卡泊三醇对鼠黑素瘤B16细胞维生素D受体表达的影响

目的:评价卡泊三醇(CPT)对鼠黑素瘤B16细胞维生素D受体(VDR)表达的影响.方法:用不同浓度CPT干预鼠黑素瘤B16细胞24h后,分别用荧光定量PCR法和Western印迹法检测B16细胞VDRmRNA和蛋白质表达情况.结果:与空白对照组相比,CPT浓度为10μg/mL时B16细胞中VDRmRNA和蛋白含量无明显变化(P＞0.05).在102μg/mL和103μg/mL时VDRmRNA和蛋白水平明显高于对照组,且103μg/mL组高于102μg/mL组,有统计学差异(P＜0.05).结论:CPT对鼠黑素瘤B16细胞VDR的mRNA转录和蛋白质表达有剂量依赖性的促进作用.     

皮肤肿瘤

20121696卡泊三醇对小鼠黑素瘤B16细胞增殖及凋亡的影响/叶蓉(北京大学深圳医院皮肤科),周亮,胡小平…∥中国皮肤性病学杂志.-2012,26(2).-106～108不同浓度卡泊三醇(CPT)作用于体外培养的小鼠黑素瘤B16细胞24h,在倒置显微镜下观察细胞密度及形态,采用MTT比色法和AnnexinV/PI染色法分别检测细胞增殖抑制率和凋亡率。结果:与对照组相比,     

栀子苷、黄芩苷、华蟾酥毒基对体外培养的B16恶性黑素瘤细胞细胞增殖的抑制作用

目的观察栀子苷、黄芩苷、吴茱萸内酯、穿心莲内酯、华蟾酥毒基等5种中药单体成分抗恶性黑素瘤的活性。方法以系列浓度的上述5种药物作用体外培养的B16恶性黑素瘤细胞72h,顺铂为对照,MTT法测定细胞增殖抑制率。结果在5种中药单体中,栀子苷、黄芩苷、华蟾酥毒基对体外培养的B16恶性黑素瘤细胞增殖有抑制作用。其中栀子苷对细胞增殖的抑制率呈量效关系,最大抑制率达62.9%;黄芩苷仅在最高浓度时(80μg/mL)对细胞增殖有抑制作用,抑制率为42.8%;华蟾酥毒基浓度≥20μg/mL时表现出对细胞增殖的抑制作用,但无明显量效关系,最大抑制率仅为24.1%(40μg/mL);80μg/mL的栀子苷对细胞增殖的抑制作用与2μg/mL的顺铂无明显差异;穿心莲内酯、吴茱萸内酯则对细胞增殖无明显影响。结论栀子苷、黄芩苷、华蟾酥毒基具有抗恶性黑素瘤的作用,可以做为治疗恶性黑素瘤的备选药物。     

芍药苷对人黑素瘤细胞株A375增殖凋亡的影响

目的:研究不同浓度芍药苷(PF)对人黑素瘤细胞A375增殖抑制及早期凋亡的影响.方法:将体外培养的人黑素瘤细胞株A375分为6组,5个实验组分别加入不同浓度PF(2、1、0.5、0.1、0.01 mg/mL),对照组不加PF.光镜下观察细胞密度及形态、MTT法测定细胞增殖抑制率,Amnexin V/PI染色法检测细胞早期凋亡率.结果:镜下观察可见随着PF浓度的增加,黑素瘤细胞株A375数量降低,贴壁能力渐差,细胞形态渐圆钝,甚至出现皱缩.与对照组相比,不同浓度PF处理A375细胞24h、48h和72 h后,PF对细胞有浓度依赖性的增殖抑制作用(P＜0.05),但未见明显的时间依赖性(P＞0.05).不同浓度PF干预24h时A375细胞的早期凋亡率,对照组和各实验组差异无统计学意义(P＜0.05).结论:PF能抑制人黑素瘤细胞株A375的增殖,这种抑制作用呈浓度依赖性而非时间依赖性,但对A375细胞早期凋亡率无明显影响.     

