运动训练对D-半乳糖造阿尔茨海默病模型大鼠海马β位淀粉样蛋白42和裂解酶1的影响

目的:探讨游泳+跑台的混合运动训练对D-半乳糖所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马内β位淀粉样蛋白42和裂解酶1(Aβ42、BACE1)的影响。方法:将16只雄性SD大鼠随机分为安静注射组(C组)和运动注射组(T组),所有大鼠连续8周腹腔注射D-gal造阿尔茨海默病模型大鼠,同时,T组大鼠连续进行8周的游泳和跑台(均每周3次,交替进行)相结合的混合运动训练。运用WesternBlot法检测大鼠海马Aβ42蛋白表达量,运用RT-PCR法检测大鼠海马BACE1mRNA和IGF-1mRNA的表达量。结果:①与C组相比,T组大鼠海马内Aβ42蛋白表达量显著减少,具有极显著性差异(P<0.01);②C组比T组大鼠海马内BACE1mRNA表达量多,具有显著性差异(P<0.05);③与C组相比,T组大鼠海马内胰岛素源生长因子(IGF)-1mRNA表达增加,具有极显著性差异(P<0.01)。结论:游泳和跑步混合运动训练能延缓AD的发展进程,这可能与运动训练上调了AD大鼠海马内IGF-1mRNA表达有关。     

运动对快速老化小鼠海马β-淀粉样蛋白及淀粉样蛋白前体蛋白的影响

目的 研究运动对快速老化小鼠(SAMP)8海马β-淀粉样蛋白(Aβ)及淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的影响,以探讨运动改善阿尔茨海默病(AD)学习记忆功能的机制.方法 将40只3月龄SAMP8小鼠采用单纯随机抽样法分为运动组和对照组,运动组进行跑笼运动训练,第1个月每周训练5 d,每天10 min,第2个月每周训练5 d,每天20 min.2个月后采用H-E染色观察2组小鼠海马神经元形态改变;免疫组织化学技术检测海马Aβ免疫阳性细胞的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测海马APP mRNA的表达水平.结果 对照组5月龄SAMP8小鼠海马部分神经元细胞变性、死亡,核浓缩,空泡变性;运动组偶有神经元细胞变性、死亡,大部分细胞形态正常.运动组海马Aβ免疫阳性细胞表达水平为(0.192±0.018),明显低于对照组的(0.274±0.017)(P＜0.05);运动组海马APP mRNA表达水平为(0.168±0.059),明显低于对照组的(0.574±0.115)(P＜0.01).结论 运动可以延缓SAMP8小鼠海马神经元变性,降低海马Aβ及APP的表达,这可能是运动改善AD学习记忆功能的重要机制之一.

Abstract：

Objective To explore the effects of movement on hippocampal β-amyloid protein ( Aβ ) and amyloid precursor protein (APP) in senescence-accelerated and senescence-prone (SAMP8) mice, and the mechanism by which movement improves learning and memory in mice with a model of Alzheimer's disease. Methods Forty 3-month-old SAMP8 mice were divided randomly into a movement group and a control group. The movement group was trained with a running wheel 10 min daily, 5 days a week in the first month, and 20 min daily in the second month. Morphological changes in the hippocampus were observed under the microscope after HE staining. The expression of Aβ in the hippocampus was detected by immumohistochemical methods and APP mRNA expression was detected by RT-PCR two months later. Results HE staining showed neuron degeneration and death, chromatin condensation and vacuolar degeneration in the hippocampus of the 5-mouth-old SAMP8 mice of the control group. The movement group showed less neuron degeneration and death, and the morphology of most cells was normal The expression of Aβ in the hippocampus of the 5-month-old SAMP8 mice in the movement group was significantly lower than that in the control group. APP mRNA expression levels in the movement group were also significantly lower.Conclusions Movement can delay neuron degeneration and down-regulate Aβ and APP mRNA expression levels in the hippocampus of SAMP8 mice. It may be an important mechanism by which movement improves learning and memory in mice with a model of Alzheimer's disease.     

沂蒙山区3年32例阿尔茨海默病患者淀粉样β蛋白及其前体基因表达量的相关性分析

背景：淀粉样β蛋白沉积是引致阿尔茨海默病的重要原因，淀粉样β蛋白前体基因过度表达或某部分发生突变，可能与阿尔茨海默病的发生有关。目的：观察沂蒙山区阿尔茨海默病与淀粉样β蛋白及其前体基因的关系。设计：病例-对照分析。单位：临沂市人民医院神经内科。对象：选择临沂医专附属临沂市人民医院神经内科2001-01／2003-12住院阿尔茨海默病患者32例，以性别、年龄相当的非颅脑损伤的外科手术老年人30例为对照组（简易精神状态量表评分〉27分）。方法：应用ELISA法检测脑脊液淀粉样β蛋白水平，应用荧光定量聚合酶链反应技术检测淀粉样β蛋白前体基因表达量。结果：62例全部进入结果分析。①阿尔茨海默病组脑脊液淀粉样β蛋白水平明显高于对照组[（13．63&;#177;9．34），（6．75&;#177;5．37）μg／L，t=3．354,P〈0．01]。②阿尔茨海默病组脑脊液淀粉样B蛋白前体表达量明显高于对照组[（1624&;#177;298），（1275&;#177;269）拷贝／μL。t=4．42，P〈0．01]。③阿尔茨海默病组淀粉样β蛋白水平与淀粉样β蛋白前体基因表达量呈正相关（r=0．44，P〈0．01）。结论：沂蒙山区阿尔茨海默病患者脑脊液中淀粉样β蛋白及其前体基因表达增高，且淀粉样β蛋白水平越高，其前体基因表达越高。痴呆程度越重。提示阿尔茨海默病与淀粉样β蛋白、淀粉样β蛋白前体密切相关。但淀粉样β蛋白前体表达量在阿尔茨海默病诊断中不具特异性。     

