整合素在成年中枢神经系统中的分布和作用

整合素在成年ＣＮＳ中,主要分布在血管结构,神经纤维网,海马等部位,α４β１等在介导外周白细胞穿过血脑屏障中的作用β１等增强星形胶质瘤细胞与ＥＣＭ分子的粘附,αｖβ３等促进恶性胶质瘤细胞入侵正常脑组织。此外,整合素还与阿耳茨海默氏病的发生,脑的衰老和ＣＮＳ生理可塑性可形成等过程密切相关,本文尚提及其配体ＥＣＭ分子,如生腱蛋白,层粘连蛋白等的表达水平与ＣＮＳ损伤呈正相关。     

整合素在成年中枢神经系统中的分布和作用

整合素在成年ＣＮＳ中，主要分布在血管结构、神经纤维网、海马等部位，α４β１ 等在介导外周白细胞穿过血脑屏障中起作用，β１ 等增强星形胶质瘤细胞与ＥＣＭ分子的粘附，αＶβ３ 等促进恶性胶质瘤细胞入侵正常脑组织。此外，整合素还与阿耳茨海默氏病的发生、脑的衰老和ＣＮＳ生理可塑性形成等过程密切相关。本文尚提及其配体ＥＣＭ分子，如生腱蛋白、层粘连蛋白等的表达水平与ＣＮＳ损伤呈正相关。     

去甲二氢愈创木酸对胶质瘤细胞诱导的内皮细胞迁移的影响

目的 观察去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）对胶质瘤细胞诱导的内皮细胞迁移的影响。方法 采用微孔滤膜培养小室及室细胞联合培养法,进行人脐静脉内皮细胞系ＥＣＶ－３０４细胞与人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４细胞的联合培养,并以免疫组化ＳＰ方法检测ＳＨＧ－４４细胞血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的表达。结果 １００μｍｏｌ／Ｌ的ＮＤＧＡ作用１～３ｄ后,ＳＨＧ－４４细胞ＶＥＧＦ、ｂ     

去甲二氢愈创木酸对胶质瘤诱导的血管内皮细胞成型的作用

目的 观察去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）对胶质瘤细胞诱导的内皮细胞成型的影响并初步探讨其机理。方法 采用在Ｉ型胶原凝胶上的细胞立体培养和内皮－胶质瘤细胞的联合培养法,观测人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４细胞或其条件培养基对人脐静脉内皮细胞ＥＣＶ－３０４细胞形成管腔样结构的影响,同时以免疫组织化学结合图像分析的方法检测ＳＨＧ－４４细胞ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ蛋白的表达。结果 １００μｍｏｌ／Ｌ的ＮＤＧＡ作用１     

抗胶质瘤免疫放疗制剂35S标记单抗SZ39细胞毒效应

目的证实新制备的纯β射线免疫放疗制剂３５Ｓ－ＭｃＡｂＳＺ３９对胶质瘤的特异性杀伤作用。方法采用ＭＴＴ法，以人脑胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４为靶细胞，检测３５Ｓ－ＭｃＡｂＳＺ３９及其对照组３５Ｓ－ｎＩｇＧ；３５Ｓ＋ＭｃＡｂＳＺ３９；３５Ｓ持续作用组的细胞杀伤率，求取５０％细胞抑制浓度。结果３５Ｓ－ＭｃＡｂＳＺ３９的细胞杀伤力与３５Ｓ持续作用相近，较３５Ｓ－ｎＩｇＧ强４．２倍，较３５Ｓ＋ＭｃＡｂＳＺ３９强４．０倍（Ｐ＜０．０５）。结论３５Ｓ－ＭｃＡｂＳＺ３９具有高效的靶选择性细胞毒效应，作为一种免疫放疗制剂具有良好的应用前景。     

