Na+-K+-ATP酶表达对结直肠癌细胞增殖及侵袭力的影响

  目的  探讨Na+-K+-ATP酶α亚单位表达对人结直肠癌细胞增殖及侵袭力的影响,及哇巴因治疗结直肠癌的可能机制。  方法  以SW480和SW620细胞为研究对象,予生理浓度的哇巴因（1 nM）干预,应用MTT法、Transwell侵袭小室、生化酶学、实时定量PCR及蛋白免疫印迹等方法检测细胞的增殖及侵袭力,Na+-K+-ATP酶活性及其亚单位（α₁、α₂及α₃）表达水平。  结果  与SW480细胞比较,SW620细胞增殖及侵袭力明显增加（P均 < 0.05）,Na+-K+-ATP酶活性下降,Na+-K+-ATP酶α₁亚单位mRNA表达上调（P均 < 0.001）;而SW480细胞Na+-K+-ATP酶α₃亚单位mRNA表达上调（P < 0.001）;且均与蛋白表达水平一致;哇巴因在24、48及72 h均能显著抑制两种细胞的增殖活力,以48 h效应最强,减弱其侵袭力,并下调两种细胞Na+-K+-ATP酶α₁亚单位蛋白表达,增加SW620细胞Na+-K+-ATP酶活性,而对两种细胞Na+-K+-ATP酶α₂和α₃亚单位蛋白表达及SW480细胞Na+-K+-ATP酶活性无影响。  结论  Na+-K+-ATP酶活性下降部分源于α₃亚单位表达下调及α₁亚单位表达上调,可能共同参与结直肠癌的转移;哇巴因抑制结直肠癌细胞的增殖及侵袭力的机制,可能部分与下调Na+-K+-ATP酶α₁亚单位蛋白表达有关。      

晚期结直肠癌三药联合方案化疗的研究进展

化疗是晚期结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的主要治疗手段.FOLFOXIRI三药联合方案(奥沙利铂+伊立替康+氟尿嘧啶)一线治疗晚期CRC较氟尿嘧啶单药或FOLFOX(奥沙利铂+氟尿嘧啶)、FOLFIRI(伊立替康+氟尿嘧啶)等两药联合方案可显著延长患者的无进展生存(progression fre...     

三药化疗联合靶向治疗在转移性结直肠癌的临床研究进展

转移性结直肠癌(metastatic colorectal cancer,mCRC)的治疗多年来一直是困扰临床医生的一大难题,近年来国内外开展了一系列对mCRC一线治疗的相关临床试验.TRIBE研究结果表明三药化疗联合靶向治疗较双药化疗联合靶向治疗在有效率、无进展生存期、总生存期都有显著提高,并推动国内外各指南将三药化...     

结直肠癌化疗进展

在过去的20年中,无论是针对术后结直肠癌的辅助化疗或是转移性结直肠癌的化疗均取得了令人鼓舞的进展。在20世纪80年代末,仅有5-Fu一种化疗药物可选用,现在已经有了奥沙利铂、伊立替康、卡培他滨、贝伐单抗、西妥昔单抗等多种药物组成联合化疗方案供选择。通过目前的化疗方案治疗,75%的结直肠癌患者术后3年无复发,50%晚期结直肠癌患者生存期达2年。文章重点对化疗在辅助治疗与转移结直肠癌治疗中的作用进行了综述。     

结直肠癌术前化疗进展

结直肠癌在我国的发病率逐年递增,以手术为主导的综合治疗目前仍然是结直肠癌的主要治疗方法,综合治疗包括术前的放疗、化疗和放化疗联合等多种手段。本文仅对目前结直肠癌及肝转移的术前辅助化疗进展做一综述。     

直肠癌组织中多药耐药基因表达的临床研究

目的：探讨多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1，MDR1)表达产物P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)在直肠癌组织中表达的临床意义及对预后的影响。方法：用SABC法免疫组化染色检测62例直肠癌组织中P-gp表达情况，并与癌组织分化程度、临床分期(Duke’s分期)及预后进行相关性分析。结果：MDR1表达产物P—gp的阳性表达与直肠癌组织病理分化程度差异有统计学意义．临床分期方面差异无统计学意义．且与预后有关。P—gp高表达者5年生存率为43．2％，P-gp阴性表达者5年生存率为71．6％，两者差异有统计学意义，P=0．0344。结论：直肠癌组织MDR1的阳性表达具有先天耐药性，这是直肠癌术后辅助化疗效果不佳的主要原因，并影响生存率，癌组织中P-gp高表达音较阴性表达音预后差。     

晚期结直肠癌三线及三线以上治疗的研究进展

结直肠癌是消化道最常见恶性肿瘤之一,大多数结直肠癌患者就诊时已属中晚期,失去手术机会.化疗及分子靶向治疗为结直肠癌的有效治疗手段.目前,晚期结直肠癌的三线治疗尚无标准方案.全文对晚期结直肠癌的三线及三线以上治疗相关的临床研究进行了简要分析.     

