维生素D调节肠道炎症反应的研究进展

维生素D通过与维生素D受体结合发挥多种生物学功能。维生素D在肠道炎症中有重要作用。它通过调节肠道屏障的紧密连接和抑制上皮细胞凋亡来保持肠道黏膜屏障的结构完整和正常功能,通过核苷酸结合寡聚化结构域2/核因子κB途径、激活Toll样受体上调抗菌肽的表达和保持自噬功能。另外,它抑制Th1细胞介导的免疫应答,促进Th2细胞产生抑制肠道炎症的细胞因子,并且调节肠道菌群,通过保护肠道生态平衡抑制肠道炎症。因此,对维生素D及其受体调节肠道炎症机制的进一步研究,将为临床上治疗肠道炎症提供新思路。     

过敏性紫癜患儿外周血VDBP VDR表达水平与Th17/Treg相关性研究

目的 探讨维生素D结合蛋白(VDBP)、维生素D受体(VDR)在过敏性紫癜(HSP)患儿外周血中的水平变化及与Th17/Treg平衡的关系。方法 选取2019年12月至2020年12月南京医科大学附属儿童医院就诊并确诊的55例HSP患儿为HSP组，并以同期50例健康体检儿童为对照组。采用定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测外周血中VDR mRNA水平，酶联免疫法检测VDBP水平，蛋白印迹法检测VDR蛋白的表达；流式细胞术检测Th17和Treg细胞比例；Pearson法分析VDBP与VDR表达的相关性以及二者与Th17/Treg的相关性；受试者工作特征曲线(ROC)评价血清VDBP和VDR水平对HSP发生的诊断价值。结果 与对照组比较，HSP组患儿外周血中VDBP表达水平明显下调，VDR表达水平上调，差异均有统计学意义(P<0.05);HSP组患儿Th17、Th17/Treg均高于对照组，Treg均低于对照组(P<0.05);VDBP与Treg呈正相关(r=0.358,P<0.05),与Th17、Th17/Treg呈负相关(r=-0.436、-0.606,P...     

维生素D受体及维生素D受体激动剂的研究进展

维生素D受体为亲核蛋白,属于类固醇激素/甲状腺激素受体超家族成员,在体内主要介导维生素D的细胞作用.维生素D的主要代谢产物——活性维生素D3在体内作用广泛,与维生素D受体结合后,不仅发挥经典的钙磷调节作用,还具有调节细胞增殖、调节免疫及抑制细胞坏死、诱导肿瘤细胞分化、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤浸润和转移等非钙调作用.文章就维生素D受体的生物学特征、信号转导通路和活性维生素D3及其衍生物——维生素D受体激动剂的有关研究进展做一综述.     

活性维生素D_3及其受体对糖尿病肾病的影响

半个多世纪以来,活性维生素D3,即1,25-二羟维生素D3[1-25(OH)2D3]在糖尿病相关治疗研究中成为热点。由于1-25(OH)2D3及其特异性受体在糖尿病肾病中有一定抑制肾脏纤维化作用而备受关注。其可能通过参与抑制肾素-血管紧张素系统激活、减少纤维化因子释放及氧化应激等过程发挥作用,目前机制尚未完全明确。该文针对1-25(OH)2D3及其受体在肾脏中的表达及其相互作用进行阐述,以期为糖尿病的预防和诊治带来新的契机。     

VDR基因敲除鼠一氧化氮合酶和内皮素-1基因的表达

目的探讨维生素D受体(VDR)基因敲除鼠血压变化以及与血压水平密切相关的内皮型一氧化氮合酶、内皮素-1基因在主动脉的表达情况,了解维生素D、维生素D受体与血压的联系及可能机制。方法小鼠血压采用动脉血管插管法直接测定,主动脉内皮型一氧化氮合酶、内皮素-1基因表达采用实时定量聚合酶链式反应检测。结果内皮型一氧化氮合酶、内皮素-1基因均能在野生型正常鼠及维生素D受体基因敲除鼠主动脉表达。与野生型正常鼠比较,纯合子维生素D受体基因敲除鼠收缩压、舒张压明显升高,主动脉内皮型一氧化氮合酶基因表达明显下调,内皮素-1基因表达明显上调(P均<0.05),杂合子维生素D受体基因敲除鼠收缩压、舒张压及主动脉内皮型一氧化氮合酶、内皮素-1基因表达则无明显改变(P均>0.05)。相关性研究发现主动脉内皮型一氧化氮合酶基因表达水平与收缩压、舒张压水平呈负相关,与收缩压、舒张压水平呈正相关(P均<0.05)。结论纯合子维生素D受体基因敲除鼠存在与血压密切相关的主动脉内皮型一氧化氮合酶、内皮素-1基因表达水平明显异常。     

