甲基丙烯酸环氧丙酯的致突变性和致癌性研究

甲基丙烯酸环氧两酯(GMA)是我们研究组近年发现的致突变物。GMA在Ames试验和小鼠骨髓微核试验得到阳性结果,GMA可与DNA共价结合,在体外淋巴细胞培养诱导UDS和抑制DNA复制。GMA对雄性小鼠生殖细胞也有遗传毒性。我们研究了GMA诱导的PBR322质粒TcR基因的限制酶酶谱,HPLC谱和DNA序列。结果提示,某些限制酶的酶切位点发生位移,GMA诱发缺失和插入,并存在序列专一性和热点。而且,我们发现GMA诱发叙利亚金黄地鼠胚胎细胞的恶性转化。     

银染PCR-SSCP法检测食管癌P53基因突变

目的 :探索快速、有效、简便的检测食管癌 P5 3基因突变的方法 ,以利于食管癌的早期诊断和研究。方法 :用银染 PCR- SSCP法检测本院 63例食管切除标本的 P5 3基因突变 (选突变多发位点 5、6、7、8外显子 )。结果 :食管癌 P5 3基因突变发生于第 5、6、7、8外显子 ,总突变率 68% ,鳞癌、腺癌、未分化癌中 P5 3突变率差异不显著 ;鳞状上皮不典型增生中 P5 3突变率为 61.5 %。结论 :P5 3基因突变可作为食管癌早期诊断的一个重要分子生物学指标     

GMA致人支气管上皮细胞恶性转化过程中全基因组甲基化水平的研究北大核心CSCD

目的分析甲基丙烯酸环氧丙酯(glycidyl methacrylate,GMA)致人支气管上皮细胞(16HBE细胞)恶性转化过程中不同时点全基因组甲基化水平的改变,探讨GMA诱导16HBE细胞全基因组甲基化水平改变的意义。方法通过细胞毒性试验,确定8μg/ml浓度GMA诱导16HBE细胞,收集GMA转化前期(第10代)、转化中期(第20代)、转化后期(第30代)细胞和同步溶剂对照(DMSO)细胞,以及去甲基化制剂(5-氮杂-2-脱氧胞苷,5-aza-cdr)处理的各时点转化细胞,应用DNA甲基化定量检测试剂盒,检测不同转化时期细胞全基因组甲基化水平。结果 DNA甲基化定量检测结果显示,不同时点GMA转化组较同代龄DMSO组细胞全基因组甲基化水平降低,转化前期GMA组、DMSO组、5-aza-cdr组细胞甲基化水平较转化中期及转化后期相对应各组的全基因组甲基化水平低。结论 GMA诱导16HBE细胞在转化前期已出现全基因组低甲基化现象,故可将其视为细胞恶性转化前期生物标志。     

大肠上皮恶性转化不同阶段p53表达与细胞凋亡的关系

目的：观察大肠腺癌,腺瘤恶性变区及非恶变区细胞凋亡及其调控基因ｐ５３的表达状态,探讨它们在大肠上皮恶性转化进程中的作用及二者的关系。方法：利用ＤＮＡ缺口末端标记技术,ｐ５３蛋白免疫组化染色及双重染色技术,原位观察２７例大肠腺癌及２１例瘤恶变标本中凋亡细胞和ｐ５３阳性表达细胞的密度与分布,以８例非种瘤大肠粘膜作为对照。结果：腺瘤非恶变区凋亡密度分别高于腺癌（Ｐ〈０．０１）、腺瘤恶变区（Ｐ〈０．０１）     

食管鳞状细胞癌中p53基因突变和蛋白表达研究

目的检测食管鳞状细胞癌(ESCC)中p53基因突变和蛋白表达及其与临床病理和预后的相关性。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)和免疫组织化学(SP)两种方法检测56例ESCC中p53基因突变和蛋白的表达。结果56例ESCC组织中p53蛋白阳性表达率为61%(34/56),它与患者的年龄、性别和家族史无关(P>0.05),有和无淋巴结转移的阳性率分别为81%(17/21),49%(17/35);生存率<3年组和>3年组的p53阳性表达率为74%(17/23),46%(13/28),差异有统计学意义。PCR-SSCP检测p53基因突变率为77%(43/56),突变位于第4外显子者5例,第5外显子者23例,第6外显子者1例,第7外显子者4例,第8外显子者7例,有3例在内显子。p53基因突变/过度表达率为46%(26/56),两种方法检测的符合率为55%(31/56)。结论p53基因突变/过度表达在食管鳞癌发生、发展中可能发挥重要作用,可作为判断食管鳞癌患者预后的参考指标之一。     

