr staining was shown to be a better method for detecting and evaluating total cell concentrations in the risk assessment of sick building syndrome and allergy.     

海宁市霍乱弧菌检出结果分析

[目的]掌握我市外环境中霍乱弧菌的存在状况及预测未来霍乱发病趋势以便采取适当的防病措施。[方法]依据GB15984-1995《霍乱诊断标准及处理原则》和外环境水样标本分离霍乱弧菌程序对不同样品进行检测,并对33份阳性菌株进行噬菌体-生物分型鉴定。[结果]对不同样品进行检测,其中水样579份阳性31份,阳性水源11处。感染确诊病例18例（其中1例为输入病例）,其中O139型2例,稻叶型16例。33份阳性菌株经噬菌体-生物分型,1 f 21株、2 f 2株、1 d 1株、1 e 1株、5k 1株、19k 1株,0139型6株。埃尔托霍乱弧菌中流行株,共计25株,25/27（92.6%）。[结论]海宁市外环境中存在多种霍乱弧菌,并发现在同一水源中同时检出2种不血清型的霍乱弧菌;本次流行仍以稻叶型、O139型霍乱为主;菌株鉴定存在流行株（1f、2f、1d和1e）。未来几年仍有霍乱暴发流行和散发的可能。防控形势非常严峻,必须采取有力措施。     

湖南省O139群霍乱流行因素和快速评估研究

目的了解湖南省O139群霍乱的流行特点,分析流行因素,探索快速有效的监测评估方法和预防控制措施,为制定科学的防控策略提供依据。方法采用回顾性队列研究、生态学研究和现场流行病学调查研究湖南省O139霍乱的流行特点和高发区的流行因素;评估农村集体聚餐卫生指导和管理预防控制措施的效果。分别采用膜免疫层析法和常规细菌分离培养法对腹泻病人及霍乱病人的密切接触者粪便标本进行O139霍乱弧菌检测,以后者为金标准,计算膜免疫层析法的灵敏度和特异度。结果湖南省1997-2009年共发生48起O139霍乱疫情,报告病例103例,带菌者119例,死亡2例,病死率为1.94%。在局部地区有集中发生趋势。2002-2009年常规监测腹泻病人阳性率为2.47/万,水产品样阳性率为0.57%,疫点监测检测人群阳性率为1.18%,外环境阳性率为3.44%;非疫点地区水体环境中未检测到霍乱弧菌。48起疫情中暴发16起,散发32起,28起疫情与农村集体聚餐有关。2003年9起暴发疫情中参与聚餐人员的O139霍乱弧菌感染率为5.46%,食用聚餐剩菜人员的感染率为9.23%,未食用聚餐食物人员的感染率为0,病人和带菌者分离到的O139霍乱弧菌和甲鱼中菌株的PFGE图谱相同。高发区农村聚餐中使用甲鱼和食品制作生熟不分的比率、人均甲鱼消耗量、甲鱼中O139霍乱弧菌检出率均高于低发区。高发区采取农村集体聚餐卫生指导和管理措施后,农村厨师和就餐人群的卫生习惯改善,未再发现疫情。膜免疫层析法检测病例粪便标本中灵敏度为100%,特异度为95.20%,45份实验室霍乱弧菌培养阳性的甲鱼和外环境标本经二次增菌培养,试纸条检测结果为阴性。结论湖南省1997-2009年的O139霍乱疫情呈低流行水平;O139霍乱疫情的发生主要跟食用被霍乱弧菌污染的水产品特别是甲鱼有关,以农村集体聚餐卫生指导和管理为主的综合性预防控制措施是预防O139霍乱疫情发生的有效措施;膜免疫层析法可适用于各医疗机构的腹泻病门诊患者的快速筛查和评估。     

白山市鸭绿江水体非O1群霍乱弧菌血清分型

目的了解白山市外环境水体中非O1群霍乱弧菌的菌型分布和致病性,掌握其流行规律,为感染性腹泻的控制和防治提供科学依据。方法于2006年4月-2008年8月对鸭绿江水系白山段水体进行了连续定点的监测,并对部分菌株进行了霍乱肠毒素的检测。结果共检测水样200份,检出非O1群霍乱弧菌70株,可以用诊断血清分型的有41株,可分型率为58．57％,未定型29株,占41．43％。分离出携带霍乱肠毒素毒力基因（CT）的非O1群霍乱弧菌5株。结论通过对鸭绿江水系白山段水体的监测,证实该水体中广泛存在着非O1群霍乱弧菌,其血清分型是复杂和分散的。首次分离出携带霍乱肠毒素毒力基因（CT）的非O1群霍乱弧菌。鸭绿江水系中非O1群霍乱弧菌的存在与人们的生活污水排放有密切关系。     

2010年湖南省霍乱弧菌病原学特征及溯源分析

目的分析2010年湖南省霍乱弧菌分离株的病原学特征,比较霍乱疫情分离株与常规监测分离株之间的克隆相关性,追溯传染源。方法对疫情与监测分离到的42株霍乱弧菌进行常规生物分型和PCR检测毒力基因,对23株代表株进行药敏试验,对18株代表株通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析,探讨菌株间的相关性。结果 2010年从湖南省霍乱疫情中分离10株霍乱弧菌均为O139群,ctxA阳性率100%。常规监测分离霍乱弧菌32株,其中O1群15株,全部为ctxA阴性株;O139群17株,ctxA阳性率94.11%。23株霍乱弧菌耐药结果显示强力霉素、复方新诺明的耐药率分别为47.83%、56.52%,发现1株对诺氟沙星、环丙沙星耐药。PFGE方法显示有5种脉冲场凝胶电泳图谱,相似率在82%~100%之间,甲鱼中分离的O139群霍乱弧菌与霍乱疫情分离菌株之间高度同源。结论湖南省霍乱弧菌存在紧密相关的流行克隆群;被O139群霍乱弧菌污染的甲鱼很可能是湖南省霍乱疫情发生的主要传染来源,海、水产品的监测是霍乱防控的重点;要密切关注对诺氟沙星、环丙沙星的耐药变化。     

水产品中霍乱弧菌的监测方法研究

目的:研究水产品中霍乱弧菌的监测方法,及时发现被霍乱弧菌污染的水产品,采取有效防控措施,防范霍乱疫情的发生。方法:用实时荧光PCR法、胶体金法、分离培养法三种方法分别对180份水产品进行霍乱弧菌检测,阳性样品再进行霍乱肠毒素检测。结果:三种方法检出了44份核酸阳性标本,18份霍乱肠毒素阳性标本,分离出8株霍乱弧菌。结论:在进行水产品霍乱监测时,可以先用实时荧光PCR进行初筛,筛出核酸阳性标本,进行霍乱肠毒素检测,及时发现被霍乱产毒株污染的水产品,再对筛出的核酸阳性标本结合胶体金法进行分离培养和分型鉴定,进一步完成霍乱疫情的确证和分析。