沂蒙山区3年32例阿尔茨海默病患者淀粉样β蛋白及其前体基因表达量的相关性分析

背景:淀粉样β蛋白沉积是引致阿尔茨海默病的重要原因,淀粉样β蛋白前体基因过度表达或某部分发生突变,可能与阿尔茨海默病的发生有关。目的:观察沂蒙山区阿尔茨海默病与淀粉样β蛋白及其前体基因的关系。设计:病例-对照分析。单位:临沂市人民医院神经内科。对象:选择临沂医专附属临沂市人民医院神经内科2001-01/2003-12住院阿尔茨海默病患者32例,以性别、年龄相当的非颅脑损伤的外科手术老年人30例为对照组(简易精神状态量表评分>27分)。方法:应用ELISA法检测脑脊液淀粉样β蛋白水平,应用荧光定量聚合酶链反应技术检测淀粉样β蛋白前体基因表达量。结果:62例全部进入结果分析。①阿尔茨海默病组脑脊液淀粉样β蛋白水平明显高于对照组[(13.63±9.34),(6.75±5.37)μg/L,t=3.354,P<0.01]。②阿尔茨海默病组脑脊液淀粉样β蛋白前体表达量明显高于对照组[(1624±298),(1275±269)拷贝/μL,t=4.42,P<0.01]。③阿尔茨海默病组淀粉样β蛋白水平与淀粉样β蛋白前体基因表达量呈正相关(r=0.44,P<0.01)。结论:沂蒙山区阿尔茨海默病患者脑脊液中淀粉样β蛋白及其前体基因表达增高,且淀粉样β蛋白水平越高,其前体基因表达越高,痴呆程度越重。提示阿尔茨海默病与淀粉样β蛋白、淀粉样β蛋白前体密切相关。但淀粉样β蛋白前体表达量在阿尔茨海默病诊断中不具特异性。     

跑台运动对D-半乳糖阿尔茨海默病大鼠海马β-淀粉样前体蛋白和Tau蛋白基因表达的影响

目的:探讨8周的有氧跑台运动对D-半乳糖模型阿尔茨海默病(AD)大鼠海马β-淀粉样前体蛋白(APP)和Tau蛋白及其激酶糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)mRNA表达的影响.方法:选用健康雄性8周龄SD大鼠16只,随机分为对照组(C组,n=8),运动组(T组,n=8).两组大鼠连续8周经腹腔按120mg/kg·d的浓度注射D-半乳糖造模AD大鼠,同时对T组大鼠进行连续8周,每周5次的有氧跑台运动.运用实时荧光定量RT-PCR的方法检测两组大鼠海马APP、Tau蛋白和GSK-3β的mRNA表达水平.结果:8周的有氧跑台运动显著下调了T组大鼠海马APP、Tau蛋白和GSK-3β的mRNA表达水平;其中,APP的下调幅度为42％(P＜ 0.05),Tau蛋白的下调幅度为45％(P＜ 0.01),GSK-3β的下调幅度为38％(P＜ 0.05).结论:8周的有氧跑台运动有效抑制了APP和Tau蛋白的基因表达水平,其机制可能是与运动抑制了GSK-3β的基因表达水平有关.     

穹隆海马伞切断与卵巢切除大鼠大脑皮质和海马CA1区雌激素受体α与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存观察

