急性缺血再灌注小鼠肾损伤修复过程中Wnt-β-catenin信号的表达

目的 观察急性肾损伤（AKI）后恢复过程中肾组织内Wnt-β-catenin信号分子表达的分布及变化, 探讨Wnt-β-catenin信号通路在AKI修复过程中的作用。 方法 (1)应用BAT-gal转基因报告鼠建立急性肾缺血再灌注损伤（IRI）模型, 在IRI后1 d断尾取血,并于IRI后第2和7天处死报告鼠取血并收集肾脏标本。肾组织切片行PAS染色观察肾病理改变及X-gal-LTL(近曲小管标记物)、X-gal-NKCC2（髓袢标记物）、X-gal-DBA（集合管标记物）免疫荧光组织化学双重染色,观察Wnt-β-catenin信号的分布、表达与变化。(2)应用野生型小鼠建立IRI模型,于IRI后第2、5、7天处死小鼠获取肾脏标本用Western 印迹方法检测Wnt4及其共同受体低密度脂蛋白受体相关蛋白6（Lrp6）的表达水平。 结果 IRI小鼠肾损伤后第2天,PAS结果显示损伤肾脏的肾小管上皮细胞排列紊乱,可见明显的肾小管上皮细胞脱落及基底膜裸露,管腔内可见脱落的细胞和细胞碎片;7 d时小鼠肾小管上皮细胞损伤面积较2 d时明显缩小。X-gal染色显示第2天损伤的肾脏皮质和外髓质层中可见少数肾小管出现Wnt信号的表达,间质中Wnt信号的反应较高,第7天与第2天比较,Wnt信号表达明显增强。Western印迹结果显示,Wnt4于IRI后2 d增高,第5、7天亦较第2天明显增高;其共同受体磷酸化Lrp6代表激活的Wnt-β-catenin信号,在IRI 2 d后明显增高,而在无损伤成鼠肾组织中未检测到。免疫双染提示主要是近曲小管和髓袢的上皮细胞对Wnt信号通路应答。 结论 急性肾损伤时Wnt-β-catenin信号通路被激活,可能参与了肾小管上皮细胞的修复机制。     

肠缺血再灌注损伤后RSpo1和β-catenin在肠上皮的表达及作用

目的 探讨肠缺血再灌注损伤(IIRI)后肠上皮R-Spondin1(RSpo1)mRAN和β-链接素(β-catenin)mRAN的变化及其作用机制.方法 健康雄性昆明小鼠50只,分为对照组(10只)和实验组(40只).对照组仅作剖腹手术.实验组小鼠麻醉后夹闭肠系膜动脉20 min后松夹,然后再分为4组,即再灌注6 h(A组),12 h(B组),24 h(C组)和48 h(D组)组.采用RT-PCR方法检测小肠组织RSpo1和β-eatenin mRNA的表达.结果 IIRI后6,12,24,48 h小肠绒毛高度逐渐递增,前3个时点显著低于对照组(P<0.01),48 h也显著低于对照组(P<0.05).β-catenin表达变化和小肠绒毛高度变化趋势一样,但其表达均显著低于对照组(P<0.01).BSpo1表达在IIRI后6 h显著降低于对照组(P<0.05),12 h表达逐渐增加,24 h达到高峰并显著高于对照组(P<0.01);随后其表达迅速下降,48 h显著低于对照组(P<0.05).结论 缺血再灌注损伤能抑制β-catenin和早期BSpo1表达,诱导中期RSpo1表达.两者均与肠道上皮干细胞增殖和分化有关,参与肠黏膜受损后的修复过程.     

辛伐他汀预先给药对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响

目的 评价辛伐他汀预先给药对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠96只,体重220～280 g,随机分为3组(n=32):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)和辛伐他汀预先给药组(Si组).IR组和Si组采用夹闭腹主动脉45 min后开放的方法制备脊髓缺血再灌注模型,Si组制备模型前3 d开始以辛伐他汀20 mg·kg-1·d-1灌胃,连续3 d.分别于再灌注6、12、24 h时取8只大鼠,进行后肢运动功能评分.分别于再灌注2、6、12、24 h时取8只大鼠,采集静脉血样,测定血清脑型肌酸激酶同工酶(CK-BB)活性.取完血样后取大鼠脊髓组织,测定Toll样受体4(TLR4)mRNA表达、NF-κB活性、TNF-α含量和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)含量,光镜下观察脊髓的病理学结果.结果 与S组比较,IR组和Si组后肢运动功能评分降低,血清CK-BB活性、脊髓TLR4mRNA表达、NF-κB活性、TNF-α和ICAM-1含量升高(P＜0.05或0.01).与IR组比较,Si组后肢运动功能评分升高,血清CK-BB活性、脊髓TLR4 mRNA表达、NF-κB活性、TNF-α和ICAM-1含量降低(P＜0.05或0.01).Si组脊髓病理学损伤程度轻于IR组.结论 辛伐他汀预先给药可减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤,其机制与下调TLR4表达、抑制NF-κB激活,从而减轻炎性反应有关.     

