小补心汤总黄酮含药血清对皮质酮损伤神经细胞的保护作用

目的探讨小补心汤总黄酮（XBXT-2）含药血清的神经保护作用。方法采用血清药理学方法分别制备大鼠的空白血清、氟西汀（10 mg/kg）和XBXT-2（25,50,100,200 mg/kg）含药血清。采用皮质酮损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）、人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）及原代培养大鼠海马神经元为体外药理学模型,应用ATP生物发光法检测XBXT-2及氟西汀含药血清对损伤细胞存活率的影响。结果皮质酮（50～300μmol/L）能够浓度依赖性地抑制SH-SY5Y的存活,氟西汀与XBXT-2（25,50 mg/kg）含药血清能显著提高皮质酮（100μmol/L）损伤的SH-SY5Y的存活率（P〈0.01,P〈0.05,P〈0.01）;与空白对照组比较,200μmol/L皮质酮导致PC12的存活率显著下降（P〈0.01）,氟西汀与XBXT-2（25,50,100 mg/kg）含药血清能显著对抗这种损伤（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.05）;100μmol/L皮质酮使原代海马神经元存活率显著下降（P〈0.001）,XBXT-2（25、50 mg/kg）对这种损伤具有显著的保护作用（P〈0.05,P〈0.001）,其作用与阳性药氟西汀含药血清相当。结论 XBXT-2含药血清对皮质酮所致的神经细胞损伤具有明显保护作用,这可能是其抗抑郁效应的重要细胞机制之一。     

广藿香醇对β-淀粉样蛋白神经毒性的抑制作用

目的研究雌激素受体卢亚型（estrogen receptor β，ERβ）选择性激动剂广藿香醇（patchouli alcohol，PA）对β-淀粉样蛋白（β-amyloidpe ptide，Aβ）片段神经毒性的体外抑制作用。方法Aβ25-35位氨基酸片段（Aβ25-35）作用于人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）之前不同浓度PA预防给药，荧光探针法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平和细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]；），流式细胞术检测细胞凋亡率。结果PA（0．05、0．5、5μg·ml^-1）能够抑制Aβ25-35引起的细胞内ROS水平和[Ca^2＋]；升高，使细胞凋亡减少。结论PA对Aβ25-35的神经毒性具有抑制作用。     

骨髓间充质干细胞对冈田酸致神经细胞损伤的修复作用

目的 观察人骨髓间充质干细胞对冈田酸(OA)损伤的神经细胞是否具有修复作用.方法 应用冈田酸损伤神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞,建立阿尔茨海默病体外模型.将细胞分成正常组、损伤组和治疗组,损伤组用20nmol/L冈田酸损伤24h,治疗组在损伤24h后加入骨髓间充质于细胞的条件培养基治疗24h.采用CCK-8法检测各组细胞活力,免疫荧光染色微管微丝测定细胞树突长度和荧光面积,Western blotting检测磷酸化Tau蛋白和总Tau蛋白含量.结果 冈田酸能损伤SH-SY5Y细胞,使其胞体皱缩、塌陷,出现空泡,树突缩短、断裂,微管微丝排列紊乱,而骨髓间充质干细胞条件培养基可使SH-SY5Y细胞胞体变得圆润,树突重新恢复变长,微管、微丝致密规则,荧光变强;并且能有效降低冈田酸诱导的Tau蛋白过度磷酸化水平.结论 骨髓间充质干细胞对冈田酸损伤的神经细胞具有明显的修复作用.     

