ABO反定型免疫胶体金试剂的初步研制与评估

目的血型鉴定正确是临床输血安全的前提。文中对一种新研制的ABO反定型免疫胶体金试剂进行评估。方法应用胶体金标记A、B和O型红细胞膜抗原,制备ABO反定型免疫胶体金试剂;利用试管法和微量板法对其特异性、亲和力、稳定性、灵敏度及准确率进行评估。结果本试剂的特异性和亲和力均符合常规使用要求,且稳定性高,可在2～8℃储存1年,其灵敏度与传统反定型红细胞相当。对809份临床样本进行血型反定型检测,准确率达99.5%。结论 ABO反定型免疫胶体金试剂可以用于常规血型鉴定。     

IgM/IgG型抗P1致正反定型不符1例

1临床资料 无偿献血者,女性,29岁,首次献血.初检以血型正定型为B型,反定型中与A、B和O型试剂红细胞凝集(强度分别为4+、1+和±),与自身红细胞不凝集送检. 按照《全国临床检验操作规程》[1]复检,结果同上.该献血者红细胞其他血型表型:CcDee,MN.直抗:阴性.反定型中与O型试剂红细胞凝集,提示血清中可能存在ABO血型外不规则抗体.以10个0型谱细胞进行抗体鉴定试验,该献血者血清与1、2、3、4、5、7和8号P1型谱细胞在盐水及抗人球蛋白介质中均出现凝集,而与6、9、10号非P1型谱细胞不凝集,该反应格局表明献血者血清中存在IgM及IgG型抗P1.     

醛化法制备试剂红细胞的方法与探讨

试剂红细胞是检查红细胞血型抗体必要的红细胞试剂。试剂红细胞包括ABO反定型用的试剂红细胞各种筛选红细胞、各种谱细胞及特殊或稀有红细胞[1]在日常工作中随时可能发现有用的稀有红细胞。在红细胞血型抗体研究和检查红细胞抗体等方面，这些红细胞血型抗原十分宝贵，也是难得的必备工作试剂现在国内使用的试剂红细胞是用新鲜血配制的ABO反定型用的红细胞，只能用豆周。这对于医院血库及采血点检测ABO反定型带来诸多不便。为了解决这个问题，笔者根据本实验室的条件研究了应用成二醛固定红细胞抗原的方法，稳定红细胞膜上的血型抗原并加…     

血型反定型微孔板实验中红细胞浓度的影响

目的运用血型自动化检测技术探讨不同红细胞浓度对反定型微孔板检测结果的影响。方法 130份O型无偿献血者血浆分别与不同浓度（2%、3%、4%5、%6、%）的试剂红细胞做微孔板凝集法反应,通过孵育、离心、震荡悬浮、结果判读等操作过程进行OD值统计分析。结果红细胞浓度为5%时错型率最低,且阴阳性OD值最高。结论 5%红细胞悬液为反定型鉴定的最适细胞浓度.     

1例类孟买血型的血型鉴定及输血策略

目的 研究类孟买血型的血型鉴定方法和分子生物学特点。方法 用血清学方法对1例正反定型不符患者血样进行红细胞表型鉴定;用吸收放散试验确证红细胞上弱表达的ABO抗原;PCR扩增FUT1基因编码区序列,对PCR产物进行直接测序分析以进一步明确基因型。结果 盐水法鉴定患者血型正定型为O型,反定型患者血清与试剂红细胞Ac、Bc、Oc均凝集,不规则抗体筛查结果均为阳性,自身细胞阴性。红细胞吸收放散试验显示患者红细胞放散液与B型红细胞反应为2+,与A型红细胞和O型红细胞反应为阴性。患者红细胞与抗-H在盐水介质中反应无凝集,O型对照红细胞与抗-H反应凝集,患者血浆与人源类孟买细胞在盐水介质中反应无凝集,证实该患者为Bmh类孟买血型。FUT1基因测序发现第551位发生了腺嘌呤（A）和鸟嘌呤（G）2个碱基的缺失,存在基因突变,基因型为h1/h1,进一步证实患者为类孟买血型。结论 血清学结合分子生物学技术有助于类孟买血型的鉴定。     

