lncRNA TOB1-AS1在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨 ERBB2.1 转导蛋白反义 RNA1（transducer of ERBB2.1 antisense RNA 1,TOB1-AS1）在上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）组织中的表达情况及其临床意义,初步探讨TOB1-AS1对EOC细胞体外增殖、迁移和侵袭的影响。方法：使用TCGA数据库对EOC组织中TOB1-AS1表达情况进行分析;收集2017年7月至2018年1月在河北医科大学第四医院妇科行肿瘤切除并经病理检查证实为EOC的67例患者的肿瘤组织,收集同期因其他妇科疾病接受手术的30例患者的非肿瘤卵巢组织作为对照。采用qPCR法检测EOC组织和非肿瘤卵巢组织中TOB1-AS1的表达水平,χ2检验分析TOB1-AS1的表达与不同临床病理特征之间的相关性,Kaplan-Meier和Cox比例风险回归模型分析患者生存及预后的潜在影响因素。CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验分别检测敲低TOB1-AS1表达对EOC细胞SKOV3和A2780增殖、迁移和侵袭的影响。结果：TCGA数据库中资料和qPCR检测结果均显示,在EOC组织中TOB1-AS1的表达水平显著高于非肿瘤卵巢组织（均P<0. 01）。TOB1-AS1的高表达与EOC患者较晚的FIGO分期、较差的组织分级、淋巴结转移及腹膜转移有关（均P<0.05）。Kaplan-Meier生存分析结果显示,TOB1-AS1 高表达组患者术后 DFS 和 OS 均短于 TOB1-AS1 低表达组（均 P<0.05）。Cox 比例风险回归模型分析结果显示,FIGO分期、淋巴结转移、腹膜转移及TOB1-AS1表达是EOC患者预后的独立影响因素（均P<0.05）。TOB1-AS1在EOC细胞系SKOV3、A2780中的表达水平也显著高于正常卵巢上皮细胞系IOSE80（均P<0.01）。细胞功能实验结果显示,敲低TOB1-AS1可抑制SKOV3和A2780细胞的增殖、迁移和侵袭（均P<0.05）。结论：TOB1-AS1在EOC组织中高表达,与患者的不良预后显著相关。TOB1-AS1可能通过促进EOC细胞SKOV3、A2780的增殖、迁移和侵袭来影响EOC的恶性进展。     

LINC01503通过miR-342-3p/IGF2R轴促进上皮性卵巢癌的进展

目的：探讨LINC01503 在上皮性卵巢癌（EOC）中的表达水平和生物学功能及其可能的作用机制。方法：收集2015年5月至2016 年5月间在河北医科大学第四医院妇瘤科手术切除并经病理学确诊的85 例EOC患者的肿瘤组织和输卵管组织。常规培养人EOC 细胞A2780、SKOV3、OVCAR3 和OV90 及正常人卵巢上皮细胞IOSE80，将si-LINC01503、si-NC 及miR-342-3p mimic、miR mimic NC分别转染至SKOV3和A2780 细胞，分别作为si-LINC01503 组、si-NC 组、miR-342-3p mimic 组和miR mimic NC组。qPCR 法检测EOC组织和细胞中LINC01503 的表达水平，Kaplan-Meier 法分析LINC01503 表达水平与患者生存的关系。双荧光素酶报告基因实验验证LINC01503/miR-342-3p/IGF2R轴相关分子间的靶向关系。平板克隆、划痕愈合和Transwell 实验分别检测敲低LINC01503 及转染miR-342-3p mimic 对A2780 和SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。WB法检测EOC细胞中LINC01503/miR-342-3p 通路对IGF2R蛋白表达的影响。构建A2780 细胞裸鼠移植瘤模型，观察敲低LINC01503 对移植瘤生长的影响。结果：EOC组织和细胞中LINC01503 表达水平分别显著高于输卵管组织和IOSE80 细胞（均P<0.01），LINC01503高表达组患者术后PFS 和OS 均显著短于LINC01503 低表达组患者（均P<0.01）。敲低LINC01503、转染miR-342-3p mimic 均可抑制EOC 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）。敲低LINC01503 可下调IGF2R的表达（P<0.01），这一现象可通过转染miR-342-3p inhibitor 挽救。敲低LINC01503 可抑制A2780 细胞裸鼠移植瘤的生长（P<0.01）。结论：在EOC 组织和细胞中呈高表达的LINC01503，与患者的不良预后密切相关，LINC01503可能通过吸附miR-342-3p影响IGF2R表达进而促进EOC的进展。     

