黄芩苷对非白念珠菌生物膜抑制作用的研究

目的:研究黄芩苷对光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌等非白念珠菌生物膜的影响.方法:96孔微量培养板上构建4种非白念珠菌生物膜;微量稀释法检测黄芩苷对4种非白念珠菌最低抑菌浓度(MIC);XTT减低法评价黄芩苷对4种非白念珠菌生物膜SMIC及菌细胞黏附性的影响.结果:4种非白念珠菌在96孔板中可形成成熟的生物膜;黄芩苷对4种非白念珠菌MIC分别是125,250,125,62.5 mg·L~(-1);黄芩苷对4种非白念珠菌生物膜的SMIC50分别是＞1 000,500,125,250 mg·L~(-1);SMIC80均大于或等于1 000 mg·L~(-1).黄芩苷对4种非白念珠菌的黏附有一定的抑制效应.结论:黄芩苷对近平滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌生物膜有较强的抑制作用.     

黄苓苷体外抗白念球菌生物膜作用的研究

目的 研究黄芩苷对体外白念珠菌生物膜的影响.方法 采用XTT减低法评价黄芩苷对白念珠菌的生物膜及黏附性的影响;镜下观察该药对白念珠菌生物膜的形态学影响:细胞毒试验检测该药的毒副作用.结果 各黄芩苷对白念珠菌生物膜的SMIC50、SMIC80分别是1 000μg/ml、2 000 μg/ml;2 000μg/ml及200μg/ml的黄芩苷对白念珠菌的早期黏附及菌丝生长有抑制作用:黄芩苷对人细胞毒性较弱.结论 黄芩苷对体外白念珠菌生物膜有较强的抑制作用.     

黄芩苷体外抗白念珠菌生物膜作用的研究

目的研究黄芩苷对体外白念珠菌生物膜的影响。方挂采用XTT减低法评价黄芩苷对白念珠菌的生物膜及黏附性的影响；镜下观察该药对白念珠菌生物膜的形态学影响；细胞毒试验检测该药的毒副作用。结果 各黄芩苷对白念珠菌生物膜的SMIC50、SMIC80分别是1000μg／ml、2000μg／ml;2000μg／ml及200μg／ml的黄芩苷对白念珠菌的早期黏附及菌丝生长有抑制作用；黄芩苷对人细胞毒性较弱。结论 黄芩苷对体外白念珠菌生物膜有较强的抑制作用。     

没食子酸抑制白念珠菌生物膜作用的研究

目的:研究没食子酸对体外白念珠菌生物膜的影响.方法:采用XTT减低法评价没食子酸对白念珠菌的生物膜及黏附性的影响;镜下观察没食子酸对白念珠菌生物膜的形态学影响;细胞毒试验检测该药的毒副作用.结果:没食子酸抑制白念珠菌生物膜最低药物浓度SMIC_(50),SMIC_(80)分别是500,1 000 mg·L~(-1);100,1 000 mg·L~(-1) 的没食子酸对白念珠菌的早期黏附及菌丝生长有抑制作用;没食子酸对人细胞毒性较弱.结论:没食子酸对体外白念珠菌生物膜有较强的抑制作用.     

知母合剂对白念珠菌的黏附抑制作用

目的探讨抗真菌中药复方(知母合剂)对白念珠菌的黏附抑制作用。方法将知母合剂配成高、中、低3个浓度(3组浓度依次为:10,5,2.5 mg/ml),分别对白念珠菌标准菌株(ATCC14053、CCCMCla)和临床分离菌株(C1-1、C1-4)预处理,再加入从人口腔黏膜分离的上皮细胞,37℃孵育1 h,观察药物对白念珠菌不同菌株的黏附作用及药物浓度对菌株黏附作用的影响。结果知母合剂对ATCC14053、CCCMCla和C1-1、C1-4 4株试验菌均具有黏附抑制作用,而且药物对不同菌株黏附上皮细胞的抑制作用具有显著性差异(P<0.001),对标准菌株(ATCC14053、CCCMCla)黏附抑制作用较强,对临床分离菌株(C1-1、C1-4)的黏附抑制作用较弱;抑制作用的强弱与药物浓度呈正相关,尤其对C1-4的黏附作用具有显著影响,高浓度药物组黏附细胞数最少(黏附抑制作用强),其次是中浓度药物组,空白对照组黏附细胞数最多,四组间该指标总的差别有统计学意义(P<0.001)。结论知母合剂能明显抑制白念珠菌标准菌株(ATCC14053、CCCM-Cla)和临床分离菌株(C1-1、C1-4)对口腔黏膜上皮细胞的黏附作用,抑制作用的强弱因菌株不同而具有显著差异并与药物浓度密切相关。     

