miR-29a对胶质瘤细胞CDC42表达及迁移和侵袭的影响

  目的  探讨胶质瘤miR-29a与CDC42表达的相互关系及其对肿瘤细胞侵袭迁移的影响。  方法  采用组织微阵列及锁定寡核苷酸原位杂交技术, 检测60例不同级别胶质瘤及10例非肿瘤对照脑组织中miR-29a的表达水平, 采用qRT-PCR、Westernblot及Transwell培养, 分别检测U251及其稳定表达miR-29a和无义对照序列的亚细胞系(U251-miR-29a及U251-scr)miR-29a、CDC42 mRNA及蛋白的表达及其迁移和侵袭能力, 并分析其相互关系。  结果  各级别胶质瘤miR-29a表达水平均显著低于对照脑组织, 并随肿瘤级别升高而减少, 差异均有统计学意义(P < 0.01)。U251-miR-29a的miR-29a表达量明显高于U251和U251-scr(P < 0.001), 其CDC42 mRNA和蛋白表达量明显降低(P < 0.05);CDC42 mRNA与其蛋白表达量呈正相关(r=0.834, P < 0.01), 而与miR-29a表达量呈负相关(r=-0.979, P < 0.01)。U251-miR-29a的迁移和侵袭能力明显低于U251和U251-scr(P < 0.001), 并均与CDC42蛋白表达量呈正相关(r=0.828, P < 0.01)。  结论  miR-29a表达水平是评价胶质瘤良恶性的重要参考指标, 胶质瘤细胞miR-29a表达异常减少是CDC42上调及迁移侵袭能力增强的重要因素, 补充外源性miR-29a可抑制靶基因CDC42表达, 阻止其侵袭迁移, 提示恶性胶质瘤基因治疗中具有重要的潜在应用价值。      

胶质瘤细胞miR-153上调对树突状细胞分化成熟及Nrf2表达的影响

目的:探讨胶质瘤细胞miR-153上调对树突状细胞分化成熟及Nrf2表达的影响。方法:体外培养小鼠胶质瘤细胞系GL261,随机分为对照组、miR-153 mimics阴性对照组、miR-153 mimics组,以miR-153 mimics阴性对照、miR-153 mimics分别处理GL261,以实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组GL261细胞miR-153、VEGF-A及IL-10 mRNA水平;以蛋白免疫印迹法检测各组GL261细胞VEGF-A、IL-10、Nrf2蛋白表达;以流式细胞仪检测DC2.4细胞表面共刺激分子MHC-II、CD80、CD86、CD40表达水平;将小鼠T淋巴细胞系与上述各组DC2.4细胞共培养,以CCK-8检测T细胞增殖情况。结果:与对照组相比,miR-153 mimics组GL261细胞miR-153、VEGF-A及IL-10 mRNA水平,VEGF-A及IL-10蛋白表达明显降低（P＜0.05）。DC2.4表面共刺激分子MHC-II、CD80、CD86及CD40表达水平,DC2.4细胞Nrf2蛋白表达,T细胞活力明显升高（P＜0.05）;miR-153 mimics阴性对照组细胞各指标无明显变化（P＞0.05）。结论:上调miR-153可抑制胶质瘤细胞分泌免疫抑制性因子VEGF-A、IL-10,促进树突状细胞分化成熟并上调其Nrf2蛋白表达。     

