1,25-二羟维生素D3对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞和气道炎症的影响

目的 探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞(即CD4+ CD25+ Foxp3+ T 细胞)及气道炎症的影响.方法 28只Wistar大鼠用卵白蛋白作为致敏原制备大鼠哮喘模型,然后随机分为四组(n=7).治疗组 1于激发前1 h给予口服1,25(OH)2D3;治疗组2于激发前1 h给予皮下注射地塞米松;治疗组3则于激发前1 h给予以上两药联合应用;组4于激发前1 h不用药(哮喘对照组).分别测定各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4和IL．10水平,计数总细胞数和嗜酸性粒细胞数;流式细胞仪检测外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4+T细胞的比值;检测肺组织中IL-10和Foxp3mRNA表达.以未造模Wistar大鼠作为正常对照组(n=7).结果 哮喘对照组与正常对照组比较各项指标均有显著差异.与哮喘对照组比较,各哮喘治疗组大鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞计数明显减少,IL-4水平降低而IL-10水平增高;外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4+T细胞比值明显增高;肺组织中IL-10 mRNA和Foxp3 mRNA表达增加.各哮喘治疗组间及其与正常对照组间各项检测指标比较均无显著差异.结论 哮喘大鼠给予1,25(OH)2D3可增加外周血和脾脏Treg比例和Foxp3mRNA表达水平.提示1,25(OH)2D3对Treg具有调节作用,对哮喘可能有潜在的治疗作用.     

1,25二羟基维生素D_3对大鼠脾CD4~+CD25~+调节性T细胞及Foxp3基因表达的影响

目的:探究1,25二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对大鼠脾CD4 CD25 调节性T细胞(Treg)及其特异性转录因子Foxp3基因表达的影响.方法:近交系雄性Lewis大鼠,随机分成对照组和3个剂量的VitD3组: 0.125 μg组,0.25 μg组和1 μg组,每组30只;灌胃给药,3次/周,共2周后对照组给予赋形剂;各组随机抽取20只大鼠,于第15 d腹腔注射脂多糖(LPS)(10 mg/kg),随机选择其中10只于6 h后切取脾,其余10只观察注射LPS后96 h大鼠的病死率,同时留取未注射LPS大鼠的脾;流式细胞仪检测脾CD4 CD25 Treg数量变化,RT-PCR检测脾Foxp3 mRNA表达.结果:1,25(OH)2D3明显上调大鼠脾CD4 CD25 Treg的数量及特异性转录因子Foxp3 mRNA的表达;1,25(OH)2D3能保护大鼠抵抗LPS的攻击.结论:1,25(OH)2D3对大鼠脾CD4 CD25 调节性T细胞及特异性转录因子Foxp3 mRNA的表达有显著影响.1,25(OH)2D3保护大鼠抵抗LPS攻击可能与其促进CD4 CD25 Treg的发育和功能有关.     

1,25-二羟维生素D3处理树突状细胞在过敏性气道炎症中的作用

目的 研究1,25-二羟维生素D3对树突状细胞(dendritic cells,DC)表型和功能的影响及其处理后DC在过敏性气道炎症中的作用.方法 体外扩增小鼠骨髓来源的树突状细胞,采用流式细胞术和ELISA检测1,25-二羟维生素D3对DC表型和分泌细胞因子IL-10和IL-12的影响;观察1,25-二羟维生素D3处理DC过继卵蛋白致敏小鼠肺组织病理特点和支气管肺泡灌洗液细胞类型.结果 经1,25-二羟维生素D3处理后,DC表达CD80和MHC Ⅱ均明显降低,而CD11c变化不明显;分泌IL-10显著增加,而分泌IL-12显著降低.过继小鼠肺组织未见典型的哮喘样病理改变,支气管肺泡灌洗液细胞类型与空白对照组无显著差异.结论 1,25-二羟维生素D3可抑制DC成熟,经其处理后DC过继致敏小鼠可诱导对抗原的免疫耐受,避免过敏性气道炎症的发生.     

