人类精子表面附睾蛋白激酶抑制剂Eppin和精囊凝固蛋白Semenogelin的相互作用研究

目的:探讨人类精子表面一种附睾蛋白激酶抑制剂Epp in和精囊凝固蛋白Sem enogelin(Sg)的相互关系。方法:①用抗Epp in的抗体与精子和精浆中Epp in蛋白进行免疫沉淀反应;②免疫荧光法在精浆和精子表面共同显色定位;③重组Epp in(rEpp in)和重组精囊凝固蛋白Sg(rSg)共同孵育,用抗Epp in抗体或抗Sg抗体进行免疫共沉淀;④W estern印迹检测rEpp in和rSg相互作用;⑤放射性125I-rSg与rEpp in结合达饱和后,用未标记的rSg竞争性结合分析;⑥放射性125I-rSg直接与印迹膜上的rEpp in行放射性自显影。结果:人精子表面蛋白Epp in与精囊蛋白Sg发生特异性结合,Sg分子结构中的半胱氨酸残基Cys-239是唯一的结合位点,Cys-239的还原及羧甲基化将阻碍125I-rEpp in与rSg的结合。结论:Epp in与Sg的结合是靠分子结构中二硫化键的参与。在人类射精后的精子表面,精囊蛋白Sg结合在精子表面的Epp in上。     

人精子表面乳铁蛋白受体的分子特性

人类精子表面存在附睾蛋白酶抑制剂(Eppin)、Clusterin和乳铁蛋白(Lf)蛋白质复合体~([1]),调控着精液的凝固和液化过程,人类精浆中以及精子表面均含有丰富的乳铁蛋白(Lf).本研究旨在观察人类精子膜表面是否存在与之相结合的受体(LfR).     

抗精子抗体对人精子表面ConA受体影响的研究

本研究运用刀豆蛋白-A(ConA)-胶体金分子探针,对经兔抗人精子抗血清处理的正常人精子和免疫性不育患者的精子做分子水平的定位观察。结果表明,经兔抗人精子抗血清处理的精子和免疫性不育症患者的精子,其顶体反应的囊泡上和顶体后区胶体金的结合均明显低于正常,提示抗精子抗体能封闭精子顶体后区与卵细胞识别的位点,从而影响精子的受精能力。     

抗人精子表面蛋白P34H单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备并鉴定抗人精子表面蛋白P34H的单克隆抗体(M cAb)。方法:以重组P34H蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术建立分泌抗P34H M cAb的细胞株,并制备腹水型M cAb,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、W estern印迹鉴定其敏感性及特异性。结果:获得1株(2C4)IgG1 Kappa型抗P34H M cAb。ELISA结果表明腹水型M cAb效价可达1∶103~1∶105,W estern印迹显示该M cAb既能特异性地结合精子膜蛋白中相对分子质量(Mr)约为34 000的天然抗原,又能特异性地结合Mr约为27 000重组P34H蛋白。结论:用上述方法成功制备抗P34H M cAb,为进一步研究P34H与男性生殖的关系奠定了基础。     

重组人睾丸精子结合蛋白对人精子运动参数的影响

目的:探讨重组人睾丸精子结合蛋白(TSBP)对体外培养人精子运动参数的影响。方法:将22例生育男性的精液经Percoll密度梯度离心后,分别与0.01mg/ml及0.1mg/ml的重组His6-TSBP在体外共同孵育1h或3h,同时设立对照组,Western印迹检测重组His6-TSBP与精子膜的结合情况,计算机辅助精液分析(CASA)系统测定重组His6-TSBP对精子运动参数的影响。将12例弱精子症患者的精液按同样方法处理,检测重组His6-TSBP对弱精子症患者精子运动参数的影响。结果:0.1mg/ml重组His6-TSBP与生育男性精子作用1h可以提高体外培养精子的前向运动百分率(a+b级精子百分率),培养3h后前向运动百分率和活率均有所提高,差异具有显著性(P<0.05);0.01mg/ml重组His6-TSBP对检测各指标均无显著性影响。0.1mg/ml重组His6-TSBP与弱精子症患者精子作用3h可以提高精子前向运动百分率(P<0.05),但对活率无显著影响。结论:0.1mg/ml的重组His6-TSBP在体外可以提高生育男性精子的前向运动百分率和活率及弱精子症患者精子的前向运动百分率。     