P^53基因突变检测及其临床应用

肿瘤的发生是一个多基因、多步骤作用的过程,是正常细胞基因组发生多种损伤的过程。随着分子生物学研究的发展,人们认识到癌基因、抑癌基因的突变是导致肿瘤发生、发展的原因。近年来,尤以抑癌基因P~(53)的研究更为活跃。本文仅就P~(53)基因突变检测及临床应用方面作一简要综述。     

疑诊老年肺癌患者p53基因突变检测及意义

目的　探讨纤维支气管镜标本的p5 3基因突变检测对老年肺癌早期诊断的价值。方法　应用聚合酶链反应—单链构象多肽性分析 (PCR—SSCP)技术 ,对 5 4例临床高度疑诊肺癌的老年患者纤维支气管镜标本进行p5 3基因 5～ 8号外显子突变分析 ,分析结果与病理学对照或随访以证实阳性的可信度。结果　 19例确诊老年肺癌患者中 ,有 10例 p5 3基因发生突变 ,占 5 3%。在 35例疑诊老年肺癌但病理学阴性的患者中发生p5 3基因突变的 11例 ,无p5 3基因突变的 2 4例。经过 2 8个月的随访 ,p5 3基因突变组有 5例证实为肺癌 ,占 4 6 % ;而无p5 3基因突变组只有 2例证实为肺癌 ,占 9%。两组比较 ,差异具有显著性 (P <0 0 1)。结论　通过对患者纤维支气管镜标本的 p5 3基因突变分析 ,作为早期诊断老年肺癌的一种方法是可行的     

用银染PCR-SSCP方法检测新鲜食管癌组织中p53基因的点突变

p53基因是抗癌基因(anti-oncogene)的代表,它位于17号染色体p13,其产物参与正常细胞周期的调节。大量研究表明,野生型p53基因的失活与人类肿瘤的发生密切相关,其突变已被发现是与人类肿瘤有关的最常见的基因异常,而p53基因的主要失活途径是点突变,检测其突变,对于了解p53基     

尿路上皮肿瘤ras和p53基因突变的研究

目的：研究K-ras和p53基因突变与尿路上皮肿瘤的预后关系。方法：应用聚合酶链式反应加单链多态性分析（PCR－SSCP）检测52例尿路上皮肿瘤K-ras和p53基因突变。结果：K-ras基因突变率为9．6％（5／52），p53基因突变率为42．3％（22／52）。结论：尿路上皮肿瘤发生和发展牵涉多基因多步骤途径，p53基因突变对尿路上皮肿瘤预后有预测意义。     

p53基因突变与非霍奇金淋巴瘤病因学关系研究

目的：研究p53基因突变在非霍奇金淋巴瘤（NHL）发生发展中的作用。方法：在37例非霍奇金淋巴瘤组织中采用PCR-单链构象多态性分析法（PCR-SSCP）进行p53基因外显子58的突变检测。结果：p53基因总突变率为54.1%，惰性组、侵袭性组、高侵袭性组突变率分别为0.0%、58.1%、100.0% T和NK细胞组和B细胞组突变率分别为37.5%、58.6%。结论：非霍奇金淋巴瘤中存在p53基因的突变，p53基因的突变在NHL的发展演变中可能起重要作用。     

胃癌组织中p53基因突变及蛋白表达的研究

目的 探讨胃癌组织中p53基因第5～8外显子突变率及p53蛋白的表达.方法 应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)和银染技术,对30例胃癌石蜡包埋组织中p53基因第5～8外显子突变率进行检测;同时应用免疫组织化学Envision二步法检测胃癌组织中p53的表达水平.结果 30例胃癌石蜡标本中有11例发生p53基因的突变,突变率为36.67%.病理组织学观察胃癌中乳头状腺癌/管状腺癌(分化较好)16例,低分化腺癌/印戒细胞癌(分化较差)14例.p53蛋白随胃癌的分化程度降低而增加,阳性表达率递增(P＜0.05).结论 胃癌组织中p53基因突变及p53蛋白高表达在胃癌的发生中有重要的作用及意义.从石蜡包埋组织中提取DNA进行分子生物学检测适用于肿瘤研究.     

