肝细胞生长因子与肝纤维化关系研究进展

肝细胞生长因子是一种多效性的细胞因子,具有促细胞分裂、增殖、运动、抗纤维化等多种生物学活性。它可以通过抑制减少转化生长因子β1合成和信号转导、减少肝星形细胞活化和增殖、抑制胶原纤维合成、促进细胞外基质降解、抑制上皮-间质转化等多种机制来发挥抗肝纤维化效应,具有开发成为一种有效的抗纤维化临床药物的巨大潜能。     

肝细胞增殖、凋亡与肝纤维化关系的实验研究

目的 动态观察实验性肝纤维化大鼠肝细胞增殖、凋亡情况,探讨肝细胞增殖、凋亡与肝纤维化进展的关系.方法 Wistar大鼠分为正常、对照组和肝纤维化模型组,HE染色观察肝组织形态学变化,赖氏法检测ALT、AST,竞争性放射免疫分析法测定透明质酸、Ⅳ型胶原,免疫组化方法检测PCNA(增殖细胞核抗原)的表达,TUNEL标记法检测肝细胞凋亡百分率.结果 (1)病理形态学分析和血清检测结果:造模5周末模型组可见肝小叶结构紊乱,汇管区扩大,纤维组织增生,8周末有明显完整的纤维间隔包绕肝结节形成假小叶;造模5周及8周末,模型组血清ALT、AST、透明质酸、Ⅳ型胶原较正常组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)肝细胞增殖率测定(PCNA):造模5周及8周末,模型组大鼠肝细胞增殖明显多于正常组(P＜0.01),模型组造模5周与8周相比,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)肝细胞凋亡率测定(TUNEL法):造模5周及8周末,模型组大鼠肝细胞凋亡明显多于正常组(P＜0.01).结论 肝纤维化时肝细胞凋亡较正常对照组增加,提示肝细胞凋亡是肝细胞增生不良、肝纤维化进展的重要促动因素.     

软肝升白颗粒对肝纤维化小鼠肝脏肝细胞生长因子及其C-Met mRNA表达的影响

目的通过观察软肝升白颗粒对肝纤维化小鼠肝脏肝细胞生长因子及其C-Met mRNA表达的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法 80只BABL/c小鼠给予0.03%硫代乙酰胺饮用水喂养20周,制备肝纤维化动物模型[1]。随机分为4组,每组20只。A组小鼠给予软肝升白颗粒11.2 g/(kg.d),B组小鼠给予软肝升白颗粒5.6 g/(kg.d),C组小鼠给予鳖甲软肝片1.12 g/(kg.d),D组分别给予等体积的生理盐水,每天灌胃1次,另外,20只小鼠作为正常对照组(E组),处理方法同D组。分别在4周和8周时,各处死小鼠10只,检测血清肝功能指标,各组取肝组织HE染色肝组织学观察,同时应用RT-PCR技术检测肝组织中肝细胞生长因子(HGF)及其受体C-Met mRNA的表达量。结果治疗前后肝功能和组织学均存在显著性差异。治疗组HGF/C-Met mRNA表达显著高于对照组(P0.05)。结论肝纤维化发生后,软肝升白颗粒能使HGF/C-Met mRNA高表达。     

大部分肝切除后肝细胞生长因子和增殖细胞核抗原作用的研究

为了探讨肝切除后肝细胞生长因子（ＨＧＦ）及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）在肝再生中的作用，制备大鼠肝切除后肝再生模，应用免疫印迹法免疫印迹法及免疫组织化学染色分别检测ＨＧＦ的分子形式及ＰＣＮＡ的表达，结果发现，ＨＧＦ在肝切除后残存的肝组织中的含量在１２ｈ显著增加，是正常的１４倍。增加的水平维持到２４ｈ。但ＨＧＦ的重链带低于检测水平。ＰＣＮＡ在肝切除后残存的肝组织中的表达明显升高，于术后２４ｈ高峰。阳性     