1,25-二羟维生素D3对小鼠成骨细胞OPG和RANKL基因表达的影响

目的观察1,25-二羟维生素D 3[1,25(OH)2D 3]对体外培养的小鼠成骨细胞osteoprotegerin(OPG)和receptor activator of NF-κB ligand(RANKL)基因表达的作用.方法取30只出生24 h内的新生小鼠,在无菌条件下取颅盖骨,去除纤维结缔组织,用胰蛋白酶-胶原酶消化法进行成骨细胞的原代培养.取第3～5代的成骨细胞,分成对照组和实验组,在实验组培养液中加入不同浓度的1,25(OH)2D3(10-8、10-9、10-11 mol/L),培养48 h后,取出培养液,-70℃冻存备用.从培养瓶中贴壁细胞提取总RNA,应用RT-PCR法检测细胞中OPG和RANKL的mRNA表达.应用EUSA方法检测培养液中OPG蛋白的浓度.结果各浓度1,25(OH)2D3作用的成骨细胞中,OPG的mRNA表达均较对照组显著减弱,并随1,25(OH)2D3浓度的增加而表达减弱,呈现明显的浓度依赖性;实验组RANKL mRNA的表达较对照组表达明显,且随1,25(OH)2D3浓度增加而增强;实验组成骨细胞中OPG蛋白的表达明显低于对照组(P＜0.05).结论1,25(OH)2D3抑制小鼠成骨细胞OPG的表达,同时增加RANKL的表达.     

1,25-二羟维生素D3抑制大鼠角膜移植术后免疫排斥反应

目的研究1,25-二羟维生素D3对角膜移植术后免疫排斥反应的影响。方法以45只SD大鼠为受体,15只Wistar大鼠为供体建立穿透性角膜移植模型。受体SD大鼠随机分成实验组、实验对照组和对照组,每组15只。实验组及实验对照组行同种异体角膜移植,对照组行自体角膜移植。术后0～13d实验组腹腔注射1,25-二羟维生素D31.0μg·kg-1·d-1,对照组和实验对照组注射灭菌花生油2ml/d;术后观察植片存活情况,并于术后14、21、30d每组随机处死5只大鼠行植片病理学检查和ELISA检测外周血IL-1β、IL-2、IL-8、IL-10。结果对照组角膜植片存活时间为（21.7±6.8）d,实验对照组为（11.2±2.5）d,实验组为（19.3±5.2）d,3组比较统计学差异非常显著（P〈0.01）;病理学检查示实验组淋巴细胞浸润和新生血管均较实验对照组少;实验组外周血中IL-1β、IL-2、IL-8含量与实验对照组相比下降,IL-10含量增高,统计学差异非常显著（P〈0.01）。结论1,25-二羟维生素D3能在角膜移植后有效的保护植片,抑制排斥反应,延长植片存活时间。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞对哮喘大鼠免疫功能影响

目的:观察CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)对CD4+CD25-T细胞增殖和Th1/Th2细胞因子分泌的影响,探讨其在哮喘气道炎症中的作用机制。方法:将哮喘大鼠CD4+CD25-T细胞分别与卵白蛋白(OVA)免疫耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞和哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞联合培养,3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测量细胞增殖情况,ELISA检测细胞IL-4、IL-5和IFN-γ含量。结果:OVA耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞能抑制CD4+CD25-T细胞增殖和Th2细胞因子分泌(P<0.05);哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞可明显抑制IFN-γ的分泌(P<0.05)。结论:OVA免疫耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞可能通过抑制哮喘大鼠CD4+CD25-T细胞增殖和影响Th1/Th2平衡发挥作用,哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞存在功能异常,可能与哮喘的发病有关。     

1,25-二羟维生素D3的免疫调节机理及其应用进展

1,25-二羟维生素D3[1,25（OH）2D3]不仅具有调节钙磷代谢的作用,还可影响多种细胞的生长和分化,具有调节免疫系统的作用.该文综述1,25（OH）2D3的免疫调节机制,为进一步开发更安全有效的类似物,并作为新兴的免疫调节剂应用于临床提供理论依据.     