目的：分析穹隆-海马伞切断加卵巢切除大鼠大脑皮质区、海马CA1区雌激素受体α与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存表达的变化。 方法：实验于2003—03／12在青岛大学医学院附属医院脑病防治重点实验室完成。成年健康雌性Wistar大鼠14只，随机分为穹隆-海马伞切断加卵巢切除组和对照组，每组7只。穹隆-海马伞切断参照Klein等的方法，动物麻醉固定于脑立体定位仪后，参照Paxinos等大鼠脑立体定位图谱于前囟后2．2～2．5mm，中线外1．0mm处凿开颅骨，切开硬脑膜，自制双刃刀完全切断海马伞外侧缘。双侧卵巢切除参照Singh等的方法，麻醉动物后，打开腹腔，在肾脏下方的脂肪内取出卵巢，结扎并切除。对照组除不切断穹隆-海马伞和不切除卵巢外，其余步骤同穹隆-海马伞切断加卵巢切除组。免疫荧光双标细胞化学法染色，激光共聚焦显微镜下观察大鼠大脑皮质区、海马CA1区雌激素受体α、淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶阳性细胞表达以及共存表达的变化。 结果：14只大鼠参加实验，中途无脱落，均进入结果分析。①穹隆-海马伞切断加卵巢切除组大鼠皮质区绿色雌激素受体α阳性细胞数与对照组比较明显减少，差异有显著性意义[（4．42&;#177;3．99），（9．71&;#177;4．53）。P〈0．05]；红色淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶阳性细胞数量显著增多，差异有显著性意义[（20．00&;#177;5．16），（5．71&;#177;3．14），P〈0．05];共表达双标阳性细胞数量显著增多，差异有显著性意义[（4．00&;#177;2．94），（1．14&;#177;1．67），P〈0．05]。②穹隆-海马伞切断加卵巢切除组大鼠在海马CA1区雌激素受体α阳性细胞数与对照组比较明显减少，差异有显著性[（5．14&;#177;3．80），（12．57&;#177;3．59），P〈0．01]；淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶阳性细胞数量明显增多，差异有显著性意义[（17．14&;#177;4．45），（6．85&;#177;1．95），P〈0．01]；共表达阳性细胞数无显著变化意义[（2．01&;#177;2．08），（2．00&;#177;2.08），P〉0．05]。 结论：穹隆-海马伞切断与卵巢切除可以导致大鼠大脑皮质区、海马CA1雌激素受体α表达减少、淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶表达增多，皮质区接存细胞表达增多，说明雌激素与淀粉样β蛋白前体代谢系统存在内在的联系。     

穹隆海马伞切断与卵巢切除大鼠大脑皮质和海马CA1区酪氨酸激酶A与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存观察

目的：观察穹隆海马伞切断加卵巢切除大鼠大脑皮质区、海马CA1区酪氨酸激酶A与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存表达的变化。 方法：实验于2003—03／12在青岛大学医学院附属医院脑病防治重点实验室完成。选择成年健康雌性Wistar大鼠14只，随机分为穹隆-海马伞切断加卵巢切除组和对照组，每组7只。穹隆海马伞切断参照Klein等的方法，动物麻醉固定于脑立体定位仪后，参照Paxinos等大鼠脑立体定位图谱于前囟后2．2-2．5mm，中线外1．0mm处凿开颅骨，切开硬脑膜，自制双刃刀完全切断海马伞外侧缘。双侧卵巢切除参照Singh等的方法，麻醉动物后，打开腹腔，在肾脏下方的脂肪内取出卵巢，结扎并切除。对照组除不切断穹隆-海马伞和不切除卵巢外，其余步骤同穹隆-海马伞切断加卵巢切除组。免疫荧光双标细胞化学染色。激光共聚焦显微镜下观察大鼠大脑皮质区、海马CA1区酪氨酸激酶A、淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶阳性细胞表达及其共存表达的变化。 结果：实验过程中，无动物死亡，全部进入结果分析。穹隆-海马伞切断加卵巢切除组大鼠大脑皮质区、海马CA1区酪氨酸激酶A绿色荧光细胞数与对照组比较显著减少[皮质区（11．85&;#177;8．11），（22．14&;#177;8．68），P〈0．05]；[海马CA1区（11.28&;#177;3．04），（17.28&;#177;5．85），P〈0．05]。淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶红色荧光细胞数与对照组比较显著增多[皮质区（21.14&;#177;6．20），（5．57&;#177;3.10），P〈0．01];[海马CA1区（12．43&;#177;6．24），（3．42&;#177;2．76），P〈0.01]。海马CA1区呈现黄色荧光的舣标细胞数与对照组比较显著增多[（5．71&;#177;3．64），（0．57&;#177;1．51），P〈0．01]，大脑皮质区呈现黄色荧光的双标细胞数与对照组比较，差异无显著性意义[（5．71&;#177;3．14），（2．85&;#177;3．07）。P〉0．05]。 结论：穹隆海马伞切断加卵巢切除大鼠大脑皮质区、海马CA1区出现淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶表达增多、酪氨酸激酶A表达减少，海码CA1区共存细胞表达增多现象，说明神经生长因子系统与淀粉样β蛋白前体系统可能存在内在的相互联系。     

大鼠海马注射β-淀粉样蛋白1-40后β位淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA表达及加减地黄饮子提取物的干预

目的:观察SD大鼠海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40后β位淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA表达的变化及加减地黄饮子对其的干预作用。方法:①实验于2005-09/2006-09在齐齐哈尔医学院医药科学研究所完成。②选用100只SD大鼠随机分为空白对照组、假手术对照组、模型对照组、盐酸多奈哌齐组、加减地黄饮子组共5组,每组20只。通过海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40诱导老年性痴呆动物模型。③盐酸多奈哌齐按0.33mg/(kg·d)给药,加减地黄饮子组按1.0g/(kg·d)给药,共给药28d。空白对照组和假手术对照组给予等量生理盐水。④第5周处死大鼠,应用实时定量PCR法检测大脑海马组织β位淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA表达(用2-ΔΔCt表示,Ct为阈循环值,ΔCt=CtBACE1-CtGAPDH,ΔΔCt=ΔCt各干预组-ΔCt空白对照组)。⑤多组间差异的显著性分析用单因素方差分析,组间两两比较运用LSD-t检验。结果:实验选用100只大鼠,每组随机选5只用于抽提大脑海马组织总RNA,因此共有25只大鼠纳入结果分析。β位淀粉样前体蛋白裂解酶12-ΔΔCt值模型组(4.67±0.52)显著高于假手术对照组(1.07±0.08)(P<0.01),表明模型组β位淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA表达上调。盐酸多奈哌齐组(1.80±0.23)和加减地黄饮子组(1.26±0.20)显著低于模型对照组,表明β位淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA表达下调。结论:大鼠大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40后海马组织β位淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA表达水平明显增高,加减地黄饮子提取物可以抑制海马组织β位淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA的表达,从而发挥抗老年性痴呆的作用。     

