黄芪总黄酮对高糖诱导的牛视网膜血管周细胞氧化应激与DNA损伤的影响

目的探讨黄芪总黄酮对高糖诱导的牛视网膜血管周细胞氧化应激与DNA损伤的影响。方法体外培养3代融合的牛视网膜血管周细胞,分别在对照组、高糖组、黄芪总黄酮组中孵育6d,透射电镜观察周细胞超微结构改变,硫代巴比妥酸法检测培养液丙二醛(MDA)水平;黄嘌呤氧化酶反应系统检测培养液超氧化物歧化酶(SOD)水平;单细胞凝胶电泳检测DNA损伤情况。结果与高糖组相比,黄芪总黄酮组MDA/SOD比值降低;黄芪总黄酮组周细胞彗尾长度及拖尾率均减低。结论黄芪总黄酮对高糖培养下的牛视网膜血管周细胞氧化应激与DNA损伤有明显的抑制作用。     

不同质量浓度的黄芪总黄酮对高糖培养下牛视网膜血管周细胞氧化应激的影响

目的探讨黄芪总黄酮对高糖培养下的牛视网膜微血管周细胞氧化应激的影响。方法体外培养3代近融合的牛视网膜微血管周细胞为对象,分为正常对照组、模型组（葡萄糖培养液25mmol/L）、不同质量浓度黄芪总黄酮组（0.25、0.5、1.0、2.0mg/mL）,孵育6d;硫代巴比妥酸检测培养液丙二醛（MDA）水平;黄嘌呤氧化酶法检测培养液超氧化物歧化酶（SOD）水平。结果与模型组相比,黄芪总黄酮组周细胞MDA/SOD比值降低;黄芪总黄酮质量浓度与周细胞氧化应激有关。结论一定质量浓度黄芪总黄酮对高糖培养下的牛视网膜微血管周细胞氧化应激有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。     

黄总黄酮对高糖培养下牛视网膜血管周细胞凋亡的影响

目的:探讨黄芪总黄酮对高糖培养下的牛视网膜血管周细胞凋亡的影响.方法:以在体外培养3代融合的牛视网膜血管周细胞为对象,分为正常对照组、高糖组(25 mmol/L)、干预组不同浓度黄芪总黄酮组(0.25、0.5、1.0、2.0 mg/ml),孵育6d,采用TUNEL法检测培养后周细胞凋亡率;硫代巴比妥酸检测培养液丙二醛(MDA)水平;黄嘌呤氧化酶反应系统检测培养液超氧化物歧化酶(SOD)水平.结果:与高糖组比较,黄芪总黄酮0.5、1.0、2.0mg/ml组周细胞MDA含量、SOD活力、MDA含量/SOD活力比值及凋亡率均降低(P＜0.01);MDA含量/SOD活力与周细胞凋亡率二者呈正相关(r=0.921,P＜0.01);黄芪总黄酮2.0 mg/ml组周细胞氧化应激水平及凋亡率明显低于其他各组(P<0.05).结论:一定浓度黄芪总黄酮对高糖培养下的牛视网膜血管周细胞凋亡有明显的抑制作用,呈剂量依赖性.     

黄芪总黄酮对高糖培养下牛视网膜血管周细胞凋亡的影响

目的:探讨黄芪总黄酮对高糖培养下的牛视网膜血管周细胞凋亡的影响。方法:以在体外培养3代融合的牛视网膜血管周细胞为对象,分为正常对照组、高糖组(25 mmol/L)、干预组不同浓度黄芪总黄酮组(0.25、0.5、1.0、2.0 mg/ml),孵育6d,采用TUNEL法检测培养后周细胞凋亡率;硫代巴比妥酸检测培养液丙二醛(MDA)水平;黄嘌呤氧化酶反应系统检测培养液超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果:与高糖组比较,黄芪总黄酮0.5、1.0、2.0mg/ml组周细胞MDA含量、SOD活力、MDA含量/SOD活力比值及凋亡率均降低(P<0.01);MDA含量/SOD活力与周细胞凋亡率二者呈正相关(r=0.921,P<0.01);黄芪总黄酮2.0 mg/ml组周细胞氧化应激水平及凋亡率明显低于其他各组(P<0.05)。结论:一定浓度黄芪总黄酮对高糖培养下的牛视网膜血管周细胞凋亡有明显的抑制作用,呈剂量依赖性。     