SEPT7基因抑制人胶质瘤细胞系U251MG侵袭的研究

目的 研究SEPT7基因对人胶质瘤细胞系U251MG侵袭的抑制作用及其可能的分子机制.方法 以腺病毒为载体转导SEPT7(rAd5-SEFF7)入U251人脑胶质瘤细胞系;Transwell法和3-D Matrigel法观察U251胶质瘤细胞侵袭能力的变化,划痕实验和2-D Matrigel法观察细胞迁移能力的变化.应用蛋白印记检测MMP2,MMP9,MT1-MMP,TIMP1和TIMP2的表达变化,蛋白印记和免疫荧光检测整合素αvβ3的表达,以及应用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白tubulin-α结构的变化.结果 转染SEPT7后U251MG细胞的侵袭和迁移能力明显受到抑制、细胞MMP2、MMP9、MT1-MMP和整合素αvβ3的表达下调、TIMP1和TIMP2的表达则上调;肿瘤细胞的微管蛋白tubulin-α结构出现了重新分布,发生了扭曲及聚集现象,接近于正常的非肿瘤细胞的tubulin-α结构.结论 SEPT7基因可以抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力,其分子机制可能通过逆转MMPs/TIMPs的失衡状态,降低整合素αvβ3的表达,以及改变细胞骨架tubulin-α的结构而实现的.SEPT7可作为基因治疗胶质瘤的重要候选基因.     

雷公藤红素对人肥大细胞系粘附能力和粘附分子表达的影响

雷公藤红素是雷公藤单体之一.本文研究雷公藤红素对人肥大细胞系HMC-1细胞粘附及粘附分子表达的影响.结果发现:HMC-1细胞能自发地表达β1、β3型整合素和CD44,不表达β2型整合素,具有迅速粘附于鼠尾胶的能力,在粘附过程中细胞由圆形、椭圆形变成梭形、多极形.雷公藤红素与HMC-1细胞在粘附前或粘附后共育均能以剂量和时间依赖方式抑制粘附和粘附过程中细胞形态的变化,并可下调粘附分子的表达.提示:雷公藤红素能抑制HMC-1细胞的粘附,这一作用与其抑制粘附分子表达和细胞形态的改变有关.     

去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44生长和分化的影响

目的探讨去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）对胶质瘤生长和分化的作用及可能机理。方法分别将ＮＤＧＡ加入培养基中和进行单细胞胞浆内显微注射ＮＤＧＡ，观察它对人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４细胞生长、形态、细胞周期和免疫组化特性的影响。结果经ＮＤＧＡ处理的瘤细胞贴壁率和生长速率受抑制，增殖活性降低，细胞周期也有明显改变；细胞异型性变小，胞浆中胶质细丝增多，且其中ＧＦＡＰ标记增加而ｖｉｍｅｎｔｉｎ标记减少；ｐ５３蛋白和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）表达也降低。单细胞胞浆内注射ＮＤＧＡ（约１．５×１０－１１ｇ／细胞）后上述作用更显著，且作用迅速而持久。结论ＮＤＧＡ对恶性胶质瘤细胞具有抑制生长和诱导分化作用；对血管生成因子表达亦有抑制作用。     

ICA和PJA对高转移性人肺癌细胞体外侵袭转移能力抑制的研究

目的：将新型抗癌药物淫羊藿甙（ＩＣＡ）和济南假单胞菌制剂（ＰＪＡ）作用于ＰＧ细胞,从肿瘤转移抑制的多个方面和环节探讨ＰＪＡ、ＩＣＡ抗转移作用的机制。方法：采用粘附实验、运动侵袭实验、逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）、细胞免疫组化等多种方法进行了检测。结果：ＰＪＡ、ＩＣＡ可降低ＰＧ细胞对胞外基质的粘附性及侵袭、运动能力,减少ＰＧ细胞表面粘附分子ＣＤ４４Ｖ６、ＬＮ－Ｒ及胞浆内ＣＫ１８的表达,同时细胞内ｃ－ｍｙｃ、Ｔｉａｍ－１基因ｍＲＡＮ水平均有不同程度的降低,而Ｎｍ２３－Ｈ１ ｍＲＮＡ水平有不同程度的升高,且两药有明显的协同作用。结论：ＰＪＡ、ＩＣＡ通过对肿瘤转移多个步骤的抑制而发挥抗转移作用。     

