阿法替尼对人乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响及机制研究

  目的  探讨酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor,TKI）阿法替尼（afatinib）对乳腺癌细胞增殖、周期及凋亡的影响,并就阿法替尼与吉非替尼（gefitinib）对乳腺癌细胞的作用进行比较。  方法  应用MTT法检测人乳腺癌细胞系MCF-7、T47D、MDAMB-231细胞活性,流式细胞术的PI染色法检测细胞周期变化以及Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡,通过Western blot法检测蛋白表达情况。  结果  阿法替尼对MCF-7、T47D、MDA-MB-231细胞均有明显的抑制作用,IC₅₀分别为0.101、0.141、0.887 μmol/L。阿法替尼对T47D、MDA-MB-231细胞作用24 h后G₀/G₁期细胞比例明显升高,细胞凋亡率增加,晚期的凋亡率分别为88.9%、58.1%,并可促进细胞凋亡通路蛋白PARP、caspase-3发生剪切。阿法替尼、吉非替尼使MDA-MB-231细胞的EGFR磷酸化水平受到明显抑制,相同浓度下,阿法替尼作用较吉非替尼更强、持续时间更长。  结论  阿法替尼可显著抑制乳腺癌细胞增殖、促进其凋亡,且具有明显的量效关系,较吉非替尼具有更有效的作用。      

基因转染LL-37/hCAP-18对人乳腺癌细胞凋亡的影响

目的：探讨基因转染人源抗菌肽LL-37/hCAP-18对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响。方法：将含人LL-37/hCAP-18的真核表达质粒瞬时转染人MCF-7细胞,48h后,MTT比色检测MCF-7细胞的增殖,流式细胞术检测MCF-7细胞周期及凋亡,细胞免疫组化染色检测MCF-7细胞中Bax、Bcl-2的表达。结果：重组基因瞬时转染MCF-7细胞48h后,与各对照组相比,肿瘤细胞的生长增殖受到显著抑制（P〈0.05）;转染重组基因组肿瘤细胞凋亡率显著高于各对照组（P〈0.05）,但细胞周期无明显变化;与对照组相比,转染重组基因pEGFP-c1-LL-37的MCF-7细胞中Bcl-2表达显著下降（P〈0.05）,Bax由阴性表达转为表达明显升高。结论：LL-37/hCAP-18可以通过上调促凋亡因子Bax、下调抗凋亡因子Bcl-2诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖。     

LBH589对人上皮性卵巢癌OVCAR-3细胞增殖的抑制作用及机制探讨

  目的  探讨新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对人上皮性卵巢癌OVCAR-3细胞增殖抑制和促进凋亡作用及其机制。  方法  不同浓度LBH589处理细胞后, 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测对细胞增殖的影响; AO/EB(台盼蓝、吖啶橙溴化乙啶双染色法)检测细胞凋亡; Western blot检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白水平。  结果  LBH589明显抑制OVCAR-3细胞增殖, 48 h半数抑制浓度(IC50)为0.12μM。Western blot检测发现Caspsae-3、PARP-85kD剪切蛋白增加, Bax表达增加, Bcl-2表达减少。  结论  LBH589在体外条件下能明显抑制卵巢癌细胞OVCAR-3细胞增殖, 诱导细胞凋亡。      

芹菜素诱导乳腺癌T47D细胞系p53依赖性凋亡及G2/M期阻滞

  目的  探讨芹菜素（apigenin）对乳腺癌T47D细胞系凋亡及细胞周期的影响。  方法  常规培养T47D细胞, 用四甲基偶氮唑盐法（MTT法）检测芹菜素对乳腺癌T47D细胞系细胞增殖的影响。荧光染色法观察凋亡细胞的形态变化。流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布。Western blot检测不同浓度（0、10、20、40、80 μM）芹菜素对凋亡及周期相关蛋白表达的影响。  结果  随着芹菜素浓度的增加, 芹菜素对T47D细胞的增殖抑制作用明显增强（P < 0.05）; 凋亡荧光染色及流式细胞仪显示, 芹菜素能够诱导乳腺癌T47D细胞凋亡, 随着其浓度的增高, 各组凋亡率分别为（2.41±0.072）%、（10.87±0.028）%、（18.02±0.056）%、（37.05± 0.092）%和（78.38±0.082）%, 与对照组相比, 差异有统计学意义（P < 0.05）; 流式周期分析显示, 芹菜素能够使T47D细胞系G₂/M期阻滞, 随着芹菜素浓度的增高, 不同浓度组细胞G₂/M期所占的比例逐渐增加, 差异有统计学意义（P < 0.05）; Western blot显示p53、p21、Bax和p-Cdc2的含量及Caspase-3, PARP剪切明显增加, 而Bcl-2、CyclinB1及Cdc2的含量却显著减少。  结论  芹菜素能够诱导乳腺癌T47D细胞系p53依赖性凋亡及G₂/M期阻滞, 从而明显抑制其增殖。      

