氯胺酮对体外缺氧鼠胎大脑神经元乳酸脱氢酶的影响

目的探讨氯胺酮对神经元缺氧损伤时细胞膜通透性的影响。方法应用无血清原代培养鼠胎大脑神经细胞,对神经元进行缺氧结合无糖处理。取培养上清液于缺氧前及缺氧后1、3、5h应用生化法测定细胞外液乳酸脱氢酶(LDH)浓度;基于上述实验,将缺氧1h、5h细胞随机分组,于缺氧处理开始时分别给予1μmol/L、20μmol/L、100μmol/L氯胺酮,于缺氧结束后复氧24h测定细胞外液LDH浓度。结果①缺氧不同时间细胞外液LDH浓度显著高于对照组(P<0.05和P<0.01),各缺氧组之间LDH浓度差异无显著性(P>0.05)。②对于缺氧1h组,给予氯胺酮后,随浓度的增加,LDH的变化无明显规律。③对于缺氧5h组,应用氯胺酮后,随药物浓度增加,各组细胞外液LDH浓度逐渐降低,呈现明显的剂量依赖性,至氯胺酮100μmol/L时基本恢复至对照组水平(P>0.05)。结论氯胺酮可部分稳定神经细胞膜,防止细胞膜通透性的改变,部分抑制缺氧及再灌注所致的LDH流出量的增高     

免疫荧光法和酶联免疫吸附试验对汉坦病毒感染的血清学测定的比较

作者用3种酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光法(IFA)检测102份人血清样品中的汉坦病毒(HV)抗体,并用蛋白印迹法对各种结果进行确证.细胞ELISA:将γ射线照射的HV感染或未感染的VeroE6细胞悬液(10~6细胞/ml)加入微滴板中,用含5%醋酸的乙醇固定,待用.使用时,加入50μl人血清样品,置37℃     

阿克拉霉素A对HeLa细胞核仁及细胞表面超微结构的影响

本文报道用透射电镜及扫描电镜观察国产阿克拉霉素A对HeLa细胞核仁及细胞表面超微结构的影响。阿克拉霉素 A0.5μg/ml处理 10分钟即可见核仁内出现多个核仁纤维中心,继而出现核仁分离及微球体,核仁的这些超微结构改变与该药特异性抑制rRNA生物合成相关。阿克拉霉素A0.5μg/ml作用8小时细胞表面微绒毛消失,继而细胞表面破裂,细胞崩解提示细胞膜可能也是阿克拉霉素作用的靶位之一。     

由转录抑制剂处理的外周血单个核细胞产生的一种新型人体干扰素

外周血单个核细胞(PBMC)在不同的诱生剂作用下能产生两种干扰素(IFN):IFN-α和IFN-γ。作者发现,PBMC经转录抑制剂放线菌素D(ACD)和二呋喃核糖苯并咪唑(DRB)处理后可产生IFN样蛋白(ILP)。用Picoll-Hypaque从正常人外周血中分离出PBMC,用含2%胎牛血清的RPMI1640培养液配成5×10~6/ml悬液,经20μg/ml放线菌酮加5μg/ml ACD或50μg/ml DRB处理1小时,洗去药物后,以1×10~6/ml浓度再悬于预温培养液中,37℃培养过夜。用常规试验检测培养上清液中IFN活性。结果表明,ACD诱生的ILP抗病毒效价     

雷公藤甲素对类风湿性关节炎患者外周血T细胞的免疫抑制作用

目的:研究雷公藤甲素对类风湿性关节炎(RA)患者外周血T细胞免疫功能的抑制作用。方法:在RA患者外周血T细胞中加入T细胞多克隆刺激剂(0.2μg/ml)以活化淋巴细胞并分泌细胞因子。实验分为空白对照(常规培养液)组、抗人CD3抗体(anti-CD3)刺激(0.2μg/ml)组、雷公藤甲素(anti-CD3 0.2μg/ml+雷公藤甲素1 mmol/ml)组。采用密度梯度离心法分离RA患者的外周血单核细胞(PBMCs),加入雷公藤甲素,以酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞γ干扰素(IFN-γ)含量,流式细胞仪检测分泌IFN-γ、白细胞介素(IL)-2、IL-4与T细胞活化分子CD69和CD25的CD4+、CD8+T细胞百分比。结果:与anti-CD3刺激组比较,雷公藤甲素组PBMCs中IFN-γ含量减少,分泌IFN-γ、IL-2、IL-4的CD4+、CD8+T细胞百分比降低,分泌CD69和CD25的CD4+、CD8+T细胞百分比降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:雷公藤甲素可能通过抑制T细胞活化和细胞因子分泌来发挥免疫抑制作用,从而发挥对RA的临床治疗作用。     