大鼠海马注射β-淀粉样蛋白1-40后β位淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA表达及加减地黄饮子提取物的干预烛

目的：观察SD大鼠海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40后β位淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA表达的变化及加减地黄饮子对其的干预作用。方法：①实验于2005-09／2006-09在齐齐哈尔医学院医药科学研究所完成。②选用100只SD大鼠随机分为空白对照组、假手术对照组、模型对照组、盐酸多奈哌齐组、加减地黄饮子组共5组，每组20只。通过海马立体定向注射β-淀粉样蛋白，40诱导老年性痴呆动物模型。③盐酸多奈哌齐按0.33mg，（kg·d）给药，加减地黄饮子组按1.0g，（kg·d）给药，共给药28d。空白对照组和假手术对照组给予等量生理盐水。④第5周处死大鼠，应用实时定量PCR法检测大脑海马组织13位淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA表达（用2^-△△ct表示，Ct为阈循环值，△Ct=Ctbace1CtGAPDH，△△Ct=△Ct各干预组-△Ct空白对照组）。⑤多组间差异的显著性分析用单因素方差分析，组间两两比较运用LSD-f检验。结果：实验选用100只大鼠，每组随机选5只用于抽提大脑海马组织总RNA，因此共有25只大鼠纳入结果分析。β位淀粉样前体蛋白裂解酶12^-△△ct值模型组（4.67±0.52）显著高于假手术对照组（1.07±0.08）（P〈0.01），表明模型组B位淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA表达上调。盐酸多奈哌齐组（1.80±0.23）和加减地黄饮子组（1.26±0.20）显著低于模型对照组，表明13位淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA表达下调。结论：大鼠大脑海马注射β-淀粉样蛋白，40后海马组织β位淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA表达水平明显增高，加减地黄饮子提取物可以抑制海马组织β位淀粉样前体蛋白裂解酶1mRNA的表达，从而发挥抗老年性痴呆的作用。     

穹窿海马伞切断和卵巢切除对大鼠不同脑区雌激素受体α与淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶共存表达的影响

目的：探讨穹窿-海马伞切断和卵巢切除大鼠大脑雌激素受体α（ERα）与β淀粉样蛋白前体蛋白β位点裂解酶（BACE）共存表达的变化。方法：成年健康雌性Wistar大鼠28只，随机分为穹窿-海马伞切断组（FF组）、卵巢切除组（OVX组）、穹窿-海马伞切断加卵巢切除组（OF组）和对照组。每组7只。免疫荧光双标细胞化学法染色，激光共聚焦显微镜下观察大鼠大脑皮质区、海马CA1区ERα、BACE阳性细胞表达的变化。结果：FF组、OVX组和OF组大鼠皮质区和海马CA1区ERα阳性细胞与对照组比较显著减少（皮质区：4．71±1．11，5．29±2．01，4．42±3．99vs9．71±4．53;海马区：6．91±2．63，7．58±4．16，5．14±3．80vs12.57±3．59，均P〈0．05）；FF组、OVX组和OF组大鼠皮质区和海马CA1区BACE阳性细胞与对照组比较显著增多（皮质区：15．78±6．01，17．63±4．42，20．00±5．16vs5．71±3．14；海马区：15．91±5．12，12．34±5．07，17．14±4．45vs6.85±1．95，均P〈0.05）。但三组之间两两比较无显著性差异（P〉0．05）。OF组大鼠皮质区ERα和BACE双标阳性细胞数与对照组比较显著增多（P〈0．05），但海马CA1区无显著性变化（P〉0.05）。结论：穹窿-海马伞切断或卵巢切除可以导致大鼠大脑皮质区、海马CA1区ERα表达减少、BACE表达增多，两种方法同时作用导致皮质区共存细胞表达增多。     

穹隆海马伞切断与卵巢切除大鼠大脑皮质和海马CA1区雌激素受体α与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存观察

