胎儿内耳膜迷路蛋白的提取及电泳分析

使用含０．１％十二烷基磺酸钠（ＳＤＳ），５％二巯基乙醇（β－ＭＥ）和１０％甘油的提取液制备 胎儿内耳膜迷路蛋白，并采用十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）技术分析其蛋白 组成。结果：胎儿内耳膜迷路蛋白 Ｍｒ为 １３６ ０００、６８ ０００、６２ ０００、５５ ０００、５０ ０００、４３ ０００、３２ ０００、 ３０ ０００等。结果为进一步分析，纯化内耳特异性抗原，为临床采用免疫印迹法检测抗内耳组织自身 抗体提供了可能。     

豚鼠自身免疫性梅尼埃病相关抗原相对分子质量68000蛋白的二维电泳和质谱分析

目的:探寻导致豚鼠自身免疫性梅尼埃病模型的内耳组织抗原成分中相对分子质量为68 000的蛋白质成分.方法:双向凝胶电泳方法分离豚鼠内耳组织抗原成分,用ImageMaster图像分析软件选择相对分子质量为68 000的蛋白质点,对这些蛋白质点进行质谱分析,通过Mascot软件查询Swiss-prot数据库,利用PathwayStudio软件对查询到的蛋白进行生物信息学分析并选取蛋白进行免疫印迹法验证.结果:获得重复性和分辨率都较好的双向电泳图谱,软件分析相对分子质量为68 000蛋白共获得22个蛋白质点;质谱分析后查询数据库鉴定得到13个蛋白质.这些蛋白分别与免疫、凋亡和分化等功能相关,其中波形蛋白从相对分子质量、Mascot评分和蛋白功能等方面综合评估可能为相对分子质量 68 000蛋白中引起豚鼠自身免疫性梅尼埃病的主要蛋白.结论:成功获得豚鼠自身免疫性梅尼埃病模型主要内耳抗原成分中相对分子质量 68 000 蛋白的双向凝胶电泳图谱,并应用质谱技术鉴定蛋白质点.波形蛋白可能为相对分子质量 68 000 蛋白中引起豚鼠自身免疫性梅尼埃病的主要蛋白.     

中国龙虾过敏原的分离纯化研究

目的:分离、纯化和鉴定中国龙虾的主要过敏原。方法:利用传统的硫酸铵分级沉淀和等电点沉淀方法对过敏原粗提夜进行初分,在蛋白核酸检测仪检测控制下,用DEAE-52离子交换层析柱进行阶段洗脱和Sepha-dex G-100凝胶柱层析,免疫斑点法(Dot-ELISA)确定其免疫活性部分。结果:中国龙虾过敏原蛋白的硫酸铵沉淀范围在35%～60%之间,pH=4.7、4.5时的等电点沉淀蛋白质有明显的过敏原活性;离子交换层析中的具过敏原活性蛋白峰的蛋白条带分子量为15 000、20 700、34 000、60 000和83 200;Sephadex G-100凝胶层析后具过敏原活性蛋白峰SDS-PAGE显示只有34 000分子量的蛋白条带,纯度为91.5%。结论:分离、纯化鉴定出中国龙虾分子量为34 000的主要过敏原,对于过敏原的标准化、提高过敏性疾病诊治水平具有重要的意义。     

猪囊尾蚴蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦电泳分析

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和薄层水平等电聚焦电泳(IEF)对猪囊尾蚴囊液、头节囊壁和全囊的可溶性蛋白质进行了分析比较。PAGE结果表明,囊液和头节囊壁各分离出15条蛋白带,全囊分离出16条蛋白带。在激光光密度扫描中分别可见4个主峰。IEF结果表明,囊液分离出28条蛋白带,头节囊壁和全囊分离出34条蛋白带。在激光光密度扫描中分别可见9,11、11个主峰。     