制备生产人或鼠抗体的杂交瘤的新方法

作者试验了一种新的高效制备杂交瘤的技术,该技术结合了在人T细胞培养上清中鼠或人B细胞克隆扩增、辐照过的EL-4作为辅助细胞以及扩增的B细胞微电融合等方法。将分离出的T细胞悬于含10% FCS的DMEM/HAM’S F12培养液中,加5μg/ml     

阿克拉霉素B、阿霉素和小檗碱对人外周血NK细胞活性影响的初步研究

本文研究了阿克拉霉素B、阿霉素和小檗碱对人外周血NK细胞活性的影响.NK细胞活性由测定~(51)Cr从NK细胞作用的标记K562细胞的释放率来决定.阿克拉霉素B(0.5和1.Oμg/ml),阿霉素(0.5和1.0μg/ml)和小檗碱(1.0和10μg/ml)作用1小时后,未见对NK细胞活性有显著影响,提示三个药物可能即不明显抑制也不促进NK细胞的细胞毒作用.阿克拉霉素B和小檗碱在高浓度时表现轻微的促进作用,但阿霉素有轻微抑制作用.三个药物均有不同程度地增加靶细胞~(51)Cr的自然释放率,以阿霉素最强,提示有细胞膜毒性产生.因而尚难肯定阿克拉霉素B和小檗碱的NK细胞活性促进作用.     

白细胞介素6对甲状腺细胞钠/碘转运体的基因调控

目的研究白细胞介素6(IL-6)对甲状腺滤泡细胞膜上钠/碘转运体(NIS)基因表达的影响,探讨细胞因子在甲状腺生理功能调控和甲状腺疾病发病机制中的作用和地位。方法取Graves病(GD)患者的甲状腺组织,进行甲状腺细胞原代培养,培养5d后,吸去培养液,换用含不同浓度IL6的试验液,与单层培养的滤泡上皮细胞共同孵育48h,运用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术检测NISmRNA表达的变化。结果IL-6浓度在0U/ml、1U/ml时,GD甲状腺滤泡上皮细胞膜上NISmRNA表达无明显差异;IL-6浓度在10U/ml、100U/ml时,NIS基因表达比前一浓度时明显受抑制(P<0.05),且高浓度比低浓度抑制更加明显;IL-6浓度为1000U/ml时,NIS基因表达量与前一浓度比较无统计学差别。结论IL6可抑制甲状腺滤泡细胞基底膜上NIS基因的表达,提示细胞因子IL-6的浓度不同在甲状腺生理功能调控中发挥的作用也不同。     

黄芪甲苷Ⅳ联合紫杉醇通过STAT3-NF-κB途径对胃癌细胞的作用研究

目的探讨黄芪甲苷Ⅳ联合紫杉醇对胃癌细胞的作用及其可能的机制。方法黄芪甲苷Ⅳ和紫杉醇按给药剂量分为0μg/ml组、5μg/ml组、10μg/ml组、20μg/ml组、40μg/ml组、80μg/ml组和160μg/ml组处理胃癌细胞AGS。CCK-8试剂盒检测细胞活力;集落形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2和STAT3-NF-κB途径相关蛋白的表达;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果黄芪甲苷Ⅳ在20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml和160μg/ml浓度下可明显抑制AGS细胞活力,黄芪甲苷Ⅳ IC_(50)=63.99μg/ml;紫杉醇在10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml和160μg/ml浓度下可明显抑制AGS细胞活力,紫杉醇IC_(50)=40.08μg/ml。与对照组相比,黄芪甲苷Ⅳ组、紫杉醇组和联合组的细胞活力、克隆形成数、细胞迁移和侵袭数明显降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达明显升高(P<0.05),Bcl-2、pSTAT3/STAT3和pNF-κB/NF-κB蛋白表达明显降低(P<0.05);与联合组比较,黄芪甲苷Ⅳ组和紫杉醇组的细胞活力、克隆形成数、细胞迁移和侵袭数明显升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达明显降低(P<0.05),Bcl-2、pSTAT3/STAT3和pNF-κB/NF-κB蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论黄芪甲苷Ⅳ联合紫杉醇可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,该作用可能是通过抑制STAT3-NF-κB途径实现的。     

抗ErbB2嵌合抗体chA21对SKBR3细胞的增殖抑制以及对PI3K/Akt和Erk1/2信号转导途径的影响

目的检测抗ErbB2嵌合抗体chA21对高表达ErbB2乳腺癌细胞SKBR3的增殖抑制作用,并分析抗体对细胞膜上ErbB2分布以及对细胞PI3K/Akt和Erk1/2信号转导途径的影响,探讨chA21的抑癌机制。方法采用MTT检测chA21对SKBR3的增殖抑制作用,流式细胞术检测经chA21处理后细胞膜上ErbB2抗原的分布变化,Western blot检测抗体作用后对细胞PI3K/Akt和Erk1/2信号转导途径的影响。结果chA21可抑制SKBR3细胞的增殖,其作用呈剂量和时间依赖性。抗体作用后可下调细胞膜上ErbB2含量,并不同程度下调细胞的PI3K/Akt和Erk1/2的活化水平。结论chA21可抑制SKBR3细胞增殖,可能通过下调细胞膜上ErbB2分布而减少其介导的PI3K/Akt和Erk1/2信号转导途径的活化来实现的。     