TSG101的下调对乳腺癌细胞的作用

目的:研究肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSGl01)的下调对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞的作用及TSG101在乳腺癌组织中的表达.方法:应用脂质体法将靶向TSG101的小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)转染入乳腺癌细胞系MCF-7细胞中.分别使用MTT法、流式细胞仪、transwell小室法检测siRNA干扰后MCF-7细胞增殖能力、细胞周期、细胞凋亡率和细胞迁移能力的变化.使用免疫组织化学方法检测TSG101在54例乳腺浸润性导管癌及癌旁正常乳腺组织中的表达.结果:MTT结果显示,TSG101 siRNA转染后的MCF-7细胞与对照组相比,增殖能力减弱.细胞周期结果显示.TSG101 siRNA转染后的MCF-7细胞周期G0/G1期及S期比例(70.51±0.23;23.65±0.78)与对照组(59.15±0.77,34.96±0.45)、(59.21±0.68.34.89±0.30)相比,G0/G1期比例增多,S期比例减少.细胞凋亡结果显示,TSG101 siRNA转染后的MCF-7细胞(13.71±1.31)与对照组(4.37±0.87)、(6.00±0.08)相比,细胞凋亡率增加.细胞迁移结果显示,TSG101 siRNA转染后的MCF-7细胞(4.60±0.80)与对照组(24.47±1.90)、(23.80±2.20)相比,细胞迁移能力减弱.免疫组化实验结果显示,TSG101蛋白主要定位于乳腺癌细胞质和(或)细胞核内,呈棕黄色颖粒.54例乳腺癌组织中TSG101阳性表达40例(74.07%),TSG101在癌旁正常乳腺组织中不表达或呈微弱的胞质表达,TSG101在乳腺癌组织中的表达高于癌旁正常乳腺组织.结论:TSG101的下调能够抑制乳腺癌细胞系MCF-7细胞的增殖,诱导凋亡,阻滞细胞周期于G1/S期,并且降低其迁移能力.TSG101可能参与乳腺癌的发生、发展过程.     

辛伐他汀对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用及机制研究

目的 探讨辛伐他汀（SVA）体外对乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用及其可能的机制。 方法 选用人乳腺癌MCF-7细胞进行体外培养,采用四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度SVA（0、3.25、6.25、12.5、25、50和100 μmol／L）处理MCF-7细胞24、48、72 h后的增殖抑制作用,荧光染色法观察SVA（0、2和4 μmol／L）处理MCF-7细胞48 h后的凋亡形态学变化,流式细胞仪测定SVA（0和4 μmol／L）处理MCF-7细胞48 h后的细胞周期变化,免疫印迹法分析SVA（0、2、4和8 μmol／L）处理MCF-7细胞72 h后细胞内Bcl-2和Bax蛋白水平的表达。结果 不同浓度SVA处理不同时间后,MCF-7细胞的增殖明显受到抑制,且增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性;荧光显微镜观察发现SVA能够诱导MCF-7细胞出现核固缩、染色质凝集等凋亡形态学改变。流式细胞仪检测细胞周期显示,SVA阻滞MCF-7细胞于G0／G1期。免疫印迹 结果 显示,SVA处理组的Bcl-2蛋白表达水平低于对照组,Bax蛋白表达水平明显高于对照组,且随SVA浓度的增高,Bcl-2蛋白水平逐渐降低,Bax蛋白水平逐渐升高。结论 SVA对人乳腺癌MCF-7细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖性,其抗肿瘤机制可能与诱导细胞周期阻滞、下调Bcl-2蛋白及上调Bax蛋白表达有关。     