维生素D及其受体对3T3-L1前脂肪细胞分化影响的分子机制

前脂肪细胞增殖、分化过度是肥胖的一个重要病理机制。早在20多年前就已发现维生素D可以抑制3T3-L1前脂肪细胞系分化成熟,相关的分子机制近几年有了新的进展。3T3-L1分化是一个受多种基因蛋白调节的具有严格时序性的过程,现已证实维生素D与其受体结合后作用于3T3-L1分化早期的分子事件,如减少PPARγ配体形成,减少CCAAT/增强子结合蛋白βmRNA的表达,抑制C/EBPβ的转录活性,同时也作用于晚期分子事件,如抑制C/EBPα和PPARγ的mRNA表达等,通过影响这些重要分子发挥其抑制作用。     

维生素D受体mRNA及其蛋白在不同体质指数人群皮下和大网膜脂肪组织中的表达差异

目的:观察正常?超重和肥胖3组人群皮下和大网膜脂肪组织中维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)mRNA及其蛋白表达水平的差异?方法:用半定量RT-PCR方法检测20例正常组?35例超重组?27例肥胖组人群的腹部皮下和大网膜脂肪组织VDR基因的mRNA表达水平;用Western blot方法检测VDR的蛋白表达水平?结果:在皮下脂肪组织中,肥胖组VDR mRNA和蛋白表达水平明显低于正常组和超重组(P < 0.05);在大网膜脂肪组织中,超重组VDR mRNA及其蛋白表达增高(P < 0.05),肥胖组VDR mRNA及其蛋白表达与超重组相比降低(P < 0.05)?结论:肥胖患者脂肪组织中VDR表达水平降低,可能是临床上补充维生素D干预肥胖达不到预期效果的机制之一?     

维生素D在子宫内膜癌中的研究进展

骨化三醇是人体必需维生素,是维生素D在人体内的活化形式,不仅具有调节钙磷代谢等多种生理功能,还具有诱导细胞分化、抑制细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡以及免疫调节作用。骨化三醇的抗肿瘤作用主要通过维生素D受体的基因组机制而发挥,在子宫内膜癌中已检测到维生素D受体的存在。现对维生素D的作用机制与子宫内膜癌的相关性研究予以综述。     

维生素D受体对低氧下结肠细胞屏障蛋白的作用

目的 探究低氧环境对结肠细胞DLD-1屏障蛋白影响及补偿机制。方法 将DLD-1分别给予低氧(l% O₂)、维生素D(100 nmol/L)及低氧联合维生素D处理48 h。Western blot法检测各组细胞中紧密连接蛋白封闭小带-1(ZO-1)、闭锁蛋白、Claudin-1和上皮细胞钙黏蛋白及维生素D受体(VDR)的表达情况。采用慢病毒包装的方法建立DLD-1的VDR稳转敲降细胞系及对照,给予低氧处理后,检测上述蛋白的表达情况。结果 与对照组相比,DLD-1低氧处理48 h后紧密连接结构蛋白闭锁蛋白、Claudin-1及VDR表达均增加(P均<0.001),低氧+维生素D联合处理组较单独维生素D处理组除闭锁蛋白、Claudin-1及VDR表达增加外,ZO-1及上皮细胞钙黏蛋白表达也明显增加(P均<0.001)。VDR敲降细胞系低氧处理后,ZO-1(P<0.001)、闭锁蛋白(P<0.05)、Claudin-1(P<0.01)及上皮细胞钙黏蛋白(P<0.001)表达均显著降低。结论 VDR对于低氧状态下结肠细胞系DLD-1肠上皮屏障蛋白表达有调节作用,提示VDR通路可能为低氧环境下保护肠黏膜屏障的另一重要机制。     