黄芩苷对人肺腺癌A549细胞的体内外研究

目的:探讨黄芩苷在体外对人肺癌A549细胞增殖、侵袭、迁移、对脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)新生血管形成的影响,在体内对A549细胞裸鼠移植瘤的作用.方法:调整细胞密度为1×104/mL,应用25,50,100,200,400 μmol·L-1黄芩苷作用于A549细胞24,48,72 h,采用MTT法检测黄芩苷对A549细胞的增殖抑制作用;Transwell小室法观察12.5,25,50μmol·L-1黄芩苷对A549细胞侵袭及迁移的影响;小管形成实验观察12.5,25,50μmol·L-1黄芩苷对HUVEC小管形成的影响;将A549细胞移植瘤裸鼠分为黄芩苷高剂量组(100 mg·kg-1)、黄芩苷低剂量组(50 mg·kg-1)、溶剂对照组、顺铂组(1 mg· kg-1),前3组通过ig方式给予,连续21 d;顺铂组ip连用10 d.观察黄芩苷对A549细胞裸鼠移植瘤的作用.结果:①黄芩苷能抑制A549细胞增殖,其增殖抑制率与药物浓度及作用时间呈依赖性,24,48,72 h的IC50分别为100.77,75.02,55.81 μmol·L-1.②25,50μmol·L-1黄芩苷能抑制A549细胞的侵袭及迁移,从而抑制癌细胞转移.③25,50μmol·L-1黄芩苷能抑制HUVEC小管生成,与对照组比较具有统计学意义(P＜0.05).④体内实验表明50 mg·kg-黄芩苷对A549细胞移植瘤具有一定的抑制作用.结论:黄芩苷体外可以抑制A549细胞的增殖、侵袭、迁移,抑制HUVEC小管形成,体内对A549细胞裸鼠移植瘤具有一定的抑制作用.     

黄连解霉汤及其单味药对体外白念珠菌生物膜影响的比较

目的 比较黄连解毒汤及其单味药在体外对白念珠菌生物膜的影响.方法 采用MTT法评价白念珠菌的悬浮菌及生物膜对黄连解毒汤及其单味药敏感性;药物预先包被对白念珠菌生物膜形成的影响.结果 黄柏、黄芩对自念珠菌悬浮菌的MIC50、MIC90以及对白念珠菌生物膜的SMIC50、SMIC90与黄连解毒汤的接近:黄连MIC50、MIC90、SMIC50、SMIC90明显低于复方、黄柏、黄芩;复方、黄连、黄柏、黄芩预先包被96孔板对白念珠菌生物膜形成有一定的抑制作用;栀子对白念珠菌悬浮菌与生物膜均无明显抑制作用.结论 黄柏、黄芩对体外白念珠菌生物膜的抑制作用与黄连解毒汤相近,黄连的抑制作用更明显.     

黄连解毒汤联合氟康唑对耐药白念珠菌麦角甾醇的影响

目的:探讨黄连解毒汤乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Huanglian Jiedu decoction,EAHD)联合氟康唑(fluconazole,FLZ)对耐药白念珠菌生物膜麦角甾醇的影响。方法:采用CLSI M27-A3的微量稀释法测定EAHD与FLZ对白念珠菌FLZ耐药株的MIC与SMIC80;棋盘稀释法测定EAHD与FLZ联用对白念珠菌的协同效应;稀释涂布平板法考察EAHD与FLZ联用不同时间对菌体的杀伤作用;分别用HPLC和qRT-PCR法检测耐药白念珠菌生物膜麦角甾醇含量及相关基因的变化。结果:对于9株白念珠菌FLZ耐药株,EAHD对其MIC介于156~1 250 mg·L-1,FLZ对其MIC介于256~2 048 mg·L-1以上,二者联用后MIC显著降低,FICI(部分抑菌浓度指数)最低达0.066;EAHD单用对其SMIC80均高于1 250 mg·L-1,FLZ单用对其SMIC80均高于512 mg·L-1,最高可达2 048 mg·L-1以上,联用组除个别组具有相加作用外也均有协同效应。时间杀菌(time kill,TK)实验显示当作用12 h,二者联用杀菌效应最强。HPLC结果显示联用组、EAHD组与空白组麦角甾醇量相比,分别降低了近85%,50%。qRT-PCR检测FLZ组ERG1,ERG2,ERG6,ERG7,ERG11均上调,ACS1,ACS2,MET6均下调;EAHD组所有基因均下调;联用组ERG2,ERG6,ERG11均显著上调,ERG1,ERG7,ACS1,ACS2,MET6均显著下调。结论:EAHD协同FLZ抗白念珠菌耐药株,可能与抑制麦角甾醇合成相关基因的表达来降低麦角甾醇的合成有关,造成细胞膜损伤,抑制菌体生长。     