芹菜素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞系非P53依赖性凋亡的研究

  目的  探讨芹菜素(Apigenin)对乳腺癌MDA-MB-231细胞系凋亡的影响。  方法  常规培养MDA-MB-231细胞,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法评价芹菜素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。荧光染色法观察细胞形态学变化。流式细胞术(FCM)Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。Western blot检测不同浓度芹菜素对Caspase-3,PARP,突变型P53,P73,PIG3,Bax,Bcl-2等凋亡相关蛋白表达的影响。RNA干扰技术检测P73对凋亡及下游靶基因PIG3表达的影响。  结果  MTT结果显示,芹菜素10、20及40 μM分别处理细胞24 h,发现芹菜素可有效抑制MDA-MB-231细胞增殖,且具有浓度依赖性和时间依赖性,实验组与对照组比较差异具有统计学意义(P < 0.05),两组组间比较差异具有统计学意义(P < 0.05);荧光染色结果显示,对照组未观察到凋亡细胞,芹菜素10 μM、20 μM及40 μM组细胞中均可见凋亡小体,其数目随芹菜素浓度的增加而逐渐增加,具有浓度依赖性;流式细胞术结果显示,与对照组比较,芹菜素10 μM,20 μM及40 μM组早期凋亡率逐渐增加,呈明显的量效关系,实验组与对照组比较差异具有统计学意义(P < 0.05);Western blot结果显示,与对照组相比,芹菜素10μM、20μM及40μM组Caspase-3、PARP剪切带含量明显增加,P73、PIG3及Bax表达增加,而突变型P53与Bcl-2表达减少,且具有浓度依赖性。RNA干扰结果显示,与阴性对照组相比,p73-siRNA可有效抑制芹菜素诱导的PIG3表达,Caspase-3和PARP剪切含量也相应降低,实验组与对照组比较差异具有统计学意义(P < 0.05)。  结论  芹菜素可通过非P53依赖性凋亡有效抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,其机制可能与下调突变型p53表达,上调P73介导的PIG3表达,以及Bax/Bcl-2比值增加有关。      

贝母素乙通过调控PI3K/Akt信号通路诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的：探究贝母素乙（Peiminine）对乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡的影响及其可能作用机制。方法：采用不同浓度贝母素乙或联合PI3K抑制剂LY294002干预MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖能力;Hoechst33258染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化;Western blotting检测细胞中PI3K(p110α)、Akt、p-Akt(ser473)、Bad、Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3以及线粒体和胞浆中细胞色素C(Cyt C)等蛋白表达水平。结果：贝母素乙可呈时间-浓度依赖性抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞出现凋亡形态改变,促进细胞凋亡,并降低线粒体膜电位,上调细胞中Bad、Bax、cleaved-Caspase-3及胞浆中Cyt C蛋白表达水平,下调PI3K(p110α)、p-Akt、Bcl-2和线粒体中Cyt C蛋白表达水平,而Akt蛋白表达水平无显著变化。然而,联合LY294002干预可增强贝母素乙对MCF-7细胞凋亡的促进作用。结论：贝母素乙可诱导乳腺癌MCF-7细胞凋...     

致康胶囊对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨致康胶囊对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖及凋亡的影响。方法:采用0（对照组）、0.5、1.0、2.0 mg/ml 致康胶囊培养液分别处理乳腺癌细胞MCF-7,分别于培养后24、48和72 h计数MCF-7细胞数。采用MTT法检测致康胶囊对乳腺癌MCF-7细胞生长增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期;PI 单染流式细胞仪检测致康胶囊对MCF-7细胞凋亡的影响。结果:不同浓度致康胶囊能有效地抑制MCF-7细胞增殖,且随浓度增加和作用时间延长,细胞的增殖抑制率增加。0.5、1.0、2.0 mg/ml的致康胶囊作用MCF-7细胞72 h后,G0/G1期细胞所占细胞周期的比例分别为19.33%±10.38%、14.12%±5.37%和26.84%±2.13%;而对照组G0/G1期比例为51.83%±1.90%。0.5、1.0、2.0 mg/ml致康胶囊处理48 h后细胞的凋亡率分别为2.09%±0.74%、3.84%±0.78%和 5.35%±0.83%。结论:致康胶囊能抑制MCF-7细胞的体外增殖,且抑制作用表现为时效和量效关系;并能通过阻滞细胞周期于G2/M期,促进乳腺癌细胞凋亡。     