多西紫杉醇对黑素瘤B16F10细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨多西紫杉醇对黑素瘤B16F10细胞增殖及凋亡的体外作用.方法:以不同浓度多西紫杉醇处理B16F10细胞,MIT法检测细胞增殖速度,倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞周期分布,TUNEL法检测原位细胞凋亡.结果:多西紫杉醇呈剂量和时间依赖性抑制细胞增殖.以多西紫杉醇10μmol/L处理B16F10细胞,24h即可出现细胞形态改变,G<,2/M期阻滞,但凋亡细胞数目增多不明显(P<0.05);作用48h凋亡细胞数目明显增多(P0.05).结论:多西紫杉醇具有抑制B16F10细胞增殖、诱导细胞凋亡等作用,细胞凋亡的发生迟于周期阻滞.     

大蒜油对黑素瘤B16细胞增殖、凋亡及其血管内皮生长因子表达的影响

目的研究大蒜油对黑素瘤B16细胞增殖、凋亡及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其抑制恶性黑素瘤进展和转移的机制。方法实验分对照组和大蒜油处理组2组。噻唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度大蒜油对黑素瘤B16细胞增殖活性的影响;原位末端转移酶标记法(TUNEL)原位检测黑素瘤B16细胞凋亡情况;免疫组化法测定黑素瘤B16细胞P16和C-myc的表达率;RT-PCR和Western Blot分别检测黑素瘤B16细胞VEGF信使核糖核酸(m RNA)和蛋白质表达。结果在50~100 mg/L范围内,大蒜油可显著抑制黑素瘤B16细胞增殖(P0.01),且呈剂量、时间依赖性。TUNEL染色显示,100 mg/L大蒜油诱导48 h后,黑素瘤B16细胞的凋亡率明显高于对照组(P0.01)。免疫组化检测表明,100 mg/L大蒜油组P16蛋白的表达增强,C-myc蛋白的表达率下降,与对照组相比较差异均有统计学意义(P0.01)。100 mg/L大蒜油处理48 h后,VEGF m RNA和蛋白质的表达显著下降,与对照组相比有统计学意义(P0.05)。结论大蒜油可抑制黑素瘤B16细胞增殖,并能诱导其凋亡,其作用机制可能与下调C-myc蛋白的表达、上调P16蛋白的表达有关;大蒜油还可下调黑素瘤B16细胞VEGF的表达,从而抑制肿瘤细胞生长和扩散。     

大蒜素对小鼠黑素瘤细胞B16-F1增殖和凋亡的影响

目的探讨大蒜素对小鼠黑素瘤细胞B16-F1增殖及凋亡的影响。方法传代培养小鼠黑素瘤B16-F1细胞,使细胞浓度为5×104个/m l,分别加入不同浓度(3,6,9,12,15μg/m l)的大蒜素细胞培养液。培养12,24,36,48 h后,噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存活性,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,定量RT-PCR法检测ras基因的表达水平。结果3~15μg/m l的大蒜素对B16-F1细胞均有杀伤作用,当大蒜素的浓度为3~6μg/m l,诱导肿瘤细胞凋亡,且呈浓度时间相关性。当大蒜素的浓度较高时,细胞呈中毒反应,凋亡作用不明显。3~15μg/m l的大蒜素下调ras基因的表达,并且呈显著的浓度相关性。结论大蒜素对小鼠黑素瘤B16-F1细胞有杀伤作用,可以明显诱导肿瘤细胞的凋亡,并且对肿瘤细胞ras基因的表达均有不同程度的下调作用。     

雷公藤内酯醇抑制A375细胞增殖和迁移及CCR7表达的体外实验

目的观察雷公藤内酯醇在体外抑制人黑素瘤细胞A375增殖和迁移的能力及对细胞表面趋化因子受体CCR7表达的影响情况,初步分析其作用机制。方法用CCK-8比色试剂盒检测雷公藤内酯醇对A375细胞增殖的作用,Transwell微孔隔离小室迁移实验检测雷公藤内酯醇对A375细胞体外迁移能力的影响,Western blot法检测雷公藤内酯醇对A375细胞CCR7蛋白表达的影响。结果雷公藤内酯醇以剂量依赖方式抑制A375细胞的增殖,24h的IC50值为0.20μg/mL;雷公藤内酯醇能显著地抑制A375细胞的体外迁移能力(P0.01),侵袭抑制率约为82.84%;经不同浓度雷公藤内酯醇(0μg/mL,0.2μg/mL和0.4μg/mL)处理后,A375细胞中CCR7蛋白表达呈明显下降趋势(P0.05)。结论雷公藤内酯醇具有抗A375细胞增殖和体外迁移能力的作用,其机制可能与下调其表面趋化因子受体CCR7的表达相关,并且该作用呈一定的浓度依赖性。     

