氧化砷通过线粒体跨膜电位下降与激活Caspase-3诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡

目的　探讨氧化砷 (As2 O3)是否诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡与其可能机制。方法　以两株多发性骨髓瘤细胞系RPMI82 2 6和U2 66为体外模型。以细胞形态学观察、流式细胞仪检测亚G1期细胞含量以及DNA凝胶电泳判定细胞凋亡。通过检测胞内Rhodamine12 3染色强度来判定线粒体跨膜电位。通过Western印迹分析蛋白表达。结果　 0 1- 0 5μmol LAs2 O3抑制RPMI82 2 6与U2 66细胞系生长 ,2 0 μmol LAs2 O3 诱导两株细胞凋亡 ,而 1 0μmol LAs2 O3抑制细胞生长同时也诱导部分细胞凋亡。As2 O3诱导的细胞凋亡伴随线粒体跨膜电位下降与细胞凋亡 ,而二巯基苏糖醇 (二巯基还原剂 )则部分抑制以上效应。虽然全反式维甲酸 (ATRA)诱导RPMI82 2 6细胞凋亡 ,但是它与As2 O3无协同效应。结论　不同深度As2 O3可抑制多发性骨髓瘤细胞生长与诱导细胞凋亡。线粒体是As2 O3 诱导细胞凋亡的重要且共同的“靶子”。     

三氧化二砷诱导肝癌细胞HepG2凋亡作用

目的 探讨三氧化二胂（As2O3)诱导肝癌细胞HepG2凋亡作用。方法 应用普通光学显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪观察As2O3对HepG2细胞株的形态学改变和诱导凋亡率。结果 As2O3作用于细胞后,可看到较典型的细胞凋亡形态学改变,细胞体积缩小、染色质固缩成斑块状、呈半月型紧贴于核膜周边、核碎裂、凋亡小体形成等。AO／EB荧光染色法显示,细胞凋亡率为3．1％－9．1％。As2O3诱导HepG2细胞凋亡作用呈时间依赖性,最佳浓度为2μmol／L。流式细胞仪DNA直方图上呈现典型的亚二倍体凋亡峰。As2O3主要作用于细胞周期的G2／M期。结论 As2O3具有诱导HepG2细胞凋亡作用,具有治疗肝癌的潜在价值。     

应用DNA微阵列技术研究三氧化二砷对RPMI 8226细胞的作用

目的:应用cDNA芯片技术研究三氧化二砷对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226的作用。方法:采用包含4096个人类基因的cDNA表达谱芯片,检测三氧化二砷作用于RPMI8226细胞24h前后其基因表达的变化。结果:在mRNA水平上,273个基因的表达发生了明显改变,其中121个基因表达上调,152个基因表达下调。结论:三氧化二砷可引起RPMI8226细胞株一系列基因表达的改变。ZFYVE16、TXNIP及ALK1基因可能与RPMI8226细胞的分化与凋亡密切相关。     

Mechanism of Arsenic Trioxide Inhibiting Angiogenesis in Multiple Myeloma

Duringthelast decade,the efficacy of arsenic tri-oxide(As2O3)in both newly diagnosed and relapsedpatients with acute promyelocytic leukemia(APL)hasbeen established.And now,As2O3is used with otheragentsintreating patients with relapsed and refractorymultiple myeloma(MM)in clinical practice[1].Theinitial researches demonstratedthat As2O3couldinhibitproliferation andinduce apoptosisin MMcellsin vitroandin vivo[2,3].In addition to affecting tumorgrowth,As2O3has been showntoinhibit angiogenes…     