桥接整合因子1 通过c-MYC途径抑制非小细胞肺癌A549 细胞中PD-L1的表达

目的：研究人非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）A549 细胞中桥接整合因子-1（bridging intergrator-1,BIN1）对程序性死亡受体-配体1（programmed death-ligand 1,PD-L1）表达的影响及其机制。方法：采用qRT-PCR和Western blotting方法检测A549 细胞和正常人胚肺成纤维细胞2BS中BIN1 与PD-L1 基因和蛋白表达情况,通过基因转染技术、利用阳离子脂质体将含有人全长BIN1 基因序列的真核表达质粒CMV-MCS-GFP-SV40-Neomycin-BIN1 转染到A549 细胞中（BIN1+组）,构建过表达BIN1 的细胞株,采用RNA干扰技术将干扰骨髓细胞瘤病毒癌基因（cellular-myelocytomatosis viral oncogene ,c-MYC）的c-MYC-siRNA转染到A549 细胞中（c-MYC-siRNA组）以敲低c-MYC基因表达,通过qRT-PCR和Western blotting 方法验证转染效果及过表达BIN1 基因或敲低c-MYC基因对A549 细胞中c-MYC 和PD-L1 表达的影响。结果：与2BS 细胞相比,A549 细胞中BIN1 基因和蛋白均呈低表达状态,而PD-L1 呈高表达状态（均P<0.05）。将携带BIN1 基因的真核表达质粒转染到A549 细胞后,BIN1 基因和蛋白表达水平较对照组显著升高（P<0.05）,而PD-L1 表达显著降低（P<0.05）。c-MYC-siRNA 转染到A549 细胞后,细胞内c-MYC表达显著降低（P < 0.01）,PD-L1 表达明显下调（P<0.01）。结论：BIN1 过表达可以通过失活c-MYC通路降低PDL1表达,从而抑制A549细胞的免疫逃逸。     

TRAP1调控氧化磷酸化在卵巢癌顺铂耐药中的作用研究

目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)在顺铂耐药性卵巢癌中的表达以及对顺铂耐药性卵巢癌细胞氧化磷酸化的影响。方法 收集2019-01-10-2020-01-10郑州人民医院手术切除的卵巢癌组织样本41例,其中顺铂敏感26例(顺铂敏感组),顺铂耐药15例(顺铂耐药组),癌旁组织10例(对照组),及细胞株A2780与顺铂耐药株A2780CP,测定上述对象中TRAP1表达。通过转染siRNA沉默A2780CP细胞中TRAP1表达,检测细胞全细胞及线粒体耗氧率(OCR)、ATP产量变化,检测加药顺铂时细胞增殖活性和凋亡率的变化。结果 顺铂耐药组、顺铂敏感组和对照组TRAP1蛋白表达水平分别为1.00±0.30、0.60±0.14和0.22±0.08,差异有统计学意义,F=47.640,P<0.001。A2780CP细胞TRAP1蛋白表达水平(2.24±0.10)高于A2780细胞(1.00±0.05),差异有统计学意义,t=11.383,P=0.001。与A2780细胞相比,A2780CP细胞的顺铂IC₅₀浓度升高,全细胞及线粒体OCR、ATP产量均升高...     