大黄素对黑素瘤B16F10细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的：明确大黄素对黑素瘤B16F10细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法：10、20、40、60、80 μmol/L的大黄素作用于B16F10细胞24 h后，Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法检测细胞增殖；倒置显微镜下观察细胞形态及数目变化；细胞划痕实验和Transwell迁移实验分别检测各组细胞划痕愈合率和细胞迁移数目；流式细胞术检测细胞周期；TUNEL法检测细胞凋亡情况；Western blot测定凋亡相关蛋白caspase-3的表达。结果：与空白对照组比较，不同浓度（10、20、40、60、80 μmol/L）的大黄素均可抑制B16F10细胞的增殖（P＜0.05），其抑制率呈浓度依赖和时间依赖关系，并且将细胞阻滞于G2/M期。在显微镜观察下细胞呈现出凋亡状态，不同浓度的大黄素组凋亡相关蛋白caspase-3的表达水平升高。结论：大黄素可有效抑制黑素瘤B16F10细胞增殖，抑制细胞迁移能力，并能促进细胞凋亡。     

普鲁士蓝纳米粒子光热治疗皮肤黑素瘤的实验观察

目的探讨普鲁士蓝纳米粒子(PB NPs)光热治疗皮肤黑素瘤的疗效与安全性。方法 CCK-8法测定普鲁士蓝纳米粒子光热治疗前后对皮肤黑素瘤细胞B16F10的增殖抑制作用。用C57BL/6小鼠建立皮肤黑素瘤模型,并将其随机分为对照组、PB NPs组、激光组和联合治疗组。治疗过程中,使用热成像仪观察对照组和联合治疗组肿瘤区域的温度变化。各组小鼠均连续观察10d。每日测量瘤体大小,比较四组瘤体体积变化。治疗后第10天,对照组和联合治疗组分别取小鼠的心肝脾肺肾进行HE染色,比较PB NPs对小鼠内脏毒副作用的影响。结果 CCK-8法测得B16F10细胞分别与不同浓度PB NPs(250μg/mL,125μg/mL,62μg/mL,31μg/mL,16μg/mL,8μg/mL,0μg/mL)培养24h的细胞增殖,每组细胞存活率都在70%以上。808nm NIR激光强度1W/cm~2照射5min治疗B16F10细胞后,250μg/mL PB NPs细胞死亡率为71.80%。治疗10d后,联合治疗组小鼠瘤体体积明显小于其余三组小鼠瘤体体积;各组小鼠瘤体体积两两进行比较,联合治疗组小鼠瘤体消失,且差异均有统计学意义(P0.05);HE染色观察到普鲁士蓝纳米粒子对小鼠脏器无明显毒副作用。结论普鲁士蓝纳米粒子联合光热治疗可以有效安全治疗皮肤黑素瘤。     

黑素瘤细胞中脂肪酸结合蛋白7的表达及其与细胞增殖、凋亡的关系

目的探讨黑素瘤细胞中脂肪酸结合蛋白7(FABP7)的表达及其与细胞增殖、凋亡的关系。方法采用免疫组织化学方法分析临床45例良性痣(为皮内痣)、60例原位黑素瘤、60例转移性黑素瘤标本中FABP7的表达。取组织细胞进行体外培养,选择FABP7特异性小干扰RNA(siRNA)降低FABP7的表达,然后检测黑素瘤细胞的增殖及凋亡情况。结果良性痣细胞浆及细胞核中FABP7的表达均高于原位黑素瘤、转移性黑素瘤(P<0.05),原位黑素瘤和转移性黑素瘤细胞浆及细胞核中的FABP7表达差异无显著性(P>0.05)。下调FABP7表达可减少原位黑素瘤细胞31.0%及转移性黑素瘤细胞81.0%的增殖性,下调FABP7表达对原位黑素瘤及转移性黑素瘤细胞的凋亡率无明显影响。结论良性痣中FABP7表达比黑素瘤高,FABP7对体外培养黑素瘤细胞增殖有影响。     