沉默热休克蛋白27基因增强大肠癌细胞对5-FU化疗敏感性

目的:探讨不同大肠癌细胞热休克蛋白(HSP27)蛋白表达水平及其与5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的关系,同时通过RNA干扰抑制HSP27基因的表达,初步探讨沉默该基因对5-FU抗肿瘤作用的影响。方法:Western blot法检测各大肠癌细胞中HSP27蛋白的表达水平,CCK-8法测定不同浓度5-FU对各细胞株的抑制率,分析各组细胞HSP27蛋白表达水平与IC50的关系。设计合成3对针对不同靶点的HSP27小干扰RNA,通过脂质体转染SW480细胞,激光共聚焦显微镜观察转染效率,Real-time PCR及Western blot法检测转染后HSP27 m RNA及蛋白表达水平。CCK-8法检测HSP27-si RNA对细胞的生长抑制作用及沉默HSP27基因细胞对5-FU化疗敏感性的变化。结果:各组细胞中HSP27的表达水平与5-FU的敏感性呈负相关性。Real-time PCR及Western blot法结果显示有两对靶向HSP27-si RNA能有效抑制HSP27 m RNA及蛋白水平的表达;CCK-8法检测结果显示HSP27-si RNA转染可增强SW480细胞对5-FU的敏感性,半数抑制浓度(IC50)明显下调。HSP27在大肠癌细胞中的表达水平与5-FU化疗药IC50值呈正相关。结论:靶向HSP27的si RNA能有效抑制大肠癌SW480细胞HSP27蛋白的表达,增强5-FU化疗药物的敏感性。     

25羟维生素D3对支气管上皮细胞维生素D受体表达及分布的影响

目的探讨25羟维生素D3对人正常气道上皮维生素D受体表达及分布的影响。方法选取正常人支气管上皮细胞系16HBE为研究对象,MTT法分别检测不同浓度25羟维生素D3对细胞活力的影响;实验组分为对照组和不同浓度25羟维生素D3处理组。各处理因素作用细胞时间为24 h。用实时荧光定量PCR、Western blot、免疫荧光法观测各处理组维生素D受体(VDR)mRNA及蛋白表达、分布的情况。结果与对照组相比,各个不同处理浓度的25羟维生素D3对VDR的表达量及分布均无显著增加(P>0.05)。结论 25羟维生素D3对支气管上皮细胞的影响可能并不依赖于VDR的表达及转位。     

利用载体介导的RNA干扰技术抑制人骨肉瘤细胞HOS-8603内维生素D3受体的表达及功能

目的:构建由载体介导的抑制人维生素D3受体(VDR)表达的RNA干扰载体,并在人骨肉瘤细胞中初步研究其对VDR表达及功能的影响.方法:通过在线筛选设计了两段针对人VDR的RNAi序列,并与载体pSilencer-2.1-U6连接,获得了表达载体pSilencer-2.1-U6-VDR1与pSilencer-2.1-U6-VDR2.利用脂质体转染法分别转入人骨肉瘤细胞系HOS-8603细胞中,通过Western 印迹法检测其对内源性VDR蛋白表达、对1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]激活PKC作用的影响,利用细胞计数和MTT的方法检测其对1,25(OH)2D3抑制HOS-8603细胞增殖作用的影响.结果:在分别转染pSilencer-2.1-U6-VDR1/2的HOS-8603细胞中,与对照细胞比较,内源性VDR蛋白的表达、1,25(OH)2D3对细胞的增殖抑制作用以及1,25(OH)2D3快速诱导PKC磷酸化的作用均有显著降低.结论:构建的表达载体pSilencer 2.1-U6-VDR1与pSilencer 2.1-U6-VDR2均能在细胞水平显著抑制内源性VDR基因的表达,并能有效阻断一些由VDR介导的1,25(OH)2D3生物学作用,为进一步研究VDR与维生素D3的功能提供了一个有用工具.     