目的:分析穹隆-海马伞切断加卵巢切除大鼠大脑皮质区、海马CA1区雌激素受体α与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存表达的变化。方法:实验于2003-03/12在青岛大学医学院附属医院脑病防治重点实验室完成。成年健康雌性Wistar大鼠14只,随机分为穹隆-海马伞切断加卵巢切除组和对照组,每组7只。穹隆-海马伞切断参照Klein等的方法,动物麻醉固定于脑立体定位仪后,参照Paxinos等大鼠脑立体定位图谱于前囟后2.2～2.5mm,中线外1.0mm处凿开颅骨,切开硬脑膜,自制双刃刀完全切断海马伞外侧缘。双侧卵巢切除参照Singh等的方法,麻醉动物后,打开腹腔,在肾脏下方的脂肪内取出卵巢,结扎并切除。对照组除不切断穹隆-海马伞和不切除卵巢外,其余步骤同穹隆-海马伞切断加卵巢切除组。免疫荧光双标细胞化学法染色,激光共聚焦显微镜下观察大鼠大脑皮质区、海马CA1区雌激素受体α、淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶阳性细胞表达以及共存表达的变化。结果:14只大鼠参加实验,中途无脱落,均进入结果分析。①穹隆-海马伞切断加卵巢切除组大鼠皮质区绿色雌激素受体α阳性细胞数与对照组比较明显减少,差异有显著性意义[(4.42±3.99),(9.71±4.53),P<0.05];红色淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶阳性细胞数量显著增多,差异有显著性意义[(20.00±5.16),(5.71±3.14),P<0.05];共表达双标阳性细胞数量显著增多,差异有显著性意义[(4.00±2.94),(1.14±1.67),P<0.05]。②穹隆-海马伞切断加卵巢切除组大鼠在海马CA1区雌激素受体α阳性细胞数与对照组比较明显减少,差异有显著性[(5.14±3.80),(12.57±3.59),P<0.01];淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶阳性细胞数量明显增多,差异有显著性意义[(17.14±4.45),(6.85±1.95),P<0.01];共表达阳性细胞数无显著变化意义[(2.01±2.08),(2.00±2.08),P>0.05]。结论:穹隆-海马伞切断与卵巢切除可以导致大鼠大脑皮质区、海马CA1区雌激素受体α表达减少、淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶表达增多,皮质区共存细胞表达增多,说明雌激素与淀粉样β蛋白前体代谢系统存在内在的联系。     

阿尔茨海默病患者及对照者血清或脑脊液β-淀粉样蛋白1-42水平的Meta分析

目的 系统评价阿尔茨海默病(AD)患者及对照者血清或脑脊液(CSF)β-淀粉样蛋白1-42(Aβ_1-42)水平,评估Aβ_1-42作为AD生物标志物的诊断潜力。方法 计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库、维普数据库、PubMed、EMBASE、Web of Science中对AD患者及对照者血清或CSF Aβ_1-42进行检测的研究,检索时限从建库到2022年3月。根据纳入及排除标准进行文献筛选并提取基本资料,依据修改后的纽卡斯尔-渥太华量表(NOS)评价文献质量。采用RevMan5.3和Stata12软件做Meta分析并生成森林图,异质性较大时采用亚组分析寻找异质性来源,采用Egger’s检验评估纳入文献是否存在发表偏倚。结果 共纳入17篇文献,共计AD患者1 322例,对照者1 137例。Meta分析结果显示,AD患者的血清或CSF Aβ_1-42水平低于对照者,差异具有统计学意义(P<0.00001)。对照者类型结果显示,两亚组总体标准化均数差(SMD)结果与未分组结果大体一致,组间异质性...     

调心方对淀粉样β蛋白25～35杏仁核注射诱导的痴呆模型大鼠淀粉样肽前体mRNA表达的影响

目的：观察调心方对淀粉样β蛋白杏仁核注射诱导的痴呆模型大鼠脑内淀粉样肽前体mRNA表达，淀粉样β蛋白沉积及星形胶质细胞增殖作用，并与多萘哌齐比较。方法：实验于2001—01／2004—01在上海中医药大学老年医学研究所实验室完成。取SD大鼠40只，随机分为正常对照组、假手术组，模型组、调心方组、多萘哌齐组5组，每组8只。①给药：各组动物于造模前1周开始给药，调心方组给予调心方（党参、茯苓、远志、桂枝、菖蒲等组成，7．45g／mL）24．8g／kg，多萘哌齐组应用多萘哌齐组5mg／kg；其余各组用1mL双蒸水，每天灌胃1次，连续3周。②造模：正常对照组不造模；模型组、调心方组、多萘哌齐组大鼠通过单侧杏仁核注射淀粉样β蛋白25～35（5．0nmol）造成痴呆大鼠模型；假手术组切开皮肤后立即缝合。③观察指标：各组大鼠给药完毕后麻醉状态下处死取脑，采用免疫组化法观察老年斑的主要成分淀粉样β蛋白1～40沉积和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白的表达，反转录一聚合酶链反应法观察淀粉样肽前体KPI和MPI mRNA的表达。结果：40只大鼠全部进入结果分析。①淀粉样β蛋白1～40的阳性表达：模型组可见皮质、海马大量阳性细胞表达，其吸光度显著高于正常对照组和假手术组，调心方组显著低于模型组（P〈0．01）。多萘哌齐组虽有降低但不明显（P〉0．05）。②胶质纤维酸性蛋白的表达：与正常组和假手术组相比，模型组海马、皮质内胶质阳性细胞广泛增多，吸光度值亦高（P〈0．01）；调心方组显著低于模型组（P〈0．01）。而多萘哌齐组作用不明显。③反转录-聚合酶链反应结果：调心方组KPI（1269bp），MPI（297bp）条带表达均明显减弱，抑制大脑皮质和海马淀粉样肽前体751／770mRNA的表达。结论：淀粉样β蛋白沉积能激活胶质细胞分泌多种炎性细胞因子，诱发炎症反应，进一步促使淀粉样肽前体mRNA的表达和淀粉样β蛋白的沉积，启动炎症和免疫级联反应诱导老年斑的形成。而调心方可显著减少模型大鼠脑内胶质纤维酸性蛋白和淀粉样肽前体mRNA的表达，抑制炎症反应，从而进一步减轻淀粉样β蛋白的大量沉积，其效果优于多萘哌齐。     