FK506对培养的人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响

目的探讨FK506对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法体外人A375黑素瘤细胞培养,MTT法测定FK506对黑素瘤细胞增殖的影响,NaOH法测定FK506对黑素合成的影响。结果浓度为101~102nmol/L的FK506对黑素瘤细胞增殖无影响,103~104nmol/L的FK506对黑素瘤细胞增殖有抑制作用,但是101~104nmol/L的FK506对黑素瘤细胞的黑素合成均有促进作用,其中以101~103nmol/L的FK506对黑素合成的促进作用最为显著。结论FK506能够直接促进培养的黑素瘤细胞的黑素合成。     

金黄色葡萄球菌肠毒素A诱导黑素瘤B16细胞凋亡的体外研究

目的 探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)诱导黑素瘤B16细胞凋亡.方法 用不同浓度的SEA(0.001、0.01、0.1、1 μg/mL)作用于体外培养的B16细胞,采用荧光法观察SEA诱导B16细胞凋亡的形态学改变,用末端标记法(TUNEL)计算细胞凋亡率,用流式细胞仪分析B16细胞的凋亡周期.结果 三种方法均显示SEA对小鼠B16细胞有明显的诱导凋亡作用,SEA在0.01 μg/mL浓度时B16细胞的凋亡率最高.结论 超搞原SEA对体外培养的小鼠B16细胞有诱导凋亡的作用.     

姜黄素对小鼠角质形成细胞核转录因子κB及其抑制因子IκBα的影响

目的观察姜黄素对小鼠角质形成细胞291增殖的影响,并探讨姜黄素对核转录因子κB(NF-κB)及其抑制因子IκBα的干预作用。方法常规培养291细胞至90%融合,分别加入5,10,15,20,25μmol/L的姜黄素,继续培养3h和6h,MTT法检测不同浓度的姜黄素作用不同时间,291细胞增殖的情况;在常规培养至90%融合的291细胞中,分别加入肿瘤坏死因子(TNF-α)20ng/mL和/或姜黄素20μmol/L,继续培养3h,显微镜下观察细胞形态和活性;采用MTT法检测细胞吸光度;Western blot法分析各组细胞NF-κB及IκBα蛋白的表达情况。结果姜黄素对291细胞增殖抑制作用随剂量增大、时间延长而增加;显微镜下可见,姜黄素作用于291细胞3h后,细胞收缩,形态变圆,单个视野死亡细胞数较空白组和TNF-α组显著增加,姜黄素组细胞吸光度显著下降(P<0.05);Western blot实验结果显示,姜黄素组NF-κB蛋白表达显著下降,IκBα蛋白的表达显著升高(P<0.05);而TNF-α组NF-κB蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论姜黄素抑制角质形成细胞增殖的机制,可能是抑制NF-κB表达,增加IκBα表达。     

18味中药乙醇提取物对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素生成的影响

目的研究中药乙醇提取物对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法以MTT法测定培养的B16黑素瘤细胞的增殖活性:NaOH法测定黑素生成量;体外氧化多巴反应方法测定酪氨酸酶活性。结果与空白对照组相比,18种中药乙醇提取物中,有9种提取物对1种以上指标有显著性作用(P<0.05或P<0.01)。沙苑子、甘草、山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、黄芩、黑芝麻、墨旱莲可明显促进B16黑素瘤细胞增殖,甘草、山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、何首乌、黑芝麻、墨旱莲明显增加黑素含量,山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、黑芝麻、墨旱莲明显增加酪氨酸酶活性,山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、黑芝麻和墨旱莲的提取物对3种指标均有显著性作用(P<0.05或P<0.01)。结论山慈姑等6种中药的乙醇提取物具有促进黑素细胞增殖和合成黑素的作用。     

复方甘草酸苷注射液对B16鼠黑素瘤细胞黑素生成的影响

目的：研究复方甘草酸苷注射液对B16鼠黑素瘤细胞黑素的影响及其机制。方法：通过CCK8、流式细胞术、NaOH裂解法、多巴氧化法和Western-blotting技术检测复方甘草酸苷对B16鼠黑素瘤细胞生长,黑素合成与转运及酪氨酸酶活性和蛋白含量的影响。结果：(1) 复方甘草酸苷注射液浓度低于30μl/ml,对B16鼠黑素瘤细胞生长无明显影响;浓度大于50μl/ml,细胞生长速率减慢;浓度达到500μl/ml,细胞生长明显受抑制。(2) 浓度在10μl/ml到200μl/ml之间,黑素的合成和酪氨酸酶的活性均增加。黑素的合成在复方甘草酸苷注射液浓度为50μl/ml时增加最明显;且酪氨酸酶活性呈浓度依赖性增加,在浓度为100μl/ml和150μl/ml时达到最高。结论：复方甘草酸苷注射液有促进黑素瘤细胞黑素的合成与转运及增加酪氨酸酶活性的作用。     