噻替派(Thiotepa)滴眼液对人癌细胞和正常细胞的细胞毒作用

目的 了解0.05%Thiotepa滴眼液对各种不同的人癌细胞和正常细胞生长的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法进行体外细胞毒试验,测定Thiotepa滴眼液对人癌细胞和正常细胞的生长抑制作用,以半数抑制浓度(IC50值)进行评价.结果 Thiotepa滴眼液在50μg/ml～0.78μg/ml浓度下对人癌细胞Glc-82、K-562、Bel-7402、Hela和CNE2的IC50值依次为:22.7μg/ml、10.6μg/ml、15.3μg/ml、11.2μg/ml和9.6μg/ml.对人正常细胞Hk-293、ECV-304、HRPE、Fibro和小鼠3T3细胞的IC50值分别为:1.4μg/ml、12.5μg/ml、17.8μg/ml、36.6μg/ml和14.4μg/ml.结论 Thiotepa滴眼液对各种细胞有明显的生长抑制作用;0.05%Thiotepa滴眼液对各种人癌细胞和正常细胞均有强的细胞毒作用,且对人癌细胞无明显的选择性抑制作用.     

N-(3’,4’,5’-三甲氧基肉桂酰)邻氨基苯甲酸对抗原诱发的离体豚鼠回肠收缩、大鼠肥大细胞脱颗粒及组胺释放的影响

实验证明 N-(3′,4′,5′-三甲氧基肉桂酰)邻氨基苯甲酸(TOA)管内浓度80μg/ml 能明显抑制抗原诱发的主动致敏豚鼠离体回肠收缩。TOA 管内浓度25和50μg/ml 能显著抑制亲同种细胞抗体介导的大鼠肠系膜肥大细胞脱颗粒和腹腔肥大细胞组胺释放。     

黄芪甲苷IV联合紫杉醇通过STAT3-NF-κB途径对胃癌细胞的作用研究

目的 探讨黄芪甲苷IV联合紫杉醇对胃癌细胞的作用及其可能的机制.方法 黄芪甲苷IV和紫杉醇按给药剂量分为0μg/ml组、5μg/ml组、10μg/ml组、20μg/ml组、40μg/ml组、80μg/ml组和160μg/ml组处理胃癌细胞AGS.CCK-8试剂盒检测细胞活力;集落形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞...     

N—（3′，4′，5′—三甲氧基肉桂酰）邻氨基苯甲酸对抗原诱发的离体豚鼠回肠收缩、大鼠肥大细胞脱颗粒及组胺释放的影响

实验证明N－（3′，4′，5′－三甲氧基肉桂酰）邻氨基苯甲酸（TOA）管内浓度80μg/ml能明显抑制抗原诱发的主动致敏豚鼠离体回肠收缩。TOA管内浓度25和50μg/ml能显著抑制亲同种细胞抗体介导的大鼠肠系膜肥大细胞脱颗粒和腹腔肥大细胞组胺释放。     

对氢氧化铝和磷酸钙作为疫苗佐剂时的毒性研究

作者配制了3mg/ml的氢氧化铝凝胶(Al-gel)、氢氧化铝悬液(Al—SUS)、磷酸钙凝胶(Ca-gel)和磷酸钙悬液(Ca-SUS)作为试验材料。通过测定血管通透性来评价它们引起水肿的程度,即在豚鼠静脉注射含1％伊文斯蓝的生理盐水后立即皮内注射试验材料,5小时后从皮内切除注射部位的伊文斯蓝块,在620nm下测定光吸收值,以表示血管通透性强度。     

婴儿期接种b型流感杆菌-破伤风类毒素结合菌苗的6岁儿童的血清抗体

作者采用对照试验研究瑞典的6岁儿童在3、5和12月龄时接种b型流感杆菌结合菌苗一破伤风类毒素(Hib-TT)后的血清Hib抗体持久性,并比较免疫儿童和未免疫儿童体内的Hib抗体浓度.作者于1987年用Hib-TT接种85名婴儿(分别于 3、5和 12月龄时接种),其中40名婴儿每剂接受7.5μg的Hib荚膜多糖.另45名则接受15μg的Hib.结果显示,30个月时两组的Hib抗体几何平均浓度(GMC)分别为0.92μg/ml和1.69μg/ml,97%的儿童的抗体浓度高于推荐的保护水平(0.15μg/ml),51%的儿童的抗体浓度高于1.0μg/ml.作者在这些儿童6岁时对其中的70岁儿童进行Hib抗体检测,并挑选85名未接种过Hib-TT且未感染过Hib的儿童作对照.     