反义封闭MMP-9基因表达对胶质母细胞瘤细胞系增殖的影响

目的 探讨反义封闭胶质瘤细胞MMP-9基因表达对胶质瘤细胞增殖的影响。方法 利用基因重组的方法构建正义和反义MMP-9重组体;经脂质体介导,分别将pcDNA3.0空载质粒、正义重组体、反义重组体转染TJ905细胞;通过RT-PCR和Western blot检测转染细胞MMP-9的mRNA和蛋白表达水平;利用免疫组织化学法分析了转染细胞中MMP-9和Ki-67的表达。结果经限制性酶切鉴定和DNA测序分析,基因重组成功,且正义与反义重组体插入位点间的序列方向正好相反。与TJ905对照组、空载体组和正义对照组相比较,转染反义重组体后的TJ905细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的表达水平明显下降（P<0.001）。转染空载体和正义重组体后,TJ905细胞内MMP-9 mRNA和蛋白的表达水平与未进行转染的TJ905细胞相比差异无统计学差异（P>0.05）。免疫组织化学结果显示反义封闭有效,MMP-9的表达下调,TJ905细胞增殖活性下降。结论 转染反义MMP-9重组体可以有效抑制胶质母细胞瘤细胞的MMP-9基因的表达,同时可以抑制肿瘤细胞的增殖。     

非小细胞肺癌血浆miR-223、miR-93和miR-218的表达及其临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者血浆miR-223、miR-93和miR-218水平,分析三者与NSCLC患者临床病理学特征的关系。方法 收集本院收治85例NSCLC患者未经治疗前的血浆标本（NSCLC组）,采用实时定量RT-PCR（qRT-PCR）法检测血浆中miR-223、miR-93和miR-218水平,收集NSCLC患者的临床病理学参数,比较三者不同水平的临床病理参数并分析三者间的关系,采用受试者工作特征曲线（ROC）评价血浆miR 223、miR 93和miR 218水平检测在NSCLC诊断中的临床价值。同时选取同期的90例健康体检者的血浆标本作对照（对照组）。结果 NSCLC组的血浆miR-223和miR-93水平高于对照组,miR-218水平低于对照组,差异均有统计学意义（P均＜0.05）;miR-223水平与TNM分期、肿瘤大小有关,miR-93水平与组织学类型、淋巴结转移有关,miR-218水平与肿瘤大小、分化程度有关,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）;NSCLC患者血浆中miR-223水平与miR-93呈正相关（r=0.411）,miR-223、miR-93分别与miR-218呈负相关（r=-0.361,r=-0.451）,差异均有统计学意义（P＜0.05）;血浆miR-223、miR-93和miR-218诊断NSCLC的AUC、灵敏度和特异度分别为0.926、95.2％和87.1％,0.912、88.4％和92.5％,0.941、92.7％和84.4％,均高于CEA的0.774、75.1％和66.2％,且miR-223、miR-93和miR-218联合诊断的效能高于单独检测。结论 NSCLC患者血浆中miR-223和miR-93呈高表达,miR-218呈低表达,与临床病理学参数有关,且在NSCLC诊断中有一定的价值,可用于辅助NSCLC的诊断和病情评估。     

CpG-ODN对树突状细胞的分化成熟的影响

目的：探讨ＣｐＧ－ＯＤＮ对小鼠骨髓来源的树突状细胞（ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ,ＢＭＤＣ）分化成熟的影响。方法：利用合成的含非甲基化ＣｐＧ基序的寡核苷酸（ＧｐＧ ｍｏｔｉｆ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ,ＣｐＧ－ＯＤＮ）,通过酶切鉴定ＤＮＡ制品ＣｐＧ基序甲基化程序,ＦＡＣＳ分析ＤＣ表型和内吞作用的变化,ＥＬＩＳＡ检测ＤＣ培养上清     