三氧化二砷联合偏钒酸钠对HL-60细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)联合偏钒酸钠(NaVO3)对人白血病细胞HL-60增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT法检测不同浓度的As2O3、NaVO3单药或联合(1×10-8 mol/L NaVO3联合5×10-3 mol/LAs2O3)对HL-60细胞的生长抑制作用;琼脂糖电泳检测DNA条带;Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察不同处理组中细胞核的变化;以AnnexinV/PI双染色流式细胞术检测5×10-3mol/L As2O3、1×10-8 mol/L NaVO3单药或联合对HL-60细胞凋亡的影响.结果 MTT结果显示As2O3能抑制HL-60细胞的增殖,并呈剂量和时间效应;低浓度的NaVO3促进细胞增殖,高浓度(≥1×10-8 mol/L)的NaVO3抑制细胞的生长;两药联合抑制作用强于对应浓度单药抑制作用(P＜0.05).HL-60细胞经As2 O3和较高浓度(≥1×10-8 mol/L)的NaVO3处理24 h后均可见到DNA梯形条带.Hoechst 33258染色结果发现HL-60细胞经As2O3和较高浓度(1×10-9 mol/L NaVO3)的NaVO3处理24 h后可见细胞核呈现核浓缩现象.流式细胞术结果显示5×10-3 mol/L As2O3和1×10-8 mol/LNaVO3联合作用于HL-60细胞所诱导的早期凋亡细胞显著多于单独用药(P＜0.05).结论 As2O3及浓度大于1×10-8 mol/L NaVO3均可有效地抑制体外白血病细胞HL-60的增殖并诱导细胞凋亡,两药联合对于抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡具有加强作用.     

三氧化二砷诱导骨髓瘤细胞JAK/STAT3通路抑制作用的研究

目的 研究三氧化二砷（As₂O₃)诱导人骨髓瘤细胞U266、RPMI8226细胞内JAK/STAT3信号转导通路抑制与细胞增殖之间存在的关系。方法 采用MTT法观察As₂O₃对骨髓瘤细胞作用的半数抑制浓度（IC₅₀）,流式细胞技术检测As₂O₃作用前后细胞周期的改变情况,甲基化特异性PCR法检测As₂O₃作用前后骨髓瘤细胞内SOCS-1基因甲基化状态的变化,Western blotting法检测As₂O₃作用前后磷酸化STAT3蛋白的表达差异。结果 As₂O₃作用72 h后,骨髓瘤细胞U266、RPMI8226细胞内磷酸化STAT3蛋白表达水平明显降低,同时伴随SOCS-1基因启动子区CpG岛甲基化程度明显减弱至消失,细胞增殖发生G₀/G₁期阻滞,上述三者变化均与As₂O₃浓度呈正相关（r=0.85,P<0.05）。结论 As₂O₃可诱导骨髓瘤细胞增殖受抑,与As₂O₃诱导细胞内JAK/STAT3信号转导通路抑制存在一定关系,且与细胞内SOCS-1基因甲基化状态改变相关。     

三氧化二砷诱导人肿瘤细胞凋亡和G2＋M期阻滞但引起人永 …

目的　研究 As2 O3引起肿瘤细胞凋亡和对细胞周期的影响。方法　采用 DNA凝胶电泳 ,流式细胞仪分析、RT- PCR和 Western免疫印迹等技术检测细胞凋亡的发生。结果　由 As2 O3诱导的人肺腺癌 GL C- 82、胃腺癌 MGC- 80 3和 SGC- 790 1、食管癌 Ec10 9、宫颈癌 He L a细胞凋亡前 ,细胞阻滞在 G2 M期 ,上述细胞均表现为对c- myc基因的下行调节 ;但在导致永生化人宫颈上皮 HCE16 /3细胞凋亡之前 ,细胞却被阻滞在 G1期 ,对 c- m yc基因表达无影响。结论　 As2 O3引起细胞凋亡与细胞周期阻滞有关 ,在肿瘤细胞和前恶变的 HCE16 /3细胞中阻滞的时期不同 ,这可能与 c- myc基因表达的改变与否有关     

亚砷酸、维生素C联合化疗治疗老年性多发性骨髓瘤的临床分析

目的多发性骨髓瘤的治疗已取得不少进展,20世纪60年代引用美法仑治疗MM至今,有效率仅40-50%,完全缓解率仅5%,近年来,许多新的治疗方法已经应用于临床。方法我院60例老年性MM患者均采用亚砷酸、维生素C联合化疗治疗,观察疗效。结果部分缓解19例,进步27例,无效14例;毒副作用主要为肝损害,应用保肝药物2周内可恢复正常。结论亚砷酸对于老年性多发性骨髓瘤具有良好疗效。     