内皮祖细胞与肾脏缺血再灌注损伤

内皮祖细胞是血管内皮细胞的前体细胞,在某些损伤因素刺激下,可从骨髓动员到外周血参与损伤血管的修复,对肾脏缺血再灌注损伤产生了重要影响,引起了国内外学者的关注.本文就内皮祖细胞在肾缺血再灌注损伤中的研究进展作一综述.     

干细胞与肾脏缺血再灌注损伤

本文回顾了干细胞和肾缺血再灌注相关的文献,并总结了目前的研究结果。现在还不清楚肾脏中是否存在干细胞,但干细胞能分化成间质、内皮及肾小管上皮细胞等,这种过程在肾损伤后增强,并有助于肾功能的恢复。其潜在的机制很可能是干细胞的可塑性,但也可能是细胞融合的结果。这些结果为研究肾缺血再灌损伤引起的急性肾衰以及肾移植物损伤的治疗方法提供了新的思路。     

干细胞与肾脏缺血再灌注损伤

本文回顾了干细胞和肾缺血再灌注相关的文献,并总结了目前的研究结果.现在还不清楚肾脏中是否存在干细胞,但干细胞能分化成间质、内皮及肾小管上皮细胞等,这种过程在肾损伤后增强,并有助于肾功能的恢复.其潜在的机制很可能是干细胞的可塑性,但也可能是细胞融合的结果.这些结果为研究肾缺血再灌损伤引起的急性肾衰以及肾移植物损伤的治疗方法提供了新的思路.     

氯胺酮对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨氯胺酮对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠24只,随机分为4组(n=6):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、氯胺酮2 ms/kg组(K_1组)及氯胺酮10 mg/kg组(K_2组).采用无创动脉夹夹闭左肾动脉45 min,再灌注6 h,制备大鼠肾脏缺血再灌注模型.K_(1,2)组于再灌注前5 min分别经尾静脉注射氯胺酮2、10 mg/kg.于再灌注6 h时取右心耳血样2 ml,测定血清肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)的浓度;光镜下观察肾组织病理学结果 ;采用免疫组织化学法测定肾组织Fas或Caspase-3表达水平;采用TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡情况,并计算凋亡指数(AI).结果 与S组比较,其余3组血清Cr、BUN的浓度升高,肾组织Fas、Caspase-3的表达上调,AI升高(P<0.01);与IR组比较,K_(1,2)组血清Cr、BUN的浓度降低,肾组织Fus、Caspase-3的表达下调,AI降低(P<0.01);与K_1组比较,K_2组血清Cr、BUN浓度降低,肾组织Fas、Caspase-3的表达下调,AI降低(P<0.01).K_2组肾组织病理损伤较K_1组明显减轻.结论 氯胺酮可减轻肾脏缺血再灌注损伤,且呈剂量依赖性,可能与其抑制肾小管上皮细胞凋亡有关.     

缺血预处理对肾脏缺血再灌注损伤保护作用的研究进展

肾缺血再灌注损伤导致急性缺血性肾衰竭在临床上十分常见.研究显示缺血预处理对肾缺血再灌注损伤具有保护作用.近年来关于肾缺血预处理作用机制的报道较多,本文就缺血预处理对肾缺血再灌注损伤保护作用的研究现状作一综述.     

HIF-1在肾脏缺血再灌注损伤的表达及其促进损伤修复作用的研究进展

肾脏缺血再灌注损伤(IRI)主要表现为急性肾小管坏死,因此促进肾小管上皮细胞修复是IRI肾脏修复的关键,而我们发现缺氧诱导因子-1(HIF-1)蛋白质在该过程起极其重要的作用,本文拟对HIF-1蛋白质参与肾小管上皮细胞的再生和修复过程的发生机制作一综述.     