晚期结直肠癌的化疗进展

化疗是晚期结直肠癌的主要治疗手段,以氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、奥沙利铂和伊立替康为主的三药是晚期肠癌治疗的重要药物,联合化疗和“打打停停”的治疗模式在提高疗效的同时兼顾了治疗的耐受性。新的化疗药物雷替曲塞、替吉奥和TAS-102也在临床中获得应用。就晚期结直肠癌化疗的进展进行综述。     

γ-氨基丁酸抑制结直肠癌细胞增殖及其对化疗的增敏作用

目的:通过体内、体外实验,探讨γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)对结直肠癌SW480、HCT116细胞的抑制作用及其与化疗联用的增敏作用.方法:采用CCK-8方法分析GABA及其与抗癌药5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-ru)或奥沙利铂(Oxaliplatin,OXA)联用对结直肠癌SW480、HCT116细胞增殖的影响,流式细胞术分析GABA对SW480、HCT116细胞周期的影响.通过裸鼠成瘤实验观察移植瘤质量和体积,免疫组化法检测裸鼠肿瘤组织Ki67蛋白的表达,TUNEL染色观察裸鼠结直肠癌细胞的凋亡,体内实验研究GABA与OXA联用对肿瘤细胞生长的影响.结果:100 μmol/L GABA可显著抑制结直肠癌SW480、HCT116细胞的增殖,其抑制率分别为(37.38±2.62)％、(15.54±1.33)％,GABA浓度增加至200 μmol/L时,其抑制作用未见明显增强.GABA使SW480、HCT116细胞S期数量分别减少11.8％及10.7％.GABA与5-FU或OXA联用组对SW480细胞增殖抑制率高于5-FU或OXA组[(72.76±1.07)％ vs (63.82±3.29)％或(65.60±1.19)％ vs (57.09±1.25)％;q=4.079或4.128,P＜0.05],对HCT116细胞增殖抑制率也高于单用5-FU及OXA组[(79.53±1.12)％ vs(69.71±0.09)％或(73.19±0.07)％ vs(64.65 ±1.99)％;g=4.569或4.561,P＜O.05].实验结束时,GABA与OXA联用组小鼠移植瘤质量、体积显著低于对照组和OXA组[(0.20±0.016) vs (0.42±0.039)、(0.36±0.030)g和(250±27)vs(780±60)、(520±46) mm3,均P＜0.01];抑制Ki67蛋白在肿瘤组织的表达、促进肿瘤组织细胞的凋亡.结论:GABA对结直肠癌细胞增殖具有较强的抑制作用,与5-FU或OXA联用可增强化疗效果.     

结直肠癌内科治疗进展

结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一.新的化疗药物和分子靶向药物的问世,使晚期结直肠癌病人中位生存期延长,根治术后的辅助治疗使Ⅲ期结肠癌病人复发和死亡风险进一步降低.本文综述结直肠癌内科治疗最新进展.     

白血病抑制因子对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor, LIF）对细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法 采用荧光定量PCR和Western blot检测LIF在人NSCLC组织和癌旁组织中的表达;应用重组LIF因子处理非小细胞肺癌细胞系A549和Z793, MTT技术检测重组LIF因子对细胞增殖的影响; Transwell实验检测重组LIF因子对细胞侵袭的影响;Western blot检测重组LIF因子对肿瘤细胞中AKT/mTOR信号通路的影响。结果 LIF在肺癌组织中的表达水平较正常癌旁组织显著上调（P=0.0078）。重组LIF处理A549和Z793细胞后,肿瘤细胞增殖较对照组明显增加（P<0.01）;肿瘤细胞的侵袭能力较对照组明显增强（P<0.01）;AKT蛋白的磷酸化水平明显增加,且其下游底物mTOR的表达显著上调。结论 LIF在非小细胞肺癌中表达上调,并通过激活AKT/mTOR信号通路促进非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭。     

Genistein抑制卵巢癌细胞的侵袭转移及其机制

目的探讨Genistein对卵巢癌细胞株SKOV3侵袭转移能力的抑制作用及其机制。方法用不同浓度的Genistein处理SKOV3细胞,采用锥虫蓝活细胞拒染法检测癌细胞体外生长活性,划痕损伤实验及Transwell小室观察其对细胞运动及侵袭能力的影响,利用 RT-PCR技术检测Genistein对SKOV3细胞中MTA1 mRNA表达的影响。结果Genistein抑制SKOV3细胞的生长,并呈剂量依赖性（P<0.05）;其对SKOV3细胞的运动及侵袭能力均有明显抑制作用（P<0.05）;并且能显著降低MTA1 mRNA的表达（P<0.05）。结论Genistein在体外剂量依赖性地抑制卵巢癌细胞株SKOV3的侵袭转移,其作用机制可能与通过降低MTA1的表达有关。     