室管膜下区放疗对胶质母细胞瘤患者预后作用分析

目的探讨室管膜下区(SVZ)放疗对胶质母细胞瘤(GBM)患者预后作用,并分析影响GBM患者的预后因素。方法回顾性分析2017—2020年南京医科大学附属肿瘤医院收治的52例GBM患者,根据同侧或对侧SVZ剂量中位值将患者分为高剂量组和低剂量组,比较两组患者生存差异并分析预后影响因素。结果全组患者中位无进展生存(PFS)期17.1个月(95%CI为12.4~30.7),中位总生存(OS)期38.3个月(95%CI为20.4~44.5)。单因素分析显示肿瘤是否累及SVZ、切除程度、MGMT基因甲基化状态是PFS的影响因素(P=0.039、0.009、0.039)。年龄、卡诺夫斯凯计分(KPS)、肿瘤是否累及SVZ、切除程度以及MGMT基因甲基化状态是OS的影响因素(P=0.018、0.043、0.038、0.020、0.019)。将SVZ剂量作为连续变量分析显示,SVZ剂量是PFS的影响因素(P<0.05),而不是OS的影响因素(P≥0.05)。无论肿瘤是否累及SVZ,高剂量组和低剂量组生存均无显著差异。多因素分析显示肿瘤是否累及SVZ、MGMT基因甲基化状态是PFS的独立影响因素,同样也是OS的独立影响因素(均为P<0.05)。而SVZ剂量相关变量在多因素分析中均无统计学意义。结论肿瘤累及SVZ的患者预后更差。增加同侧或对侧SVZ剂量并不能改善患者生存。SVZ放疗是否影响患者生存仍需前瞻性随机临床研究进一步证实。     

miR-146b-5p对胶质瘤TJ905细胞生长的抑制作用及其机制探讨

  目的  在TJ905胶质母细胞瘤细胞系中观察miR-146b-5p对MMP16的调控作用及其对细胞侵袭、迁移、增殖和凋亡的影响。  方法  分别用无义序列表达质粒(对照组)和miR-146b-5p表达质粒(P-miR-146b-5p组)转染TJ905细胞, 用qRT-PCR和Western blot检测两组细胞miR-146b-5p的表达水平及MMP16 mRNA和蛋白的表达水平, 用体外迁移侵袭实验及流式细胞术检测转染细胞迁移、侵袭、细胞周期分布和凋亡水平, 并分析这些变化的相互关系。  结果  与对照组相比, p-miR-146b-5p组MMP16 mRNA和蛋白表达量明显降低, 二者间呈正相关且均与miR-146b-5p表达量呈负相关。p-miR-146b-5p组侵袭和迁移细胞数均明显低于对照组, 并均与同组MMP16蛋白表达量呈正相关; 而凋亡水平明显高于对照组, 并与同组miR-146b-5p表达量呈正相关, 但两组细胞周期时相分布无显著性差异。  结论  miR-146b-5p是胶质瘤的抑瘤miRNA; 补充外源性miR-146b-5p可促进胶质瘤细胞凋亡, 并通过抑制靶基因MMP16表达阻止其侵袭迁移; 提示miR-146b-5p在恶性胶质瘤基因治疗方面具有重要的潜在应用价值。      

不同级别人胶质瘤组织中miR-10b表达变化的研究

背景与目的:人miR-10b编码基因位于染色体2q31HOXD8基因之间,有研究显示其特异性地高表达于多种肿瘤中,并与肿瘤的侵袭、迁移和远距离转移有关。本研究对不同级别胶质瘤组织及非肿瘤对照脑组织中miR-10b的表达水平进行检测和比较。方法:采用组织微阵列及锁定寡核苷酸原位杂交技术检测56例不同级别胶质瘤及10例非肿瘤对照脑组织中miR-10b的表达水平。结果:对照脑组织及WHOⅠ~Ⅱ级、Ⅲ级及Ⅳ级胶质瘤组织中miR-10b阳性标记指数(LI%)分别为36.87±20.63、18.86±14.04、12.13±11.56及4.93±6.45,4组间差异均有显著性(P<0.05~0.001),miR-10b LI%与肿瘤的良恶性分级呈显著负相关(rs=-0.61,P<0.001)。结论:miR-10b的表达水平与胶质瘤病理分级呈负相关。     