肝细胞生长因子在大鼠肾间质纤维化中作用机制的研究

目的：通过观察大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)后，肝细胞生长因子(HGF)的表达及其与转化生长因子-β1(TGF-β1)之间的动态变化关系，以探讨HGF在肾间质纤维化中的作用机制。方法：将36只雄性SD大鼠中的18只行左侧输尿管结扎术，另外18只行假手术。于术后第3、7、14天分别处死各组中的6只大鼠，用免疫组化方法测定HGF、TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及纤维粘连蛋白(FN)的表达，并行苏木精-伊红(H—E)和Masson染色，动态观察肾的病理学改变。结果：在肾间质纤维化早期，肾HGF表达明显增加而TGF-β1表达却明显下降；在肾间质纤维化晚期，肾HGF表达明显下降而TGF-β1表达却明显上升，同时α-SMA和FN的表达明显增强，肾的病理改变明显，而且HGF表达与TGF-β1、α-SMA及FN表达呈明显负相关。结论：HGF可能是肾间质纤维化进程中重要的调节因子，它与TGF-β1相互作用，共同调节肾间质纤维化的发生和发展。     

门静脉栓塞及结扎联合肝细胞生长因子对肝纤维化大鼠肝再生的研究

目的 探讨门静脉栓塞及结扎联合肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）对肝纤维化大鼠肝再生的作用。方法 制备大鼠肝纤维化模型,将100只肝纤维化大鼠随机分为5组,术前对照组、门静脉栓塞组(A1组)、门静脉结扎组(A2组)、门静脉栓塞+肝细胞生长因子组(B1组)和门静脉结扎+肝细胞生长因子组(B2组）,每组20只。除术前对照组外以上各组栓塞或结扎大鼠门静脉右支。每组于术前及术后1、3、7及14 d分批处死大鼠,每次5只,检测各组时间点大鼠外周血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)的含量;称取各叶肝脏及全肝重量,计算术后不同时间点非栓塞及非结扎肝叶占整个肝脏的百分比;免疫组化检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）与Ki- 67的表达。结果 术后各组ALT、AST呈一过性升高改变,表现为术后第1天达到高峰,B1与B2组术后第1、3、7天ALT及AST峰值分别较A1与A2组低(P <0.05)。各组大鼠非栓塞及非结扎侧肝重/全肝重百分比均随时间增加而增加,术后第7、14天B1组非栓塞叶肝重/全肝重较A1组高,B2组非结扎叶肝重/全肝重较A2组高(P<0.05)。免疫组织化学改变：A1与A2组、B1与B2组术后非栓塞及非结扎侧肝叶PCNA与Ki-67的表达较术前明显增加并于第3天达高峰(P<0.05),然后缓慢下降,第14天A1与A2组恢复至术前水平(P>0.05),而B1与B2组较术前仍明显升高(P<0.05)。结论 肝纤维化大鼠选择性门静脉栓塞、门静脉结扎后对侧肝脏均有再生能力;外源性HGF能明显提高肝再生能力。     

肝细胞在肝纤维化中的作用

10余年前,人们普遍认为肝细胞(HC)在肝纤维化的病理过程中不起多大作用。然而,近年随着细胞生物学和分子生物学技术的发展,对HC在肝纤维化中的重要作用认识越来越深刻。本文就这方面文献概述如下。1　合成胶原基质早期实验多系研究整个肝脏内胶原变化。Chojkier利用HC能将14C标记的鸟氨酸转化为14C标记精氨酸这一特点,将14C-鸟氨酸和3H-脯氨酸应用于正常和纤维化大鼠,提取肝内胶原测定14C-鸟氨酸和3H-脯氨酸掺入量,其比值提示胶原来源于HC或非HC。他认为无论正常肝还是纤维化肝组织中HC是胶原的主要来源。部分学者通过HC原代培养研…     