黄芩苷体外对白念珠菌凋亡的影响

目的探讨中药有效成分黄芩苷对白念珠菌凋亡的影响。方法采用Hoechst33258染色荧光显微镜检测白念珠菌细胞凋亡的形态;Rh123染色流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化;DHR染色流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果 1 000,100μmol/L的黄芩苷能诱导白念珠菌细胞核固缩与碎裂,并降低白念珠菌MMP;1 000,100,10μmol/L的黄芩苷均能提高细胞内ROS水平。结论黄芩苷可通过线粒体途径诱导白念珠菌凋亡。     

白头翁汤正丁醇提取物对碱性pH条件下白念珠菌VVC临床株形态转化的影响

目的:探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng decoction,BAEB)在碱性条件下对白念珠菌VVC(vulvovaginal candidiasis)临床分离株酵母-菌丝形态转化的影响。方法:采用肉汤稀释法测定白头翁汤不同溶剂萃取物对VVC临床株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);倒置显微镜观察不同p H环境下VVC临床株形态;采用XTT还原法评价在p H 8.0时菌丝活性;扫描电镜观察白念珠菌菌丝形态;荧光显微镜观察菌体代谢活力;固体培养基上观测菌落形态;半固体培养基上观察菌丝侵袭能力;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测菌丝特异性基因ALS3,CSH1,SUN41,HWP1和Ca PDE2的表达量。结果:白头翁汤正丁醇提取物(BAEB)对VVC临床株的MIC为64~128 mg·L-1,低于总提取物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物和水提取物的MIC;p H 8.0时VVC临床株的菌丝形成能力最强;扫描电镜结果显示512,1 024 mg·L-1的BAEB明显抑制VVC临床株的形态转化,荧光显微镜结果显示1 024 mg·L-1的BAEB可以降低VVC临床株的代谢活性;512,1 024 mg·L-1BAEB浓度的固体菌落未出现褶皱,1 024 mg·L-1BAEB浓度的半固体培养基内部未见菌丝侵袭;qRT-PCR检测显示1 024 mg·L-1时,ALS3,CSH1,SUN41,HWP1分别下调4.26,3.2,2.74,5.12倍,Ca PDE2上调2.38倍。结论:BAEB在碱性p H条件下对白念珠菌VVC临床株的形态转化具有抑制作用。     

龙胆泻肝汤不同提取部位对白念珠菌生物膜的抑制作用研究

目的： 观察龙胆泻肝汤提取物体外对白念珠菌生物膜形成影响,探讨其可能的作用机制。方法：采用XTT法和微量稀释法筛选龙胆泻肝汤各提取部位的抗菌活性并检测各提取物对白念珠菌生物膜的抑制作用。采用实时荧光定量PCR法检测其黏附相关基因ALS1和菌丝形成基因SUN41的表达量。结果：龙胆泻肝汤用石油醚、水、正丁醇、甲醇及乙酸乙酯提取部位对白念珠菌浮游菌的MIC分别为>1 000,>1 000,>1 000,125,125 mg·L^-1;对白念珠菌生物膜的SMIC₅₀分别为>1 000,>1 000,>1 000,500,500 mg·L^-1;SMIC₈₀分别为>1 000,>1 000,>1 000,>1 000,1 000 mg·L^-1;1 000 mg·L^-1的乙酸乙酯提取物能明显抑制黏附相关基因ALS1和菌丝形成基因SUN41的表达。结论：龙胆泻肝汤抗白念珠菌生物膜的活性部位为乙酸乙酯提取部位。     