人脑胶质母细胞瘤细胞系SHG-44中血管生成因子和细胞周期调控因子的表达

目的探讨人脑胶质母细胞瘤细胞系ＳＨＧ４４长期传代后的某些生物学特性和免疫表型特征。方法采用免疫组织化学和原位杂交技术对ＳＨＧ４４细胞增殖活性、中间丝蛋白共存、肿瘤蛋白、血管生成因子和细胞周期调控相关蛋白表达水平进行检测。结果传代１３０～１５０代的ＳＨＧ４４细胞呈胶质纤维酸性蛋白弱阳性而波形蛋白强阳性;Ｋｉ６７、增殖细胞核抗原平均标记指数分别为８３．５％±１０．２％、７０．０％±１８．７％。ｐ２１ｒａｓ、ｃｅｒｂＢ２、表皮生长因子及其受体、碱性成纤维细胞生长因子及其受体ＦＧＦＲ均显过度表达。血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）及ＶＥＧＦｍＲＮＡ的表达情况亦相似。该细胞还具有诱导型一氧化氮合酶表达和ｐ１６、ｐ５３、周期素依赖性激酶４、ｃｙｃｌｉｎＤ１蛋白积聚（平均标记指数分别为４３．１％±１１．２％、２０．７％±６．６％、３３．１％±１１．４％和２９．８％±４．７％）。结论ＳＨＧ４４细胞存在上述生长因子、肿瘤蛋白表达异常和细胞周期的失控,使ＳＨＧ４４细胞生长旺盛,增殖活性高,并且血管生成能力强,具有很高的恶性表型。     

肿瘤坏死因子对晶状体上皮细胞的粘附移行作用

目的：探讨肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ α,ＴＮＦ－０６３３）对晶状体上皮细胞在细胞外基质上的粘附移行作用。以及在此过程中整合素分子的表达情况。方法：借助细胞粘附实验和移行实验研究ＴＮＦ－α对体外培养的牛晶状体上皮细胞在细胞外基质上的粘附和移行,以及整合素抗体封闭后对细胞的影响。ＴＮＦ－α对细胞表面整合素的表达调节经免疫荧光染色后由流式细胞仪检测。结果：ＴＮＦ－α可以明显促进晶状体上皮细胞在Ⅳ型胶原、层粘蛋白、纤维连接蛋白上的粘附移行。抗体封闭实验表明整合素β１、α２、α５亚基参与细胞的粘附,在细胞移行中发挥主要作用的是α亚基而非β亚基,流式细胞仪检测表明ＴＮＦ－α可上调晶状体上皮细胞中整合素的表达。结论：胶原、层粘蛋白、纤维连接蛋白是晶状体囊的主要成分。肿瘤坏死因子α促进晶状体上     

实验性肺纤维化大鼠肺组织整合素α5β1和转化生长因子-β的表达

目的　研究纤维连接蛋白受体整合素α５β１ 在大鼠肺纤维化中的作用。方法　用免疫组化方法观察实验性大鼠肺纤维化纤维连接蛋白（ＦＮ） 及其受体整合素α５β１ 和转化生长因子β（ＴＧＦβ）表达的动态变化;用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交和免疫细胞化学方法观察ＴＧＦβ对体外培养的大鼠肺成纤维细胞整合素α５β１ ｍＲＮＡ和蛋白表达的影响。结果　（１）实验组１～３ 天,病灶内上皮细胞和内皮细胞整合素α５β１ 表达明显增强,炎细胞及增生的间质细胞亦呈阳性反应。以后,整合素α５β１ 阳性反应主要见于明显增生的间质细胞,并与ＴＧＦβ阳性分布相似。ＦＮ的变化与整合素α５β１ 的变化同步。（２）ＴＧＦβ作用后,大鼠肺成纤维细胞整合素α５β１ ｍＲＮＡ 及其蛋白表达增强（α５、β１ ｍＲＮＡ 杂交条带的积分光密度值,依次分别是对照的６．６ 、４．４ 倍;α５β１ 蛋白染色积分光密度值为对照的３．６ 倍） 。结论　整合素α５β１在肺间质细胞活化、增殖、分化及细胞外基质合成中起了极其重要作用。     