肝细胞生长因子与肝再生增强因子融合基因对大鼠肝纤维化的影响

目的研究肝细胞生长因子（HGF）与肝再生增强因子（ALR）融合基因对大鼠实验性肝纤维化的治疗作用,并探讨其可能作用机制。方法采用80只SD大鼠建立肝纤维化模型,将成模大鼠随机分为模型组、单纯HGF组、单纯ALR组和HGF／ALR融合基因组,并取10只同批次大鼠作正常组,分别检测各组血清透明质酸（HA）、层粘蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）和Ⅳ型胶原（CIV）水平,同时留取肝组织标本用于病理学观察和增殖细胞核抗原（PCNA）、原癌基因（c-jun）测定。结果各治疗组大鼠肝纤维化和肝细胞再生程度均较模型组改善,但以HGF／ALR组尤为明显。HGF／ALR组血清HA、LN、PCⅢ和CⅣ水平均较单纯HGF组和ALR组显著下降（均P〈001）,PCNA表达水平较单纯HGF组和ALR组显著增强（P〈0．01）,而c-jun表达水平则较单纯HGF组和ALR组减弱（P〈001）。结论HGF与ALR的融合基因具有较好改善大鼠实验性肝纤维化的作用,并可能通过促进肝细胞增殖和抑制c-jun的表达,从而发挥其抗肝纤维化作用。     

地顶孢霉菌丝体对免疫性肝纤维化大鼠的保护作用及其可能机制的研究

目的探讨地顶孢霉菌丝体(AMM)对猪血清诱导的免疫性肝纤维化大鼠的保护作用及机制。方法健康成年SD大鼠90只,随机分为空白对照组、模型组、秋水仙碱组(Col 0.1 mg/kg)、AMM组(700、350、175 mg/kg)。除空白对照组腹腔注射等量的生理盐水外,其余各组分别腹腔注射猪血清0.5 ml/只,每周2次,连续18周,建立肝纤维化模型。并于造模之日起,AMM组和Col组灌胃给药,空白对照组和模型组分别给予等量蒸馏水。VG染色观察AMM对肝脏病理形态学影响;测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性及肝脏匀浆中羟脯氨酸(Hyp)的含量;ELISA法测定血清中转化生长因子β1(TGF-β1)的含量;免疫组化和Western blot法检测大鼠肝脏组织TGF-β1蛋白表达水平。结果 VG染色显示,与模型组比较,AMM(700、350 mg/kg)组肝组织胶原面积明显减少,TGF-β1和Hyp含量均显著降低(P<0.05,P<0.01);免疫组化和Western blot结果显示,AMM(700、350 mg/kg)明显下调TGF-β1表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论 AMM能有效抗免疫性肝纤维化,其机制可能与下调肝纤维化大鼠中升高的TGF-β1的表达和分泌有关。     

赖氨大黄酸对胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠的治疗作用及其分子机制

目的: 探讨赖氨大黄酸(RHL)对胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠的治疗作用,阐明RHL治疗大鼠胆汁淤积性肝纤维化的分子机制。方法:将35只大鼠分为对照组、模型组、35和70 mg·kg^-1RHL治疗组及赖氨酸组,每组7只大鼠。通过胆总管结扎(BDL)方法建立胆汁淤积性大鼠肝纤维化模型。使用全自动生化分析仪检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性以及总胆汁酸(TBA)和总胆红素(TBIL)水平;HE染色对肝脏组织行病理学检查;Masson三色染色观察肝组织纤维数量;使用试剂盒通过酶标仪测定肝脏组织中羟脯氨酸(Hyp)水平;免疫组织化学染色检测肝脏组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的分布;Western blotting法检测α-SMA表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠肝脏质量与体质量比值、血清中AST和ALT活性以及TBA和TBIL水平升高(P<0.05);肝组织肝小叶结构被破坏,纤维异常增生,Hyp水平亦升高(P<0.05)。免疫组织化学染色,α-SMA着色于胞膜和胞浆且表达增多;Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠α-SMA表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,35和70 mg·kg^-1RHL治疗组大鼠肝脏质量与体质量比值、血清中AST和ALT活性以及TBA和TBIL水平明显降低(P<0.05)。肝脏病理组织学,与模型组比较,35和70 mg·kg^-1RHL治疗组大鼠肝脏组织中纤维成分数量减少,Hyp水平降低(P<0.05);免疫组织化学和Western blotting法,与模型组比较,35和70 mg·kg^-1 RHL治疗组大鼠肝脏组织中α-SMA表达减少(P<0.05)。结论:RHL能抑制肝星形细胞激活、肝脏纤维变性和蓄积以发挥对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏的保护作用,RHL有望成为治疗胆汁淤积性肝纤维化的药物。     