阿魏酸钠对抗Aβ_（25-35）诱导的鼠神经元凋亡作用研究

目的探讨阿魏酸钠对β淀粉样蛋白（Aβ25-35）通过谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡的影响。方法 培养的皮层神经元分别与谷氨酸（20μmol/L）、Aβ25-35（5μmol/L）、Aβ25-35（5μmol/L）＋谷氨酸（20μmol/L）孵育,采用Hoechst 33258荧光染色法分析神经细胞凋亡;然后用谷氨酸（50μmol/L）诱导神经元凋亡,采用荧光染色法和Western blot观察阿魏酸钠的保护作用。结果单独应用Aβ25-35（5μmol/L）和单独加入谷氨酸（20μmol/L）引起的皮层神经元凋亡率与对照组无明显差异;Aβ25-35与皮层神经元共同孵育5天,接着用谷氨酸处理24h,细胞凋亡率从正常的9.2%±1.5%增加到43%±8%;阿魏酸钠能够显著降低谷氨酸诱导的神经细胞凋亡百分比至21%±5%,并对抗谷氨酸引起的Bcl-2蛋白表达的降低。结论阿魏酸钠能够减弱Aβ25-35提高谷氨酸毒性诱导的鼠皮层神经元凋亡。     

银杏叶提取物对Aβ_（25-35）诱导的神经细胞毒性的防治作用

目的探讨银杏叶提取物对Aβ25-35诱导体外培养神经细胞毒性的防治作用。方法 培养大鼠大脑皮质神经元细胞,构建AD细胞模型,制模前后加用银杏叶提取物（EGb）干预,四甲基噻唑蓝比色法（MTT）测定神经细胞活力,West-ern印迹分析法测Caspase3、Bcl-2、Bax表达。结果 EGb显著提高预防组细胞活力（P〈0.01）,增强预防组及治疗组Bcl-2表达（P〈0.01）,明显抑制预防组及治疗组Caspase3、Bax表达（P〈0.01）。结论 EGb可有效的对抗Aβ25-35的神经毒性作用,抑制细胞凋亡。     

组织蛋白酶B在β-淀粉样蛋白刺激星形胶质细胞炎性反应中的作用

目的：研究组织蛋白酶B（Cathepsin B,CB）与β-淀粉样蛋白（β-amyloid protein,Aβ）激活星形胶质细胞诱导炎性反应的关系。方法：应用免疫细胞化学方法鉴定体外培养的星形胶质细胞;四唑盐法检测细胞活性,加入不同浓度溶解状态的Aβ1-40后观察细胞形态学改变,western blot法测定细胞上清CB水平。结果：在5~60μmol/L溶解状态的Aβ1-40作用24 h的条件下,星形胶质细胞的活性没有受到影响,其细胞形态无明显变化,但是随着时间的延长星形胶质细胞逐渐出现肿胀、坏死。40~60μmol/L的溶解状态Aβ1-40诱导的星形胶质细胞上清中检测到CB。结论：Aβ1-40可激活星形胶质细胞,诱导其释放CB,提示CB的神经毒性作用可能是通过诱导神经细胞凋亡实现的。     

VEGF参与CoCl2预处理对神经细胞缺氧损伤的保护作用

目的：探讨CoCl2对体外培养分化SH-SY5Y细胞的缺氧损伤保护作用及缺氧诱导基因产物VEGF在其中的作用。方法：分化的SH-SY5Y细胞随机分为对照组、化学缺氧预处理组（预处理组,细胞先用50μM CoCl2预处理3 h,换液后常氧培养1 h,然后在2%的低氧孵箱内缺氧28 h）、缺氧组（无CoCl2预处理过程,其余同预处理组）。用Western Blotting法测细胞VEGF的蛋白表达,RT-PCR测VEGF的mRNA表达,通过乳酸脱氢酶释放率和MTT细胞活力测定判断细胞损伤程度。然后,进一步通过添加VEGF单克隆抗体、重组人VEGF,验证VEGF在化学缺氧预处理组中的保护作用。结果：化学缺氧预处理组细胞VEGF蛋白、VEGF mRNA表达都显著高于缺氧组（P〈0.01）,预处理组细胞较缺氧组细胞存活率高,乳酸脱氢酶释放率减少（P〈0.01）。MTT细胞活力测定显示,40μg/ml VEGF单克隆抗体可抑制预处理的保护作用,而100 ng/ml重组人VEGF可模拟预处理组的保护作用。结论：CoCl2化学预缺氧可保护神经型细胞对缺氧产生耐受,VEGF可能在其中发挥重要的保护作用。     