mdr1启动子调控CD::UPP基因对紫杉醇耐药卵巢癌细胞的杀伤作用

目的探讨腺病毒介导的mdr1启动子调控胞嘧啶脱氨酶尿嘧啶磷酸核糖转移酶(CDUPP)融合基因联合5-氟胞嘧啶(5-FC)对紫杉醇耐药卵巢癌细胞的特异性杀伤作用.方法扩增、纯化含有mdr1-CDUPP基因的重组腺病毒,转染人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol和亲本细胞株A2780,RT-PCR检测mdr1和CDUPP基因的表达水平;之后加入5-FC,MTT法检测细胞抑制情况及旁观者效应,并观察腺病毒转染后裸鼠移植瘤的生长情况.结果mdr1和CDUPP基因在A2780/Taxol细胞中可稳定表达,转染后A2780/Taxol组的细胞生长明显低于A2780组;转基因的A2780/Taxol细胞联合5-FC后可通过旁观者效应杀伤周围未转基因的耐药细胞;耐药组移植瘤生长明显受到抑制,肿瘤体积为(569.10±187.93)mm3,对照组肿瘤体积为(2 111.98±230.82)mm3,差异有统计学意义(P＜0.01).结论mdr1启动子可调控CDUPP基因特异性表达并特异性杀伤紫杉醇耐药卵巢癌细胞.     

mdr1启动子调控CD∷UPP基因对紫杉醇耐药卵巢癌细胞的杀伤作用

目的:探讨腺病毒介导的mdr1启动子调控胞嘧啶脱氨酶∷尿嘧啶磷酸核糖转移酶(CD∷UPP)融合基因联合5-氟胞嘧啶(5-FC)对紫杉醇耐药卵巢癌细胞的特异性杀伤作用。方法:扩增、纯化含有mdr1-CD∷UPP基因的重组腺病毒,转染人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol和亲本细胞株A2780,RT-PCR检测mdr1和CD∷UPP基因的表达水平;之后加入5-FC,MTT法检测细胞抑制情况及旁观者效应,并观察腺病毒转染后裸鼠移植瘤的生长情况。结果:mdr1和CD∷UPP基因在A2780/Taxol细胞中可稳定表达,转染后A2780/Taxol组的细胞生长明显低于A2780组;转基因的A2780/Taxol细胞联合5-FC后可通过旁观者效应杀伤周围未转基因的耐药细胞;耐药组移植瘤生长明显受到抑制,肿瘤体积为(569.10±187.93)mm3,对照组肿瘤体积为(2111.98±230.82)mm3,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:mdr1启动子可调控CD∷UPP基因特异性表达并特异性杀伤紫杉醇耐药卵巢癌细胞。     

下调Beclin1 抑制卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的：探究敲减Beclin1 表达对卵巢癌细胞A2780 对顺铂耐药的影响及其相关机制。方法：以Western blotting 及qPCR 检测卵巢癌细胞株A2780 及耐药细胞株A2780/DDP 中Beclin1 的表达情况；A2780/DDP 细胞转染Beclin1 siRNA 后，用MTT法检测细胞对顺铂敏感性的变化，克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成情况，流式细胞术检测各组细胞的凋亡，MDC荧光染色检测细胞的自噬情况，Western blotting 检测自噬相关蛋白、溶酶体相关膜蛋白Lamp-2 以及组织蛋白酶Cathepsin B的表达情况。结果：顺铂耐药细胞株A2780/DDP 中Beclin1 mRNA及蛋白的表达水平均明显高于A2780 细胞株（均P<0.05），在A2780细胞中加入顺铂刺激后Beclin1 蛋白的表达水平显著升高（P<0.05）。敲减Beclin1 表达可促进顺铂诱导的A2780/DDP 细胞的凋亡（P<0.05）、抑制细胞自噬的发生（P<0.05）、减少细胞克隆形成（P<0.05）和增加细胞对顺铂的敏感性（P<0.05）；Western blotting结果显示，敲减Beclin1 可上调A2780/DDP 细胞中cleaved-caspase 3 和Cathepsin B的蛋白水平，下调Atg3、Atg7、LC3Ⅱ/Ⅰ、Lamp-2的表达水平（均P<0.05）。结论：敲减Beclin1 表达可提高A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性，其机制可能与调节自噬相关蛋白表达抑制细胞保护性自噬和影响溶酶体功能，从而促进顺铂诱导耐药细胞凋亡有关。     