穹隆海马伞切断与卵巢切除大鼠大脑皮质和海马CA1区酪氨酸激酶A与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存观察

目的:观察穹隆海马伞切断加卵巢切除大鼠大脑皮质区、海马CA1区酪氨酸激酶A与淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶共存表达的变化。方法:实验于2003-03/12在青岛大学医学院附属医院脑病防治重点实验室完成。选择成年健康雌性Wistar大鼠14只,随机分为穹隆-海马伞切断加卵巢切除组和对照组,每组7只。穹隆海马伞切断参照Klein等的方法,动物麻醉固定于脑立体定位仪后,参照Paxinos等大鼠脑立体定位图谱于前囟后2.2～2.5mm,中线外1.0mm处凿开颅骨,切开硬脑膜,自制双刃刀完全切断海马伞外侧缘。双侧卵巢切除参照Singh等的方法,麻醉动物后,打开腹腔,在肾脏下方的脂肪内取出卵巢,结扎并切除。对照组除不切断穹隆-海马伞和不切除卵巢外,其余步骤同穹隆-海马伞切断加卵巢切除组。免疫荧光双标细胞化学染色,激光共聚焦显微镜下观察大鼠大脑皮质区、海马CA1区酪氨酸激酶A、淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶阳性细胞表达及其共存表达的变化。结果:实验过程中,无动物死亡,全部进入结果分析。穹隆-海马伞切断加卵巢切除组大鼠大脑皮质区、海马CA1区酪氨酸激酶A绿色荧光细胞数与对照组比较显著减少[皮质区(11.85±8.11),(22.14±8.68),P<0.05];[海马CA1区(11.28±3.04),(17.28±5.85),P<0.05]。淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶红色荧光细胞数与对照组比较显著增多[皮质区(21.14±6.20),(5.57±3.10),P<0.01];[海马CA1区(12.43±6.24),(3.42±2.76),P<0.01]。海马CA1区呈现黄色荧光的双标细胞数与对照组比较显著增多[(5.71±3.64),(0.57±1.51),P<0.01],大脑皮质区呈现黄色荧光的双标细胞数与对照组比较,差异无显著性意义[(5.71±3.14),(2.85±3.07),P>0.05]。结论:穹隆海马伞切断加卵巢切除大鼠大脑皮质区、海马CA1区出现淀粉样β蛋白前体β位点裂解酶表达增多、酪氨酸激酶A表达减少,海马CA1区共存细胞表达增多现象,说明神经生长因子系统与淀粉样β蛋白前体系统可能存在内在的相互联系。     

调心方对淀粉样β蛋白25～35杏仁核注射诱导的痴呆模型大鼠淀粉样肽前体mRNA表达的影响

目的:观察调心方对淀粉样β蛋白杏仁核注射诱导的痴呆模型大鼠脑内淀粉样肽前体mRNA表达,淀粉样β蛋白沉积及星形胶质细胞增殖作用,并与多萘哌齐比较。方法:实验于2001-01/2004-01在上海中医药大学老年医学研究所实验室完成。取SD大鼠40只,随机分为正常对照组、假手术组、模型组、调心方组、多萘哌齐组5组,每组8只。①给药:各组动物于造模前1周开始给药,调心方组给予调心方(党参、茯苓、远志、桂枝、菖蒲等组成,7.45g/mL)24.8g/kg,多萘哌齐组应用多萘哌齐组5mg/kg;其余各组用1mL双蒸水,每天灌胃1次,连续3周。②造模:正常对照组不造模;模型组、调心方组、多萘哌齐组大鼠通过单侧杏仁核注射淀粉样β蛋白25～35(5.0nmol)造成痴呆大鼠模型;假手术组切开皮肤后立即缝合。③观察指标:各组大鼠给药完毕后麻醉状态下处死取脑,采用免疫组化法观察老年斑的主要成分淀粉样β蛋白1～40沉积和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白的表达,反转录-聚合酶链反应法观察淀粉样肽前体KPI和MPImRNA的表达。结果:40只大鼠全部进入结果分析。①淀粉样β蛋白1～40的阳性表达:模型组可见皮质、海马大量阳性细胞表达,其吸光度显著高于正常对照组和假手术组,调心方组显著低于模型组(P<0.01)。多萘哌齐组虽有降低但不明显(P>0.05)。②胶质纤维酸性蛋白的表达:与正常组和假手术组相比,模型组海马、皮质内胶质阳性细胞广泛增多,吸光度值亦高(P<0.01);调心方组显著低于模型组(P<0.01)。而多萘哌齐组作用不明显。③反转录-聚合酶链反应结果:调心方组KPI(1269bp),MPI(297bp)条带表达均明显减弱,抑制大脑皮质和海马淀粉样肽前体751/770mRNA的表达。结论:淀粉样β蛋白沉积能激活胶质细胞分泌多种炎性细胞因子,诱发炎症反应,进一步促使淀粉样肽前体mRNA的表达和淀粉样β蛋白的沉积,启动炎症和免疫级联反应诱导老年斑的形成。而调心方可显著减少模型大鼠脑内胶质纤维酸性蛋白和淀粉样肽前体mRNA的表达,抑制炎症反应,从而进一步减轻淀粉样β蛋白的大量沉积,其效果优于多萘哌齐。     