JNJ-7706621对人乳腺癌细胞周期及凋亡的影响

  目的   探讨周期素依赖性蛋白激酶（cyclin-dependent kinases,CDKs）抑制剂JNJ-7706621对人乳腺癌细胞周期及凋亡的影响。  方法  常规培养乳腺癌T47D、MD-MB-231细胞,MTT法检测不同浓度JNJ-7706621（0、1、2、4 μM）对乳腺癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测JNJ-7706621对细胞周期的影响,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测JNJ-7706621对细胞凋亡的影响;West. ern blot检测JNJ-7706621对凋亡及周期相关蛋白表达的影响。  结果  JNJ-7706621能够抑制乳腺癌T47D、MDA-MB-231细胞增殖,具有浓度和时间依赖性;流式细胞术显示,JNJ-7706621可将T47D、MDA-MB-231细胞的周期阻滞于G2/M期,具有浓度依赖性,与对照组相比差异有统计学意义（P < 0.05）;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法示随着JNJ-7706621浓度增加或作用时间的延长,T47D、MDA-MB-231细胞凋亡所占比例逐渐增加,与对照组相比,差异有统计学意义（P < 0.05）;Western blot结果显示,随JNJ-7706621浓度增加,Bcl-2的表达明显下调,Caspase3、PARP的剪切明显增高,而p53的表达无明显变化;周期相关蛋白CDK1的表达无明显变化;CDK1在Thr161位点的磷酸化水平降低,而在Tyr15位点的磷酸化水平增高;  结论   在体外条件下,JNJ-7706621可通过阻滞细胞周期与诱导细胞发生凋亡的方式,有效抑制乳腺癌细胞增殖,可能与抑制CDK1在Thr161位点的磷酸化水平有关。      

芳香化酶抑制剂来曲唑诱导乳腺癌细胞凋亡实时观测模型的建立

  目的  构建芳香化酶过表达的乳腺癌细胞模型以及芳香化酶抑制剂来曲唑诱导乳腺癌细胞凋亡的实时观测模型。  方法  采用慢病毒包被介导基因转导方法,构建凋亡荧光指示蛋白VC3AI稳定表达的MCF-7-VC3AI和ZR7530-VC3AI工具细胞系,同时将该细胞系过表达芳香化酶,进而构建来曲唑诱导乳腺癌细胞凋亡实时观测模型。采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测和验证细胞中芳香化酶表达,通过MTT法检测细胞增殖。分别观察过表达芳香化酶的MCF-7-VC3AI、ZR7530-VC3AI细胞在雄激素和雌激素作用下的体外增殖能力,以及来曲唑作用下细胞的增殖能力。  结果  实时荧光定量RCR检测结果显示,过表达芳香化酶MCF-7-VC3AI、ZR7530-VC3AI细胞模型中芳香化酶mRNA的表达水平明显高于MCF-7-VC3AI、ZT7530-VC3AI细胞。蛋白质印迹法结果显示,两种细胞模型中,芳香化酶蛋白的表达水平明显升高。MTT法检测结果显示,过表达芳香化酶的细胞模型在雄激素和雌激素刺激下增殖加快。100 nmol/L雄激素作用下,过表达芳香化酶MCF-7-VC3AI细胞的增殖率约为对照组的1.2倍（P < 0.01）,而ZR7530-VC3AI细胞的增殖率约为对照组的1.5倍（P < 0.01）。来曲唑以浓度依赖方式抑制雄激素诱导的细胞增殖。10 μmol/L来曲唑作用下,过表达芳香化酶MCF7-VC3AI细胞增殖率为对照组的80%,而过表达芳香化酶ZR7530-VC3AI细胞增殖率为对照组的68%。  结论  成功建立了来曲唑诱导乳腺癌细胞凋亡的实时观测模型,为研究来曲唑的作用机制奠定了重要的实验基础。      

PUMA基因转染乳腺癌MCF-7细胞增强表柔比星致凋亡敏感性的研究

  目的  探讨PUMA基因转染是否增强乳腺癌MCF-7细胞对表柔比星致凋亡的敏感性。   方法  应用脂质体介导重组真核表达载体PUMA-pCDNA3和空载体pCDNA3质粒瞬时转染至乳腺癌MCF-7细胞中, G418筛选阳性细胞。将系列浓度(0.01~100μmol/L)的表柔比星分别作用于MCF-7、MCF-7/PUMA和MCF-7/pCDNA3细胞72 h, MTT法测定各组细胞的存活率并计算IC50, FCM、TUNEL法检测细胞凋亡情况, Western blotting检测各组细胞PUMA蛋白表达的变化。   结果  MCF-7、MCF-7/PUMA和MCF-7/pCDNA3细胞的表柔比星IC50分别为(13±1.4)、(1.8±0.2)和(10.7±1.3)μmol/L, MCF-7/PUMA细胞对表柔比星作用的敏感性增加了7.2倍。表柔比星以剂量依赖方式诱导MCF-7细胞凋亡, 但对MCF-7/PUMA细胞所诱导的凋亡比MCF-7和MCF-7pCDNA3更明显。低浓度表柔比星(0.1μmol/L)轻微引起MCF-7/pCDNA3[(1.15±0.26)%]和MCF-7细胞凋亡[(0.9±0.24)%], 但能诱导MCF-7/PUMA细胞明显凋亡[(6.44±1.46)%]; 高浓度表柔比星(1μmol/L)诱导各组细胞凋亡, 但表柔比星MCF-7/PU MA细胞凋亡率[(35.47±9.36)%]明显高于MCF-7[(12.6±3.73)%]和MCF-7/pCDNA3细胞[(15.2±5.17)%], 差异均有统计学意义(P < 0.01);FCM和TUNEL方法检测显示相同的结果。PUMA蛋白在MCF-7/PUMA细胞中的表达明显高于MCF-7和MCF-7/pCD NA3细胞。   结论  PUMA基因稳定转染明显地增强了乳腺癌MCF-7细胞增强表柔比星致凋亡作用的敏感性。      

甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的:研究甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:采用MTT法检测甲异靛对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制;流式细胞仪测定细胞凋亡率;光学显微镜观察细胞形态的变化;westernblot法测定caspase-3、PARP及bcl-2表达。结果:甲异靛能明显抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖。甲异靛诱导MCF-7细胞凋亡,呈现典型细胞凋亡的形态变化,并呈时间和剂量依赖性,凋亡率最高可达(68.40±4.87)%,在细胞凋亡过程中出现PARP分子断裂和bcl-2下调,未检测到caspase-3。结论:甲异靛能诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡抑制细胞增殖,其发生机制可能与下调bcl-2有关。     

Fbxw7通过降解c-Myc和Cyclin E诱导胃癌细胞凋亡和生长阻滞

  目的  检测Fbxw7在胃癌组织中的表达并探讨其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。  方法  免疫组织化学染色技术检测Fbxw7在20例胃癌及对应癌旁组织中的表达; 应用Fbxw7过表达质粒和Fbxw7 shRNA分别转染人胃癌细胞系MGC-803和AZ521, Western blot技术检测Fbxw7及其靶蛋白c-Myc和Cyclin E表达变化, 通过MTT和流式细胞术检测Fbxw7对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。  结果  Fbxw7在胃癌组织中的表达显著低于对应的癌旁组织(P < 0.05);Fbxw7过表达的MGC-803细胞中c-Myc和Cyclin E蛋白表达明显减少, Fbxw7过表达诱导细胞凋亡和生长阻滞(P < 0.05);敲低AZ521细胞中Fbxw7表达引起c-Myc和Cy- clin E蛋白蓄积, 导致细胞凋亡减少和增殖能力增强(P < 0.05)。  结论  Fbxw7在胃癌组织中低表达, 其可能通过泛素化降解c-Myc和Cyclin E诱导胃癌细胞凋亡和生长阻滞, 提示Fbxw7在胃癌中可能作为关键抑癌因子发挥功能。      

RNA干扰CysLT2R对LTC4介导的人乳腺癌细胞生物学行为的影响

  目的   观察MCF-7细胞低表达半胱氨酰白三烯Ⅱ型受体(CysLT2R)对半胱氨酰白三烯(LTC4)介导的细胞生长、侵袭能力、细胞周期和凋亡等生物学行为的影响。   方法   针对CysLT2R的已知cDNA序列, 设计并体外转录合成4条特异性shRNA, 用脂质体介导转染入MCF-7细胞48 h, 同时设阴性对照组(1条非特异性序列转染)、正常MCF-7对照组(未转染)。Western blot检测干扰后CysLT2R蛋白表达水平下调的变化。应用噻唑蓝比色(MTT)法检测50 nM LTC4作用下细胞株生长能力; 应用流式细胞仪检测50 nM LTC4作用下细胞周期和凋亡变化; 应用趋化小室检测50 nM LTC4作用下MCF-7细胞侵袭运动活性。   结果   与正常MCF-7细胞和阴性对照组比较, MCF-7细胞CysLT2R低表达组的细胞生长增殖无明显变化(P > 0.05), 干扰后, MCF-7细胞表现出侵袭活性明显增强(P < 0.05), 细胞周期和凋亡无明显变化。   结论   CysLT2R在人乳腺癌MCF-7细胞的侵袭过程中起着一定的作用, CysLT2R有可能是一种新的乳腺肿瘤抑制基因。      

甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的：研究甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法：采用MTT法检测甲异靛对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制;流式细胞仪测定细胞凋亡率;光学显微镜观察细胞形态的变化;westernblot法测定caspase-3、PARP及bcl-2表达。结果：甲异靛能明显抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖。甲异靛诱导MCF-7细胞凋亡,呈现典型细胞凋亡的形态变化,并呈时间和剂量依赖性,凋亡率最高可达（68.40±4.87）%,在细胞凋亡过程中出现PARP分子断裂和bcl-2下调,未检测到caspase-3。结论：甲异靛能诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡抑制细胞增殖,其发生机制可能与下调bcl-2有关。     

诱导建立乳腺癌MCF-7放射耐受细胞亚株的实验研究

  目的  探索诱导并建立人乳腺癌MCF-7放射耐受细胞亚株的体外实验方法。  方法  体外培养MCF-7细胞株, 应用梯度递增的X线对MCF-7进行诱导照射, 照射剂量达到59Gy时, 得到放射耐受细胞亚株(MCF-7R), 扫描电镜和透射电镜观察亲本株MCF-7与放射耐受细胞亚株MCF-7R细胞超微结构, 流式细胞仪检测其细胞周期分布, 集落形成实验检测其放射敏感性, 并计算存活分数, 多靶单击模型拟合细胞存活曲线。  结果  与MCF-7相比, MCF-7R外形及细胞器均出现明显改变; G₂/M期比例明显降低; (13.32%vs.9.43%)放射敏感性参数SF₂即照射2 Gy时的细胞存活分数升高34%(P < 0.001), 准域剂量Dq值由2.261 Gy升高至3.695 Gy(P < 0.05), 平均致死剂量D_o值由1.215 Gy升高至1.834 Gy(P < 0.05)。  结论  照射剂量梯度递增法是可行的建立人乳腺癌放射耐受细胞亚株的方法, 得到的放射耐受亚株细胞形态及细胞生物学特性与亲本株细胞相比较有明显差异。      

蟾毒灵与顺铂协同抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的机制探讨

目的 探讨蟾毒灵（Bufalin）联合顺铂对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响,并探讨可能的协同机制。方法 采用MTT法检测空白对照组（仅培养液）、单纯细胞对照组和实验组的细胞增殖率,实验组加入不同浓度的顺铂或Bufalin单药或以固定比例（Bufalin∶顺铂=1 nmol／L∶1 μmol／L）联合作用24 h。分别采用20 nmol／L Bufalin、20 μmol／L顺铂单药或联合作用24 h,用流式细胞术检测细胞凋亡,并用Western Blotting检测活化的Met（p-Met）、Met、活化的Src（p-Src）、Src、PARP及其裂解cleaved PARP蛋白的表达。结果 MTT法检测显示,顺铂和Bufalin均以剂量依赖方式抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖。在顺铂≥0.1 μmol／L和Bufalin≥0.1 nmol／L时两药联合作用可协同抑制MCF-7细胞增殖（0＜CI＜0.433）。流式细胞术检测显示,20 μmol／L顺铂作用24 h可诱导（10.7±4.8）％ 的MCF-7细胞凋亡,而20 nmol／L Bufalin作用24 h未明显诱导细胞凋亡,20 nmol／L Bufalin与20 μmol／L顺铂联合作用24 h后可诱导（40.8±8.5）％的MCF-7细胞凋亡。Western Blotting检测显示,顺铂作用后可导致Met和Src活化,Bufalin与顺铂联合作用后可抑制顺铂诱导的Met和Src活化,同时上调PARP裂解。结论 Bufalin可能通过抑制顺铂诱导的Met和Src活化与顺铂协同抑制MCF-7细胞增殖,增强顺铂诱导的细胞凋亡。     

MLN4924促进人肺腺癌细胞株A549凋亡的机制研究

  目的  观察MLN4924对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,探讨MLN4924促进凋亡的作用机制。  方法  不同浓度的MLN4924作用细胞不同时间后,采用CCK-8检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、NF-κB p65及CDT1相对表达量。  结果  MLN4924能够明显抑制A549细胞的增殖,并且具有浓度和时间依赖性。流式细胞仪检测结果显示药物作用后,细胞被阻滞在S期。Western blot结果显示药物作用后细胞内Caspase-3、CDT1蛋白的表达量增加,而NF-κB p65的表达量减少。  结论  MLN4924能够明显抑制A549细胞增殖、促进细胞凋亡,其相关机制为MLN4924可阻滞细胞于S期,增加Caspase-3蛋白表达,抑制NF-κB通路的激活。