肝细胞生长因子对大鼠肝脏原位冷缺血再灌注损伤的保护作用

目的　观察大鼠肝脏原位冷缺血再灌注损伤的发生规律和肝细胞生长因子 (HGF)的保护作用。方法　建立大鼠肝脏原位冷缺血再灌注模型 ,分为保护组和对照组 ,分别于术前 30min给予HGF(1.5mg 10 0g体重 )和生理盐水 ,于术后不同时段处死大鼠并测定血清中的天门冬氨酸氨基转移酶 (AST)、丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、透明质酸(HA)的浓度 ,检测肝脏匀浆中的丙二醛 (MDA)的含量。肝脏组织做光镜及透射电镜检查。并检测凋亡细胞数。结果　HGF保护组在各采样时间点上血清AST、ALT、HA和肝组织匀浆中MDA的含量均明显低于对照组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;HGF保护组中肝组织中凋亡细胞数低于对照组。结论　保护组的生化指标均明显低于对照组 ,复灌12 0min升高显著。HGF可减轻大鼠肝脏的冷缺血再灌注损伤。     

牛磺酸对实验性肝纤维化大鼠保护作用的研究

[目的]研究牛磺酸（Tau）对实验性肝纤维大鼠肝组织的保护作用。[方法]将120只实验用大鼠随机分为正常对照组、模型组、牛磺酸低（150 mg/kg）、中（300 mg/kg）、高（600 mg/kg）剂量组和复方鳖甲软肝片540 mg/kg组,每组20只;采用CCl₄复合法制备肝硬化门静脉高压大鼠模型,灌胃给药治疗4周后,测定血清中丙氨酸氨基转移酶门冬氨酸（ALT）、氨基转移酶（AST）和总胆红素（TBIL）含量,测定血清中肝纤四项（CⅣ、PCⅢ、LN、HA）含量,HE染色法观察肝脏组织形态结构变化并对肝组织细胞坏死和组织增生进行分级;通过天狼星染色观察肝脏组织纤维化状况;测定抗氧化酶（SOD、GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量;测定血清中炎症细胞因子IL-10、TNF-α含量。[结果]与模型组相比,牛磺酸中、高剂量组大鼠血清中ALT、AST、TBIL含量和CⅣ、PCⅢ、HA含量均显著降低（P<0.05,P<0.01）,高剂量组LN含量显著降低（P<0.05）;牛磺酸各剂量组大鼠肝组织纤维化病变呈不同程度改善,以高剂量组效果最为显著;牛磺酸中、高剂量组大鼠肝脏组织SOD、GSH-Px活性显著升高且MDA含量显著降低（P<0.05,P<0.01）,血清中IL-10、TNF-α含量显著降低。[结论]牛磺酸对实验性肝纤维化大鼠具有保护作用,其机制可能与牛磺酸能够有效保肝降酶、抑制氧化应激反应和炎症反应、改善肝功能有关。     

田基黄水煎液下调羟脯氨酸和丙二醛对大鼠实验性肝纤维化的保护作用

目的：为提高肝病患者对手术术中肝脏缺氧的耐受及术后肝功能的恢复,观察田基黄水煎液对四氯化碳（CCl4）诱导的实验性肝纤维化的保护作用。方法：将SD大鼠分成正常对照组、模型组、田基黄水煎液低剂量给药组（4 g/kg）和高剂量给药组（8 g/kg）,采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,造模同时给予田基黄水煎液干预,在实验第8周,测定血清肝功相关酶指标[谷丙转氨酶（ALT）,谷草转氨酶（AST）]及肝纤维化血清标志物透明质酸（HA）,层黏连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）的含量,测定肝组织匀浆中羟脯氨酸（HYP）和丙二醛（MDA）含量。结果：田基黄水煎液不同剂量均能降低肝纤维化大鼠血清ALT、AST、HA、LN和Ⅳ-C含量,同时能减少肝组织中HYP和MDA含量（P〈0.05）。结论：田基黄对CCl4诱导的实验性肝纤维化具有防护作用。     

橙皮苷抗大鼠肝纤维化作用的实验研究

目的 观察橙皮苷(HDN)抗大鼠肝纤维化作用.方法 60只SD大鼠,随机分为正常组、模型组、HDN(50、100、200 mg/kg)3个剂量组和秋水仙碱(0.1 mg/kg)组,每组10只.除正常组外,其余各组采用50%四氯化碳(CCl4)皮下注射,每周2次,连续12周诱导肝纤维化大鼠模型.于造模第7周起,治疗组分别...     