Intermedin预处理大鼠肾脏缺血再灌注损伤修复过程中CyclinE和CDK2表达的变化

目的 观察Intermedin(IMD)预处理大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)修复过程中细胞周期蛋白E(cyclinE)和其依赖性激酶2(CDK2)表达的变化,IMD可能的促进肾组织再生修复的作用机制.方法 健康雄性Wistar大鼠,体重180～220g,共144只随机分为对照组、IRI组、转空质粒组、转IMD组.对照...     

补体和肾缺血再灌注损伤

肾缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I／R)损伤是导致急性肾衰竭(acute renal failure，ARF)最常见的原因。补体系统通过促进炎性细胞的浸润和凋亡在肾I／R损伤中发挥着重要作用。利用特异的补体抑制剂抑制补体活化可能产生有效的肾脏保护作用。     

PPARγ与肾脏缺血再灌注损伤的研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator aetivated receptor gamma,PPARγ)核转录因子超家族成员之一[1],主要参与糖脂代谢、脂肪细胞分化、机体免疫及增强胰岛素敏感性.与糖尿病、肥胖、高血压、动脉粥样硬化、炎症性疾病、休克、肿瘤、不育等疾病密切相关.     

不同剂量瑞芬太尼对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨不同剂量瑞芬太尼对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠60只,体重220～250 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为5组(n=12):假手术组(S组)、模型组(M组)、低、中和高剂量瑞芬太尼组(RL组、RM组和RH组).除S组外均采用夹闭双侧肾动脉45 min后恢复再灌注法建立肾脏缺血再灌注模型.RL组、RM组和RH组于缺血前15min分别经尾静脉输注瑞芬太尼0.2、0.6、1.0μg·kg-1·min-1至再灌注30 min;S组和M组给予等容量生理盐水替代.于再灌注30 min及24 h时经股静脉采集血样1 ml,测定血清BUN及Cr浓度;于再灌注24h时取肾组织,测定MDA含量及SOD、Ca2+-ATP酶活性,光、电镜下观察肾组织病理学结果.结果 与S组比较,其余4组血清BUN和Cr浓度、肾组织MDA含量升高,SOD和Ca2+-ATP酶活性降低(P＜0.05或0.01),肾组织有不同程度的病理学损伤.与M组比较,RL组、RM组和RH组血清BUN和Cr浓度、肾组织MDA含量降低,SOD和Ca2+-ATP酶活性升高(P＜0.05或0.01),肾组织病理学损伤减轻o RL组、RM组和RH组随瑞芬太尼剂量增加,血清BUN和Cr浓度、肾组织MDA含量逐渐降低,SOD和Ca2+-ATP酶活性逐渐升高(P＜0.05或0.01),肾组织病理学损伤逐渐减轻.结论 瑞芬太尼可减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤,且与剂量有关,其机制与抑制脂质过氧化反应、提高Ca2+-ATP酶活性有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of different doses of remifentanil on the renal ischemiareperfusion (I/R) injury in rats. Methods Sixty male SD rats weighing 220-250 g were randomly divided into 5 groups ( n = 12 each): sham operation group (group S), model group (group M), low, median and high doses of remifentanil groups (RL, RM and RH groups). The rats were anesthetized with intraperitoneal 5% chloral hydrate 6 ml/kg. Renal ischemia was induced by clamping the bilateral renal arteries for 45 min using an atraumatwere infused via the caudal vein 15 min before ischemia respectively and the infusion was stopped at 30 min of reperfusion, while S and M groups received equal volume of normal saline instead. Blood samples were collected from the femoral vein at 30 min and 24 h of reperfusion for measurement of serum creatinine (Cr) and blood urea nitrogen (BUN) concentrations. The rats were sacrificed at 24 h of reperfusion and the renal tissues were removed for determination of MDA content, SOD and Ca2+ -ATPase activities. Pathological changes in renal tissues were observed with light and electron microscopes. Results Compared with group S, the concentrations of serum Cr and BUN and content of MDA were significantly increased, while activities of SOD and Ca2+ -ATPase were significantly decreased in the other 4 groups ( P ＜ 0.05 or 0.01). Compared with group M, the concentrations of serum Cr and BUN and content of MDA were significantly decreased, activities of SOD and Ca2+ -ATPase were significantly increased (P ＜0.05 or 0.01) and the pathological changes were reduced in RH, RM and RL groups. The plasma BUN and Cr concentrations and MDA content were decreased gradually and SOD and Ca2+ -ATPase activities were increased gradually with the increase in the doses of remifentanil in RL, RM and RH groups ( P ＜ 0.05 or 0.01 ).Remifentanil infusion significantly attenuated the pathologic changes in a dose-dependent manner. Conclusion Remifentanil can reduce the renal I/R injury in a dose-dependent manner by inhibiting lipid peroxidation and increasing Ca2+ -ATPase activity.     