人抗黏病毒蛋白-MxA基因克隆及在大肠杆菌中的表达

目的克隆人抗黏病毒蛋白-MxA基因,构建其原核表达载体并进行表达、纯化、活性鉴定,为深入开展该蛋白功能的研究奠定基础。方法从IFN-β诱导的A549细胞系中提取总RNA,通过RT-PCR技术扩增出MxA全长cDNA,克隆于pUC119载体,酶切鉴定后并经测序证实序列正确,再克隆于pET-32a（＋）载体上构建表达载体pET-32a（＋）-MxA,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达并优化诱导条件,通过NTA-Agarose亲和层析和割胶电洗脱法获取纯化MxA蛋白,用SDS-PAGE电泳分析表达产物,并通过对病毒VSV的抑制作用鉴定其活性。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示RT-PCR扩增出两条片段,大小同预计片段相符,并经测序证实与公布的MxA基因序列一致;重组载体转化菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳初步鉴定,目的蛋白约占总菌体蛋白的25%,与预计的分子量91kd相一致。用NTA-Agarose亲和层析法可获得纯度〉95%的目的蛋白,割胶电洗脱回收法可获得纯度〉90%的目的蛋白。结论克隆了人抗黏病毒蛋白-MxA基因,克隆基因在大肠杆菌中获得了较高水平的表达,并通过两种方法获得了该蛋白的纯化物。     

大鼠足阳明胃经循经部位发现特异蛋白电泳条带的实验研究

目的:通过蛋白质凝胶电泳技术,寻找大鼠循经部位与非循经部位蛋白质条带的差异,证实循经部位是否存在特异蛋白.方法:在大鼠足阳明胃经循经部位与非循经部位选取皮下结缔组织,提取蛋白质制备电泳样品,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,观察二者蛋白电泳条带差异.结果:在电泳图谱中可观察到大鼠循经部位存在特异蛋白电泳条带(非循经部位不存在).结论:初步证明大鼠足阳明胃经循经部位存在特异蛋白质.     

狗牙髓和小肠碱性磷酸酶的电泳分离

作用正丁醇抽提法从狗牙髓和小肠粘膜制备碱性磷酸酶，并探讨了这两种组织来源的碱性磷酸酶的电泳分离方法。结果表明牙髓碱性磷酸酶和小肠碱性磷酸酶的酶染色带谱显不同，前呈２条带，后呈４条带。两种碱性磷酸酶制剂经神经氨酸酶处理后均表现为迁移率碱小。在电泳系统中加入０．５％Ｔｒｉ－ｔｏｎＸ－１００，可显提高酶染色带的分辨力。作还比较了圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和平板琼脂糖凝胶电泳的效果，结果表明，圆盘     

长白山白眉蝮蛇毒类凝血酶的分离纯化

目的 建立一种分离纯化长白山白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶的方法.方法 将长白山白眉蝮蛇蛇毒溶解后离心,取上清进行阴离子交换层析,所得蛋白进行分子筛层析.提纯的蛋白用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定及相对分子量测定.测定酶的N-末端氨基酸序列.结果 经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳呈单一区带,相对分子量为35.5kDa.N-末端氨基酸序列分析表明其N-末端氨基酸序列与立止血中巴曲酶N-末端氨基酸序列基本一致.提取率约为5mg类凝血酶/g蛇毒.结论 用上述方法可制得高纯度的类凝血酶.     

乙醇固定对肿瘤细胞的蛋白质提取及Western印迹的影响

为研究乙醇固定后肿瘤细胞的蛋白质提取及Western印迹的可行性。于低温（4℃）或常温条件下裂解经75％冷乙醇固定的肿瘤细胞（HL－60细胞和Molt-4细胞），提取细胞蛋白质进行SDS－PAGE凝胶电泳和Western印迹。结果显示经预处理后的肿瘤细胞中提取的蛋白质不论是在SDS－PAGE后的考马斯亮蓝染色，还是转膜后的Western印迹均可得到可分析的蛋白质条带。提示75％冷乙醇固定的肿瘤细胞仍适用于SDS-PAGE和Western印迹。并可结合流式细胞术对肿瘤细胞蛋白质进行细胞周期定性、定量和定时相的同步分析。     

Serum protein patterns in adenocarcinoma of breast and rectum

Serum protein patterns were studied in 27 cases of adenocarcinoma of breast and rectum by polyacrylamide gel disc electrophoresis. Pretreatment and post-treatment cases showed different protein patterns. The increased number of bands in zone A in pretreatment rectal cancer cases decreased after chemotherapy. Thus, the number and position of bands before and after treatment and in different types of cancer may be used in diagnosis and prognosis of the disease.     

