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相似文献
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1.
采用从人精浆中纯化的前列腺特异性抗原(PSA),经免疫、融合、筛选,得到两株抗PSA抗原的单克隆抗体1H7和2D1,并通过免疫组化法鉴定了抗体的特异性。将其配对建立的定量测定血清PSA的双抗体夹心ELISA法最低检出量为0.5μg/L,孔间平均变异系数为4.4%,批内平均变异系数为5.8%。35例正常男性血清PSA的范围(x±s)为(1.45±1.24)μg/L;11例前列腺癌患者血清PSA的范围(x±s)为(26±27.2)μg/L。与进口PSA-ELISA试剂盒检测的总符合率为83%。  相似文献   

2.
可溶性HLA—I的检测及中国人正常值   总被引:7,自引:0,他引:7  
目的 sHLA-I可预测器官移植排斥反应及监控某些疾病,为了介绍sHLA-I类抗原定量检测技术及中国人sHLA-I正常值,方法:采用ELISA双抗夹心法,以W6/32mAb包被酶标板,加被检血清,再加β2m-HRP及底物显色,以不同浓度sHLA-I标准品的结果绘出标准曲线并测定113例正常人sHLA-I含量。结果 ELISA法可以准确定量测定血清中sHLA-I,中国人sHLA-I正常值为789.2  相似文献   

3.
前列腺特异性抗原是从人精液中提取的一种糖蛋白。血清中PSA测定对前列腺良、恶性疾病有重要诊断价值。利用生物素─—抗生物素系统与ELISA技术相结合,建立了测定血清中PSA含量的ABC-ELISA竞争法。此法较常规的ELISA敏感度高,较放免法安全、经济。本文对其方法的灵敏度、重复性、可靠性进行了探讨。测得正常男性血清PSA范围是0~3.3ng/ml(n=86),女性血清PSA未测出(n=15)。  相似文献   

4.
鼠抗人sIL—6R单克隆抗体的制备及sIL—6R检测方法的建立   总被引:3,自引:2,他引:3  
以重组人sIL-6R蛋白作为抗原,获得3株分泌特异性McAb的杂交瘤株,分别命名为SI10,SI11和SI12。3株McAb均属小鼠IgG1亚类。竞争抑制试验的结果表明,3株McAb识别两个不同的抗原表位,将杂交瘤细胞注入同系小鼠腹腔诱生的cAb腹水,经protein G纯化后用生物素标记,建立了双McAb夹心ELISA法,该法用于血清sIL-6R的特异性检测,灵敏度为50μg/L。  相似文献   

5.
弓形虫IgM抗体检测方法的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
本文以鼠抗人μ链单克隆抗体捕获被测人血清中IgM抗体,再以辣根过氧化物酶标记的弓形虫抗原进行直接酶联免疫吸附试验,检测人血清中特异性抗弓形虫IgM抗体,并以阻断试验证实该方法的特异性。与风疹病毒IgM抗体阳性血清,巨细胞病毒IgM抗体阳性血清和类风湿因子等无交叉反应。与进口试剂盒以酶联免疫吸附试验双夹心法(DS-ELISA-Tox-IgM)进行比较检测了临床血清样品1053份,两者阳性符合率为95.56%,DS-ELISA阴性血清在D-ELISA法亦阴性,而且后者灵敏度略高。酶标记抗原和包被抗体的酶标板在4℃中保存6个月仍稳定。试剂盒操作简便,快速,适用于弓形虫病的早期诊断。  相似文献   

6.
采有来源于鼠抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)单克隆抗体杂交瘤细胞株腹水,经纯化后包被硝基纤维素膜,和标记四氯金酸,建立双抗体夹心测定乙型肝炎病毒表面抗原的间接胶体金联免疫吸附试验(GCISA)。其特异性和国内外酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒水平相同,而灵敏度明显高于ELISA检测水平,完全达到了HBsAg诊断试剂国家质控标准的要求,特点是操作简便,快速,观察结果直观可靠,适于血站,医院大  相似文献   

7.
黄河  徐建平 《现代免疫学》1995,15(6):368-368,360
本文报告了双抗体夹心竞争ELISA法检测人血清弓形虫抗体,并与间接ELISA法进行了比较。结果二法阳性符合率为91.7%。夹心ELISA法特异性、稳定性优于间接ELISA法,间接ELISA法阳性检出率略高于夹心法,但无统计学差异(P>0.05)。  相似文献   