论著p53基因突变与非霍奇金淋巴瘤病因学关系研究

目的:研究p53基因突变在非霍奇金淋巴瘤(NHL)发生发展中的作用。方法:在37例非霍奇金淋巴瘤组织中采用PCR-单链构象多态性分析法(PCR-SSCP)进行p53基因外显子5～8的突变检测。结果:p53基因总突变率为54.1%,惰性组、侵袭性组、高侵袭性组突变率分别为0.0%、58.1%、100.0%;T和NK细胞组和B细胞组突变率分别为37.5%、58.6%。结论:非霍奇金淋巴瘤中存在p53基因的突变,p53基因的突变在NHL的发展演变中可能起重要作用。     

垂体瘤转化基因和p53在骨肉瘤中的表达及其意义

为观察垂体瘤转化基因（PTTG）和p53在骨肉瘤中的表达情况,笔者对42例骨肉瘤和15例骨软骨瘤组织中PTTG和p53蛋白的表达进行检测,现将结果报告如下。     

宫颈癌中p53基因多态性的检测及其临床意义

目的探讨p53基因多态性在宫颈癌中的表达及其临床意义。方法采用等位基因特异性PCR（allele specific polymorphism chain reaction,ASP）的方法检测p53基因型在46例宫颈癌患者及84例对照者中的表达。采用SPSS14.0软件分析p53基因多态性与宫颈癌临床特征的关系。结果 p53基因多态性分析显示,Pro/pro基因型在宫颈癌和对照组中的表达差异有统计学意义。HPV状态分层分析,HPV阴性者中Pro/pro基因型在宫颈癌和对照组中的表达差异有统计学意义,HPV阳性者则无显著统计学差异。p53基因多态性与患者的年龄、宫颈癌的临床分期、组织类型、细胞分化程度、肿瘤大小、有无淋巴结转移均无显著相关。不同临床分期、组织类型、分化程度、淋巴结转移的宫颈癌中Pro/pro基因型表达差异与HPV状态无显著相关。结论 p53基因72密码子Pro/pro基因型可能是HPV阴性妇女患宫颈癌的高危因素。p53基因多态性与宫颈癌临床病理性特征无相关性。     

眼睑基底细胞癌组织中p53基因表达的研究

目的:探讨眼睑基底细胞癌组织中p53基因的表达。方法:收取武汉大学人民医院病理科1999~2006年收集的手术切除及活检的基底细胞癌(basalcell carcinoma,BCC)标本共40例,另取癌周围组织5例作对照。基底细胞癌发病年龄20~68岁。根据细胞分化程度,将BCC分为分化型(角化型、囊样型、腺样型)和未分化型(实体型、色素型、浅表型、硬化型),其中BCC分化型22例,未分化型18例。将基底细胞癌和正常组做免疫组织化学染色,观察各组细胞内p53基因表达的变化。利用HPIAS-2000图像分析系统测定p53基因在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果:基底细胞癌组织中p53基因呈高表达,癌旁组织中p53基因呈低表达。图像分析结果显示,基底细胞癌组织与癌旁组织之间p53基因的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P<0.01)。结论:p53基因在肿瘤的发生发展中起了重要的作用。     

PCR-SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分支杆菌rpoB,katG,ahpC基因突变的研究

目的：应用PCR－SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分支杆菌rpoB,katG及ahpC基因突变,评价此方法用于结核分杆菌利福平（RFP）及异烟肼（INH）耐药性试验的意义。方法：以结核分支杆菌H37Rv为对照,30例耐RFP（单耐或多耐）、21例耐INH（单耐和多耐）的结核分枝杆菌临床分离株及10例敏感菌株;39例菌阳肺结核患者及30例非结核 性肺部疾病患者痰标本,采用PCR－SS－CP技术检测痰标本和菌株中的结核杆菌rpoB,katG,ahpC基因突变,并与药敏试验对照。结果：PCR－SSCP检测痰标本中结核分支杆菌rpoB,katG及ahpC基因突变的阳性率分别为79％（31／39）、46％（18／39）及5％（2／39）.结论：PCR－SSCP可望成为直接检测临床痰标本中结核分枝杆菌耐利福平及耐异烟肼的快速方法。     

60例胃癌p53蛋白的检测

p53基因结构及表达的异常是人类肿瘤最常见的基因改变之一。大约有50%的人类肿瘤有p53基因的突变．我们对60倒胃癌组织中p53蛋白表达水平作了检测，现报道如下。     