人精子蛋白17在乳腺癌中的研究现状

目的总结人精子蛋白17(sperm protein 17,SP17)在乳腺癌中的研究现状。方法在PubMed、Web of Science、CNKI、万方等数据库中检索SP17在乳腺癌中的表达情况及其功能的研究,并对其结果进行综述。结果目前研究发现SP17只在乳腺癌组织中表达,而在正常乳腺组织中不表达。有研究检测到SP17只在转移阶段的肿瘤细胞中被检测到;同时体外研究发现,SP17阳性表达的乳腺癌细胞可以被特异性T淋巴细胞杀死。结论 SP17具有成为乳腺癌免疫治疗新靶点的潜能,可能具有促进癌细胞迁移的作用,未来仍需更多研究证实其在乳腺癌发生及发展过程中的作用,进而加速SP17疫苗的研制及其在乳腺癌临床治疗中的应用。     

编码精子尾部蛋白oppo 1的人正源基因的分子克隆及特性

本文报道了编码雄性小鼠生精细胞特异性精子尾部蛋白oppol的人正源基因及其基因组组织结构。研究表明人oppo-1基因(h-oppo-1)的mRNA仅表达于睾丸,在人睾丸和精于检测到由此mRNA编码的 30kDa的蛋白质。免疫组化分析显示人OPPO-1蛋白定位于成熟精子的鞭毛。人     

人精子蛋白17放射免疫分析方法的建立

目的:建立人精子蛋白17(Sp17)的放射免疫分析方法。方法:用重组人Sp17(rhSp17)免疫动物制备高质量的抗血清,用氯胺T法制备125I-rhSp17,建立了Sp17放射免疫分析方法,并测定了正常人(n=59)及35例患者(卵巢癌20例,子宫癌14例,宫颈癌1例)血清Sp17值。结果:测定范围3.3~800μg/L;灵敏度为2.0μg/L;批内CV为7.5%~9.8%,批间CV为8.2%~13.2%。正常人血清Sp17值为(15.60±7.66)μg/L。以Sp17>31.92μg/L为阳性,35例女性肿瘤患者血清标本15例阳性。结论:Sp17的放射免疫分析是一种简便、灵敏、特异的分析方法,可满足临床和科研的需要;Sp17的测定对研究该蛋白的功能、天然分布和异常表达有重要意义。     

人细胞核自身抗原精子蛋白的研究进展

人细胞核自身抗原精子蛋白（humannuclearautoantigenicspermprotein,hNASP）是一种组蛋白结合蛋白,存在于所有的分裂细胞中。NASP作为组蛋白的转运蛋白参与细胞周期的调节。人类NASP分为睾丸型和体细胞型两种,与组蛋白结合参与核小体形成,其表达不充分将会使DNA复制停止以及细胞分裂的停止。本文就NASP的组成、活性调节、生理功能、在细胞周期调节中的作用以及其临床检测的应用进行综述。     

人精子表面蛋白P34H重组表达载体的构建及诱导表达

目的 :获得纯化的人精子表面蛋白P34H用于基础和临床研究。　方法 :在克隆到P34H基因编码区全长的基础上 ,将P34H基因亚克隆至原核表达载体pQE 30中 ,构建重组表达载体pQE 30 /P34H。将pQE 30 /P34H转化至大肠埃希菌后 ,用异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达 ,通过Ni NTA树脂进行亲和层析纯化上清中可溶性形式的重组蛋白P34H。对表达纯化重组蛋白的质粒进行DNA测序 ,并对重组蛋白P34H行十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析 ,鉴定其是否为所需目的蛋白。　结果 :经PCR和双酶切鉴定 ,重组表达载体pQE 30 /P34H为正确克隆。SDS PAGE和DNA测序证实 ,所获的重组蛋白确系所需目的蛋白。　结论 :用上述原核表达的方法可获得纯化的人精子表面蛋白P34H。     