β淀粉样蛋白1-40和氯化铝双干预阿尔茨海默病大鼠模型的建立

背景:目前已建立的各种阿尔茨海默病动物模型均存在一定的局限性.目的:以β淀粉样蛋白1-40和氯化铝双干预的方式,建立一种较为理想而实用的阿尔茨海默病大鼠模型.方法:健康雄性老年SD大鼠,经Morris水迷宫训练和筛选后,随机分为模型组,生理盐水组和对照组.采用单侧侧脑室一次性注射β淀粉样蛋白1-40和腹腔连续4周隔天注射3%氯化铝的方式建立阿尔茨海默病大鼠模型.以Morris水迷宫实验和跳台实验检测模型大鼠的行为学变化.以刚果红和苏木精-伊红染色检测大鼠海马淀粉样蛋白沉积以及病理学改变.结果与结论:与对照组及生理盐水组相比,模型组大鼠水迷宫实验逃避潜伏期明显延长(P＜0.05);跳台实验反应时间、基础错误次数和错误次数显著增加(P＜0.05),潜伏期明显缩短(P＜0.05).模型组大鼠海马可见淀粉样蛋白物质沉积,细胞形态发生明显的损伤改变且细胞数量减少.以上结果提示,以β淀粉样蛋白1-40和氯化铝双干预的方式能够成功复制出一种比较理想而实用的阿尔茨海默病大鼠模型.     

雌激素对去卵巢大鼠不同脑区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达的影响

背景：脑中雌激素可调节淀粉样β蛋白前体蛋白的代谢与β淀粉样蛋白的产生。了解雌激素与淀粉样β蛋白前体蛋白代谢以及关键酶淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶的关系，对研究轻度认知障碍、阿尔茨海默病的发病原因具有重要作用。目的：利用大鼠卵巢切除模型观察内外源性雌激素缺乏及补充外源性雌激素对大鼠脑皮质区和海马CA1区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达以及血清雌激素含量的影响。设计：完全随机对照实验。单位：青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所，青岛市市立医院病理科。材料：实验于2003—01／12在青岛大学医学院附属医院脑病防治重点实验室完成。选择健康雌性Wistar大鼠21只，随机分为3组，每组7只。①卵巢切除组：制备大鼠双侧卵巢切除模型。②卵巢切除后补充外源性雌激素治疗组（雌激素组）：卵巢切除后给予苯甲酸雌二醇（1mg／kg），每7d皮下注射1次，共4次。③假手术对照组：手术过程与卵巢切除组相同，但不切除卵巢，不补充雌激素。方法：①第28天时，大鼠在麻醉状态下取脑组织备用，制备冠状切片，用于免疫荧光标记细胞化学染色观察。②激光共聚焦显微镜下观察皮质区、海马CA1区红色荧光标记细胞数量。③体内雌激素水平检测：大鼠眼动脉取血1．5mL，离心取上清备用，运用放射免疫法检测大鼠血清中雌激素含量。主要观察指标：①免疫荧光标记细胞化学法观察大鼠脑皮质区、海马CA1区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶免疫荧光细胞数的变化。②放免法测量大鼠血清雌激素含量的变化。结果：21只大鼠均进入结果分析。①卵巢切除组大鼠皮质区、海马CA1区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶阳性细胞数显著高于对照组和雌激素组[皮质区：（20．00&;#177;5．16），（5．7l&;#177;3．14），（4．00&;#177;4．61）个／视野；海马CA1区：（17．14&;#177;4．45），（6.85&;#177;1．95），（5．14&;#177;5．52）个／视野，P均〈0．011。②卵巢切除组血液雌激素含量显著低于对照组和雌激素组[（5．31&;#177;0．85），（22．94&;#177;9．48），（21．30&;#177;7．62）ng/L，P均〈0．01]。③雌激素组各观察部位淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达阳性细胞数和血液雌激素含量与对照组接近（P均〉0．05）。结论：采用双侧卵巢切除的方法，造成大鼠体内雌激素缺乏，引起大鼠脑内皮质区、海马CA1区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达增多。给予卵巢切除大鼠补充外源性雌激素，其海马CA1区、皮质区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达显著减少，说明体内外雌激素含量的变化可影响大鼠皮质和海马区域淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达。     