缺血后处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响

目的探讨缺血后处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响。方法SD大鼠32只,雌雄不拘,随机分为4组（n=8）,假手术组（Ⅰ组）;对照组（Ⅱ组）建立肾缺血再灌注（I/R）模型;不同时间缺血后处理组（Ⅲ组和Ⅳ组）,建立I/R模型,Ⅲ组于缺血后再灌注10s,停灌10s,反复3次;Ⅳ组缺血后再灌注2min,停灌2min,反复3次。测定再灌注24h时血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）浓度、超氧化物岐化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）浓度,光镜下进行肾组织病理形态学观察,采用免疫组化法测定肾组织血红素氧合酶-1（HO-1）表达。结果再灌注24h时,与Ⅰ组比较,其余3组血清Cr、BUN和MDA浓度升高,SOD活性和HO-1表达降低（P〈0.01）;与Ⅱ组比较,Ⅲ组和Ⅳ组血清Cr、BUN、MDA浓度和HO-1表达降低,SOD活性升高（P〈0.05或0.01）;Ⅲ组和Ⅳ组各指标差异无统计学意义（P〉0.05）。Ⅲ组和Ⅳ组病理改变明显轻于Ⅱ组。结论缺血后处理可减轻大鼠肾缺血再灌注损伤,其机制与上调HO-1的表达和清除氧自由基有关。     

缺血后处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响

目的探讨缺血后处理对大鼠肾缺血再灌注（I／R）损伤的影响及其机制。方法18只雄性SD大鼠随机分为3组（n=6）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（I／R组）和缺血后处理组（IPo组）。采用夹闭双侧肾蒂45min-再灌注6h制备肾脏缺血再灌注损伤模型。IPo组在夹闭双侧肾蒂45min后，再灌注10s，缺血10s，重复3次后，完全恢复肾血流。再灌注6h时开胸，取心脏血后处死大鼠，取肾组织。测定血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）和尿酸（UA）浓度，肾组织中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性；光镜下观察肾组织病理学改变；采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记（TUNEL）法检测肾组织中凋亡细胞，光镜下计数凋亡细胞，并计算肾小管上皮细胞凋亡指数（AI）。结果与S组比较，I／R组和IPo组Cr和BUN浓度升高（P〈0．05），UA浓度差异无统计学意义（P〉0．05），肾组织SOD活性降低，MDA含量升高，肾小管上皮细胞凋亡指数增加（P〈0．05），病理损伤明显。与I／R组比较，IPo组Cr和BUN浓度降低（P〈0．05），UA浓度差异无统计学意义（P〉0．05），SOD活性升高，MDA含量降低，肾小管上皮细胞凋亡指数减少（P〈0．05），病理损伤减轻。结论缺血后处理能减轻大鼠肾缺血再灌注损伤，其机制与增强肾脏抗氧化能力和抑制肾组织细胞凋亡有关。     

硝苯地平对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨硝苯地平对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响.方法 健康雄性SD大鼠42只,体重220～250 g,随机分为3组(n=14):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)和硝苯地平组(N组).IR组和N组采用夹闭双侧肾动、静脉45 min后恢复灌注的方法制备大鼠肾缺血再灌注模型,S组不夹闭双侧肾动、静脉.N组于夹闭前15 min和再灌注前15 min分别尾静脉注射硝苯地平0.1 mg/kg,IR组分别尾静脉注射等量溶剂.于再灌注6和24 h时留尿,测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性;抽取腹主动脉血,测定血清肌酐(Cr)、MDA和一氧化氮(NO)浓度,然后处死大鼠取肾,采用流式细胞仪检测肾皮质细胞凋亡情况、热休克蛋白70(HSP70)的表达,免疫组化法测定内皮素-1(ET-1)的表达.结果 与S组比较,IR组血清Cr和MDA浓度、尿NAG活性、HSP70和ET-1表达水平及肾皮质细胞凋亡率均升高(P＜0.05),血清NO浓度差异无统计学意义(P＞0.05);与IR组比较,N组血清Cr和MDA浓度、尿NAG活性、ET-1表达水平及肾皮质细胞凋亡率降低,血清NO浓度升高(P＜0.05),HSP70表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 硝苯地平可减轻大鼠肾缺血再灌注损伤,可能与其抑制ET-1表达有关.     