HGF经HGF/Akt通路抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖

目的:观察肝细胞生长因子(HGF)对人胆管细胞型肝癌细胞HCCC-9810增殖的影响,并探讨其分子机制?方法:HGF处理HCCC-9810细胞后,用MTT及EdU法检测癌细胞的增殖;siRNA干扰技术抑制HCCC-9810细胞内源性Akt的表达,Western blot检测癌细胞Cyclin D1蛋白表达和Akt磷酸化的变化?结果:50和100 ng/ml HGF显著抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖?Western blot结果显示,HGF处理后的肝癌细胞Akt磷酸化和Cyclin D1表达量明显下调?siRNA干扰Akt的表达,阻断了HGF诱导的Cyclin D1表达量的下调及细胞增殖抑制?结论:HGF通过下调Akt磷酸化和Cyclin D1表达量抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖?     

Effect of oxymatrine on hepatic gene expression profile in experimental liver fibrosis of rats

Objective:To investigate the effects of oxymatrine on hepatic gene expression profile in a rat model of liver fibrosis.Methods:Forty healthy male SD rats were randomly divided into three groups,a normal group（n=8）,a model group（n=16）,and an oxymatrine treatment group（n=16）.Experimental hepatic fibrosis was induced by subcutaneous injection of carbon tetrachloride（CCI₄）.The rats in the treatment group received oxymatrine via celiac injection at a dosage of 40 mg/kg once a day at the same time.The rats in the model and normal groups received saline at the same dosage via celiac injection.Serum levels of aspartate aminotransferase （AST）,alanine transarninase（ALT）,alkaline phosphatase（AKP）,hyaluronic acid（HA）,and laminin（LN）were assayed.The deposition of collagen was observed with HE and Masson staining.Effect of oxymatrine on hepatic gene expression profile was detected by oligonucleotide microarray analysis with Affymetrix gene chip rat U230A. Quantitative real-time polymerase chain reaction（QRT-PCR）was carried out to confirm the expression changes of six genes.Results:Oxymatrine significantly improved liver function,lowered serum levels of HA and LN,and decreased the degree of liver fibrosis,compared with the model group（P<0.05）.A total of 754 differentially expressed genes were identified by gene chip between the model group and the normal group,among which 438 genes increased and 316 genes decreased over two folds.Compared with the model group,86 genes were downregulated markedly in the oxymatrine group（P<0.05）,including collagen I and other genes related to extracellular material（ECM）,integrin signal transduction genes,early growth response factor genes,and proinflammatory genes;28 genes were upregulated significantly（P<0.05）,including cytochrome P450（CYP450） superfamily genes,glycolipids metabolism and biological transformation related genes.Six genes were confirmed with QRT-PCR,consistent with the result from microarray.Conclusion:Oxymatrine could affect the expression of many functional genes and may be useful in the prevention and treatment of liver fibrosis.     

可注射组织工程肝改善大鼠肝纤维化的作用及其机制

目的探讨可注射工程化肝组织抗肝纤维化作用及其机制。方法制作大鼠肝纤维化模型,采用新生大鼠肝细胞、液态鼠尾胶原复合物行肝纤维化大鼠肝包膜下多点注射,20d后计算大鼠生存率、行腹部超声检查、取肝脏观察大体及镜下变化并检测肝组织TGF-β的表达,观察肝脏原位多点注射工程化肝组织对大鼠肝纤维化的影响。结果实验组大鼠镜下及超声检查提示肝纤维化缓解,TGF－β表达明显下降。结论原位多点注射基于新生大鼠肝细胞构建的工程化肝组织能缓解肝纤维化,机制可能与其显著抑制TGF-β的表达有关。