葛根等中药对高糖作用下牛视网膜微血管周细胞增殖抑制的影响

目的观察葛根等中药对高糖培养下牛视网膜微血管周细胞的保护作用.方法采用MTT法测定葛根等对损伤牛视网膜微血管周细胞增殖的影响.结果葛根(1 mg/mL)、胡黄连(0.1 mg/mL)、知母(1 mg/mL)及生地黄(0.1 mg/mL)组MTT测定A值均较模型组增高.结论葛根等中药能有效保护周细胞免受高糖所致的增殖抑制.     

葛根等中药对高糖作用下牛视网膜微血管周细胞增殖抑制的影响

目的　观察葛根等中药对高糖培养下牛视网膜微血管周细胞的保护作用。方法　采用MTT法测定葛根等对损伤牛视网膜微血管周细胞增殖的影响。结果　葛根 (1mg/mL)、胡黄连 (0 .1mg/mL)、知母(1mg/mL)及生地黄 (0 .1mg/mL)组MTT测定A值均较模型组增高。结论　葛根等中药能有效保护周细胞免受高糖所致的增殖抑制。     

高糖条件下牛视网膜毛细血管周细胞增殖与凋亡的研究

目的观察高糖对牛视网膜毛细血管周细胞(pericyte,PC)增殖和凋亡的影响。方法建立牛视网膜毛细血管周细胞体外培养模型,将传至第三代的周细胞用常规培养液制作细胞悬液、计数并接种于96孔培养板(或培养瓶)中,待细胞贴壁后,分组加入含不同葡萄糖浓度(5.5、10、20、30、40mmol/L)的DMEM培养液,分别培养2～8天后收集细胞。用MTT法、流式细胞仪(FCM)检测,研究高糖对周细胞的影响。结果①高糖10mmol/L培养4、6、8天组和高糖20、30L、40(mmol/L)培养2、4、6、8天组周细胞增殖均有明显抑制作用,其抑制率以40mmol/L、8天组最高(P<0.01)。②高糖10、20、30、40mmol/L培养2～8天均能促进周细胞的凋亡,其凋亡细胞数以40mmol/L、8天组最多(P<0.01)。结论①高糖对周细胞的增殖有明显抑制作用,高糖以剂量依赖性方式使周细胞减少,随着葡萄糖浓度升高和时间延长,周细胞形态学改变更明显,高糖对周细胞增殖的抑制率也增大。②高糖能促进周细胞凋亡,其凋亡百分率随糖浓度的增高和培养时间的延长而增加。     

不同浓度黄芪提取物对高糖损伤HUVECs的保护机制

目的:研究不同浓度的黄芪提取物对HUVECs损伤的保护机制。方法:将HUVECs细胞分为正常组、高糖组、高渗组等12组分别培养12h、24h、48h,考察HUVECs细胞活力;观察不同浓度黄芪提取物干预后,HUVECs细胞中ET-1、eNOS、p-eNOS的活力以及mRNA和蛋白量的表达情况。结果:MTT检测结果显示高糖组会显著影响HUVECs细胞的活力,随着培养时间的延长,黄芪提取物各组对高糖损伤的保护不断增强(P0.05)。PCR、Western blot法检测结果显示,与正常组相比,高糖组的ET-1表达明显升高(P0.05),eNOS表达量显著降低(P0.05);3种不同浓度的黄芪提取物均能抑制ET-1的表达,增加eNOS表达;Western blot法检测eNOS结果显示高糖、黄芪提取物对eNOS蛋白表达无影响(P0.05)。结论:高糖组能显著抑制HUVECs细胞的活性,黄芪提取物组可不同程度地改善高糖抑制作用(P0.05),且黄芪提取物高浓度组保护作用最强,说明不同浓度的黄芪总黄酮提取物能从调节ET-1、eNOS、p-eNOS表达量方面对高糖损伤的HUVECs产生保护作用。     