维生素D及其活性形式1,25-二羟维生素D_3与糖尿病的关系

糖尿病的发病机制正在研究中,近些年的研究发现,维生素D及其活性形式1,25-二羟维生素D3除传统的调节钙、磷代谢的作用外,还通过刺激胰岛素分泌和减少细胞因子介导的β细胞凋亡途径,在糖尿病的发生、发展中起着关键作用。     

1,25-二羟维生素D_3对棕榈酸诱导巨噬细胞炎症因子表达的影响

目的研究1,25-二羟维生素D_3(1,25(OH)_2D_3)对棕榈酸(PMA)诱导THP-1巨噬细胞炎症因子表达的影响及其机制。方法用1,25(OH)_2D_3(10 nmol/L)和/或PMA(250μmol/L)处理THP-1巨噬细胞6 h,采用荧光定量PCR和酶联免疫吸附法(ELISA)法检测肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-10的表达水平;用1,25(OH)_2D_3和/或PMA处理THP-1巨噬细胞60 min,采用免疫印迹(Western-blot)法检测AMPKα1和磷酸化AMPKα1(p-AMPKα1)水平。结果 1,25(OH)_2D_3(10μmol/L))明显抑制PMA(250μmol/L)作用下THP-1巨噬细胞TNFα、IL-1β和IL-6的表达,并上调IL-10的表达;1,25(OH)_2D_3显著上调THP-1巨噬细胞AMPKα1的磷酸化水平。结论 1,25(OH)_2D_3抑制PMA诱导的THP-1巨噬细胞炎症因子表达,该效应可能与其激活AMPKα1有关。     

Influence of Danshen Injection on airway inflammation and CD4^＋CD25^＋ regulatory T cells of asthmatic rats

Objective： To investigate the influence of Danshen Injection on airway inflammation and CD4^＋CD25^＋ regulatory T cells（CD4^＋CD25^＋ Tr） of asthmatic rats, and elucidate the possible mechanism of Danshen Injection in treatment of asthma. Methods： 30 Wister rats were randomly divided into control group, asthma group and Danshen Injection treated group. Bronchoalveolar lavage fluids （BALF） were collected, and cytology studies were conducted. Lung tissues were obtained and pathologic analyses were done with hematoxylin and eosin stain （HE）. Flow cytometry was used to detect the CD4^＋CD25^＋ Tr ratio in peripheral blood mononuclear cells （PBMCs）. Results： Total cell, the percentage of lymphocytes, neutrophils and eosinophils （Eos） in BALF of Danshen Injection-treated group were lower than that in asthma group （P〈0.05, P〈0.01）. Compared with asthma group, less infiltration of inflammatory cells in lung tissues was observed in Danshen Injection-treated group. CD4^＋CD25^＋ Tr of asthma group was lower than that of control and Danshen Injection treated group （P〈0.05）. Conclusion： Danshen Injection can suppress airway inflammation of asthmatic rats, probably by increasing the number of CD4^＋CD25^＋ Tr.     

氨茶碱、地塞米松对哮喘患者CD4+CD25+T调节细胞抑制功能的影响

目的探讨哮喘患者CD4+ CD25+ T调节细胞的作用是否存在缺陷及药物(地塞米松、小剂量氨茶碱)对其作用的影响,为有效控制哮喘提供依据。方法分离哮喘患者及健康对照者外周血CD4+ CD25+ T调节细胞及CD4+CD25-T淋巴细胞并培养,设CD4+ CD25+ T调节细胞组、CD4+CD25-T淋巴细胞组及CD4+ CD25+ T调节细胞联合CD4+CD25-T淋巴细胞组,第3组又分为氨茶碱干预组、地塞米松干预组及空白对照组,72h后取培养上清液用ELISA法检测IFN-γ、IL-5、IL-13水平。结果健康对照者CD4+ CD25+ T调节细胞可抑制IFN-γ、IL-5及IL-13的生成(P<0.01),哮喘患者仅抑制IFN-γ、IL-5的生成(P<0.01);地塞米松预处理CD4+ CD25+ T调节细胞后,健康对照者CD4+ CD25+ T调节细胞抑制IFN-γ(P<0.05)、IL-5(P<0.01)、IL-13(P<0.01)生成能力增强,哮喘患者抑制IL-5、IL-13生成能力增强(P<0.01);采用氨茶碱预处理后,健康对照者CD4+ CD25+ T调节细胞抑制IL-5(P<0.01)、IL...     