MiR-124对食管癌细胞增殖和侵袭的作用及机制研究

摘 要：［目的］检测miR-124及其靶基因CREB1在食管癌组织中的表达情况,探讨miR-124/CREB1在人食管鳞癌细胞KYSE-150体外增殖和侵袭中的作用及机制。［方法］ 通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测32例食管鳞状细胞癌(ESCC)组织及周围正常组织的miR-124和CREB1表达。Targetscan分析miR-124与CREB1的结合位点,荧光素酶基因报告实验验证miR-124 与CREB1是否结合;过表达或抑制miR-124后,采用Western blot检测KYSE-150细胞中CREB1的表达;在KYSE-150细胞中转染miR-124 mimic为miR-124 mimic或转染miR-124抑制剂为anti-mi-R124,转染后24h、48h、72h收集细胞计数,检测细胞增殖情况;转染24h后通过体外侵袭实验检测过表达或抑制miR-124对KYSE-150细胞侵袭的影响。在KYSE-150细胞中转染CREB1 siRNA后24h、48h、72h收集细胞计数,检测细胞增殖情况;转染CREB1 siRNA 24h后检测KYSE-150细胞侵袭能力的变化;在KYSE-150细胞中共同转染anti-miR-124和siCREB1,检测细胞增殖和侵袭能力变化情况。［结果］ MiR-124在食管癌组织表达降低(P<0.001),而CREB1在食管癌组织中表达升高(P<0.001);CREB1是miR-124下游分子,过表达miR-124抑制KYSE-150细胞中CREB1的表达(P=0.016),抑制miR-124促进KYSE-150细胞中CREB1的表达(P<0.001)。在食管癌细胞中,过表达miR-124抑制KYSE-150细胞的增殖和侵袭(P均<0.05),抑制miR-124促进KYSE-150细胞的增殖和侵袭(P均<0.05);敲低CREB1抑制KYSE-150细胞的增殖和侵袭(P均<0.05)。敲低CREB1可抑制anti-miR-124对KYSE-150细胞增殖和侵袭的促进作用(P均<0.05)。［结论］过表达miR-124通过靶向CREB1抑制食管癌细胞的增殖和侵袭。     

piR-9994对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其机制

目的 探讨piR-9994对胃癌细胞生物学行为的影响及可能机制。方法 qRT-PCR检测piR-9994在胃癌细胞系（MGC803和AGS）和正常胃上皮细胞（GES-1）中的表达情况;构建过表达和敲低piR-9994的MGC803胃癌细胞株,MTT、克隆形成实验检测piR-9994表达变化对细胞增殖能力的影响,划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。qRT-PCR和Western blot检测细胞增殖和EMT相关基因表达。结果 piR-9994在胃癌细胞MGC803中表达水平显著高于正常人胃黏膜上皮细胞GES-1（P<0.05）。piR-9994过表达促进胃癌细胞增殖、侵袭和转移,敲低则作用相反。piR-9994表达与细胞周期密切相关,特别是S期。piR-9994过表达促进增殖相关基因PCNA、CCND1、Bcl-2表达,抑制凋亡基因c-PARP表达,促进EMT相关基因N-cadherin、MMP7、Twist和Vimentin表达及抑制E-cadherin表达;敲低则作用相反。结论 piR-9994异常表达影响胃癌细胞增殖、侵袭、转移及EMT进程。piR-9994可能是胃癌新的标志物和治疗靶点。     

RSK4对结直肠癌细胞增殖的影响

摘 要：［目的］ 探讨RSK4（p90 ribosomalprotein S6 kinase4）在结直肠癌细胞的表达情况及其生物学作用。［方法］ 挑选结直肠癌细胞株SW480和HCT116,用Lipofectamin 2000技术将RSK4基因转染至细胞核内,建立结直肠癌RSK4基因高表达细胞系,用RT-PCR及WB证实了RSK4在结直肠癌细胞SW480和HCT116转染成功,采用MTT、流式细胞仪技术检测转染RSK4后对结直肠癌细胞增殖的影响。［结果］ RSK4在结直肠癌细胞呈低表达,转染成功后对结直肠癌细胞有明显的抑制作用,并使S 期细胞所占的比例下降,G0 / G1期比例上升（P<0.05）。［结论］ RSK4基因在结直肠癌细胞株中呈低表达,转染RSK4后可抑制肿瘤细胞生长,有可能为一个潜在的抑癌基因。     