胃癌转移相关miRNA的差异表达谱及miR-218的生物学分析

目的 探讨胃癌转移相关微小RNA（miRNA）的差异表达情况并进行miR-218的生物学分析。方法 采用实时荧光定量PCR（qPCR）及miRNA芯片法检测低转移潜能的胃癌细胞亚系（SGC7901-NM、MKN28-NM）与高转移潜能的胃癌细胞亚系（SGC7901-M、MKN28-M）间miRNA的差异表达。提取不同转移潜能胃癌细胞系和10例胃癌冰冻组织及相应的转移淋巴结中的总RNA,利用qPCR检测miR-218在不同细胞及组织中的表达情况。结果 对不同转移潜能的胃癌细胞亚系进行芯片检测发现,与SGC7901-NM细胞比较,SGC7901-M 细胞有47个分子表达下调,15个分子表达上调。与MKN28-NM细胞比较,MKN28-M细胞有41个分子表达下调,83个分子表达上调。在SGC7901-M及MKN28-M细胞中,34个分子表达均出现下降,11个分子表达均出现上升。对不同转移潜能的胃癌细胞亚系以及人永生化正常胃黏膜细胞系GES进行检测可以发现,4种不同转移潜能的胃癌细胞亚系中miR-218的表达均低于正常胃黏膜细胞系GES,差异有统计学意义（P＜0.05）,且在高转移潜能胃癌细胞亚系中miR-218的表达均低于低转移潜能胃癌细胞系,差异有统计学意义（P＜0.05）。胃癌转移淋巴结中miR-218的表达水平为0.23±0.02,低于胃癌原发灶的1.09±0.05,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 胃癌转移相关miRNA会出现差异表达情况,高转移潜能胃癌细胞中的miR-218表达水平上调可能与胃癌转移存在一定关系。     

室管膜下区神经干细胞的恶性转化与胶质母细胞瘤发生发展的研究进展

摘 要：胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)是原发性中枢神经系统肿瘤中最具侵袭性的恶性肿瘤。GBM标准治疗包括尽可能的手术切除与辅以放、化疗为主的综合治疗。室管膜下区（subventricular zone, SVZ）含有大量的神经干细胞,可恶性转化为胶质瘤干细胞,与肿瘤的发生、增殖、治疗抵抗和复发关系密切。全文就室管膜下区神经干细胞与GBM中的胶质瘤干细胞之间的关系,以及室管膜下区治疗进展作一综述。     

丁酸钠对胶质瘤细胞放射敏感度的影响

目的研究丁酸钠（sodium butyrate,NaB）对胶质瘤细胞U-251的放射增敏作用及其机制。方法采用克隆形成实验分析NaB对U-251细胞的放射增敏作用;采用反转录PCR以及Western blot的方法评价NaB对DNA损伤修复相关基因Ku70的mRNA及蛋白表达水平的影响。结果NaB作用组细胞放疗后存活率明显降低,放射增敏比值（SER）为1.23;而且其在mRNA及蛋白水平降低了DNA损伤修复基因Ku70的表达（P<0.05）。结论丁酸钠能增加胶质瘤细胞的放射敏感度,这可能与丁酸钠能下调Ku70蛋白表达有关。     

miR-30c Impedes Glioblastoma Cell Proliferation and Migration by Targeting SOX9

miR-30c has been acknowledged as a tumor suppressor in various human cancers, such as ovarian cancer, gastric cancer, and prostate cancer. However, the role of miR-30c in glioblastoma (GBM) needs to be investigated. In our study, we found that the expression of miR-30c was significantly downregulated in GBM tissues and cell lines. We found that overexpression of miR-30c inhibited cellular proliferation of GBM cells in vitro and in vivo. More GBM cells were arrested in the G₀ phase after miR-30c overexpression. Moreover, we showed that miR-30c overexpression suppressed the migration and invasion of GBM cells. Mechanistically, we found that SOX9 was a direct target of miR-30c in GBM cells. Overexpression of miR-30c inhibited the mRNA and protein levels of SOX9 in GBM cells. Moreover, there was a negative correlation between the expression of miR-30c and SOX9 in GBM tissues. Finally, we showed that restoration of SOX9 in GBM cells reversed the proliferation, migration, and invasion of GBM cells transfected with miR-30c mimic. Collectively, our results demonstrated that miR-30c suppressed the proliferation, migration, and invasion of GBM cells via targeting SOX9.     