维生素D受体FokⅠ多态性对牙周组织细胞CYP24A1表达的影响

目的：维生素D受体（vitamin D receptor,VDR）基因的第二外显子存在唯一一个可以影响VDR蛋白结构的多态性位点,其可以由限制性核酸内切酶FokⅠ所识别,分为FF、Ff和ff三型。CYP24A1是维生素D 24羟化酶的编码基因,是常见的维生素D效应基因。本研究将探讨人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts,hGF）和牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,hPDLC）中VDR FokⅠ多态性对CYP24A1表达的影响。方法：原代培养12名供体的hGF和hPDLC,提取基因组DNA,PCR扩增包含多态性位点的267 bp的片段。根据FokⅠ对片段酶切的结果判断VDR-FokⅠ基因型。确定基因型后,给各基因型hGF和hPDLC以10 nmol/L 1α,25双羟维生素D3（1,25OH2D3）或1 000 nmol/L 25羟维生素D3（25OHD3）刺激48 h,提取RNA,其中10 nmol/L 1,25OH2D3刺激48 h后还提取蛋白。之后给予hGF和hPDLC VDR拮抗剂ZK159222,再以10 nmol/L 1,25OH2D3或1 000 nmol/L 25OHD3刺激48 h,提取RNA。应用Real-time PCR和Western blot的方法检测维生素D24羟化酶CYP24A1和VDR的mRNA和蛋白的表达水平。结果：12名供体中,FF、ff和Ff型分别为4例、3例和5例。1,25OH2D3刺激hGF和hPDLC后,FF型细胞CYP24A1的mRNA表达水平显著高于Ff型或ff型细胞（hGF：F=31.147,P＜0.01;hPDLC：F=23.347,P＜0.01）;FF型细胞CYP24A1的蛋白表达水平同样显著高于Ff型或ff型细胞（hGF：F=12.368,P＜0.01;hPDLC：F=15.749,P＜0.01）。25OHD3刺激hGF和hPDLC后,FF型细胞CYP24A1的mRNA表达水平也显著高于Ff型或ff型细胞（hGF：F=32.061,P＜0.01;hPDLC：F=32.569,P＜0.01）。如1,25OH2D3刺激伴有ZK159222,则三型细胞CYP24A1的mRNA表达水平差异无统计学意义（hGF：F=0.246,P=0.787;hPDLC：F=0.574,P=0.583）。如25OHD3刺激伴有ZK159222,则三型细胞CYP24A1的mRNA表达水平差异也无统计学意义（hGF：F=1.636,P=0.248;hPDLC：F=0.582,P=0.578）。不同刺激条件下,hGF和hPDLC两种细胞比较CYP24A1或VDR的表达水平,差异均无统计学意义。结论：在hGF和hPDLC中,FF型VDR可介导比其他基因型VDR更为显著的CYP24A1上调,提示FF型VDR可能具有更强的转录活性。     

维生素D及维生素D受体的研究进展

维生素D受体（VDR）是亲核蛋白,属于类固醇激素／甲状腺激素受体超家族成员,在体内主要介导维生素D的细胞作用。维生素D的主要活性代谢产物1,25．二羟胆骨化醇在体内作用广泛,与VDR结合后,除了产生经典的调节钙、磷代谢的作用外,还具有抑制增殖、促进分化、调节免疫及抑制细胞坏死、抑制肿瘤的浸润和转移等非钙调作用。近年来,活性维生隶D及其衍生物的抗肿瘤作用备受注目,广泛应用于临床前抗肿瘤研究,有可能成为防治肿瘤的很有前景的药物。     

25羟维生素D3对支气管上皮细胞维生素D受体表达及分布的影响

摘要：目的探讨25 羟维生素D3对人正常气道上皮维生素D受体表达及分布的影响。方法选取正常人支气管上皮细胞系
16HBE为研究对象,MTT法分别检测不同浓度25羟维生素D3对细胞活力的影响;实验组分为对照组和不同浓度25羟维生素D3
处理组。各处理因素作用细胞时间为24 h。用实时荧光定量PCR、Western blot、免疫荧光法观测各处理组维生素D受体（VDR）
mRNA及蛋白表达、分布的情况。结果与对照组相比,各个不同处理浓度的25羟维生素D3对VDR的表达量及分布均无显著
增加（P>0.05）。结论25羟维生素D3对支气管上皮细胞的影响可能并不依赖于VDR的表达及转位。
     