高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ、E-cadherin和α-catenin在卵巢上皮肿瘤组织和不同转移能力的卵巢癌细胞中的表达

目的:检测高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)、E-cadherin和α-catenin在不同卵巢上皮肿瘤组织和不同转移能力的卵巢癌细胞中的表达。方法:运用免疫组织化学法检测46例卵巢上皮恶性肿瘤(其中有大网膜或淋巴结转移者27例)、15例卵巢上皮交界性肿瘤及12例卵巢上皮良性肿瘤组织中GMⅡ、E-cadherin和α-catenin的表达情况。体外培养卵巢癌A2780、SKOV-3和HO-8910细胞,分别应用RT-PCR、免疫荧光和蛋白质印迹法检测GMⅡ、E-cadherin和α-catenin mRNA和蛋白的表达情况。结果:在卵巢上皮恶性肿瘤中GMⅡ的阳性表达率(87%)和E-cadherin、α-catenin的异常表达率(80%和72%)明显高于卵巢上皮交界性肿瘤(60%、20%和40%)和卵巢上皮良性肿瘤(42%、0%和17%),且有转移患者肿瘤组织中的阳性表达率和异常表达率明显高于无转移者(P<0.05)。A2780、SKOV-3和HO-8910细胞中GMⅡ荧光表达强度逐渐增强,E-cadherin和α-catenin荧光表达强度逐渐减弱。在A2780、SKOV-3、HO-8910中,GMⅡmRNA和蛋白表达水平逐渐增加,而E-cadherin和α-catenin mRNA及蛋白表达水平则逐渐减弱,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GMⅡ、E-cadherin和α-catenin可能在卵巢癌的恶性进展中发挥重要作用,GMⅡ有望成为卵巢癌预后的标志和治疗靶点。     

Nogo-B促进M2型巨噬细胞极化在卵巢癌细胞增殖、侵袭和血管生成中的作用研究

目的:探究内质网膜蛋白4B（reticulon 4B,Nogo-B）和巨噬细胞M2型极化在卵巢癌增殖、侵袭和血管生成中的作用及其相关机制。方法:收集我院26例卵巢癌患者肿瘤和癌旁组织,通过免疫组化检测Nogo-B蛋白表达。分离肿瘤和癌旁组织巨噬细胞,通过流式细胞术和qRT-PCR检测巨噬细胞CD86、CD206表型比例和Nogo-B表达情况。通过脂质体转染法将si-Nogo-B和si-NC转染至A2780细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞Nogo-B、VEGF表达情况,利用CCK8检测细胞增殖活性。将THP-1细胞分为3组并鉴定其Nogo-B表达水平:si-NC-PMA组、si-NC-PMA/IL4组、si-Nogo-B-PMA/IL4组（分别将si-Nogo-B和si-NC转染至THP-1细胞后,使用PMA或PMA/IL4诱导细胞极化）。将各组巨噬细胞与A2780细胞共孵育,通过CCK8检测A2780细胞增殖变化,通过Transwell实验检测细胞侵袭能力变化,通过qRT-PCR和Western blot检测细胞VEGF表达变化。结果:与癌旁组织相比,卵巢癌患者肿瘤部位Nogo-B表达增加。肿瘤部位巨噬细胞呈M2型极化,其Nogo-B表达明显提高。si-Nogo-B组与si-NC组相比,A2780细胞的VEGF表达水平和增殖能力没有显著性差异。与si-NC-PMA组相比,si-NC-PMA/IL4组巨噬细胞呈M2型极化,Nogo-B表达提高,与其共孵育后的A2780细胞的增殖、侵袭能力增加,VEGF表达水平提高。与si-NC-PMA/IL4组相比,si-Nogo-B-PMA/IL4组M2型巨噬细胞比例减少,Nogo-B表达降低,与其共孵育后的A2780细胞的增殖、侵袭能力减弱,VEGF表达水平减少。结论:Nogo-B通过促进巨噬细胞向M2型极化,可能诱导卵巢癌增殖、侵袭和血管生成。     