花生提取液对T激活细胞的影响

在配血工作中,有时会遇到多凝集或全凝集观象,其原因之一是红细胞T抗原被激活,这种红细胞叫T激活细胞。据报道花生提取液具有抗T特异性,能凝集T激活细胞。本文用肺炎球菌制备T激活细胞,收集并制备18种花生提取液,结果18种花生提取液都具有抗T特异性。     

Am亚型1例

献血员胡某某,红细胞正定型为O型(室温),反定型发现血清中只有抗-B,而无抗-A,进一步检查为罕见的Am亚型,现报告如下。1　资料与结果1.1　试剂:抗-A、抗-B、抗-A1、抗-H由卫生部长春生物制品研究所(博德公司)提供。1.2　红细胞正反定型,结果见表1。由表1可见,红细胞在室温下与抗-A无凝集现象,但与抗-A,B有弱的凝集;4℃延时反应后,与抗-A有弱的凝集反应。1.3　红细胞吸收放散试验[1],结果见表2。表1　红细胞血正反定型结果温度正定型反定型抗-A抗-B抗-A,B抗-A1抗-HAcBcOc自c4℃W0W04 04 00室温00W04 04 0037℃00004 04 00表2　红细…     

人红细胞血型糖蛋白A单克隆抗体的初步鉴定

目的：制备高效价的人红细胞血型糖蛋白A单克隆抗体（GPA McAb),为研制快速全血凝集试剂提供关键的双功能抗体成分。方法：首先用MNGP亚型GPA,经SPDP与小鼠血清白蛋白连接后,常规免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备GPA McAb;用ELISA和血凝方法对克隆进行筛选和鉴定。结果：4次融合共获3个可分泌高效价GPA McAb细胞株（3F6、5C7和5G3）。分泌的单克隆抗体均与GPA发生特异性反应,但均不引起人A、B、AB和O型红细胞凝集,属于人红细胞GPA的特异性非凝集抗体。在3株抗体中,2株为IgG1亚型,1株为IgG2亚型。结论：小分子GPA经与同种动物（免疫用动物）血清白蛋白连接后用作免疫抗原,研制的2株IgG1亚型抗体可用于全血凝集试剂中双功能抗体的制备。     

Ax血型1例报告

患者，男，60岁，2001年11月因发热贫血来我院就诊，临床诊断为急性单核细胞白血病。进行血型检查时发现患者红细胞与抗-A有微弱凝集，与抗-B无凝集，反定型时患者血清与A型红细胞、B型红细胞均发生凝集，考虑为红细胞亚型，继续对红细胞和血清进行检查。血型学检查：①红细胞抗原和血清中抗体检测：红细胞与标准血清反应；     

单纯IgG型冷凝集素致聚凝胺配血不合一例

患者 ,男 ,6 0岁。因直肠癌手术申请输血 40 0 ml。定型 :患者与献血员两者 ABO正、反定型一致 ,均为 A型 ,Rh(D)阳性。交叉配血 :1盐水法 :主次侧均未见凝集。 2聚凝胺法 :(室温 15℃左右 ,以下同 ) :主侧 ;次侧 。上述所有凝集管置 37℃水浴 5 m in后 ,凝集均消失。抗体筛选 :1患者血清与自身红细胞 O型谱细胞、供者红细胞同时分别作聚凝胺法 ,抗人球法配合试验 ,结果为 :聚凝胺法室温显示 ,37℃水浴5 min后凝集消失 ;抗人球法则不显示凝集。 2供者血清与 O型谱细胞、供者红细胞同时分别作聚凝胺法、抗人球法配合试验 ,结果均未出…     

2009年～2011年陕西省临床血型鉴定室间质量评价分析

目的:探讨临床血型鉴定室间质量评价错误的原因。方法:分别统计2009年、2010年和2011年陕西省临床检验中心临床血型室间质量评价活动结果。结果:2009年全省正鉴定参评单位133家,ABO正鉴定错误单位为1家,占参评单位的0.75%,Rh血型鉴定错误单位为1家,占参评单位的0.75%,血型反鉴定参评单位126家,反鉴定错误单位为8家,占参评单位的6.35%;2010年全省正鉴定参评单位192家,ABO正鉴定错误单位为1家,占参评单位的0.52%,Rh血型鉴定错误单位为1家,占参评单位的0.52%,血型反鉴定参评单位190家,反鉴定错误单位为7家,占参评单位的3.68%;2011年全省正鉴定参评单位200家,ABO正鉴定错误单位为1家,占参评单位的0.5%;Rh血型鉴定错误单位为1家,占参评单位的0.5%,反鉴定参评单位195家,反鉴定错误单位为14家,占参评单位的7.18%。ABO血型鉴定错误主要表现在反向反应。结论:ABO试剂红细胞质量是引起血型错误主要原因。     