黄芪甲苷抑制缺氧缺糖复氧复糖PC12细胞凋亡的研究

目的:研究黄芪甲苷对缺氧缺糖复氧复糖PC12细胞凋亡的抑制作用。方法:取对数期PC12细胞随机分为6组:正常对照组(Normal组)、黄芪甲苷溶剂对照组(DMSO组)、模型组(缺氧缺糖复氧复糖组,Model组)、黄芪甲苷高剂量组(AST H组,100μmol/L)、黄芪甲苷中剂量组(AST M组,50μmol/L)、黄芪甲苷低剂量组(AST L组,25μmol/L)。正常对照组正常培养不进行任何处理;其余各组均进行缺氧缺糖复氧复糖造模:缺氧缺糖4 h后复氧复糖24 h;黄芪甲苷各剂量组和溶剂对照组于造模前0.5 h给药,直至培养结束。用MTT方法检测细胞存活率,倒置显微镜下观察细胞的形态,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:与正常组相比,模型组细胞折光性差,细胞肿胀簇状聚集,甚至脱落,细胞之间的突触消失,细胞本身明显肿胀,存活率明显降低,细胞凋亡率增加(P0.05)。与模型组相比,溶剂对照组和黄芪甲苷低剂量组细胞形态无明显变化,存活率和凋亡率差异没有显著性(P0.05),但黄芪甲苷高、中剂量组细胞肿胀等变化明显减轻,存活率均增加,细胞凋亡率降低(P0.05)。黄芪甲苷高剂量组比中、低剂量组细胞存活率高和凋亡率低(P0.05)。结论:黄芪甲苷可抑制PC12细胞缺氧缺糖复氧复糖后的损伤和凋亡,其最佳作用浓度是100μmol/L。     

不同剂量血小板源性生长因子-B及黄芪注射液对体外高糖培养大鼠视网膜毛细血管周细胞的影响

目的观察不同剂量的血小板源性生长因子-B(PDGF-B)、不同剂量的黄芪注射液以及两者合用对体外高糖培养大鼠视网膜毛细血管周细胞(RMPs)生长的影响。方法取体外培养第3代大鼠RMPs,饥饿培养24 h后,分为空白组(5.5 mmol/L葡萄糖的低糖DMEM)、对照组(50 mmol/L葡萄糖的高糖DMEM)、不同浓度PDGF-B组(0.25 ng/mL、0.50 ng/mL、1.00 ng/mL+高糖DMEM)、不同浓度黄芪注射液组(0.2 mg/mL、2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL+高糖DMEM)和PDGF-B+不同浓度黄芪注射液组(1.00 ng/mL PDGF-B+0.2 mg/mL、2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL黄芪注射液+高糖DMEM),培养48 h后,采用CCK8法检测各组RMPs增殖情况,并用免疫荧光法鉴定增殖后的细胞。结果与对照组比较,不同浓度PDGF-B组,2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL黄芪注射液组及1.00 ng/mL PDGF-B+2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL黄芪注射液各组均能促进体外高糖培养的RMPs增殖,并在一定浓度内呈剂量-效应关系,差异均有统计学意义(P均0.05);其中1.00 ng/mL PDGF-B组及200 mg/mL黄芪注射液组促增殖作用均优于1.00 ng/mL PDGF-B+200 mg/mL黄芪注射液组(P均0.05)。加药培养后各组细胞表达周细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及血小板源性生长因子受体-β(PDGFR-β),不表达血管性血友病因子(vWF),几乎不表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结论 PDGF-B及黄芪注射液均对体外高糖培养大鼠RMPs的生长有促进作用,短期内未使RMPs发生变异,单用PDGF-B或黄芪注射液促生长作用优于两者合用。     