金黄地鼠腹侧前列腺来源蛋白结合精子表面的实验研究

目的:探讨前列腺分泌蛋白是否可结合于精子表面。方法:以金黄地鼠作为研究对象,应用间接免疫荧光和亲和素标记的蛋白转印方法检测前列腺分泌蛋白是否可结合于精子。制备的抗前列腺粗提取物多克隆抗体,间接免疫荧光技术检测体外与前列腺分泌物孵育的附睾精子,以及体内分别与含前列腺及去除前列腺雄鼠交配后收集的子宫腔内和输卵管腔内精子的前列腺成分抗原。前列腺提取物经电泳分离转膜后和生物素标记附睾精子膜蛋白作用,测定在体外前列腺分泌蛋白能否与附睾精子膜结合。实验分为对照组、附属性腺全去组、腹侧前列腺组、去除腹侧前列腺组。结果:前列腺抗原成分的免疫反应局限在精子体中部表面,而精子头、颈部未见阳性反应。在体外(80±5)%附睾精子与前列腺分泌蛋白结合,在体内与对照组雄鼠交配后收集的子宫腔内精子与前列腺分泌蛋白结合精子阳性率为(30.0±4.6)%,与去除腹侧前列腺组(3.6±1.4)%比较差异有显著性(P<0.01),在体内与对照组雄鼠交配后收集的输卵管腔内精子与前列腺分泌蛋白结合精子阳性率为(16.0±3.6)%,与去除腹侧前列腺组精子(3.2±1.4)%比较差异有显著性(P<0.01)。前列腺分泌蛋白的电泳印记膜与生物素标记附睾精子膜蛋白孵育后显色分析结果可见5条阳性反应带。结论:金黄地鼠的前列腺分泌蛋白可结合于精子体中部表面,前列腺分泌蛋白中至少有5个组分可与精子膜蛋白结合。     

人Eppin基因的原核表达及抗原性鉴定

目的 构建人附睾蛋白酶抑制蛋白(epididymal protease inhibitor,eppin)基因原核表达质粒,表达并纯化重组蛋白,并探讨其抗原性及应用价值.方法 以健康人睾丸组织cDNA为模板进行PCR扩增,将其克隆到原核表达载体pET-32a,并转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,并对纯化产物进行Western印迹鉴定.结果 重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后证实构建成功;SDS-PAGE结果显示表达产物为相对分子质量36KD的融合蛋白,Western印迹检测纯化后蛋白显示特异性条带.结论 成功构建了pET-32a-Eppin重组质粒,并获得了具有抗原特异性的可溶性Eppin蛋白,为进一步研究其生物学活性及免疫性避孕效应奠定了基础.     

弱精子症患者精子蛋白的初步研究

目的从蛋白质水平探讨弱精子症患者精子蛋白的改变,以期寻找精子活动力低下的原因。方法运用蛋白凝胶电泳技术分离90例特发性弱精子症患者和30例正常供精者精子标本的总蛋白质,结合免疫印迹技术鉴定差异蛋白,并对试验数据进行统计学分析。结果患者组与对照组精子蛋白表达量存在差异,且患者组中精子活力低下不同严重程度者的蛋白含量也存在差异(P<0.05),对于差异显著条带的Western Blotting分析显示差异蛋白为DDX4。结论精子活力与蛋白质差异表达有关,主要差异蛋白DDX4可作为评估精子活力的生物标志物。     