真核表达survivin基因对曲古菌素A诱导卵巢癌细胞凋亡作用的影响

目的　探讨survivin 基因对曲古菌素A( TSA) 诱导卵巢癌细胞凋亡作用的影响。方法　(1) 将本实验室已构建成功的survivin 正义全长真核表达质粒(pcDNA 3. 1-urvivin) ,经脂质体包裹转染人卵巢癌细胞A2780 ,以转染pcDNA 3. 1空载体的A2780 细胞为对照。(2) RT2PCR 和Western blot 方法分别检测survivin mRNA 和蛋白质的表达。(3) MTT 比色法和流式细胞仪(FACS) 分别检测TSA 对两组细胞存活率和凋亡率的影响。(4) Western blot 检测TSA 作用下A2780 细胞中survivin 蛋白的表达变化。结果　(1) RT-PCR和Western blot 检测提示转染pcDNA 3. 1-urvivin 组中survivin mRNA 和蛋白质表达明显高于空载体组。(2) MTT 比色法和FACS 检测提示转染pcDNA 3. 1-urvivin 组细胞存活率明显高于空载体组,细胞凋亡率明显低于空载体组,差异有统计学意义( P<0. 05) 。pcDNA 3. 1-urvivin转染后的2780 细胞对TSA 的敏感性明显降低。(3) Western blot 检测提示survivin 的表达水平随着TSA 作用时间的延长而下降。结论　曲古菌素A 诱导卵巢癌细胞的凋亡作用可能与survivin 基因表达有关。     

Long non‐coding RNA RP11‐552M11.4 promotes cells proliferation,migration and invasion by targeting BRCA2 in ovarian cancer

The present study aimed to investigate the effect of long non‐coding RNA (lncRNA) RP11‐552M11.4 on cell proliferation, apoptosis, migration and invasion as well as its targeting genes in epithelial ovarian cancer (EOC) cells. LncRNA RP11‐552M11.4 expression was detected in 67 tumor tissues and paired adjacent tissues obtained from EOC patients. lncRNA RP11‐552M11.4 mimic/inhibitor plasmids were transferred into ovarian cancer cells (SKOV3, A‐2780) and normal ovarian epithelial cells (IOSE80 cells). In addition, rescue experiment was carried out by transferring BRCA2 inhibitor&lncRNA RP11‐552M11.4 inhibitor plasmids into SKOV3 and A‐2780 cells. qPCR, western blot, CKK‐8, Annexin V/propidium iodide (AV/PI), wound‐healing and Matrigel invasion assays were carried out to detect RNA expression, protein expression, cell proliferation, apoptosis, migration, and invasion, respectively. LncRNA RP11‐552M11.4 expression was elevated in tumor tissues compared with paired adjacent tissues and correlated with higher pathological grade, International Federation of Gynecology and Obstetrics stage and worse overall survival in EOC patients. LncRNA RP11‐552M11.4 promoted SKOV3 cell proliferation, migration and invasion whereas it inhibited apoptosis. Rescue experiment and luciferase reporter assay showed that lncRNA RP11‐552M11.4 regulated SKOV3 cells functions through binding BRCA2. Further experiments in A‐2780 cells also validated that lncRNA RP11‐552M11.4 induced A‐2780 cell proliferation while repressing apoptosis by targeting BRCA2. In addition, upregulation of lncRNA RP11‐552M11.4 increased IOSE80 cell proliferation, migration and invasion while decreasing apoptosis. In conclusion, lncRNA RP11‐552M11.4 correlates with worse prognosis, and promotes cell proliferation, migration, invasion, and inhibits cell apoptosis by down‐regulating BRCA2 in EOC.     