蟾蜍血细胞内DNA显示的孚尔根反应

目的 熟悉并掌握孚尔根反应的原理及实验操作方法,观察DNA细胞的形态和结构。方法 取蟾蜍血细胞涂片,60℃1NHCL水解后,用Schiff试剂染细胞核,亮绿复染细胞质。结果 显微镜下观察到细胞核被染成紫红色,细胞质为绿色。结论 DNA细胞的核质红绿染色鲜明且清晰美观,让学生对生物学研究有了初步的认识。     

The Bombay blood group: are we out of risk?

The Bombay blood group is a rare blood group, phenotypes of this group lacking H antigen on the red cell membrane and have anti-H in the serum. It fails to express any A, B or H antigen on their red cells or other tissues. The existence of a human H/h genetic polymorphism was first established by Bhende et al. As first discovery in Bombay (Mumbai), in India in 1952, so the name of this rare blood group is known as Bombay blood group. People having Bombay phenotype are mostly confined to the Southeast Asia. Around 179 persons in India with a frequency of 1 in 10,000 have "Bombay Blood group". A high level of consanguinity present among the parents of the Bombay phenotype. The classic Bombay phenotype has been reported in those of Indian descendent. It is quite rare in Caucasian with an incidence of 1 in 250,000. As because in our country there is routine practice of "only forward or cell type grouping" using finger prick method by voluntary blood donors organization and various blood banks; so there is tremendous chance of misinterpretation or unexploration of this Bombay blood group. When misdiagnosed, this Bombay group can cause fatal haemolytic transfusion reaction. For this reason our suggestion is to incorporate "routine serum typing or reverse grouping confirmation" along with 'O' cell control in reverse grouping procedure in every Transfusion Medicine Department or Blood Bank or Blood Donor Centers and this practice should be mandatory to reduce the risk of fatal haemolytic transfusion reaction. In this view we will highlight the incidence, molecular biology and clinical significance of this rare and fatal blood group.     

78份细胞毒抗血清的HLA-A.B位点特异性鉴定

本文用微量淋巴细胞毒方法鉴定出28份血清,作为分型试剂的使用单价、双价特异性血清。前后已鉴定出作为分型试剂血清共62份,含18种特异性血清,用这些分型试剂检出沈阳地区汉族HLA—A位点抗原的基因频率为0.756,仍有空白0.244,HLA—B位点抗原的基因频率为0.7780,空白0.2220。     

B to O erythrocyte conversion by the recombinant α-galactosidase

Background Human group O red blood cells have great benefit in specialized transfusion areas such as armed conflict and natural calamity. The group B antigen differs structurally from group O antigen only by the addition of one terminal α-linked galactose residue. In this study we aimed to remove the terminal galactose from group B red blood cell to get group O red blood cell.Methods α-galactosidase cDNA was cloned by RT-PCR from Catimor coffee beans grown on Hainan Island of China. The vector for α-galactosidase cDNA expression was constructed and transferred into Pichia pastoris cells by electroporation. The transgenic cells were cloned by fermentation and the recombinant α-galactosidase was purified by ion exchange chromatography. After studying the biochemical characters of α-galactosidase, we have used it in converting human erythrocytes from group B to group O. Results The purity of recombinant α-galactosidase was higher than 96%, which was thought to be suitable for the use of blood conversion. Enzymatically converted human group O red blood cells (ECHORBC) exhibited membrane integrity, metabolic integrity, normal cell deformation and morphology. There were no coagulation between ECHORBC and any group of human blood. The ECHORBC will keep normal structure and function for a period of 21 days at 4℃ in monoammoniumphosphate nutrient solution. Experiments with Rhesus monkeys and gibbons showed that transfusion of enzymatically converted erythrocytes was safe.Conclusion ECHORBC can be easily obtained from group B red blood cell by α-galactosidase digestion. This study suggests that ECHORBC could be transfused to patients safely and efficiently.     