三氧化二砷联合沙利度胺治疗难治或复发多发性骨髓瘤临床观察

目的:观察三氧化二砷联合沙利度胺治疗难治或复发多发性骨髓瘤临床效果及不良反应。方法:16例复发或难治的多发性骨髓瘤患者用三氧化二砷联合沙利度胺治疗,三氧化二砷10 mg/d,1～14 d,沙利度胺起始剂量为100 mg/d,如能耐受每周加量100 mg,最大剂量为300 mg/d,每28天为1个周期。结果:16例患者中,总有效率68.7%。不良反应主要恶心、呕吐、嗜睡、水肿、便秘等。结论:三氧化二砷联合沙利度胺治疗难治或复发多发性骨髓瘤不良反应少、耐受性好、疗效明显。     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞株SKOV3和COC1凋亡

目的：对比研究三氧化二砷(As2O3)诱导卵巢癌细胞株SKOV3和COC1凋亡的作用．方法：用不同浓度的As2O3溶液作用人卵巢癌细胞株SKOV3及COC1,于不同时间点收集细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率及分析细胞周期的变化,原位末端标记法观察细胞凋亡形态学特征．结果：不同浓度的As2O3溶液对卵巢癌细胞株SKOV3及COC1均有不同程度的生长抑制作用．随着药物浓度的升高、作用时间的延长,As2O3对COC1细胞的生长抑制率升高．15．0μmol/L(10ppc)浓度组的As203对SKOV3的生长抑制效应最显．低于15．0μmol/L的浓度组对SKOV3细胞株的抑制率之间没有显性差异．As2O3对COC1细胞的生长抑制作用比SKOV3强．6．0μmol/L As2O3作用48 h SKOV3细胞出现凋亡形态学改变,COC1细胞在1．5μmol/L As2O3作用48h就出现了凋亡形态学改变,且随着作用时间的延长凋亡细胞增多．15．0和6．0μmol/L As2O3作用下SKOV3细胞周期的变化出现了随着药物作用时间的延长G1期细胞比例逐渐上升,S期、G2／M期细胞的比例同时降低的现象．在3．0和1．5μmoL／L As2O3作用下COC1细胞周期也出现了相同的改变．结论：As2O3可以诱导卵巢癌细胞株SKOV3和COC1发生凋亡,COC1比SKOV3对砷剂更敏感．诱导细胞发生G1期阻滞是As2O3抑制卵巢癌细胞生长作用的可能机制之一。     

As2O3诱导人膀胱癌BIU-87细胞株凋亡及其对细胞周期的影响

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对人膀胱癌BIU-87细胞株生长抑制作用,并探讨对细胞周期及凋亡的影响.方法:CellTiter 96 Aqueous One 试剂检测BIU-87细胞株增殖活力;荧光染色观察凋亡细胞的形态学变化;流式细胞术分析细胞周期及凋亡.结果:As2O3与BIU-87细胞株生长抑制率之间有明显的浓度依赖关系 (P<0.01),IC50为28.92 μmol/L;荧光显微镜下观察到经As2O3作用的BIU-87细胞核膜消失,核染色质呈大小不等的小圆形碎片;流式细胞术结果表明30 μmol/L的As2O3处理BIU-87细胞株48 h后,G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例增加,凋亡率为47.37%.结论:As2O3能显著抑制BIU-87细胞株增殖;使细胞阻滞在S期,并进一步诱导细胞凋亡.     

三氧化二砷诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨三氧化二砷体外诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡的作用及其可能的机制. 方法:梯度浓度三氧化二砷处理视网膜母细胞瘤细胞系HXO-RB44,MTT法观察增殖的变化,AO/EB染色法、Annexin V PI法流式细胞仪检测细胞凋亡.活性比色法检测caspase-3活性变化,Western 免疫印迹法测定bcl-2和bax蛋白的表达. 结果:三氧化二砷处理后的HXO-RB44细胞增殖抑制,抑制率呈剂量时间依赖性;其细胞凋亡率显著增加;caspase-3活性增加,bcl-2/bax的比值下调. 结论:三氧化二砷在体外可通过诱导HXO-RB44细胞凋亡达到抑制其增殖的作用;其诱导凋亡的作用可能与激活caspase-3和下调bcl-2/bax比值有关.     