浆细胞瘤多样异位基因1 在卵巢癌组织中的表达及其对SKOV3 细胞恶性生物学行为的影响

目的：研究人浆细胞瘤多样异位基因1（plasma-cytoma variant translocation gene 1, PVT1）对卵巢癌SKOV3 细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：选取2015年11 月至2017 年4 月郑州大学第三附属医院妇产科收治的卵巢癌患者32例。利用实时荧光定量PCR检测PVT1 在32例卵巢癌组织及癌旁组织的表达。通过CCK-8法、划痕法及Transwell法检测PVT1 对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果：PVT1在SKOV3细胞和卵巢癌组织表达水平均明显升高（均P<0.01）;PVT1表达水平与卵巢癌者组织学分级、FIGO分期及淋巴结转移具有相关性（P<0.05或P<0.01）。转染PVT1 siRNA36、48 h 后,SKOV3细胞中PVT1 表达水平明显下降（P<0.05）;敲减PVT1的表达能够降低SKOV3细胞的增殖能力（P<0.05）,抑制SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）。结论：PVT1 在卵巢癌中高表达,抑制PVT1表达能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

人上皮性卵巢癌组织中PFTK1的表达及其对细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响

目的:研究PFTAIRE蛋白激酶1（PFTAIRE protein kinase 1,PFTK1）在人上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）组织中的表达,以及PFTK1基因的沉默对人卵巢癌细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响。方法: 随机选取我院2015年6月至2016年11月收治的25例EOC患者为研究对象,采用Western blot检测癌组织以及癌旁组织中PFTK1蛋白的表达情况。选取PFTK1高表达的人卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,转染PFTK1-siRNA后,采用流式细胞仪检测PFTK1基因的沉默对SKOV3细胞周期的影响,采用细胞迁移和侵袭实验（Transwell）检测SKOV3细胞迁移、侵袭能力的变化,采用平板克隆形成实验检测SKOV3细胞增殖能力的变化。结果:Western blot检测结果显示,EOC患者癌组织中的PFTK1蛋白表达量显著高于癌旁组织（P＜0.01）;流式细胞仪检测结果显示,PFTK1-siRNA组细胞出现明显的生长抑制,细胞多停滞在G0/G1期,与对照组相比差异显著（P＜0.01）;细胞迁移和侵袭实验（Transwell）结果显示,PFTK1-siRNA组细胞的迁移和侵袭能力与对照组比较显著下降,且差异均显著（P＜0.01）;平板克隆形成实验结果显示,PFTK1-siRNA组细胞增殖能力显著降低,与对照组相比差异显著（P＜0.01）。结论:PFTK1在人EOC癌组织中呈现高表达状态;PFTK1基因沉默后,EOC细胞株SKOV3的细胞迁移、侵袭及增殖能力均受到不同程度的抑制,这将为基因治疗人卵巢癌提供一定的理论依据。     