雌激素对去卵巢大鼠不同脑区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达的影响

背景脑中雌激素可调节淀粉样β蛋白前体蛋白的代谢与β淀粉样蛋白的产生.了解雌激素与淀粉样β蛋白前体蛋白代谢以及关键酶淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶的关系,对研究轻度认知障碍、阿尔茨海默病的发病原因具有重要作用.目的利用大鼠卵巢切除模型观察内外源性雌激素缺乏及补充外源性雌激素对大鼠脑皮质区和海马CA1区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达以及血清雌激素含量的影响.设计完全随机对照实验.单位青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所,青岛市市立医院病理科.材料实验于2003-01/12在青岛大学医学院附属医院脑病防治重点实验室完成.选择健康雌性Wistar大鼠21只,随机分为3组,每组7只.①卵巢切除组制备大鼠双侧卵巢切除模型.②卵巢切除后补充外源性雌激素治疗组(雌激素组)卵巢切除后给予苯甲酸雌二醇(1 mg/kg),每7d皮下注射1次,共4次.③假手术对照组手术过程与卵巢切除组相同,但不切除卵巢,不补充雌激素.方法①第28天时,大鼠在麻醉状态下取脑组织备用,制备冠状切片,用于免疫荧光标记细胞化学染色观察.②激光共聚焦显微镜下观察皮质区、海马CA1区红色荧光标记细胞数量.③体内雌激素水平检测大鼠眼动脉取血1.5 mL,离心取上清备用,运用放射免疫法检测大鼠血清中雌激素含量.主要观察指标①免疫荧光标记细胞化学法观察大鼠脑皮质区、海马CA1区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶免疫荧光细胞数的变化.②放免法测量大鼠血清雌激素含量的变化.结果21只大鼠均进入结果分析.①卵巢切除组大鼠皮质区、海马CA1区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶阳性细胞数显著高于对照组和雌激素组[皮质区(20.00±5.16),(5.71±3.14),(4.00±4.61)个/视野;海马CA1区(17.14±4.45),(6.85±1.95),(5.14±5.52)个/视野,P均＜0.01].②卵巢切除组血液雌激素含量显著低于对照组和雌激素组[(5.31±0.85),(22.94±9.48),(21.30±7.62)ng/L,P均＜0.01].③雌激素组各观察部位淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达阳性细胞数和血液雌激素含量与对照组接近(P均＞0.05).结论采用双侧卵巢切除的方法,造成大鼠体内雌激素缺乏,引起大鼠脑内皮质区、海马CA1区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达增多.给予卵巢切除大鼠补充外源性雌激素,其海马CA1区、皮质区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达显著减少,说明体内外雌激素含量的变化可影响大鼠皮质和海马区域淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达.     

淀粉样β蛋白前体蛋白17肽对神经保护的作用及其机制

目的:探讨淀粉样β蛋白前体蛋白17肽对神经保护的作用机制,为阿尔茨海默病的治疗提供理论依据。资料来源:应用计算机检索Medline1987/2003关于淀粉样b蛋白前体蛋白研究的文章,检索词为“amyloidprecursorprotein,Alzheimer’sdisease”等,限定文章语言种类为英文;同时检索中国期刊网1999/2004期间的相关文献,检索词为“淀粉样β蛋白前体蛋白,阿尔茨海默病”,限定文章语言种类为中文。并手工查阅相关书籍。资料选择:对资料进行初审,选择与淀粉样β蛋白前体蛋白和阿尔茨海默病相关的研究论著,排除重复的同一研究。资料提炼:共收集到29篇相关文献,其中中文文献12篇,英文文献17篇。资料综合:淀粉样β蛋白前体蛋白17肽无论体内实验还是体外实验均显示对神经细胞的保护作用,它通过上调其他神经营养因子的表达,促进神经细胞存活信号通路相关蛋白的表达,抑制神经细胞凋亡因子的表达,影响神经细胞蛋白质代谢,从而改善模型动物神经系统超微结构的损害,提高模型动物学习记忆能力,达到神经保护的作用。结论:促进神经营养因子的表达是淀粉样β蛋白前体蛋白17肽神经元保护作用的有效机制之一;淀粉样β蛋白前体蛋白17肽对神经细胞存活信号通路的各个步骤均有影响,可以促进细胞存活是淀粉样β蛋白前体蛋白17肽神经元保护作用的另一有效机制。     

丹参大黄合剂对拟老年痴呆大鼠学习记忆能力及海马β淀粉样前体蛋白、早老素1mRNA表达的影响

目的探讨丹参大黄合剂对拟老年性痴呆（AD）大鼠学习记忆能力的影响及其机制。方法用D-半乳糖和三氯化铝联合用药制备拟AD动物模型。从造模的第20天开始,丹参大黄组灌胃给予丹参大黄合剂,连续70d。给药结束后,通过方形水迷宫、逆转录聚合酶链反应来观察丹参大黄合剂对拟AD模型大鼠学习记忆和海马β淀粉样前体蛋白（APP）、早老素1（PS1）基因表达的影响。结果丹参大黄合剂可以缩短拟AD模型大鼠水迷宫测试的潜伏期（P〈0.05）,减少其错误次数（P〈0.05）,同时降低海马APP、PS1 mRNA的表达（P〈0.05）。结论丹参大黄合剂能提高拟AD大鼠学习、记忆能力,可能与降低APP、PS1 mRNA的表达有关。