使用PCR-SSP方法检测HLA-DR4抗原

目的：采用顺序特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)建立人类白细胞抗原DR4位点的DNA分型方法。方法：合成特异性引物，组成PCR反应用于DR4位点，建立一步法PCR-SSP。结果：所有样本PCR-SSP基因分型获得成功，分型结果经标准DNA，限制性核酸内切酶分析证实符合，特异性和重复性100％。结论：PCR-SSP检测HLA-DR4的方法具有快速，准确，特异性高等优点，适合临床应用。     

Varied distribution of RhD epitopes in the Indian population

BACKGROUND: Inhabited by more than 4000 caste and tribal groups, India has an extremely heterogenous population. For thousands of years many tribal groups have practised endogamy and are practically genetically isolated. Traditionally, polyclonal anti-D reagent has been used for RhD typing; though monoclonal antibodies are increasingly being used. As a result, blood banks find it difficult to assign the RhD status to an increasing number of people. As monoclonal anti-D typing reagents may not detect all RhD antigen epitopes, we studied the RhD antigen epitope heterogeneity in different population groups in India. METHODS: Red cells of 5315 RhD-positive individuals belonging to different castes and tribes of India were tested with 30 different epitope-specific monoclonal anti-D antibodies. RESULTS: No single monoclonal antibody could detect all RhD-positive red cells detected by polyclonal antisera. The highest proportion of D antigen was detected by LHM 76/55 and BRAD-8 (98%) monoclonal antibodies. CONCLUSION: We need to determine the correct mix of monoclonal antibodies that will detect nearly all RhD antigens detected by polyclonal anti-D sera. Similarly, before accepting monoclonal anti-D for therapeutic use, it would be necessary to determine the appropriate ones for use in the Indian population.     

抗-HCV ELISA试剂评估结果分析

目的 用酶联免疫吸附试验（ELISA）的双抗原夹心法和间接法检测抗-HCV,并对不同检测方法的试剂进行评估.方法 用1种双抗原夹心法和4种间接法检测抗-HCV血清盘和不同浓度的室内质控品,严格按试剂说明书在Xantus全自动加样仪和FAME全自动酶免分析仪中进行检测.结果 经用不同的ELISA法检测抗-HCV后,血清盘中阴性参考品符合率均为20/20,阳性参考品符合率均为20/20.双抗原夹心法灵敏度高,0.05NCU/mL的室内质控品能完全检测出来,间接法最低检出为0.5 NCU/mL,间接法的10个单试剂阳性标本用双抗原夹心法和RIBA确认法检测全部为阴性.结论 双抗原夹心法的抗-HCV ELISA试剂灵敏度和特异性均优于间接法.     

加温对NIH小鼠若干血液学指标的影响

本文用常规的检验方法,研究了局部加温对正常的 NIH 小鼠白血球及其它一些血液学指标的影响。结果表明,不同温度的局部加温:(1)使动物的白血球和红血球有所上升;(2)对淋巴细胞的影响很小;(3)对嗜中性白细胞,加温后第6天有所上升,而到第14天,除了43℃加温组继续上升外,其余的都下降到加温前的基数以下;(4)对大单核细胞,加温后第6天上升,而第14天则明显下降。本文还对结果进行了讨论。     

Hemotype全自动血型分析系统在血型鉴定中的应用研究

目的探讨全自动血型分析系统在ABO、RhD血型鉴定中的应用。方法使用微板法自动血型分析系统,在一次性U形板上通过加样、离心、振荡、判读完成血型检测并发送报告。结果 8013份献血者ABO血型一次性准确定型率99.91%(8006/8013),7例正反定型不一致(含O细胞凝集),Rh(D)阴性4例。60例乳糜标本ABO血型正反定型一致。结论全自动血型分析系统进行ABO正反定型及RhD血型检测更安全可靠,实验操作实现了标准化、自动化,检测结果可永久保存、便于查询。