实验性肺纤维化大鼠组织整合素α5β1和转化生长因子—β的表达

目的 研究纤维连接蛋白受体整合蛋白受体整合素α５β１在大鼠肺纤维化中的作用。方法 用免疫组化方法观察实验性大鼠肺纤维化纤维连接蛋白及其受体整合素α５β１和转化生长因子－β表达的动态变化：用Ｎｏｒｔｈｅｍ印迹杂交和免疫细胞化学方法观察ＴＧＦ－β对体外培养的大鼠肺成纤维细胞整合素α５β１ ｍＲＮＡ和 白表达的影响。结果 （１）实验组１￣３天,病灶内上皮细胞和骨皮细胞整合素α５β１表达明显增强,炎细胞及     

S层介导嗜水气单胞菌粘附HEp—2细胞

用ＨＥｐ－２细胞作为体外模型，比较嗜水气单胞菌Ｓ层缺失突变株ＴＭ６及其亲本菌株Ｊ－１的粘附力，结果表明Ｊ－１株对ＨＥｐ－２细胞的粘附力明显高于ＴＭ６株。用Ｊ－１株Ｓ层蛋白抗体ＰＲ的Ｆａｂ片段预先与细菌反应，可使Ｊ－１株的粘附菌数下降，且呈剂量依赖关系，但对ＴＭ６株的粘附菌数无影响。用纯化的Ｊ－１株Ｓ层蛋白预先与ＨＥｐ－２细胞作用，亦能抑制Ｊ－１株对ＨＥｐ－２细胞的粘附，对ＴＭ６株也无影响。同时，将ＨＥｐ－２细胞与纯化的Ｊ－１株Ｓ层蛋白混合并孵育，用嗜水气单胞菌ＴＦ７株Ｓ层蛋白抗体ＰＦ１作免疫酶分析，结果表明Ｓ层蛋白可结合在ＨＥｐ－２细胞上。综上可见，Ｓ层是嗜水气单胞菌的一种粘附素。可介导嗜水气单胞菌粘附ＨＥｐ－２细胞。     

糖皮质激素受体β对糖皮质激素受体α功能的影响及其意义

目的 :通过研究糖皮质激素受体 β对糖皮质激素受体α功能的影响 ,探讨糖皮质激素受体 β可能存在的生物学意义。方法 :( 1 )用瞬时转染技术将ＧＲβ和报告基因ｃａｔ共转染ＨＯＳ - 860 3细胞 ,激素处理后 ,研究ＧＲβ对糖皮质激素诱导ＧＲα外源性靶基因ｃａｔ表达的影响 ;( 2 )ＧＲβ真核表达载体的构建及ＧＲβ在ＨＯＳ - 860 3细胞中的稳定过度表达 ;( 3)用定量ＲＴ -ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测糖皮质激素对ＨＯＳ -860 3细胞ｐ2 1表达的诱导及ＧＲβ的稳定表达对ＧＲα内源性靶基因ｐ2 1表达的影响 ;( 4 )用ＭＰＴ法检测ＧＲβ…     

miR-205通过靶向调控TBX18抑制神经胶质瘤细胞的侵袭能力

目的:探讨微小RNA-205(miR-205)在神经胶质瘤组织中的表达模式及其在胶质瘤细胞侵袭中的作用及可能机制。方法:用real-time PCR检测配对神经胶质瘤组织中miR-205的表达,同时用免疫组化方法检测配对组织中TBX18蛋白的表达量;用脂质体将miR-205模拟物(miR-205 mimics)、miR-205抑制物(miR-205 inhibitor)以及相应对照(control)导入U251胶质瘤细胞后,Transwell实验检测细胞的侵袭能力变化;生物信息学分析结合萤光素酶报告基因实验观察miR-205对TBX18的靶向调控作用;采用RNA干扰技术下调U251细胞中TBX18的表达,用Transwell实验检测细胞侵袭能力变化。结果:miR-205在82.6%所检测的神经胶质瘤组织中表达下调,而TBX18在神经胶质瘤组织中表达上调,两者表达呈负相关;过表达miR-205使U251细胞的侵袭细胞数下降(P0.01),抑制miR-205表达后U251侵袭细胞数增加(P0.01);miR-205在U251胶质瘤细胞中能直接靶向抑制TBX18的表达,干扰TBX18的表达亦使U251细胞的侵袭细胞数下降(P0.01)。结论:miR-205在神经胶质瘤中表达下调,miR-205可能通过靶向调控TBX18影响胶质瘤细胞的侵袭能力,这将为完善胶质瘤侵袭的分子机制及开发新治疗策略以提高胶质瘤治疗效果提供有力的理论依据。     