从青阳参提取的带7个糖残基的新C_(21)甾体苷(英文)

目的：了解青阳参片中化合物的结构。方法：对青阳参（萝藦科）根茎的乙酸乙酯提取物（即青阳参片），用柱层析的方法分离，得到的纯化合物再用光谱方法测定结构。结果：分离出2个新的C21甾体苷，每个都有7个单糖残基。结构被分别确定为：告达亭3-O—α—1-磁麻吡喃糖基-（1→4）-α—D-夹竹桃吡喃糖基-（1→4）-α—L-磁麻吡喃糖基-（1→4）-β—D-葡萄吡喃糖基-（1→4）α-D-夹竹桃吡喃糖基（1→4）-β—D-夹竹桃吡喃糖基-（1→4）-β—D-2-脱氧毛地黄吡喃糖苷（1）；和告达亭3-O—β—D-磁麻吡喃糖基（1→4）-α—D-夹竹桃吡喃糖基-（1→4）-α—1-磁麻毗喃糖基-（1→4）β-D-葡萄吡喃糖基-（1→4）-β—D-夹竹桃吡喃糖基-（1→4）-β—D-磁麻吡喃糖基-（1→4）-β—D-2-脱氧毛地黄吡喃糖苷（2）。结论：青阳参片中的C21甾体苷1和2，由一个C21甾体苷元部分和一个3-OH取代的糖链组成，7个单糖残堆组成此链，糖残基为2-去氧己糖和葡萄糖，糖间的所有连接为1—4连接。     

死亡相关蛋白激酶C末端对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用研究

目的 观察死亡相关蛋白激酶(DAPK)蛋白C-末端多肽(DCTP)对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的作用,探讨DCTP抑制DAPK功能的机制.方法 采用PCR法扩增DCTP核酸片段,定向连接至质粒pEGFPN1、pIRES2-EGFP和pcDNA3.1(-),将重组质粒[pEGFPN1-DCTP、pIRES2-DCTP-EGFP和pcDNA3.1(-)-DCTP]转染至SH-SY5Y细胞中,筛选稳定细胞株.分析pEGFPN1-DCTP的表达产物在细胞中的定位.建立稳定表达DCTP的SH-SY5Y细胞.用MTT法、Hoechst33258染色法和流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞对谷氨酸的敏感性,用Western blotting检测细胞内DAPK的表达量以及磷酸化DAPK(p-DAPK)水平的变化.结果 谷氨酸对SH-SY5Y细胞生长的抑制作用具有浓度依赖性,40mmol/L的谷氨酸对细胞的抑制率为51.7%.流式细胞仪检测结果显示,40mmol/L谷氨酸处理后细胞的凋亡率和坏死率分别为26.1%和27.7%,而正常培养细胞分别为0.08%和0%.谷氨酸诱导细胞凋亡时,p-DAPK表达下降.荧光显微镜观察可见DCTP定位于细胞质.用40mmol/L谷氨酸分别诱导转染pcDNA3.1(-)-DCTP和pcDNA3.1(-)质粒(对照质粒)的SH-SY5Y细胞,流式细胞仪检测结果显示,前者凋亡率为43.7%,而后者凋亡率为62.2%.Western blotting检测结果显示,在谷氨酸诱导下,与转染pIRES2-EGFP质粒(对照质粒)的SH-SY5Y细胞相比,转染pIRES2-DCTP-EGFP质粒的细胞内DAPK和p-DAPK水平均无明显变化.结论 DCTP基因的表达产物定位于SH-SY5Y胞质.DCTP可以抵抗谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡,但并不影响DAPK的磷酸化及其表达水平.     