C17orf76-AS1在卵巢上皮癌中的表达及其对卵巢上皮癌细胞SKOV3生物学功能的影响

目的 检测C17orf76-AS1在正常卵巢上皮细胞与卵巢上皮癌细胞系中的表达情况并探讨C17orf76-AS1过表达对卵巢上皮癌细胞系SKOV3生物学功能的影响。方法 通过定量PCR（QPCR）方法检测C17orf76-AS1在在卵巢上皮细胞IOSE80及不同卵巢上皮癌细胞系（A2780、SKOV3、OVCAR3、HO-8910和HO-8910PM）中的表达。在pcDNA3.1基础上构建C17orf76-AS1过表达质粒并采用Lipo2000瞬时转染SKOV3细胞,QPCR检测SKOV3细胞中C17orf76-AS1的过表达效率;CCK-8实验检测C17orf76-AS1过表达对SKOV3细胞增殖的影响;Transwell法和划痕实验检测C17orf76-AS1过表达对SKOV3细胞侵袭迁移能力的影响。结果 与正常卵巢上皮细胞IOSE80比较,C17orf76-AS1在A2780、SKOV3、 OVCAR3、HO-8910及HO-8910PM细胞中均呈低表达,分别下降了0.36、0.30、0.46、0.32、0.31倍（P＜0.05）。在SKOV3细胞中过表达C17orf76-AS1,CCK-8结果显示C17orf76-AS1过表达48 h后,SKOV3的增殖能力显著下降了约1.5倍;Transwell结果显示SKOV3细胞迁移能力下降约1.3倍,划痕实验也同样证实过表达C17orf76-AS1后,SKOV3细胞愈合能力显著低于对照组（P＜0.05）。结论 C17orf76-AS1在卵巢上皮癌细胞中异常低表达,其过表达显著降低了卵巢癌细胞增殖和迁移能力。     

Sphingosine kinase 1 as a potential therapeutic target in epithelial ovarian cancer

Sphingosine kinase 1 (SK1) is over‐expressed in multiple types of human cancer. SK1 has growth‐promoting effects and has been proposed as a potential therapeutic target. We investigated the therapeutic effects of SK1 inhibition in epithelial ovarian carcinoma (EOC). SK1 siRNA or inhibitors were tested in EOC cell lines, including A2780, SKOV3ip1, A2780‐CP20, SKOV3‐TR, ES2 and RMG2. Cells were treated with SK inhibitor or FTY720, and cell proliferation, apoptosis, angiogenesis and invasion were examined by MTT, FACS, ELISA and wound‐healing assays, respectively. In vivo experiments were performed to test the effects of FTY720 on tumor growth in orthotopic mouse xenografts of EOC cell lines A2780 or SKOV3ip1 and a patient‐derived xenograft (PDX) model of clear cell ovarian carcinoma (CCC). Blocking SK1 with siRNA or inhibitors significantly reduced proliferation, angiogenesis and invasion, and increased apoptosis in chemosensitive (A2780 and SKOV3ip1) and chemoresistant (A2780‐CP20, SKOV3‐TR, ES2 and RMG2) EOC cells. SK1 inhibitors also decreased the intracellular enzymatic activity of SK1. Furthermore, FTY720 treatment significantly decreased the in vivo tumor weight in xenograft models of established cell lines (A2780 and SKOV3ip1) and a PDX model for CCC compared to control (p < 0.05). These results support therapeutic targeting of SK1 as a potential new strategy for EOC.     

微小RNA?148a靶向调控S1PR1及对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-148a(miR-148a)靶向调控鞘氨醇-1-磷酸受体1(S1PR1)及对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测32例上皮性卵巢癌组织和25例正常卵巢组织及卵巢上皮细胞IOSE80和卵巢上皮癌细胞(A2780、SKOV3、OVCAR3和HO-8910)的miR-148a水平,Kaplan-Meier plotter在线生存分析miR-148a水平与485例卵巢癌预后的关系;采用脂质体向SKOV3细胞进行转染,根据转染物分为过表达组(转染miR-148a模拟物)、阴性对照(NC)组(转染无关序列)和对照组(未转染),采用QPCR检测miR-148a、S1PR1及凋亡相关因子Bcl-2、Bax和caspase-3的水平,荧光素酶报告基因系统验证两者的靶向关系,活细胞计数(CCK)-8法、AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术和caspase-3比色分析法检测增殖活力、凋亡率和caspase-3活性。结果QPCR结果显示与正常卵巢组织相比,卵巢癌组织的miR-148a水平降低(P<0.05);卵巢癌细胞的miR-148a水平均低于IOSE80细胞(P<0.05),尤其是SKOV3细胞的最低。Kaplan-Meier Plotter在线分析显示337例高水平者的中位总生存期为49.43个月,优于148例低水平者的38.53个月(P<0.05)。与对照组和NC组相比,过表达组的miR-148a水平升高,而S1PR1水平降低(P<0.05);S1PR1野生型质粒和miR-148a模拟物共转染细胞的荧光素酶活性较其他共转染组合降低(P<0.05)。与对照组和NC组相比,过表达组的增殖活力和Bcl-2水平降低,而凋亡率和caspase-3活性以及Bax和caspase-3水平均升高(P<0.05)。结论miR-148a在卵巢癌组织和细胞中表达下调且发挥抑癌作用,可能通过靶向S1PR1来抑制SKOV3细胞的增殖并诱导凋亡,在卵巢癌防治中有一定应用前景。     