siRNA 沉默NOK 基因抑制脑胶质瘤U251 细胞增殖与侵袭

目的:通过小干扰RNA(siRNA)沉默NOK基因的转录表达,研究NOK基因在人脑胶质瘤细胞U251增殖、凋亡及侵袭中的调控作用。方法:合成NOK siRNA(si-578和si-996),脂质体转染U251细胞,qRT-PCR、Western blot检测其对NOK基因转录及表达的抑制效果,MTS法及平板克隆形成实验研究其对细胞增殖的影响,Transwell试验检测细胞迁移能力,Annexin V-FITC/7-AAD双染法检测细胞凋亡,Western blot检测Cyclin D1及AKT的蛋白表达。结果:si-578和si-996可显著降低NOK基因转录和表达(P0.05)。抑制U251细胞NOK基因表达,可显著抑制细胞增殖和侵袭(P0.05),凋亡细胞数量明显增加(P0.05),G_1期U251细胞数量显著增加(P0.05),S期细胞明显减少(P0.05),Cyclin D1表达和AKT磷酸化水平明显降低。结论:NOK在脑胶质瘤细胞的增殖、侵袭和凋亡过程中发挥重要调节作用。     

成年大鼠星形细胞经LPS、前炎症因子和免疫调节因子刺激后β-趋化因子的分泌

目的研究在中枢神经系统（ＣＮＳ）的炎症性疾病中,作为构成血脑屏障结构的组成部分之一,可引起白细胞浸润的星形细胞分泌趋化因子的影响因素。方法通过星形细胞体外培养,经不同细胞因子刺激,用原位杂交检测成年大鼠星形细胞β－家系趋化因子的ｍＲＮＡ表达。结果ＩＦＮ－γ可引起ＭＣＰ－１,ＲＡＮＴＥＳ,ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达;ＴＮＦ－α可引起ＲＡＮＴＥＳ和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达;ＬＰＳ可引起ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达。ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０下调由ＬＰＳ引起的ＭＣＰ－１和ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１βｍＲＮＡ表达。ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０可抑制由ＴＮＦ－α引起的ＭＣＰ－１和ＲＡＮＴＥＳ的ｍＲＮＡ表达。ＩＬ－１０还可下调由ＴＮＦ－α引起的ＭＩＰ－１βｍＲＮＡ表达。结论成年大鼠体外试验中的星形细胞可由ＬＰＳ和前炎症因子刺激,产生β－家系趋化因子ｍＲＮＡ的表达。而调节因子如ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０可抑制由ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α和ＬＰＳ引起的β－家系趋化因子的ｍＲＮＡ表达。     

SHG－44细胞显微注射NDGA诱导分化的初步观察

采用显微注射系统对ＳＨＧ－４４细胞进行单细胞微量注射技术的探讨，并观察去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）注射后的作用。结果显示，体积较小的肿瘤细胞显微注射成功的关键在于注射参数的正确设定、细胞标记、注射针下限值的确定、注射过程中防污染以及操作细致、迅速；ＮＤＧＡ注射ＳＨＧ－４４细胞后的诱导分化作用较其在细胞外培养基中的作用更直接、迅速和显著，亦更持久。     

SHG—44细胞显微注射NDGA诱导分化的初步观察

采用显微注射系统对ＳＨＧ－４４细胞进行单细胞微量注射技术的探讨，并观察云甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）注射后的作用。结果显示，体积较小的肿瘤细胞显微注射成功的关键在于注射参数的正确设定、细胞标记、注射针下限值的确定、注射过程中防污染以及操作细致、迅速；ＮＤＧＡＩＳＨＧ－４４细胞后的诱导分化作用较其在细胞外培养基中的作用更直接、迅速和显著，亦更持久。