蛇葡萄素钠对人膀胱癌EJ细胞增殖的抑制作用

目的:研究蛇葡萄素钠(AMP-Na)对人膀胱癌EJ细胞增殖的抑制作用。方法:体外传代培养EJ细胞。以25、33、43.5、57.4、75.8、100μg/ml AMP-Na培养细胞24、48、72 h后,采用MTT法测定细胞活力并计算抑制率。以0、43.5、57.4、75.8μg/ml AMP-Na与2μg/ml顺铂培养细胞24 h后,采用流式细胞仪检测细胞数并计算细胞凋亡率与细胞周期分布。以0、43.5、57.4、75.8μg/ml AMP-Na与2μg/ml顺铂培养细胞24、48 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法测定细胞中Cyclin D1 m RNA的表达。结果:以25、33、43.5、57.4、75.8、100μg/ml AMP-Na培养细胞24、48、72 h后对细胞具有明显抑制作用,且呈明显的时间依赖关系。以57.4、75.8μg/ml AMP-Na培养细胞24、48 h后在G0/G1峰之前出现凋亡峰;以75.8μg/ml AMP-Na培养细胞24 h与43.5、75.8μg/ml培养细胞48 h后,Cyclin D1 m RNA的表达减弱(P<0.05)。结论:AMP-Na能高效抑制EJ细胞的增殖并促进其凋亡,其机制可能与诱导细胞凋亡、下调Cyclin D1 m RNA表达以及使细胞周期阻滞于G0/G1期有关。     

匹多莫德影响小儿辅助T细胞亚群功能的体外研究

目的探讨匹多莫德对小儿辅助T细胞亚群功能的影响。方法常规分离新生儿脐血单个核细胞(CBMC)和毛细支气管炎患儿外周血单个核细胞(PBMC),加入匹多莫德,ELISA检测培养上清中的IL鄄4、IFN鄄γ、IL鄄10和IL鄄12水平。结果匹多莫德可显著下调PHA诱导的CBMCIL鄄4分泌,上调LPS诱导的IL鄄12p40和IL鄄12p70的分泌;匹多莫德诱导毛细支气管炎患儿PBMC产生IFN鄄γ,恢复患儿体内相对亢进的Th2细胞功能,单独匹多莫德诱导毛细支气管炎患儿PBMC产生较高水平的IL鄄12p70(135±44pg/ml,n=9),较低水平的IL鄄10(52±16pg/ml,n=9)。结论匹多莫德具备调节Th1/Th2细胞功能平衡的能力,其机制可能与匹多莫德作用于抗原提呈细胞,刺激IL鄄12产生有关。     

磁标记骨髓间充质干细胞的实验研究

目的探讨不同时间及浓度超顺磁性氧化铁(SPIO)标记大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)标记效率、标记后细胞活力等情况,寻找最佳标记浓度和时间。方法配制含不同浓度SPIO培养基,加入MSCs孵育,于标记后不同时间行铁染色、细胞活力、铁含量测定。结果细胞活力检测显示标记1d和3d时,0μg/ml组与25μg/ml组,0μg/ml组与50μg/ml组,25μg/ml组与50μg/ml组的细胞拒染率差异无统计学意义(P>0.05)。铁含量测定显示标记浓度在50μg/ml,标记时间3d时铁含量最高。结论50μg/ml浓度,标记3d不仅标记效率高对细胞活力无影响,而且细胞内铁含量最多,为最佳标记浓度和时间。     

蛇葡萄素钠协同卡铂对人肺腺癌GLC-82细胞增殖的抑制作用

目的:研究蛇葡萄素钠(AMP-Na)协同卡铂对人肺腺癌GLC-82细胞增殖的抑制作用。方法:以25、50、100μg/ml AMP-Na,3.12、6.25、12.5、25、50μg/ml卡铂,25、50、100μg/ml AMP-Na+3.12、6.25、12.5、25、50μg/ml卡铂作用于GLC-82细胞48h,采用MTT法测定细胞增殖抑制率。以25μg/ml卡铂,12.5、25、50、100μg/ml AMP-Na,12.5、25、50、100μg/ml AMP-Na+25μg/ml卡铂作用于细胞48 h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:25~100μg/ml AMP-Na对GLC-82细胞的增殖具有抑制作用,且呈浓度依赖性。25μg/ml卡铂与AMP-Na(12.5、25、50、100μg/ml)对GLC-82细胞增殖的抑制作用较单用卡铂增强。结论:AMP-Na单用对GLC-82细胞的增殖具有一定的抑制作用;与卡铂合用,对GLC-82细胞增殖具有协同抑制效应。