三氧化二砷诱导肿瘤细胞凋亡与Caspase3及Bcl-2蛋白家族的关系

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法：以Namalwa,SGC7901和Bcap37细胞为体外模型，通过流式细胞仪检测亚G1期（sub－G1）细胞含量和细胞膜磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine,PS)外翻量鉴定细胞凋亡；流式细胞仪检测Bcl-2和Bax蛋白表达及细胞线粒体跨膜电位（△φm）；比色法8测定半胱氨酸酶3（Caspase3）活性。结果：As2O3诱导肿瘤细胞凋亡与Bax和Bcl-2蛋白表达及Caspase3活性有密切关系。结论：As2O3可能通过调节Bax和Bcl－2蛋白的表达引起△φm下降从而激活Caspase3最终导致肿瘤细胞凋亡。     

硼替佐米或联合三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡实验研究

目的 探讨硼替佐米单独或联合三氧化二砷对HL-60细胞凋亡的影响.方法 不同浓度硼替佐米、三氧化二砷处理细胞12～48 h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性;DNA凝胶电泳、细胞形态学观察、流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 10～50 nmol/L硼替佐米可有效抑制HL-60细胞增殖,并诱导其发生凋亡.其中10nmol/L剂量处理12 h,即有细胞凋亡发生,延长作用时间或增加药物剂量,细胞凋亡率明显增加.选择15 μmol/L三氧化二砷与10nmol/L硼替佐米联合应用,可见HL-60细胞凋亡率比两种药物单独使用时显著增加.结论 硼替佐米对HL-60细胞存在时间和剂量依赖性的细胞凋亡效应,与三氧化二砷联合具有明显的协同作用.     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞株SKOV3凋亡对端粒酶活性的影响

目的探讨三氧化二砷诱导卵巢癌细胞株SKOV3凋亡时对端粒酶活性的影响。方法不同浓度的As2O3溶液作用卵巢癌细胞SKOV3,在不同时间点收集细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;FCM检测细胞凋亡率;TRAP-银染法观察端粒酶活性的变化。结果 As2O3溶液对SKOV3细胞有生长抑制和诱导凋亡的作用。As2O3作用SKOV3细胞24 h,端粒酶活性无明显下降,但有凋亡现象,凋亡率为6.15%。随着作用时间的延长,凋亡率逐渐上升,端粒酶活性逐渐下降。随着药物浓度的升高端粒酶活性也呈不断下降趋势,以至消失。结论 As2O3诱导SKOV3凋亡与端粒酶活性有一定相关性,但端粒酶活性的下降可能不是As2O3诱导细胞凋亡的早期事件。     

Studies on arsenic trioxide induced mice melanoma Cloundman S91 cell apoptosis

INTRODUCTION ArsenichasalonghistoryofuseinChineseandwesternmedicine,buthasbeenoutofuseinthe mid20thcenturybecauseoftheunacceptablesideef fects.There emergenceofarsenictrioxideinclinicaluse isduelargelytopurificationofthiscompoundfromtra ditionalmixturesandtheAs2O3definitionofeffective,low doseregimensforthetreatmentofacutepromyelo cyticleukemia(APL)[1].Recently,theapoptosis As2O3inducedhasbeenobservedinmanycancercell lines,includingesophagedcarcinoma,gastriccancer,neuroblastomalymphoid…     

Human cytomegalovirus protects multiple myeloma cell line KM3 cells from apoptosis induced by growth factor withdrawal

Background There is a higher rate of cytomegalovirus (CMV) reactivation in patients with multiple myeloma after an autologous stem cell transplantation, but no attention has been given thus far to a possible pathogenetic interplay between CMV and multiple myeloma. CMV can infect many kinds of cells, and CMV infection has been shown to inhibit apoptotic responses in several cell systems. In this study the authors investigated the alterations in apoptosis in the multiple myeloma cell line KM3 after infection with CMV and DroDosed a Possible mechanism.Methods KM3 cells were infected with 100, 10, or 1 TCID50 of CMV and then cultured in serum-free RPMI 1640. An RT-PCR-based assay was used to detect mRNA expression of CMV-IE,glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), and IL-6 in CMV-infected and mock-infected cells. Flow cytometry was used to detect apoptotic cells. CMV particles and apoptotic cells were also examined with an electron microscope.Results CMV-infected KM3 cells clearly expressed immediate early (IE) antigen mRNA when compared to uninfected cells, and there were fewer apoptotic cells among cells treated with 100 or 10 TCID50 of CMV after culturing in serum-free RPMI 1640. CMV particles were observable in infected cells under an electron microscope. Expression of IL-6 mRNA increased after infection.Conclusion CMV can infect the multiple myeloma cell line KM3, inhibit the apoptotic response in these cells after apoptosis induction in serum-free culture, and increase the expression of IL-6 mRNA.