三氧化二砷诱导胶质母细胞瘤细胞分化作用的研究

背景与目的：胶质母细胞瘤的预后较差，本文旨在观察三氧化二砷（As2O3）诱导胶质母细胞瘤细胞分化作用，为胶质瘤的诱导分化治疗提供实验依据。方法：低剂量不同浓度的As2O3诱导BT325细胞系3周后．常规HE染色及电镜观察细胞形态学改变，免疫细胞化学染色观察肿瘤分化标记物GFAP，S-100，Vimentin表达的改变，流式细胞仪分析细胞周期时相分布的变化。结果：BT325细胞在As2O3作用3周后，细胞形态类似正常星形细胞，肿瘤分化标志物GFAP，S-100表达均增高，并且呈剂量依赖效应，细胞周期时相分布G0／G1期比例升高，符合诱导分化现象。结论：三氧化二砷以剂量依赖形式诱导BT325细胞分化，是治疗脑胶质瘤的潜在诱导分化剂。     

miR-16对大肠癌细胞增殖能力的影响

目的研究miR-16在大肠癌组织中的表达及其在大肠癌细胞株HCT116和LoVo细胞增殖中的作用。方法运用Realtime PCR法检测miR-16在33对配对肠癌及癌旁正常组织中的表达。HCT116和LoVo细胞转染miR-16 抑制剂、阴性对照剂和模拟剂;CCK8法检测细胞增殖;流式细胞仪进行细胞周期检测;Western blot法检测细胞中cyclinD1、CDK6和GAPDH蛋白表达。结果（1）Realtime PCR结果显示miR-16在大肠癌组织中低表达（P=0.047）。（2）miR-16过表达可抑制HCT116和LoVo细胞增殖,诱导细胞G₀/G₁期阻滞,降低cyclinD1和CDK6蛋白表达。结论miR-16过表达可以抑制大肠癌细胞的增殖能力。     

miR-218与宫颈癌关系的研究进展(英文)

MicroRNAs (miRNAs) are small endogenous non-coding RNAs which can specifically silence gene expression, and thereby alter cell and organism phenotype. Deregulation of miRNA expression has been discovered in a variety of tumors and it is now clear that they contribute to cancer development and progression. Previous studies have indicated that miRNAs are involved in developmental timing, cell proliferation, apoptosis, morphogenesis [1] , antiviral defense [2] , and tumorigenesis [3] . In cancer pathways, altered expression of tumor suppressive or oncogenic miRNAs can disrupt regulatory mechanisms normal. Altered miRNAs expression patterns have been observed in a variety of diseased tissues. Cervical cancer is the most common malignant tumor in female reproductive tract. Recently more and more study showed a large number of miRNAs were down-regulated or up-regulated in cervical cancer. Recent data revealed that miRNA-218 (miR-218) played important roles in tumor initiation and development. This review focuses on analysis of miR-218 and will provide some insight into the progress of cervical cancer.     

miR-218靶向SFMBT1影响肺癌细胞凋亡的研究

目的:探讨miR-218对肺癌细胞凋亡的影响。方法:qRT-PCR检测肺癌细胞A549、SPC-A1、H322和支气管黏膜上皮细胞16HBE中miR-218表达水平。以A549细胞为研究对象,预测miR-218的靶基因可能为含有4个mbt的Scm相关蛋白（SFMBT1）,双荧光素酶报告基因鉴定靶基因,细胞转染miR-218模拟物、模拟物阴性序列、SFMBT1小干扰RNA、小干扰RNA阴性序列,以不处理的细胞为对照,qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞中miR-218和SFMBT1表达,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:miR-218在肺癌细胞中表达水平明显低于支气管黏膜上皮细胞16HBE,并且A549细胞中miR-218水平最低。miR-218模拟物和野生型的SFMBT1共转染后细胞荧光素酶活性降低。转染miR-218模拟物后细胞中miR-218水平升高,细胞凋亡率升高,细胞中SFMBT1 mRNA和蛋白水平降低。转染SFMBT1小干扰RNA后细胞中SFMBT1 mRNA和蛋白水平降低,细胞凋亡率升高。结论:miR-218可以负调控靶基因SFMBT1的表达促进肺癌细胞凋亡。     