8.
应用聚合酶链反应(PCR)技术建立的扩增结核杆菌复合体特异重复序列IS986基因的方法和用单克隆抗体TB15-C3经ELISA夹心法检测结核杆菌特异性抗原决定簇,对10种抗酸杆菌,2种普通菌进行了检测。PCR仅对结核杆菌复合体扩增出245bp特异性条带,ELISA检测除人型结核杆菌、BCG阳性外,还与鸟型及瘰疬分枝杆菌反应阳性。PCR检测人型结核杆菌的敏感性为1pg,相当于13个左右细菌,ELIS  相似文献   

9.
BSA-ELISA检测血清中梧桐花粉特异性IgE   总被引:1,自引:0,他引:1  
BSA-ELISA检测血清中梧桐花粉特异性IgE黄哲平朱惠如余霞珍张瑞芳巫善美法国梧桐花粉是上海地区哮喘患者常见的一种致敏原。我们应用生物素链霉亲和素放大系统建立了BSA-ELISA检测血清中法国梧桐花粉特异性IgE的方法,与BA-ELISA法、皮试...  相似文献   

10.
HIV-1 p24抗原检测的应用研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:用抗HIV-1p24单克隆抗体和多克隆抗体和多克隆抗体构建的间接ELISA试剂,检测HIV-1抗体阳性及其它样品,探讨应用的可行性。方法:采用单克隆抗体固相、兔抗HIV-1p24抗体夹心,羊抗兔HRP结合物的间接ELISA法。结果:显示试剂盒HIV-1p24抗原检出灵敏度为50pg/ml(基因工程抗原);特异性99.46%;HIV抗体阳性血样性率3.2%;抗体阴性的特殊人群血样阳性率3.9&  相似文献   

11.
 目的 建立快速检测人血清中游离前列腺特异抗原(f-PSA)的 ELISA 方法。 方法 利用抗 f-PSA 的单克隆抗体(单抗)杂交瘤细胞株,一株单抗 2D1 用于固相包被,另一株单抗2E4进行辣根过氧化物酶标记,采用二步法,建立定量测定人血清 f-PSA 的双抗体夹心ELISA法。对该法的敏感度、精密度、准确性、特异性进行了分析。应用该法与瑞典 CanAg 公司的f-PSA ELISA 试剂盒同时检测了 18 例前列腺癌和 25 例前列腺增生患者血清标本的 f-PSA 含量,进行了两种方法检测结果的相关性分析。 结果 以双抗体夹心 ELISA 法检测 f-PSA,在 f-PSA 0 ~ 20 μg/L 范围内线性良好;敏感度为 0.025 μg/L;批内变异系数为 4.5% ~ 6.2%,批间变异系数为 3.9% ~ 7.2%;回收率为 94.3% ~ 111.1%;与 α1 抗糜蛋白酶结合的结合型PSA 交叉率为 0.7 %;检测 43 份临床标本 f-PSA 含量的结果与瑞典 CanAg 公司 f-PSA 试剂盒检测结果的相关系数为 0.995。 结论 所建立的双抗体夹心 ELISA 方法是一种特异、敏感、简便实用的 f-PSA 快速检测方法,有助于在 PSA 低水平升高的重叠范围内(4 ~ 10 μg/L)鉴别前列腺增生与前列腺癌。  相似文献   

12.
目的优化双抗体间接夹心ELISA试剂盒,并探讨其在乳腺癌患者中检测MUC1黏蛋白水平的应用价值。方法用基因重组MUC1-GST和MUC1-MBP融和蛋白免疫家兔和大鼠,获得抗MUC1血清,并对其纯化,获得纯化的家兔抗人及大鼠抗人MUC1多克隆抗体;经不同的筛选确立了以家兔抗人MUC1抗体作为包被抗体、大鼠抗人MUC1抗体作为检测抗体的双抗体间接夹心试剂盒,敏感度可达到0.2 ng/ml。结果应用建立的试剂盒对40例乳腺癌,18例乳腺良性疾病和120健康对照者血清中MUC1蛋白水平的进行检测,检测结果绘制ROC曲线,分析得出以2.75 ng/ml为乳腺癌患者与乳腺良性疾病患者的临界值,以1.86 ng/ml为乳腺疾病与正常人为临界值,检测结果表明本研究对乳腺癌诊断的阳性率高达97.5%,乳腺良性疾病的阳性率为66.7%,正常人特异性为96.7%。对于乳腺癌同一病例样本用酶联免疫法CA15-3诊断试剂盒进行对比检测,其检出率为3.33%,特异度为100%。绘制ROC曲线对比显示,本研究所建立的双抗体夹心ELISA方法对乳腺癌诊断的准确度明显高于CA15-3试剂盒。结论本研究成功建立了特异性强,灵敏度良好的双抗体间接夹心ELISA试剂盒,有望开发为临床辅助诊断的常规试剂盒,尤其有望应用于乳腺癌的大规模筛查及早期诊断。  相似文献   