安徽地区猪囊尾蚴蛋白质理化学及免疫学分析

应用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胺电泳、化学染色和免疫印迹技术对安徽地区猪囊尾蚴蛋白质进行了理化学和免疫学分析。猪囊尾蚴蛋白质至少有２８条区带，其中有１２条主带，在１２条主带中有７条能被囊虫病人血清识别，其分子量分别为９２、６６、５４、５１、３４．５、３０和１２ｋＤ，其中除３４．５ｋＤ为脂蛋白，其余均为糖蛋白。３０ｋＤ囊尾蚴抗原分子与肝吸虫病和日本血吸虫病血清有交叉反应，其他６个主要血清学抗原与上述吸虫病     

血链球菌血链素的分离纯化及其化学组成的测定

目的:分离纯化血链球菌血链素,并对其组成成分进行检测。方法:通过羟基磷灰石(HA)柱层析、SephadexG-150凝胶柱层析、中空纤维柱超滤脱盐、浓缩,分离并纯化血链素,SDS-PAGE检测其纯度及亚基分子量并检测其分子量,同时以紫外线吸收法及苯酚-硫酸法检测血链素蛋白及糖含量。结果:血链素分子量为180kDa,亚基分子量为110kDa和70kDa,其中蛋白含量为87.51%,糖含量为12.49%。结论:纯化的血链素是一种由两个亚基组成的糖蛋白。     

虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测研究

目的分析虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测效果,建立一种用于虫草属的DNA分子指纹高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测方法。方法分别对虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶电泳的凝胶终浓度、胶电泳步骤、胶固定方案、胶染色方法、胶显色步骤进行分析,确定利于虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶DNA多态性展现的方案。结果确定虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测方案,分别为聚丙烯酰胺凝胶浓度为6%、银染染色液为0.3%的AgNO3、胶显色步骤中显影液为强碱NaOH和0.5%的甲醛溶液,且NaOH的浓度为2%。结论本研究所建立的银染检测及显带体系适用于虫草属基因组聚丙烯酰胺凝胶电泳研究。     

蛋白质转移电泳技术在单克隆抗体检测中的应用

抗原(粗制)经聚丙烯胺凝胶电泳分离后,将凝胶上的蛋白质条带经电泳转移到硝酸纤维素膜上。在硝酸纤维素膜上抗原与加入的相应单克隆抗体结合,再与辣根过氧化物酶标记的第二抗体反应。然后通过酶对底物的催化作用,在抗原位置上出现棕褐色条带,证明了单克隆抗体与相应抗原的特异结合。     

脑脊液寡克隆区带检查对儿童病毒性脑炎的诊断价值

为探讨脑脊液寡克隆区带检查对儿童病毒性脑炎的诊断价值，采用丙烯胺凝胶电泳法对４２例病毒性脑炎患儿脑脊液寡克隆区带进行了观测。以电泳谱上γ 球蛋白的区带数及均匀程度作阳性、阴性判定。结果４２例患儿脑脊液中３２例阳性，阳性率７６．１９％；１０例阴性，阴性率２３．８１％。提示：脑脊液寡克隆区带检查在儿童病毒性脑炎的诊断中有参考价值。     