miR-218-1-3p对非小细胞肺癌细胞侵袭和迁移影响

目的 非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)因其侵袭性而导致预后不良,miR-218可对多种肿瘤的进展起到抑制作用.本研究探讨miR-218-1-3p对NSCLC A549细胞侵袭和迁移影响.方法 使用LipofectamineTM 2000 Reagent将miR-218-1-3p mimic转染入NSCLC A549细胞中,实时定量聚合酶链反应(real-time PCR,RT-qPCR)检测各组细胞中miR-218-1-3p的表达,Transwell小室法测定其侵袭及迁移能力,荧光定量PCR检测细胞迁移侵袭相关指标基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、MMP-7、MMP-9、Rho A、Rho B和Rho C的变化.结果 同对照组相比,上调mir-218-1-3p明显抑制了A549细胞的侵袭(t=4.028,P=0.016)和迁移(t=8.911,P=0.001),其侵袭和迁移的抑制率分别为37.8%和53.6%.MMP-7降低至对照组的(0.68±0.19)倍,t=2.931,P=0.043;MMP-9降低至对照组的(0.58±0.15)倍,t=4.875,P=0.080.结论 miR-218-1-3p能够抑制NSCLC A549细胞的侵袭和迁移.     

miR-218对肾癌细胞生物学功能的影响

目的 通过调控miR-218在肾癌细胞株中的表达水平,验证miR-218对肾细胞癌细胞生物学功能的影响.方法 将pcDNA3.1-miR-218稳定转染至肾癌细胞株A498、769-P中,检测肾癌细胞株中miR-218表达水平的变化,采用CCK8、Transwell小室、Annxin V-FITC、生长曲线、克隆实验等,体外验证转染后的癌细胞株在miR-218调控下的细胞活性、侵袭能力、凋亡情况、增殖能力的变化.结果 A498、769-P细胞转染后miR-218相对表达量分别为1.99、1.64,较转染前表达量（1.00）增高,差异均有统计学意义（t=60.82、10.89,均P＜0.000 1）.A498、769-P细胞转染miR-218表达质粒组的细胞活性分别为0.90±0.10、0.68±0.06,低于对照组的1.39±0.14、1.24±0.08,差异均有统计学意义（t=15.02、31.69,均P＜0.000 1）.Transwell检测结果显示,A498、769-P细胞转染miR-218表达质粒组的细胞侵袭能力较对照组减弱（t=15.78、18.80,均P＜0.000 1）.AnnxinV-FITC检测结果显示,A498、769-P细胞株对照组和转染组凋亡细胞比例分别为0.25％、45.77％和0.11％、45.57％.转染组细胞增殖能力较对照组减弱（均P＜ 0.000 1）.结论 体外实验证实miR-218表达上调能够抑制肾癌细胞的生长.     

Anti-Migration and Invasion Effects of Astaxanthin against A172 Human Glioblastoma Cell Line

Objectives: The study was to investigate anti-migration and invasion effects of astaxanthin (ATX), a natural carotenoid derivative distributed in marine environments, against A172 human glioblastoma cells. Materials and Methods: Cell viability after ATX treatment was measured by MTT assays. Tumor cell migration and invasion were observed by scratch and Boyden chamber assays, respectively. Expression of MMP-2 and activity of MMP-9 were observed by immunoblotting and gelatin zymography, respectively. Results: ATX up to 150 µM was not toxic to A172 cells at 48 h post-treatment. In contrast, ATX at 50 and 100 µM significantly decreased migration and invasion of A172 cells at 24 and 48 h post-treatment. Metastatic-reducing effect of ATX is associated with the reduction of MMP-2 and MMP-9 expressions in a dose-dependent manner. Conclusion: This finding indicated that ATX has anti-migration and invasion effects against human glioblastoma cells and might be applicable for the protection against metastasis of glioblastoma.