银杏叶提取物含药血清对体外加压培养大鼠视网膜神经节细胞保护机制影响

目的:探讨银杏叶提取物含药血清对体外加压培养大鼠视网膜神经节细胞保护机制的影响。方法:选取无特定病原体级SD大鼠35只为研究对象,将大鼠提取纯化视网膜神经节细胞,并放入培养瓶培养,将培养瓶随机分为五组,每组7个培养瓶,分别为银杏叶提取物含药血清高、中、低剂量组、高压组、低压组,观察记录大鼠的体重等一般病理特征,记录视网膜神经结节细胞凋亡情况、细胞周期情况、细胞骨架情况。结果:方差分析结果为:F值=6. 534,P值=0. 002,组间整体比较视网膜神经节细胞凋亡率有明显差异(P0. 05),与常压组相比,中剂量组、低剂量组和高压组视网膜神经节细胞凋亡率上升,差异有统计学意义(P0. 05),与高剂量组视网膜神经节细胞凋亡率无明显差异(P0. 05),与高压组相比,高剂量组、中剂量组和低剂量组视网膜神经节细胞凋亡率均降低,差异有统计学意义(P0. 05),高压组视网膜神经节细胞凋亡率最高,随着用药药量的增加,视网膜神经节细胞凋亡率逐渐下降,其中高剂量组视网膜神经节细胞凋亡率基本接近常压组;各组视网膜神经节细胞S、G2和G1期细胞所占比例无明显差异(P0. 05);高剂量组纤维型肌动蛋白分布排列规则、清晰,与高压组、中剂量组、低剂量组分布有明显差异,与常压组分布无明显差异。结论:银杏叶提取物含药血清能够抑制视网膜神经节细胞骨架微丝断裂和细胞凋亡,从而对视网膜神经节细胞损伤起到较好的保护作用。     

高糖环境下不同浓度黄芪注射液对肾小管上皮细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的观察不同浓度黄芪注射液对高糖环境下肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡和核转录因子κB (NF-κB)蛋白表达的影响,探讨黄芪注射液浓度与细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达间的关系。方法肾小管上皮细胞用无血清培养基同步化24 h后随机分为低糖组、高糖组、高糖+2μg/m L黄芪注射液组、高糖+20μg/m L黄芪注射液组、高糖+200μg/m L黄芪注射液组,每组设3个复孔。细胞培养48 h和72 h后收集细胞及细胞上清液,用流式细胞仪测定各组细胞凋亡率,Western blot方法测定各组NF-κB蛋白表达量,分析黄芪注射液浓度、细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达之间的相关性。结果细胞培养48 h和72 h,低糖组和黄芪注射液各干预组细胞凋亡率及NF-κB蛋白表达量均明显低于高糖组(P均0. 05)。黄芪注射液各干预组间细胞凋亡率及NF-κB蛋白表达量比较差异均有统计学意义(P均0. 05),高糖+200μg/m L黄芪注射液组最低。黄芪注射液浓度与细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达量呈负相关,NF-κB蛋白表达量与细胞凋亡率呈正相关。结论黄芪注射液能抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡和NF-κB蛋白表达,黄芪注射液浓度、细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达之间有显著相关性。     

黄芪注射液对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

[目的]研究黄芪注射液对高糖环境下肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响。[方法]传代培养人近曲肾小管上皮细胞,细胞用无血清培养基同步化24 h后,将细胞分为5组:低糖对照组、高糖组、高糖+不同浓度黄芪注射液组(2、20、200μg/m L),每组设3个复孔。将细胞置于37℃恒温培养箱中培养至24、48、72 h,收集细胞及细胞上清液。用流式细胞仪测定细胞凋亡率。[结果]24、48、72 h,低糖对照组细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。细胞培养24 h,黄芪干预组200和20μg/m L细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。细胞培养48和72 h,黄芪注射液干预组细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。黄芪注射液干预组各组之间凋亡率比较差异也都有显著性(P0.05),其干预作用呈剂量依赖性。[结论]黄芪注射液能抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞的凋亡,有助于糖尿病肾病的治疗。     