丙戊酸对乳腺癌MCF7细胞的放射增敏性依赖于抑癌基因p53

目的研究抑癌基因p53对丙戊酸(VPA)所致乳腺癌细胞放射增敏性的影响及其与同源重组(HR)修复机制的关系。方法用含PLKO.1或p53 shRNA慢病毒颗粒液感染乳腺癌MCF7细胞,建立p53表达下调的同源配对MCF7细胞系,即MCF7/野生型p53(MCF7/wtp53)和MCF7/缺欠型p53(MCF7/dp53)细胞;感染MCF7/(pDR-GFP)细胞,建立MCF7/pDR-GFP/wtp53和MCF7/pDR-GFP/dp53细胞;各分为细胞对照组、VPA组(VPA 0.5 mmol·L-1处理24 h)、电离辐射(IR,8 Gy)组和VPA+IR组(VPA 0.5 mmol·L-1预处理24 h后联用IR)。通过Western印迹实验检测P53蛋白表达水平,彗星和免疫荧光实验分别检测细胞核拖尾尾距及磷酸化组蛋白(γH2AX)焦点细胞比率,细胞克隆形成实验检测克隆形成率,流式细胞术检测HR修复效率,免疫荧光实验检测含乳腺癌易感基因1(BRCA1)蛋白和重组酶51(Rad51)蛋白焦点细胞比率。结果 Western印迹结果显示,MCF7/wtp53细胞中存在P53蛋白表达,MCF7/dp53细胞中P53蛋白表达显著降低(P<0.05)。彗星和免疫荧光结果显示,在MCF7/wtp53细胞中,与IR组相比,VPA+IR组细胞核拖尾尾距和含γH2AX焦点细胞百分率升高(P<0.05);在MCF7/dp53细胞中,与IR组相比,VPA+IR组细胞核拖尾尾距和含γH2AX焦点细胞百分率均升高(P<0.05),但仍低于MCF7/wtp53细胞VPA+IR组(P<0.05)。细胞克隆形成结果显示,在MCF7/wtp53细胞中,VPA+IR组细胞存活率低于IR组(P<0.05);在MCF7/dp53细胞中,VPA+IR组细胞存活率虽低于IR组(P<0.05),但高于MCF7/wtp53细胞VPA+IR组(P<0.05)。流式细胞术结果显示,在MCF7/pDR-GFP/wtp53细胞中,VPA组HR效率低于细胞对照组(P<0.05);在MCF7/pDR-GFP/dp53细胞中,VPA组HR效率低于细胞对照组(P<0.05),但仍高于MCF7/pDRGFP/wtp53细胞VPA组(P<0.05)。免疫荧光结果显示,在MCF7/wtp53细胞中,VPA+IR组含BRCA1和Rad51焦点细胞百分率均低于IR组(P<0.05);在MCF7/dp53细胞中,VPA+IR组含BRCA1和Rad51焦点细胞百分率均低于IR组(P<0.05),但仍高于MCF7/wtp53细胞VPA+IR组(P<0.05)。结论 VPA对乳腺癌MCF7细胞具有放射增敏性;抑制p53表达可降低VPA的放射增敏作用,与BRCA1-Rad51介导的HR机制过度增强有关。     

膀胱肿瘤P53基因突变临床意义

用PCR-SSCP对30例福尔马林固定,石蜡包埋膀胱肿瘤标本进行研究.结果:PCR-SSCP方法检测出P53基因突变10例,Ⅰ级1例,Ⅱ级4例,Ⅲ级5例,符合病理诊断及随访资料,P53基因未突变组与突变组在病理分级、临床分期和生存时间上差异显著(P<0.05).     

α粒子对叙利亚地鼠胚胎细胞H－ras和p53基因的影响

观察了２Ｇｙα粒子（５．３４ＭｅＶ）照射诱发叙利亚地鼠胚胎细胞转化后Ｈ－ｒａｓ和ｐ５３基因的变化．结果表明，转化细胞Ｈ－ｒａｓ基因处于激活和ｐ５３基因失活状态，以逆转录聚合酶链反应和单链构象多态性分析方法进一步分析，证明Ｈ－ｒａｓ基因发生突变和ｐ５３基因部分缺失．本实验结果提示，Ｈ－ｒａｓ基因突变与ｐ５３基因突变的偶联可能是α粒子诱发叙利亚胚胎细胞转化的重要分子机理．