槲皮素对过氧化氢诱导A375细胞氧化损伤的保护机制研究

目的探讨槲皮素对人A375黑素瘤细胞的氧化损伤是否具有保护作用。方法体外培养人A375黑素瘤细胞,随机分为空白对照组、H2O2损伤组、不同浓度槲皮素预处理组(槲皮素终浓度为5、10、25、50μmol/L)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)显色法测定细胞增殖,NaOH法测定黑素含量,流式细胞仪(Annexin V/PI法)测定细胞早期凋亡百分率。结果与H2O2损伤组相比,25μmol/L槲皮素组对细胞增殖有促进作用,其余槲皮素各组与H2O2损伤组相比差异无统计学意义(P0.05);与H2O2损伤组相比,各浓度的槲皮素均对细胞的黑素合成有促进作用(P0.05)。各槲皮素预处理组细胞早期凋亡百分率均低于H2O2损伤组(P0.05)。结论槲皮素可以减轻H2O2对人黑素瘤细胞造成的氧化损伤和早期凋亡。     

T-钙黏蛋白对小鼠皮下氮烯咪胺耐药黑素瘤B16F10细胞株的影响

目的观察T-钙黏蛋白(cadherin)对小鼠皮下氮烯咪胺(dacarbazine,DTIC)耐药黑素瘤B16F10细胞株的影响。方法通过体外分步诱导法诱导B16F10氮烯咪胺耐药细胞株(DTIC-R B16F10)。采用CCK-8法检测DTIC-R B16F10细胞的增殖情况。将T-cadherin基因转染至DTIC-R B16F10细胞。免疫组织化学检测转染后T-cadherin的表达情况。培养DTIC-R B16F10细胞,分为6组:对照组、pEGFP-N1组、T-cadherin组、DTIC组、pEGFP-N1联合DTIC组和T-cadherin联合DTIC组。通过CCK-8法和Transwell小室实验检测T-cadherin与氮烯咪胺联合对DTIC-R B16F10细胞活性和迁移的影响。建立荷瘤小鼠模型,观察T-cadherin对小鼠皮下注射DTIC-R B16F10细胞后肿瘤生长的影响。采用析因分析法评价T-cadherin联合氮烯咪胺对细胞活性、迁移和小鼠皮下瘤生长的影响。结果DTIC-R B16F10组、B16F10组与DTIC-R B16F10+DTIC组A值差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学检测表明细胞表达T-cadherin。T-cadherin联合DTIC组细胞活性、迁移细胞数及肿瘤重量均显著低于其他组(P<0.05)。析因分析显示,T-cadherin联合氮烯咪胺对DTIC-R B16F10的细胞活性、迁移和小鼠皮下瘤生长的抑制有协同作用。结论T-cadherin可抑制黑素瘤小鼠皮下瘤的生长,增加黑素瘤对氮烯咪胺的敏感性。     

鬼臼毒素纳米脂质载体通过非Caspase依赖途径诱导VK2/E6E7细胞凋亡机制的研究

目的:探讨鬼臼毒素纳米脂质载体(POD-NLC)诱导人永生化阴道上皮细胞(VK2/E6E7)凋亡的作用及机制。方法:取对数期生长VK2/E6E7细胞,分别加入POD-NLC和Caspase抑制剂Z-VAD-FMK共同培养24小时。实验分为4组:A组:空白对照组;B组:0.25μg/mL POD-NLC+Caspase抑制剂组;C组:1μg/mL POD-NLC+Caspase抑制剂组;D组:空白NLC+Caspase抑制剂组。采用流式细胞仪检测ROS水平,qPCR检测AIF mRNA表达,蛋白印迹检测各组细胞AIF、cyt-C蛋白表达。结果:B组、C组均可以上调ROS、AIF、cyt-C水平,与A组及D组相比均有统计学差异(P值均<0.05);B组与C组AIF mRNA及AIF蛋白表达无统计学差异(P值均>0.05);ROS、cyt-C各组间比较均有统计学意义(P值均<0.05)。结论:鬼臼毒素纳米脂质载体可以通过非Caspase依赖途径诱导永生化阴道上皮细胞凋亡。