13.
目的:制备并鉴定NSE(Neuron-specific enolase)单克隆抗体,建立可检测NSE蛋白的双抗夹心ELISA方法。方法:用本实验室已表达纯化的NSE融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体。采用WB、IP、IF、IHC等方法对获得的NSE单抗进行鉴定及亚型检测。利用辣根过氧化物酶标记纯化后的NSE单抗,建立一个可检测NSE蛋白的双抗夹心ELISA法。结果:通过分析和鉴定,选定2株可稳定分泌抗NSE抗体的杂交瘤细胞株,效价达4.2×107~6.5×107,亚型为IgG2b。免疫印迹结果显示,该抗体不仅能识别细胞内源NSE蛋白,还能识别分泌到细胞培养上清液中的NSE蛋白,此外还可用于免疫荧光及免疫组化检测。文中所建立的双抗夹心ELISA法,最低检测极限为8.85 ng/ml。结论:成功获得了效价高、灵敏度好及特异性强的NSE单抗,建立了一个双抗体夹心ELISA检测系统,具有良好的临床应用前景。  相似文献   

14.
目的制备重组人源细胞珠蛋白(recombinanthumanCytoglobin,rhCygb)单克隆抗体,并建立检测该蛋白双抗体夹心ELISA法,为下一步研究rhCygb药代动力学做准备。方法用纯化的rhCygb免疫BALB/c小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法获得抗rhCygb的单克隆抗体杂交瘤细胞,间接ELISA法筛选制备单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA法。结果筛选获取了稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过抗原表位相加法实验获得5株表位不同的细胞株,Western-blotting验证能与rhCygb特异性结合,间接ELISA法验证其不与本实验室制备的其它PET28a-BL21蛋白及BL21裂解液发生交叉反应。本方法灵敏度为1.25ng/ml,在浓度为10~1250ng/ml时,线性关系良好,相关性达0.9931,实验内和实验间平均变异系数分别为6.2%和10.92%。结论成功建立了灵敏度好、特异性高的双抗体夹心法,为下一步研究rhCygb药代动力学奠定了基础。  相似文献   

15.
多种单抗联合检测HIV抗原   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 建立多种单抗联合早期检测HIV抗原的夹心ELISA方法.方法 以SAS盐析沉淀法和亲和层析法纯化抗HIV-1 p24、gp41、gp120及抗HIV-2 gp36的腹水型单克隆抗体(McAb),用高碘酸钠法将纯化的McAb以HRP进行标记.建立针对单个抗原的双抗体夹心ELISA法,对其灵敏度及特异性进行检测.将筛选得到的4株捕获McAb按比例混合作为捕获抗体,4株酶标McAb按比例混合作为检测抗体,建立多种单抗联合检测HIV抗原的夹心ELISA方法,检测混合HIV抗原.结果 按确定的最优反应条件建立的多种McAb联合夹心ELISA方法,检测到的最高稀释度的HIV混合抗原中各抗原的终浓度分别为:重组HIV-1 p24:0.625 pg/ml,gp41:6.25 ng/ml,gp120:6.25 ng/ml;HIV-2 gp36:9.25 ng/ml.结论 建立了具有高度敏感性的鸡尾酒式多种单抗联合检测HIV抗原的夹心ELISA法,为早期榆测HIV抗原提供了新的思路,为后续的研究奠定了一定基础.  相似文献   

16.
多种单抗联合检测HIV抗原   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 建立多种单抗联合早期检测HIV抗原的夹心ELISA方法.方法 以SAS盐析沉淀法和亲和层析法纯化抗HIV-1 p24、gp41、gp120及抗HIV-2 gp36的腹水型单克隆抗体(McAb),用高碘酸钠法将纯化的McAb以HRP进行标记.建立针对单个抗原的双抗体夹心ELISA法,对其灵敏度及特异性进行检测.将筛选得到的4株捕获McAb按比例混合作为捕获抗体,4株酶标McAb按比例混合作为检测抗体,建立多种单抗联合检测HIV抗原的夹心ELISA方法,检测混合HIV抗原.结果 按确定的最优反应条件建立的多种McAb联合夹心ELISA方法,检测到的最高稀释度的HIV混合抗原中各抗原的终浓度分别为:重组HIV-1 p24:0.625 pg/ml,gp41:6.25 ng/ml,gp120:6.25 ng/ml;HIV-2 gp36:9.25 ng/ml.结论 建立了具有高度敏感性的鸡尾酒式多种单抗联合检测HIV抗原的夹心ELISA法,为早期榆测HIV抗原提供了新的思路,为后续的研究奠定了一定基础.  相似文献   