死精子症精子相关蛋白的蛋白质组学研究

目的:运用双向电泳(2-DE)和质谱技术比较1例死精子症患者和正常人精子的蛋白质组成差异。方法:用2-DE分离了10例正常生育者30份精子标本和1例死精子症3份精子标本的蛋白质,分别获得其参考图谱并进行比较,用质谱技术鉴定其中部分差异蛋白点。结果:在正常精子图谱和死精子症患者精子图谱分别分离出(905±57)和(792±28)个蛋白质点,死精子症患者精子图谱上有178个点未能匹配。对其中6个在患者图谱中缺失的蛋白质点进行了鉴定。结论:死精子症患者图谱上缺失的6个蛋白,可能与死精子症的形成有关。     

精子的钙调蛋白研究

精子的钙调蛋白研究（摘要）冯善章眭元庚徐正铨尤国才吴宏飞张炜金雁通过检测有生育者与不育者（精子功能不全）精子中钙调蛋白的含量、定位、精子前向运动速率以及顶体功能等项目差异，试图为开发新型男用避孕药打下基础。材料与方法选用生育者精液３０份，每份精液各取...     

精液凝固蛋白Semenogelin和附睾蛋白酶抑制剂Eppin的研究进展

精液凝固蛋白Semenogelin (Sg)与附睾蛋白酶抑制剂Eppin参与精液凝胶的形成,并调控精液液化.Sg通过Eppin与精子结合可抑制精子活动.抗Eppin抗体与Sg对精子活动有着类似的抑制作用,重组Eppin免疫的猴子出现不育,从不育猴子提取的抗Eppin抗体在体外可显著抑制人类精子的活动.现就Sg、Eppin在精液凝固过程中的相互作用,抗Eppin抗体、Sg对精子抑制作用及其分子机制的研究进展作一综述.     

PHF7在人精子中相互作用蛋白分析

目的筛选人精子中与PHF7相互作用的蛋白质并分析其作用。方法构建质粒表达GST-PHF7融合蛋白,通过GST pull-down实验串联质谱检测人精子中与PHF7特异性结合的蛋白质,进行GO富集分析和KEGG通路分析。结果利用GST-PHF7诱饵蛋白从人精子细胞总蛋白中成功钓取靶蛋白。经过质谱检测,筛选出人精子中与PHF7特异结合的蛋白75个。GO分析结果表明,这些蛋白在生物学过程上主要富集在蛋白运输和细胞内定位等;在细胞成分上主要富集在细胞器,囊泡和外泌体等;在分子功能上主要富集在结合蛋白质,核酸和酶类等。KEGG分析结果表明,这些蛋白富集在细胞代谢和遗传信息的处理等通路。结论 PHF7与精子内多种蛋白质相互作用,调节蛋白合成,运输和降解及能量代谢等可能是其调节精子发生的机制。     

AAT蛋白在人精子中的鉴定和定位

目的对α1-抗胰蛋白酶（AAT）在人精液和精子中进行鉴定以及定位。方法应用免疫印迹方法鉴定AAT蛋白，利用激光共聚焦显微镜和间接免疫荧光定位的方法研究AAT在精子上的定位。结果证实在人精浆和精子里都存在AAT蛋白，且其主要定位于精子的头部，尤其在赤道板处有强荧光。结论通过对AAT在人精子上的鉴定和定位，可以帮助进一步研究该蛋白对精子的作用。     

人精子表面蛋白P34H的基因克隆及其在睾丸和附睾中表达分析

目的 :克隆精子表面蛋白P34H基因的编码区 ,为进一步体外表达P34H蛋白做准备。　方法 :提取人附睾体部总RNA ,并以此为模板 ,进行反转录PCR获得编码P34H蛋白的基因片段。应用T/A克隆策略 ,将扩增的P34H基因编码区克隆入T载体 ,并通过双酶切和DNA测序进行鉴定。同时 ,以 β actin为内参照物 ,进行反转录PCR半定量分析 ,比较P34H在附睾头部、体部和尾部及睾丸组织中的表达量。　结果 :成功地克隆了P34H基因。将P34H的cDNA序列登录GenBank ,登录号为AF5 15 6 2 5。反转录PCR半定量分析表明P34H主要在附睾体部表达。　结论 :克隆的P34H基因可用于构建表达载体