雷帕霉素对肾脏缺血再灌注损伤的影响

移植肾在经历缺血再灌注损伤后可以产生不同程度的损伤,而雷帕霉素作为临床上常用的免疫抑制剂,又可对再灌注的移植肾产生多方面的影响.本文就雷帕霉素对肾脏缺血再灌注损伤的影响作一综述.     

肢体缺血后处理和肾脏缺血后处理对大鼠肾脏缺血-再灌注损伤的影响

目的 探讨肢体缺血后处理和肾脏缺血后处理对大鼠肾脏缺血-再灌注(I-R)损伤的影响.方法 24只大鼠随机均分为假手术组(S组)、缺血-再灌注组(I-R组)、左下肢缺血后处理组(LIP组)及肾脏缺血后处理组(RIP组).S组仅对左肾动脉进行游离;I-R组:夹闭左肾动脉45 min后松开,左肾再灌注6 h;LIP组在左肾复灌前6 min时左股动脉夹闭5 min;RIP组在左肾缺血45min后灌注10 s,停灌10 s,反复6次;检测复灌6 h时血清肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN);光镜下观察肾组织病理改变,TUNEL法检测肾组织中凋亡细胞并计算凋亡指数(AI);免疫组化法检测肾组织Fas、Caspase-3表达;电镜下观察肾单位超微结构改变.结果 与S组比较,其他三组大鼠BUN、Cr浓度升高(P<0.01)、肾组织病理改变明显、肾组织Fas、Caspase-3阳性指数和AI增加(P<0.01).与I-R组比较,LIP、RIP组大鼠BUN、Cr浓度降低(P<0.01),肾组织Fas、Caspase-3阳性指数和AI降低(P<0.01).RIP组AI明显低于LIP组(P<0.05).结论 在肾脏I-R损伤的病理过程中,肾小管上皮细胞凋亡可以由胞膜上的Fas被激活而最终导致靶细胞凋亡;两种后处理都可以抑制肾小管上皮细胞凋亡,减轻I-R损伤.     

补体和肾缺血再灌注损伤

肾缺血再灌注 (ischemia/reperfusion ,I/R)损伤是导致急性肾衰竭 (acuterenalfailure ,ARF)最常见的原因。补体系统通过促进炎性细胞的浸润和凋亡在肾I/R损伤中发挥着重要作用。利用特异的补体抑制剂抑制补体活化可能产生有效的肾脏保护作用     

抑制Ppif基因的表达对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察抑制Ppif基因的表达对缺血再灌注损伤肾脏的保护作用,并探讨其作用机制.方法 建立大鼠肾缺血再灌注模型,将实验动物随机分为3组:空白对照组、阴性对照组、治疗组(各20只).治疗组大鼠给Ppif基因靶向RNA干扰(RNAi)慢病毒载体(4μg)0.3 ml,阴性对照组再灌注时给予0.3 ml含体积分数0.01二甲基亚砜(DMSO)的生理盐水,空白对照组不夹闭肾蒂,余处理同阴性对照组.分别检测各组血肌酐(Cr)含量、尿素氮(BUN)含量、细胞凋亡指数(AI)、苏木素-伊红(HE)染色组织病理学分析.结果 治疗组与阴性对照组比较,血Cr和BUN均明显降低,AI明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05),HE染色组织病理学分析结果显示治疗组较另外2组缺血明显减轻.结论 Ppif基因靶向RNAi慢病毒载体能抑制大鼠Ppif基因的表达,从而抑制线粒体的凋亡,减轻肾脏缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To study the protective effect of Ppif gene inhibitor on renal ischemiareperfusion injury and the action mechansim. Methods A renal ischemia-reperfusion model was made in 60 rats, and the rats were evenly divided into three groups: control group (CON group), negative control group (NC group), and Ppif gene inhibitor group (treated group). The blood urea nitrogen (BUN) and creatinine (Cr), and renal cell apoptosis index (AI) were measured. Histopathological analysis was performed by using HE staining. Results A comparison between treated group and NC group showed that for treated group, the levels of both Cr and BUN were decreased, and AI decreased in the treated group as compared with the NC group (P ＜ 0. 05 ). Histolopathological analysis revealed that the ischemia in the treated group was significantly alleviated as compared with other two groups. Conclusion Ppif gene-targeted RNA interference ( RNAi ) lentiviral vector could inhibit the expression of Ppif gene in rats, thereby inhibiting the mitochondrial apoptosis and alleviating renal ischemia-reperfusion injury.