LncRNA ITGA9-AS1在卵巢癌中的表达及与顺铂化疗敏感性的关系

目的:观察长链非编码RNA（LncRNA） ITGA9-AS1在卵巢癌中的表达水平,探究其与顺铂化疗敏感性的关系。方法:选取2017年01月至2019年01月本院收治的64例卵巢癌患者,卵巢摘除手术中采集卵巢癌组织,另收集因卵巢囊肿需作手术切除但已证实无瘤细胞的正常卵巢组织标本,采用实时定量PCR（RT-qPCR）检测卵巢癌及正常卵巢组织、顺铂（DDP）耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP、卵巢癌细胞（OVCAR5、OVCAR8、SKOV3）及永生化卵巢上皮细胞（IOSE29、IOSE80）中LncRNA ITGA9-AS1表达水平。采用慢病毒介导LncRNA ITGA9-AS1转染并筛选稳定细胞株,MTT法检测过表达LncRNA ITGA9-AS1对SKOV3、SKOV3/DDP增殖的影响及对不同浓度（0、1、2、4、8、16 mg/L）DDP的敏感性。结果:与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织中LncRNA ITGA9-AS1表达水平降低（P＜0.05）。与IOSE29、IOSE80细胞比较,OVCAR5、OVCAR8、SKOV3及SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平显著降低（P＜0.05）;与SKOV3细胞比较,SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平显著降低（P＜0.05）。与空白对照组及慢病毒对照组比较,慢病毒过表达组SKOV3、SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平升高（P＜0.05）,增殖率降低（P＜0.05）,细胞存活率呈DDP浓度依赖降低（P＜0.05）。结论:LncRNA ITGA9-AS1在卵巢癌组织及癌细胞中低表达,过表达LncRNA ITGA9-AS1可增加卵巢癌SKOV3及卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP的顺铂化疗敏感性。     

颗粒蛋白前体在离体上皮性卵巢癌细胞恶性行为中的作用及意义

目的 研究颗粒蛋白前体(PGRN)在离体上皮性卵巢癌恶性行为中的作用及意义.方法 选择40例上皮性卵巢癌患者和40例卵巢良性肿瘤患者,采用免疫组织化学染色法比较肿瘤组织中PGRN的表达情况.采用慢病毒转染SKOV3细胞系,获得PGRN高表达(PGRN高表达组)和普通表达(对照组)的细胞系,传代培养比较两组细胞的增殖能力,通过Transwell小室建立转移和侵袭模型,比较两组细胞的侵袭和转移能力.结果 上皮性卵巢癌患者的PGRN免疫组化染色评分为(8.43±1.30)分,明显高于卵巢良性肿瘤患者的(3.08±1.25)分,差异有统计学意义(P﹤0.01);对照组和PGRN高表达组的细胞数量均随时间延长而明显增多(P﹤0.01),PGRN高表达组的细胞数量多于对照组(P﹤0.05).PGRN高表达组转移细胞数目为(170.73±8.13)/HP,明显多于对照组的(102.93±8.54)/HP(P﹤0.01);PGRN高表达组侵袭细胞数目为(109.33±7.37)/HP,明显多于对照组的(53.27±5.35)/HP(P﹤0.01).结论 PGRN在上皮性卵巢癌组织中高表达,并且可以促进癌细胞增殖、侵袭和转移等恶性行为.