山楂叶总黄酮对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞增殖和迁移的影响和机制

目的探讨山楂叶总黄酮对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRCEC)增殖和迁移的影响,并分析其机制。方法细胞分为对照组(含25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养液处理细胞5 d),模型组(含90 mmol/L葡萄糖的DMEM培养液处理5 d),山楂叶总黄酮低、中、高剂量组(125、250、500 ng/mL),山楂叶总黄酮高剂量+si-NC组(转染si-NC后90 mmol/L葡萄糖、500 ng/mL山楂叶总黄酮处理),山楂叶总黄酮高剂量+si-VEGF组(转染si-VEGF后90 mmol/L葡萄糖、500 ng/mL山楂叶总黄酮处理)。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测VEGF mRNA表达,噻唑兰(MTT)法检测细胞活力,集落形成实验检测克隆形成数,Transwell实验检测迁移细胞数。结果与对照组比较,模型组HRCEC活力、克隆形成数、迁移细胞数、VEGF mRNA表达升高(P0.05);与模型组比较,山楂叶总黄酮低、中、高剂量组HRCEC活力、克隆形成数、迁移细胞数、VEGF mRNA表达降低(P0.05);与山楂叶总黄酮高剂量+si-NC组比较,山楂叶总黄酮高剂量+si-VEGF组HRCEC活力、克隆形成数、迁移细胞数降低(P0.05)。结论山楂叶总黄酮可通过下调VEGF抑制高糖刺激诱导的HRCEC增殖和迁移。     

彗星试验检测雄黄对中国仓鼠肺细胞DNA的损伤作用

目的检测含砷中药雄黄对中国仓鼠肺细胞（CHL细胞）DNA的损伤作用。方法测定雄黄对CHL细胞的半数抑制浓度（IC50）,根据IC50设立不同剂量组,进行彗星试验,观察并比较不同组别不同损伤等级细胞数的差异。结果给药干预后,各剂量组及阳性对照组DNA损伤细胞数明显增加,且各剂量组随着给药浓度的增加,Ⅲ、Ⅳ级（中、重度）损伤细胞数增多。结论中药雄黄可引起CHL细胞DNA损伤。     

糖网一号对糖尿病大鼠早期视网膜毛细血管病变的影响

目的观察糖尿病大鼠视网膜毛细血管超微结构的病理改变及中药复方糖网一号对毛细血管超微结构的影响.方法链尿佐菌素(STZ)致糖尿病大鼠随机分为糖尿病模型组(M)、二甲双胍组(A)、糖网一号小剂量组(B)及糖网一号大剂量组(C)(n=12),并设正常对照组(CON).每日灌药1次,6个月后测血流变指标,取视网膜行视网膜血管铺片及透射电镜观察.结果糖网一号和二甲双胍组血流变检测,两药相比,前者优于后者,糖网一号大剂量疗效优于小剂量用药.糖尿病6个月时模型组大鼠的血液有高凝、高粘现象,并出现了影周细胞、周细胞减少、微血管瘤等早期糖尿病视网膜病变的特征性改变.其余各组视网膜病变与模型组相比明显较轻,大剂量用药组接近正常.结论大鼠糖尿病早期眼底和视网膜微血管超微结构已有改变,中药糖网一号对早期糖尿病大鼠视网膜病变具有良好的防治作用.     

中药对新生小牛视网膜组织细胞增殖作用的研究

目的观察中药对体外培养新生小牛视网膜细胞生长的干预作用.方法采用MTF法观察单味中药、复方中药和中药单体成分对体外培养新生小牛视网膜神经细胞增殖率的影响.结果复方1、枸杞、枸杞多糖、当归、阿魏酸对牛视网膜神经细胞有明显的促增殖作用,黄芪、黄芪多糖、BFGF的保护作用较为温和,丹参无明显促增殖和抑制作用.结论复方1等中药对体外培养视网膜细胞生长有较好的保护作用.     