藜蒿叶水提物对白色念珠菌的抗菌效应及强化措施

目的:研究醇沉处理和中药配伍对藜蒿叶水提物抑制白色念珠菌生长作用的影响。方法:采用微量液基稀释法测定不同醇沉浓度纯化处理后的藜蒿叶水提物对白色念珠菌的抑制作用,包括对其菌体生长量、生物膜形成、芽管生成作用等方面的影响,并考察中药配伍对藜蒿叶水提物抗白色念珠菌活性的影响。结果:醇沉处理可显著降低藜蒿叶水提物对白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC),醇沉浓度90%处理使MIC80(下降80%的药物质量浓度)由200 g·L~(-1)降至8 g·L~(-1),同时增强了其对白色念珠菌芽管生成和生物膜形成作用的抑制效果;在选取的18种常见植物药材中,薰衣草、黄芩、莪术对藜蒿叶水提物表现出了显著的抑菌增效作用(部分抑制浓度指数0.5),与黄芩联用时藜蒿叶水提物的MIC80最小,达0.60 g·L~(-1)。结论:醇沉处理和中药配伍可显著提高藜蒿叶水提物对白色念珠菌的抑菌效果,为藜蒿副产物资源的综合利用提供参考。     

京万红组方成分体外抗白色念珠菌抑菌效应探讨

目的:研究京万红组方成分中盐酸小檗碱、黄芩苷及冰片的体外抗白色念珠菌作用。方法:以白色念珠菌为研究对象,K-B纸片扩散法分别测定50,100,150 g·L^-1的盐酸小檗碱、黄芩苷、冰片及制霉菌素药液抑菌圈直径;采用试管双倍稀释法和棋盘法,测定盐酸小檗碱、黄芩苷、冰片、制霉菌素分别最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),测定盐酸小檗碱、黄芩苷、冰片两两联用及3种组分联用的MIC,计算出联合抑菌分数(FIC)。结果:盐酸小檗碱、黄芩苷、冰片MIC分别为160,1 280,320 mg·L^-1;MBC分别为640,20 480,640 mg·L^-1。盐酸小檗碱与黄芩苷联用FIC指数0.5,为协同作用;黄芩苷与冰片联用FIC指数为0.625,为相加作用;盐酸小檗碱与冰片联用FIC指数为0.5,为协同作用。3种组分药物联合使用FIC指数为0.375,有一定的协同作用。结论:盐酸小檗碱、黄芩苷、冰片对白色念珠菌均有抑制作用,且3种组分药物联合使用具有一定的协同作用。     

The effect of Dodonaea viscosa var. angustifolia on Candida albicans proteinase and phospholipase production and adherence to oral epithelial cells

Aim of the study

This study investigated effect of a crude extract of Dodonaea viscosa on the proteinase and phospholipase production and adherence to epithelial cells by Candida albicans isolated from HIV positive and HIV negative patients.

Materials and methods

Twenty Candida albicans strains isolated from HIV positive and 20 from HIV negative patients were investigated. The isolates were exposed to subinhibitory concentration of crude plant extract and adherence, proteinase and phospholipase production were assessed. The results were analysed using Student's t-test and a two-way ANOVA.

Results

Dodonaea viscosa var. angustifolia inhibited the adherence of Candida albicans to oral epithelial cells (p = <0.01) but no significant effect of the plant extract on proteinase and phospholipase production was observed. Results from Candida albicans strains isolated from HIV positive and HIV negative patients were similar.

Conclusions

Dodonaea viscosa var. angustifolia inhibited the adherence of Candida albicans to oral epithelial cells, which is the initial step of colonization in the infection process. This plant has a therapeutic potential at subinhibitory concentration.     

外源生长素对黄芩悬浮细胞有效成分和内源激素含量的影响

目的:探讨外源生长素对黄芩悬浮细胞有效成分和内源激素含量的影响。方法:将稳定继代的黄芩愈伤组织在含有不同浓度NAA或KT的MS液体培养基悬浮震荡培养,光照16 h黑暗8 h进行培养18 d后,采用HPLC的方法,测定黄芩苷的含量,采用酶联免疫吸附法测定内源激素的含量,以黑暗条件为对照。结果:①与对照组相比,光照和黑暗条件下分别加入0.2 mg.L-1NAA后,黄芩苷含量显著降低,分别为未加入NAA时的2.56%,3.36%。②黑暗条件下,加入外源NAA后,ZR含量显著降低,但IAA,ABA和GAs含量变化不明显。③0.2 mg.L-1 NAA和不同浓度KT的协同作用对黄芩苷的含量呈现先增长后降低的趋势。其中1.0 mg.L-1的KT作用下黄芩苷含量最高,且黑暗条件下显著高于光照条件,达到2.13μg.L-1。结论:外源生长素不利于黄芩有效成分黄芩苷的积累,0.2 mg.L-1 NAA+1.0 mg.L-1 KT的组合对黄芩苷的积累量具有显著的促进作用。     