孕鼠维生素D缺乏对子鼠长骨维生素D受体蛋白表达的影响

目的:研究大鼠孕期维生素D(VitD)缺乏对其子鼠长骨中维生索D受体(VDR)蛋白表达的影响.方法:成熟雌性SD大鼠36只随机分为模型组和对照组各18只,模型组以不含VitD的大鼠饲料避光喂养,对照组以标准饲料正常光照喂养.2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕20天(E20d)、生后1天(B1d)和生后7天(B7d)子鼠左侧股骨.用Western blotting方法检测子鼠股骨VDR蛋白水平的表达.结果:VDR蛋白在E20d、B1d和B7d子鼠股骨的表达量,模型组均显著低于对照组(P均<0.05).结论:孕鼠VitD缺乏可下调子鼠长骨VDR蛋白表达水平,可能为子鼠骨骼发育不良机制之一.     

原发性肝癌患者维生素D受体的表达和意义

目的:通过检测原发性肝癌患者维生素D受体(VDR)蛋白的表达,探讨原发性肝癌VDR的表达和意义.方法:采用蛋白免疫印迹法检测105例原发性肝癌患者和100例健康体检者外周血单个核细胞VDR蛋白的表达情况.结果:原发性肝癌患者VDR蛋白的表达水平明显低于健康体检者(P＜0.05).原发性肝癌患者VDR蛋白表达与性别、年龄、AFP、肿瘤直径无关(P＞0.05);与肝功能Child-Pugh分级有关,A级、B级患者VDR蛋白的表达水平明显高于C级患者(P＜0.05).结论:VDR蛋白低表达可能是原发性肝癌的不利因素.     

维生素D及其受体在妇科肿瘤中的研究进展

维生素D受体(VDR)是介导1,25二羟维生素D3发挥生物效应的核内生物大分子,为类固醇激素/甲状腺受体超家族成员。1,25二羟维生素D3是维生素D的活性形式,它除了具有钙、磷代谢调节作用外,还能调节正常组织和肿瘤细胞的生长和分化。VDR基因上存在多个多态性位点,与部分肿瘤的发生发展密切相关。本文主要综述VDR的结构及其功能、基因多态性,维生素D的细胞作用机制及与妇科肿瘤的相关性研究。     

维生素D对老龄大鼠超负荷诱导的骨骼肌肥大及维生素D受体表达的影响

目的 采用腓肠肌远端腱切术方案建立老龄大鼠骨骼肌肥大模型,探讨维生素D补充对老龄大鼠骨骼肌肥大的影响及可能机制。方法 雄性大鼠（24个月龄）20只,手术切断左后肢单侧腓肠肌远端肌腱造成超负荷骨骼肌肥大模型（Overload,Ovld侧）,另一侧行假手术（Sham侧）。造模完成后将大鼠随机分为对照组和维生素D组,维生素D组每天灌胃1 000 IU/kg的维生素D,对照组灌胃等量大豆油（溶剂）,干预1周后处死。无菌条件下取腹主动脉血待检;取左、右后肢跖肌称量,并液氮速冻,置低温冰箱保存待测。采用ELISA法检测血清25（OH）D含量和骨骼肌中维生素D受体（VDR）的含量;采用蛋白质印迹法检测mTOR、rpS6蛋白及其磷酸化水平的表达。结果 在实验期间,2组大鼠摄食量和体质量差异无统计学意义。2组大鼠 Ovld侧跖肌质量均较Sham侧增加（P<0.05）,且维生素D Ovld侧跖肌的质量高于对照组（P<0.05）,而2组Sham侧跖肌质量差异无统计学意义。ELISA结果显示,补充维生素D提高了大鼠血清25（OH）D水平（与对照组比较P<0.05）,促进了Ovld侧肌组织VDR的表达（与Sham侧比较,P<0.05）,而对照组Ovld侧肌组织VDR的表达与Sham侧比较差异无统计学意义。蛋白质印迹结果显示,2组Ovld侧肌组织中p-mTOR/mTOR、p-rpS6/rpS6比值均比Sham侧增加,但仅在维生素D组差异有统计学意义（P<0.05）。结论 腓肠肌远端腱切术能够有效促进老龄大鼠骨骼肌肥大,而维生素D补充能进一步促进骨骼肌肥大,其机制可能与维生素D促进老龄大鼠骨骼肌中VDR的表达和蛋白质合成相关信号蛋白mTOR、rpS6的表达有关。