脊髓型减压病大鼠脊髓组织内NGF和Trk A的蛋白表达

目的 观察大鼠脊髓减压病后脊髓组织内神经生长因子（NGF）及其受体酪氨酸激酶A（Trk A）蛋白表达随疾病进程的变化过程，探讨减压病脊髓损伤后自身的神经保护机制。方法 采用1.0MPa暴露5.5min后极快速减压的方法制备SD大鼠脊髓减压病模型，在出舱0，6，24，48，72h应用免疫组织化学染色和半定量图象分析方法检测脊髓组织NGF及其受体Trk A的蛋白表达。结果 极快速减压后6h开始有少量NGF和Trk A蛋白表达，在24h表达明显增强并达到高峰，此后Trk A表达逐渐减弱，NGF表达直到72h仍比基础值明显增加。结论减压病脊髓损伤诱导了脊髓神经元和胶质细胞的NGF及其受体的合成，提示脊髓型减压病在损伤神经组织的同时也激活了自身的神经保护机制，通过Trk A受体途径NGF可能在保护受损神经细胞中起作用。     

走马胎中的三萜皂苷类成分及其体外抗肿瘤活性研究

目的 研究走马胎根茎的三萜皂苷类成分及其体外抗肿瘤活性.方法 采用溶剂萃取和柱色谱方法分离纯化,根据理化性质和波谱学数据鉴定化合物结构.采用MTT法测试三萜皂苷化合物的抗肿瘤活性.结果 分离得到了7个三萜皂苷类化合物,包括3β-O- β-D-吡喃木糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖...     

干扰HERG钾通道表达可抑制成神经细胞瘤细胞增殖

目的：采用RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术抑制HERG基因的表达，探讨HERG基因编码钾通道对人成神经细胞瘤细胞（SH-SY5Y）存活及增殖的影响。方法：构建发卡状RNA干扰质粒（shRNA-HERG）转染SH-SY5Y细胞，再分别使用半定量RT-PCR和Western印迹方法观察shRNA-HERG对SH-SY5Y细胞中HERG基因mRNA及其编码蛋白表达的干扰效果。利用SH-SY5Y细胞的生长曲线和集落形成实验，观察转染shRNA-HERG质粒对SH-SY5Y细胞存活及增殖能力的影响。结果：转染shRNA-HERG干扰质粒后，SH—SY5Y细胞中HERG基因的mRNA水平及其编码的钾通道蛋白表达水平显著下降。与对照组相比，shRNA—HERG使SH-SY5Y细胞生长曲线明显下压，细胞倍增时间延长136．8％。集落形成实验结果显示，无论接种细胞数为50，100或200，shRNA-HERG组克隆形成率均显著下降，与shRNA-control组和未干扰组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：所构建的shRNA-HERG表达质粒能有效抑制HERG基因编码钾通道蛋白的表达，明显抑制SH-SY5Y细胞的生长和增殖。     

从青阳参提取的新寡糖

目的：了解青阳参片中化合物的结构。方法：对青阳参（萝藦科）的乙酸乙酯提取物（即青阳参片）进行酸水解,用柱层析的方法分离水解产物,得到的纯化合物再用光谱方法测定结构。结果：分离得到4个新寡糖,结构被分别测定为：甲基2,6-二去氧-3-O-甲基-β-D-阿拉伯-己吡喃糖基-（1→4）-6-去氧-3-O-甲基-β-D-核-己吡喃糖基-（1→4）-6-去氧-3-O-甲基-α-L-核-己吡喃糖苷（1）,甲基6-去氧-1,3-二-O-甲基-β-D-核-己糖基-（1→4）-2,6-二去氧-3-O-甲基-α-D-阿拉伯-己吡喃糖苷（2）,甲基2,6-二去氧-3-O-甲基-β-D-阿拉伯-己吡喃糖基-（1→4）-6-去氧-3-O-甲基-α-L-核-己吡喃糖苷（3）,和2,6-二去氧-3-O-甲基-β-D-阿拉伯-己吡喃糖基-（1→4）-2,6-二去氧-3-O-甲基-α-D-阿拉伯-己吡喃糖基-（1→4）-2,6-二去氧-3-O-甲基-β-D-来苏-己吡喃糖（4）。结论：青阳参片中的单糖残基为2-去氧己糖,残基间以1→4连接。     