哮喘患者外周血Rho激酶及CD4+CD25+调节性T细胞测定

目的：比较不同研究对象外周血Rho激酶及CD4+CD25+调节性T细胞的表达规律,探讨Rho激酶和CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘患者中的变化和相关性。方法：选取中、重度哮喘患者16例,健康对照组14例,通过年龄、性别配对,ELISA测定所有研究对象血清Rho激酶水平,流式细胞仪测定CD4+CD25+调节性T细胞水平,所有研究对象经肺功能仪测定肺功能。结果：哮喘组外周血Rho激酶表达水平高于对照组(P<0.05),外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平低于对照组(P<0.05);两组外周血Rho激酶与肺功能第1秒用力呼气容积(forced expiratory volume in one second,FEV1)占预计值百分比(FEV1%)无相关关系(r=-0.491,P>0.05);两组外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平与肺功能FEV1%呈轻度正相关关系(r=0.380,P=0.038);两组外周血Rho激酶与CD4+CD25+调节性T细胞水平无相关关系(r=-0.438,P>0.05)。结论：哮喘患者外周血Rho激酶水平升高,CD4+CD25+调节性T细胞水平降低,可能在哮喘发病过程中起一定的作用。     

缬沙坦对哮喘大鼠气道炎症及气道反应性的影响

目的:研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对哮喘大鼠气道炎症及气道反应性的干预作用。方法:50只Wistar大鼠随机分成5组,每组10只:A组(正常对照组)、B组(哮喘组)、C组[15mg/(kg·d)缬沙坦]、D组[30mg/(kg·d)缬沙坦]和E组[50mg/(kg·d)缬沙坦]。应用动物肺功能仪测定大鼠气道反应性,支气管肺泡灌洗液测定细胞总数及嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)计数。结果:①与A组比,B组肺泡灌洗液中细胞总数和EOS计数增高(P<0.05,P<0.01),与B组比,缬沙坦干预后的C组、D组和E组肺泡灌洗液中细胞总数和EOS计数均减少(P<0.05￣0.01);与C组比,D组肺泡灌洗液中细胞总数和EOS计数均减少(P均<0.05)。②当氯化乙酰胆碱(ACH)以较低(10￣20μg/ml)浓度激发时,各组大鼠气道阻力(Re)比较差异无统计学意义(P均>0.05);Re在ACH(40￣320μg/ml)浓度时,哮喘组的Re较高,与对照组、A组、B组和C组比较差异有统计学意义(P均<0.05,320μg/mlACH时P<0.01)。结论:缬沙坦可能是通过抑制AT1受体抑制哮喘气道炎症和降低气道反应性。     

大鼠急性脑缺血后CD4~+CD25~+调节性T细胞、Foxp3表达及其意义

目的动态观察大鼠急性脑缺血后不同时期外周血中CD4+CD25+调节性T细胞和脑组织中Foxp3的表达,探讨其在急性缺血性卒中病理生理演变过程中的作用。方法 48只Wistar大鼠按随机数字表法分为缺血组和假手术组。参考改良的Zea-Longer插线方法将缺血组大鼠制作成右侧大脑中动脉线栓脑缺血动物模型。采用流式细胞术和免疫组化染色检测造模后1、3、7、14 d时大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞表达和脑组织中Foxp3表达,同时采用改良NSS神经功能评分观察大鼠行为学变化。结果缺血组和假手术组大鼠神经功能缺损评分在模型制备后逐渐下降(P<0.01)。流式细胞术显示脑缺血后1、3 d时缺血组大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的表达与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05),7、14 d时表达明显高于假手术组(P<0.05),且与大鼠的神经功能评分呈负相关(r=-0.68,P=0.01)。免疫组化显示脑缺血后1 d时缺血组大鼠脑组织中即可观察到Foxp3表达,且主要集中在缺血灶区域,在未缺血侧也可观察到Foxp3表达,但表达量较少,而假手术组脑组织中未见Foxp3表达。结论 CD4+CD25+调节性T细胞参与了大鼠急性脑缺血后炎症免疫反应的发生发展过程,且在脑缺血后1 d时便开始参与脑缺血性损伤的免疫调节,这种免疫调节对脑细胞有着保护作用。     