17.
A double-antigen sandwich ELISA was developed a detection of HCV antibodies by a recombinant multi-epitope HCV antigen and a biotin-streptavidin amplification system. Three plasma specimens from 1708 individuals who were suspected previously to be HCV-positive using an HCV antibody diagnostic kit (Chuangxin, Xiamen, China) displayed negative results when using the ELISA. These results were validated by a recombinant immunoblotting assay (two were negative, and one was indeterminate). Among 889 blood specimens donated for clinical evaluation, 246 were positive and 630 were negative using the ELISA. The sensitivity and specificity of the ELISA were 98.7% and 100%, respectively. In 43 donors and 14 patients with chronic hepatitis C, the detectable rates for HCV IgM by both ELISA and the HCV anti-IgM detection reagents (Huimin, Shenyang, China) were 100%, and the detectable rate for HCV IgG using an indirect HCV-antibody detection kit (GWK, Beijing, China) was 98.3%. Thus, the double-antigen sandwich ELISA exhibits strong specificity and sensitivity and has been approved by the China State Food and Drug Administration (SFDA). The performance of the double-antigen sandwich ELISA was similar to the Ortho ELISA 3.0. It did not give false-negative results otherwise IgM was undetectable using an indirect HCV-antibody detection kit. This ELISA provides another method for the detection of HCV antibodies.  相似文献   

18.
A double-antigen sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is described for detection of porcine circovirus 2 (PCV2) antibodies using the well-characterized recombinant PCV2 capsid protein. In a comparative test of 394 pig sera against an indirect immunofluorescence (IIF) test and a commercial ELISA kit (also based on the recombinant PCV2 capsid protein), the results showed that the diagnostic sensitivity, specificity, and accuracy of the assay were, respectively, 90.61, 94.02, and 91.62% compared with IIF and 94.38, 95.28, and 94.67% compared with the commercial ELISA kit. Assay of 12 PCV-free pigs over a 5-week period produced only PCV2-negative titers by all 3 methods. These results and the seroprofiles of 4 pig farms obtained by both the commercial ELISA kit and the double-antigen sandwich ELISA indicate that the sandwich ELISA is a reliable method for detection of antibodies to PCV2. Additionally, the method described here permits the use of undiluted test serum samples simultaneously loaded with horseradish peroxidase (HRP)-conjugated antigen into the test well, and the complete test procedure can be performed in less than 90 min. This double-antigen sandwich ELISA should be a useful tool to aid swine industry professionals in deciding the intervention strategies for the control of PCV2-associated diseases.  相似文献   

19.
目的建立人血红蛋白(Hb)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂,探讨在大便潜血(FOB)检测中的应用。方法采用固相双抗体夹心法建立检测Hb的TRFIA方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果自制试剂盒的最低检测量为0.8ng/mL或32ng(Hb)/g(粪便),线性范围为0.8—1000ng/mL或32—40000ng(Hb)/g(粪便)。分析内和分析间变异系数分别为3.4%-8.9%和5.2%-13.4%。与羊、鸡、牛、猪、兔、狗Hb不发生交叉反应。90份临床确诊标本用本试剂盒和胶体金免疫层析(GICA)试剂同时测试,TRFIA法的敏感性和特异性均为100%.GICA法的灵敏度和特异性分别为95.6%、100%。结论Hb—TRFIA试剂盒各项指标均达到临床检测要求,适用于临床上大便潜血Hb的检测。  相似文献   

20.
利用羊抗人IgM,基因工程表达的乙型肝炎X抗原和酶标抗-HBx单克隆抗体,建立了检测血清中抗-HBx IgM充体的ELISA双夹心法,并进行了初步应用。实验结果表明,此方法的特异性强,稳定性及重复性好(批内变异系数8.64%,批间变异系数10.60%,重复率为100%),且不受血清中抗-HBc IgM、抗-HAV IgM及类风湿因子的影响。由于目前国内外都没有抗-HBx IgM标准品,故对方法的敏感性没有报道。  相似文献   

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