PTENP1对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的 探讨PTENP1对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制.方法 选取107例结直肠癌及对应的癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量PCR法检测结肠癌及癌旁组织中PTENP1表达水平.采用慢病毒在结肠癌HT29细胞建立PTENP1过表达细胞系(PTENP1组)和空载体细胞系(对照组).CCK8试剂盒分析细胞的增殖能力...     

miR-20 b对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究

目的：探讨miR-20b对大肠癌（ CRC）细胞增殖凋亡的影响及机制。方法将miR-20b模拟物转染CRC细胞株HCT-116,qRT-PCR检测转染后miR-20b的表达,分别应用CCK-8实验及流式细胞仪检测转染后细胞增殖和凋亡情况。 qRT-PCR和western blot检测转染后Bcl-w mRNA和蛋白的表达情况。结果转染miR-20b模拟物后,HCT-116细胞中miR-20b表达水平明显上调,HCT-116细胞增殖减弱（P＜0．05）,凋亡增强（P＜0．05）。 miR-20b可作用于Bcl-w mRNA的3′-UTR,使海肾荧光素酶活性显著降低。转染后Bcl-w mRNA及蛋白表达水平明显下调,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论上调HCT-116细胞中miR-20b表达水平,可抑制其靶基因Bcl-w的表达,发挥抑制细胞增殖、增加凋亡的作用。     

载脂蛋白E对结直肠癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的 观察载脂蛋白E（apolipoprotein E, ApoE）对结直肠癌细胞侵袭迁移能力的影响。方法 在结直肠癌细胞系SW48中转染ApoE过表达质粒及其特异性siRNA,实时荧光定量PCR（Real timeqPCR）检测转染ApoE的表达,利用Transwell小室观察ApoE对细胞侵袭迁移能力的影响,通过免疫印迹检测ApoE对基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP）家族蛋白表达的影响。结果 RTPCR检测结果显示：过表达ApoE组细胞中ApoE mRNA水平显著高于空白对照白组和阴性对照组,差异有统计学意义（P=0.008）,ApoE沉默组中ApoE mRNA水平与阴性对照组比,差异有统计学意义（P=0.013）;Transwell侵袭实验结果显示,穿膜细胞数：空白对照组、阴性对照组、过表达ApoE组、si-ApoE组依次为：（209±17）、（228±11）、（67±9）、（428±15）个/视野,过表达ApoE组和si-ApoE组与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;Transwell迁移实验结果显示,空白对照组（326±18）个/视野,阴性对照组（338±21）个/视野,过表达ApoE组（133±11）个/视野,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）,si-ApoE组（518±13）个/视野与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。同时免疫印迹实验显示,过表达ApoE组细胞中MMP-2及MMP-9的表达下降,组织基质金属蛋白酶抑制剂2（tissue inhibitors of metalloproteinase-2, TIMP-2）的表达升高,而si-ApoE组MMP-2及MMP-9表达升高,TIMP-2的表达降低。结论 ApoE可影响结直肠癌细胞的侵袭、迁移能力,并且可能通过影响TIMP-2、MMP-2及MMP-9的表达发挥上述功能。     

人淋巴管内皮细胞对人肝癌HepG-2细胞增殖及侵袭的影响

[目的]探讨人淋巴管内皮细胞(HLEC)对人肝癌HepG-2细胞增殖、异质黏附和侵袭能力的影响.[方法]采用Transwell小室建立HepG-2细胞与HLEC共培养系统;台盼蓝拒染法检测HLEC对HepG-2细胞增殖的影响;噻唑蓝染色法(MTT)检测HLEC对HepG-2细胞异质黏附力的影响;Transwell侵袭小室观察HLEC对HepG-2细胞侵袭力的影响.[结果]共培养系统中的HepG-2细胞数147±6/视野,显著高于单独培养的HepG-2细胞数120±3/视野(P＜0.05),表明HLEC可以促进HepG-2细胞的增殖.共培养系统中的HepG-2细胞黏附率(0.98±0.01)显著高于单独培养的HepG-2细胞黏附率(0.87±0.04) (P＜0.05),表明HLEC可以促进HepG-2细胞异质黏附.共培养系统中的HepG-2细胞穿膜数量106±6/视野,显著多于单独培养的HepG-2细胞穿膜数量89±2/视野(P＜0.05),表明HLEC可以促进HepG-2细胞侵袭,呈剂量依赖性.[结论] HLEC通过促进HepG-2细胞的增殖、黏附及侵袭能力参与了肿瘤淋巴道转移.