Effects of exposure to DAMPS and GSM signals on Ornithine Decarboxylase (ODC) activity: II. SH-SY5Y human neuroblastoma cells

Purpose: An increase in Ornithine Decarboxylase (ODC) activity was reported in L929 murine fibroblast cells after exposure to a digital cellular telephone signal. This result was not confirmed by several other studies, including the one reported in a companion paper. As a partner in the Perform-B programme, we extended this study to human neuroblastoma cells (SH-SY5Y), using well-defined waveguide systems to imitate exposure to radiofrequency radiation (RFR): Digital Advanced Mobile Phone System (DAMPS) or Global System for Mobile communications (GSM) signals emitted by mobile phones.

Materials and methods: Human neuroblastoma cells (SH-SY5Y) were exposed at various Specific Absorption Rates (SAR) to DAMPS or GSM signals using different set-ups. Cell ODC activities were assayed using ¹⁴CO₂ generation from ¹⁴C-labeled L-ornithine.

Results: SH-SY5Y cells were incubated for 20 hours, and were blindly exposed to 50 Hz-modulated DAMPS-835 or 217 Hz-modulated GSM-1800 for 8 or 24 h using Information Technologies in Society (IT'IS) waveguides equipped with fans. After cell lysis, ODC activity was determined using ¹⁴C-labeled L-ornithine. ODC activity was estimated by the ¹⁴CO₂ generated from ¹⁴C-labeled L-ornithine, as generated d.p.m. ¹⁴CO₂/h/mg protein. The results showed that, irrespective of the signal used (835 MHz/DAMPS, or 1800 MHz/GSM) and exposure conditions (duration and SAR), human SH-SY5Y neuroblastoma cells did not exhibit any alteration in ODC enzyme activity.

Conclusion: This work did not show a significant effect of mobile phone RFR exposure on ODC activity in neuroblastoma cells (SH-SY5Y).     

The oxidative stress,mitochondrial pathway apoptosis,and the antagonistic effects of chrysophanol in SH-SY5Y cells via DTPP-induced photodynamic therapy

BackgroundTo investigate the susceptibility of SH-SY5Y cells to DTPP-based photodynamic therapy (PDT) and the antagonistic effects of chrysophanol (Chr) on PDT.MethodsPDT photocytotoxicity to cells was quantified and determined by exposing increasing concentrations of DTPP between 2.5 to 20 μg/mL to radiation with energy densities of 1.2–9.6 J/cm² at 630-nm wavelength. Sodium azide (SA, NaN₃) and d-mannitol (DM) were employed to study the reaction type of PDT. The photodynamic stress after PDT was assessed by superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde (MDA), and total antioxidative capacity (T-AOC) assays. The apoptosis pathway of SH-SY5Y cells after PDT was studied by the determination of JC-1 and caspase-9/Caspase-3 concentrations. MTT and double fluorescence staining assays were applied to study the effect of Chr on cell survival and apoptosis rate in PDT, respectively. PI was used to detect the effect of Chr on cell membrane integrity after DTPP-PDT treatment.ResultsThe dose-dependent killing effect of high DTPP concentrations and irradiation doses were identified. Cell apoptosis is mediated by a mitochondrial pathway with a total apoptosis rate of 33.8% at 10 μg/mL of DTPP after irradiation with 2.4 J/cm². Oxidative stress was produced by ROS in PDT and non-reversible cell oxidative damage appeared due to the cells’ modulation of the oxidative stress balance during the PDT response. Chr had a- effect on ROS capture and an inhibitory effect on the PDT-induced destruction of cell membranes.ConclusionsSH-SY5Y cells were susceptible to DTPP-PDT, resulting in a mitochondrial apoptosis pathway. There is an antagonistic effect of Chr on PDT in SH-SY5Y neuroblastoma cells.     