PEG胁迫对黄芩黄酮类有效成分积累及相关基因表达的影响

目的:研究不同程度PEG胁迫对黄芩悬浮细胞中黄芩苷、黄芩素的积累及相关基因表达的影响.方法:采用HPLC法检测黄芩悬浮细胞中黄芩苷、黄芩素的含量,用酶标仪检测细胞内游离脯氨酸含量,并用半定量RT-PCR的方法对相关基因的表达进行分析.结果与结论:黄芩悬浮细胞内游离脯氨酸含量随PEG胁迫浓度升高而升高,10％ PEG胁迫黄芩悬浮细胞可以模拟干旱条件,提高悬浮细胞PAL基因表达量且会促进黄芩素的积累.20％ PEG胁迫提高了UBGAT基因的表达量,但同时APX酶活性的提高抑制了黄芩素参与清除活性氧,导致了黄芩素向黄芩苷的转化.     

光照对黄芩黄酮类活性成分积累及其相关基因表达的影响

目的:研究光照对黄芩悬浮细胞中黄芩苷、黄芩素的积累及相关基因表达的影响。方法:采用HPLC法检测黄芩悬浮细胞中黄芩苷、黄芩素的含量,应用半定量RT-PCR的方法对相关基因的表达进行分析。结果:光照对黄芩悬浮细胞中有效成分的积累有显著的促进作用,与黑暗条件相比,细胞生长13 d后黄芩苷含量显著增长了806.1%,黄芩素含量显著增长了42.5%,PAL基因在光照条件下的转录水平高于在黑暗条件,光照条件下UBGAT同黄芩素显著相关(r=-0.995)。结论:光诱导对黄芩悬浮细胞中有效成分的积累有显著的促进作用,光诱导刺激了与有效成分的积累相关基因(PAL,UBGAT)的表达。     

穿心莲内酯对白念珠菌生物膜分散的影响

随着真菌感染日渐增多,白念珠菌的防治成为当前抗真菌感染的重点。该研究拟探讨中药单体穿心莲内酯（AG）对白念珠菌生物膜分散的影响。实验以微孔板结合医用导管片构建白念珠菌生物膜模型,分别通过XTT减低法和平板法发现1 000,500,250 mg·L^-1AG能不同程度的影响白念珠菌生物膜分散细胞的活性;以扫描电镜观察导管片残余生物膜形态结构,发现1 000,500,250 mg·L^-1AG能剂量依赖性的诱导白念珠菌生物膜的分散,且分散出的细胞以酵母相为主;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测发现AG使HSP90表达上调,使UME6和PES1表达下调。该研究表明AG能一定程度的诱导白念珠菌生物膜分散。     

不同浓度的外源激素对黄芩愈伤组织的生物量和黄芩苷含量的影响

目的:探索有利于黄芩愈伤组织的诱导和次生代谢物积累的激素组合.方法:在培养基中添加不同浓度的外源激素,测定愈伤组织的生物量及采用高效液相色谱法测定黄芩愈伤组织中黄芩苷的含量,流动相为甲醇-水-磷酸(47∶ 53∶0.2),流速1 mL·min-1,检测波长280 nm,室温.结果:采用6-BA 1.5 mg· L-1 +NAA0.5 mg· L-1诱导培养的黄芩愈伤组织中黄芩苷含量较高,达到49.78 mg·g-1,生物量为29.34 g/瓶.结论:通过筛选适宜的外源激素组合可以促进黄芩愈伤组织生物量的提高和次生代谢物黄芩苷的积累.     

飞龙掌血乙醇提取物对白色念珠菌抑菌作用的研究

目的:研究飞龙掌血乙醇提取物体外抑制白色念珠菌生长作用,为进一步开发根管消毒新药提供理论依据.方法:微量肉汤稀释法确定飞龙掌血乙醇提取物体外抑制白色念珠菌生长的最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC);常规扫描电镜制样,观察细菌细胞形态的变化;采用RT-PCR技术获得互补DNA,PCR技术扩增白色念珠菌毒力因子SNF2和PDE2基因片段,产物进行电泳分析.结果:飞龙掌血乙醇提取物对白色念珠菌的最小抑菌浓度为7.5 g·L-1,最小杀菌浓度为15.0 g·L-1;扫描电镜观察药物作用后菌体呈现不规则形态,表面有明显的凹陷、裂痕;随着药物浓度增加,毒力因子SNF2和PDE2的表达量呈明显下降趋势.结论:飞龙掌血乙醇提取物对白色念珠菌有较好的抑菌活性;推断该药物是通过抑制或干扰毒力因子SNF2和PDE2转录过程的表达,从而抑制致病性菌丝形态的形成及破坏细菌细胞壁的完整性,达到抑菌作用.