悬铃木属花粉的纯化及免疫活性分析

目的对悬铃木属花粉变应原进行初步纯化并对其主要成分进行免疫学活性分析。方法悬铃木属花粉变应原粗制浸液经过凝胶过滤层析，收集主要蛋白质，SDS-PAGE检测各段蛋白质分子量，并用免疫印记法分析7例悬铃木属花粉过敏的支气管哮喘患者血清。结果悬铃木属花粉变应原粗制液经层析柱洗脱得两个洗脱峰，第一峰及第二峰升段富含蛋白，而第二峰降段蛋白含量甚微，收集各段进行SDS—PAGE。出现6条蛋白区带，分子量分别为7、50、35、39、22和16kd。第一峰主要含22-71kd蛋白质，峰2升段以14-16kd之蛋白质为主。对7例花粉过敏的支气管哮喘患者血清免疫印记分析可见4条sIgG反应带，蛋白分子量为50、39、22和16kd，病人血清结合百分比分别为100％、28．57％、57．14％和14．29％。结论悬铃木属花粉变应原含有6种主要蛋白成分，第一峰的50、39和22kd的蛋白质为主要致敏组分，第二峰升段的16kd蛋白质为次要致原。     

穿心莲种子蛋白质电泳鉴定的初步研究

目的探讨SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对穿心莲种子进行鉴别的可行性,为穿心莲种子鉴别及育种研究提供科学依据。方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对广东省几种不同来源和不同采收期的穿心莲种子进行可溶性蛋白质电泳研究。结果不同产地的穿心莲种子蛋白质电泳图谱之间在谱型和谱带的强弱、蛋白质相对含量上均有一定的差异,不同采收期穿心莲种子蛋白质电泳在蛋白质谱带的强弱上有一定差异。结论聚丙烯酰胺凝胶电泳技术可用于穿心莲种子鉴定。     

胰岛素受体的分离纯化及其酪氨酸蛋白激酶特性的研究

本文利用差速离心,2%Triton X-100增溶,伴刀豆球蛋白A-琼脂糖,胰岛素-亲和胶及麦胚凝集素-亲和胶亲和层析分离纯化了人胎盘的胰岛素受体。纯化的受体经圆盘电泳及HPLC凝胶过滤得单一峰。SDS-电泳显示分子量分别为135000及90000的两条带。纯受体有自身磷酸化作用,且对外源性底物呈现酪氨酸蛋白激酶活性。有意义地是纯化的受体的磷酸化可受促癌剂促癌因子抑制。     

人肌肉乙酰胆碱受体的初步纯化及其生物学鉴定

目的 :从人肌肉中提取具有免疫活性的乙酰胆碱受体蛋白 ,为复制MG动物模型提供抗原。方法 :新鲜股四头肌制成匀浆后 ,采用TritonX - 1 0 0提取 ,以SephadexG - 1 50柱凝胶层析 ,初步纯化 ;然后采用紫外分光光度法及SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,检测蛋白的含量和纯度 ;应用主动免疫的方法 ,检测AchR的免疫学特性。结果 :此纯化物的蛋白含量为 3 .2mg/ml;SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,呈一条 44kD的主要蛋白带 ;此纯化物成功地复制出了MG动物模型。结论 :该方法提取的乙酰胆碱受体蛋白 ,具有免疫活性 ,可以作为复制MG动物模型的抗原     

肺癌组织蛋白质组双向凝胶电泳方法的建立和优化

目的建立和优化肺癌组织蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术,获取高分辨率、重复性好的蛋白质2-DE图谱。方法提取肺癌组织蛋白,以固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦电泳,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)为第二向,在上述过程中分别对蛋白提取、等电聚焦电泳和凝胶染色进行控制和优化,利用ImageMaster 2Dplatinum 6.0分析软件获得二维凝胶图像。结果实验重复3次,共获15幅二维凝胶图像,平均蛋白质点数为1 137±57;随机选取1例标本的2幅图像,利用软件对2幅图像中蛋白点进行匹配,匹配率为90.4%。结论优化肺癌组织蛋白质组2-DE技术可获得高分辨率、重复性好的蛋白质2-DE图谱,为开展肺癌组织蛋白质组学研究打下基础。