Study of 99mTc-annexin V uptake in apoptotic cell models of Parkinson's disease

OBJECTIVE: To investigate the feasibility of radiolabelled annexin V imaging for early diagnosis of Parkinson's disease. METHODS: 99mTc-HYNIC-annexin V was prepared and its binding to apoptotic cell models of Parkinson's disease was studied in vitro. Cellular models of Parkinson's disease were produced by administering different concentrations of 1-methyl-4-phenylpyridinium to PC12 and SH-SY5Y cell lines. Cell apoptosis rates were analysed by flow cytometry. Annexin V was labelled with 99mTc by hydrazinonicotinamide (HYNIC). Cell binding studies were carried out using cellular models of Parkinson's disease. Cell uptake studies were also performed after different levels of MPP treatment, and the correlation between the degree of apoptosis and Tc-HYNIC-annexin V uptake was analysed. RESULTS: The specific activity of 99mTc-HYNIC-annexin V was 3.7-74 x 10 Bq.mg protein. In-vitro binding of 99mTc-HYNIC-annexin V to model cells was specific, saturable and time dependent. Scatchard analysis gave a Kd of 7.16+/-1.78 nmol.l, Bmax values of 179+/-33 fmol per 10(6) cells (PC12) and 220+/-26 fmol per 10(6) cells (SHSY5Y). MPP at different concentrations can induce cell apoptosis in a dose-dependent manner; cellular uptake of 99mTc-HYNIC-annexin V as indicated by membrane-bound radiolabelled annexin V activity was linearly correlated with total fluorescence, as observed by FITC-annexin V flow cytometry (PC12: r=0.924; SH-SY5Y: r=0.937, P<0.01). CONCLUSIONS: 99mTc-HYNIC-annexin V retains its receptor-binding activity and has a high affinity to cellular models of Parkinson's disease. The uptake of radioactivity correlated well with cell apoptosis rates; thus, 99mTc-annexin V is a potential imaging agent with which to detect early neuron damage in Parkinson's disease.     

回转器模拟微重力对神经细胞自噬的影响(英文)

目的探讨回转模拟微重力对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)自噬的影响。方法利用回转模拟微重力的细胞学效应,回转条件下培养细胞12 h、24 h,相同条件下静置培养细胞作为对照。WesternBlot方法检测LC3蛋白表达变化水平。荧光显微镜观察GFP-LC3点状聚集物,计数含有大于5个GFP-LC3点状聚集物的细胞数量。结果回转组SH-SY5Y细胞LC3-II蛋白表达高于对照组,荧光显微镜检测到GFP-LC3点状聚集物也随之增多。结论回转可以引起SH-SY5Y细胞自噬增多。     

双波长分光光度法测定棉籽提取物中黄酮苷含量

目的 通过分别测定棉籽提取物中以槲皮素和山奈酚为苷元的两类黄酮苷的含量,确定棉籽提取物中总黄酮含量.方法 以槲皮素-3-O-β-D-芹菜糖（1→2）-[α-L-鼠李糖（1→6）]-β-D-葡萄糖苷和山柰酚-3-O-β-D-芹菜糖（1→2）-[α-L-鼠李糖（1→6）]-β-D-葡萄糖苷为对照品,采用双波长分光光度法,在铝离子存在下测定510nm和410nm处的吸收度,计算两类黄酮苷的含量.结果 槲皮素糖苷类成分的线性范围为0～6.00×10-2 mg·ml-1（r=0.999 6）,回收率为（98.96±1.26）%;山奈酚糖苷类的线性范围为0～5.40×10-2 mg·ml-1（r=0.999 8）,回收率为（98.83±1.29）%.结论 本方法避免了两类黄酮苷显色后吸收系数的差异引起的测试误差,测定结果更准确地反映了棉籽中黄酮类成分的含量.