黄芪黄酮对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞的保护作用

目的:研究黄芪黄酮对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞的作用。方法:取对数期PC12细胞,随机分为5组:正常组、模型组(氧糖剥夺/复氧复糖组)、黄芪黄酮低(0.001 mg/mL)、中(0.01 mg/mL)、高(0.1 mg/mL)剂量组。其中,模型组和黄芪黄酮低、中、高剂量组氧糖剥夺2 h后复氧复糖24 h,黄芪黄酮低、中、高剂量组在复氧复糖的同时予以黄芪黄酮不同剂量处理。用倒置相差显微镜观察PC12细胞的形态变化,MTT法和CCK-8法检测细胞的存活率。结果:正常组细胞状态良好,贴壁生长,细胞突起明显,各个突起之间交织在一起,细胞整体折光性较强,细胞表面光滑;与正常组相比,模型组部分细胞漂浮,突起收缩,细胞折光性差,细胞存活率明显降低(P0.05);与模型组相比,黄芪黄酮低、中、高剂量组细胞状态均有明显好转,突起可见,细胞存活率均有升高(P0.05);与黄芪黄酮低剂量组相比,黄芪黄酮中、高剂量组细胞状态较好,细胞存活率升高(P0.05);黄芪黄酮中剂量组与高剂量组之间差异不明显(P0.05)。结论:黄芪黄酮可改善氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞的生长状态,减轻细胞损伤,提高细胞存活率,发挥保护作用,且黄芪黄酮中、高剂量组的保护作用优于低剂量组。     

基于彗星实验的大黄素型单蒽酮体内外毒性研究

目的：采用人肝细胞HepaRG构建的2D、3D细胞培养模型和大鼠体内重复给药体系开展彗星实验,探讨不同模型对大黄素型单蒽酮毒性评价结果的影响。方法：2D和3D HepaRG细胞培养模型给予不同浓度的单蒽酮处理24、48、144 h后,采用彗星实验检测DNA损伤程度。25只雄性SD大鼠,按体质量随机分为0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）对照组、阳性对照甲磺酸乙酯（EMS）200 mg·kg-1组及单蒽酮6.5、65、650 mg·kg-1组,每组5只。对照组和单蒽酮各剂量组大鼠连续14 d灌胃给药,给药体积为15 mL·kg-1,阳性对照组大鼠连续3d灌胃给予EMS。末次给药3 h后麻醉取血及肝组织用于彗星实验。结果：单蒽酮质量浓度为10 μg·mL-1及以下时对2D培养的HepaRG细胞无明显损伤作用。而当单蒽酮质量浓度为10 μg·mL-1时,在3D模型中培养的肝细胞尾DNA含量及Olive尾矩（OTM）与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）,且存在一定剂量相关性。体内彗星实验结果表明,单蒽酮650 mg·kg1组大鼠肝细胞尾DNA含量及OTM均显著高于对照组（P<0.01）,且各剂量组间存在一定剂量效应趋势;而各组大鼠的外周血有核细胞的尾DNA含量及OTM与对照组比较差异无统计学意义。结论：单蒽酮经3D培养模型代谢后存在肝细胞毒性,对大鼠肝细胞DNA损伤程度强于外周血细胞,推断其毒性与单蒽酮在肝脏中的代谢产物有关。     

丹皮酚对高糖诱导心肌细胞PI3K-Akt信号通路的影响

目的 细胞水平观察丹皮酚对高糖诱导心肌细胞PI3K-Akt信号通路的影响,以探讨丹皮酚防治糖尿病心肌病的分子机制.方法 采用差速贴壁法培养乳鼠原代心肌细胞,MTT法筛选丹皮酚药物的安全质量浓度.将心肌细胞随机分为正常组、高糖组、丹皮酚低剂量组、丹皮酚中剂量组、丹皮酚高剂量组.流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western ...