Overexpression of mclca3 in airway epithelium of asthmatic murine models with airway inflammation

Asthma is a worldwide prevalent disease that is a .considerable health burden in many countries. In recent years, the airway epithelium is increasingly recognized as a central contributor to the pathogenesis of asthma. One of the most highly induced genes in epithelial ceils in experimental allergic airway disease is the third murine calcium-activated chloride channel homologue （mclca3, alias gob-5）. Its human homology protein is hCLCA, which has been identified as clinically relevant molecules in diseases with secretory dysfunctions including asthma and cystic fibrosis.     

1, 25-二羟维生素D3对软脂酸诱导的胰岛素抵抗血管内皮细胞功能的影响

目的：探讨1, 25-二羟维生素D3[1, 25(OH)2D3]对软脂酸（PA）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs） 的胰岛素抵抗的影响及其可能作用机制。方法：用含0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9mmol/LPA 的DMEM培养基培养HUVECs,建立胰岛素抵抗内皮细胞模型。分别用0、0.01、0.1、1.0、10、100nmol/ L1, 25(OH)2D3干预,硝酸盐/亚硝酸盐荧光试剂盒测定NO含量,Westernblot法测定pAkt及peNOS蛋白的 表达,qPCR法测定VDR、ET-1的表达。结果：0.6mmol/L的PA培养HUVECs18h后,培养液中的葡萄糖浓度 耗减显著低于对照组,细胞活力降低,胰岛素抵抗的内皮细胞模型建立。PA干预后NO含量较对照组HUVECs 减少（ P ＜0.05）,1nmol/L1, 25(OH)2D3干预胰岛素抵抗的内皮细胞后NO含量增加,在1min时NO量达最 大值。1nmol/L浓度1, 25(OH)2D3干预胰岛素抵抗的内皮细胞后peNOS及pAkt的蛋白表达量明显增加（ P ＜ 0.05）,ET-1的mRNA表达水平明显减少（ P ＜0.05）。结论：1, 25(OH)2D3增加PA诱导的胰岛素抵抗血管内皮细 胞peNOS、pAkt的表达,增加NO产生,降低ET-1的表达,可能对胰岛素抵抗的血管内皮细胞存在一定的保护作用。     

吸入糖皮质激素对哮喘大鼠气道炎症和气道重构的影响

目的观察早期和晚期吸入糖皮质激素对哮喘大鼠气道炎症和气道重构的影响.方法 32只Wistar大鼠随机分为4组:A对照组8只,B卵蛋白(OVA)致哮喘组8只,C 早期激素治疗组8只,D晚期激素治疗组8只.各组大鼠肺组织切片HE、胶原染色、免疫组化NGF、TGF-β1染色,借助计算机图像分析软件测量各项指标.结果 B组气道壁炎性细胞计数、气道平滑肌面积、气道内壁面积、胶原沉积面积及NGF、TGF-β1表达均明显高于A组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01),C组各项指标均明显低于B组,差异有统计学意义(P<0.01、P<0.05),C组与A组比较各项均有升高,差异有统计学意义(P<0.01、P<0.05),D组仅气道壁炎性细胞计数、NGF表达低于B组,差异有统计学意义(P<0.05),C组各项与D组比较差异均有统计学意义(P<0.01、P<0.05).结论早期吸入激素可明显抑制气道炎症和气道重构,晚期吸入仅能部分抑制炎症反应,不能逆转已经形成的气道重构.