壶腹周围肿瘤染色体9p21缺失图谱的构建

目的:进一步限定壶腹周围肿瘤染色体9p21区域的缺失范围.方法:选择染色体9p21区域5个微卫星多态性标记,通过聚合酶链反应、聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法,检测35例壶腹周围肿瘤及其外周血杂合性丢失(LOH)状况.结果:50%(4/8)胰腺癌有至少一个微卫星位点的LOH,其中D9S974(37.5%)和D9S942(28.6%)丢失频率较高,并且有连续性丢失现象.62.5%(5/8)壶腹癌在部分或全部位点出现LOH,其中D9S942(42.9%)丢失频率最高,其次为IFNA(37.5%)和D9S171(37.5%).14.2%(1/7)胰岛素瘤有一个位点LOH.结论:壶腹周围肿瘤染色体9p21最小共同缺失区位于D9S974和D9S942位点之间,其中可能存在一个新的涉及该肿瘤发生的相关抑癌基因.     

人肺腺癌染色体8p21～p22杂合性缺失精细作图

目的　在染色体 8p2 1 8p2 2界定发生于中国人肺腺癌的杂合性缺失 (LOH)的最小区域 ,为定位克隆肺腺癌相关抑癌基因提供线索。方法　利用 32例肺腺癌患者肿瘤组织检测位于 8p2 1～p2 2的 17个微卫星多态性标记的LOH频率 ,并且探讨各位点LOH与病理分级和临床分期的关系。结果　在 32例肺腺癌患者组织中有 31例 (96 6 7% )存在至少 1个位点的LOH ;主要集中于 3个区域 :位于 8p2 2的D8S2 5 4～ 2 6 1、D8S182 7～ 1731以及D8S1135。所检测位点中仅D8S2 6 1位点的LOH发生频率与肺腺癌分期呈正相关 (P <0 0 5 )。结论　 8p2 2区域可能存在位于D8S2 5 4～ 2 6 1,D8S1135和D8S182 7～ 1731的、与中国人肺腺癌相关的抑癌基因     

黑斑—息肉综合征染色体不稳定性及肿瘤易感基因位点的分析

目的 通过对黑斑－息肉综合征（ＰＪＳ）染色体淡稳定性、基因缺失、点突变和重排的分析,确定与疾病易感的相关基因及变异方式。方法 本研究经家系调查和利用患者外周血淋巴细胞比较分析了染色体脆性位点表达;采用聚合酶反应（ＰＣＲ）、ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析、微卫星检测和ＤＮＡ测序分析技术对染色体脆性位点（Ｆｒａ）出现频率高的３ｐ１４的遗传标记进行检测。结果 ⑴４个家系共２２例患者,其息肉性质均为腺瘤样息肉,死于     

大肠腺癌17号染色体短臂等位基因丢失的病理意义

对96例新鲜大肠腺癌组织17p等位基因丢失分析显示，17p等位基因丢失频率与大肠腺癌的部位、Dukes＇分期和大肠癌转移相关。Dukes＇D期17p等位基因丢失频率（94％）高于Dukes＇A、B、C期（58～68％），P＜0．01。大肠腺癌伴远处器官转移组17p等位基因丢失（93％）高于非远处器官转移组（65％），P＜0.05。左半结肠17p等位基因丢失频率（75％），高于右半结肠（50％），P＜0.05。上述结果表明，17p等位基因丢失可能是晚期大肠腺癌的生物学标记，显示大肠腺癌预后不佳。     

Detailed deletion mapping of loss of heterozygosity on 9p13-23 in laryngeal squamous cell carcinoma by microsatellite analysis

Background This study was designed to investigate the hot spots of microsatellite loss of heterozygosity (LOH) on 9p13-23 in laryngeal squamous cell carcinoma and to find out the correlation between the incidence of microsatellite LOH and the clinicopathological parameters.Methods Tumor tissues were obtained from paraffin embedded sections with microdissection. Genomic DNA was extracted from tumor tissues and peripheral blood lymphocytes with the phenol-chloroform. Polymerase chain reaction (PCR) amplification and denaturing gel electrophoresis were carried out in a set of 42 squamous cell carcinoma (SCC) of larynx and corresponding peripheral blood lymphocytes using 13 highly polymorphic microsatellite markers on 9p13-23. The correlation was analyzed between microsatellite LOH at the high frequency on 9p13-23 and clinicopathological parameters in the patients with squamous cell carcinoma of larynx.Results Of the 42 laryngeal cancers, 41 (97.6%) showed LOH in at least one of the microsatellite markers tested on 9p13-23. The most frequently deleted marker was D9S162 in 17 of the 19 (89.5%) informative samples. The marker D9S171, which is located on 9p21, had LOH detected in 12 of the 15 informative cases (80.0%). LOH at the D9S1748 marker (closest to the p16 gene locus) was detected in 18 of the 36 informative cases (50.0%). Allelic deletion mapping revealed two minimal regions of LOH encompassing markers D9S161-D9S171 on 9p21 and IFNA-D9S162 on 9p22-23. Multiple LOH (≥4) on 9p21-23 was found more frequently in the patients under 60 years, with supraglottic SCC or cervical lymph node metastasis than those over 60 years, with glottic SCC or without cervical lymph node metastasis (P&lt;0.01 or 0.01, 0.05, respectively). On the contrary, there was no correlation between T stages or pathologic classification and the frequency of LOH on 9p21-23 in 42 SCC of Larynx.Conclusions These findings imply the presence of at least two putative tumor suppressor genes on 9p13-23 in laryngeal SCC. Multiple genetic alterations are probably implicated in supraglottic SCC with cervical lymph node metastasis in younger patients.     

人膀胱移行细胞癌染色体17p13区域杂合性缺失精细作图

目的　明确染色体 17p13区域等位基因杂合性缺失 (LOH)在人膀胱移行细胞癌 (TCC)中的发生频率和最小缺失区域 ,为膀胱TCC相关抑癌基因的定位克隆提供线索。方法　应用位于17p13区域的 13个微卫星标记 ,对 4 4例膀胱TCC患者手术切除的癌组织进行LOH分析 ,并探讨各微卫星标记LOH与病理分级、分期的关系。结果　 4 4例患者中 ,35例 (79 5 % )的膀胱TCC组织中存在至少 1个微卫星标记的LOH。缺失频率最高的微卫星标记是位于 17p13 2的D17S5 13,达 4 1 4 % (12 /2 9) ;其次为位于 17p13 3的D17S130 8,为 4 0 5 % (17/ 4 2 ) ;最低为位于 17p13 1的D17S2 6 1,为 14 3% (4/2 8)。LOH主要集中于三个区域 :位于 17p13 3的D17S6 95～D17S130 8,位于 17p13 2的D17S15 33～D17S831,以及位于 17p13 1区域的TP5 3。所检测微卫星标记中仅TP5 3的LOH与膀胱TCC病理分级(χ2 =5 10 4 ,P <0 0 5 )和分期 (χ2 =5 382 ,P <0 0 5 )呈正相关。结论　在 17p13区域除TP5 3基因以外 ,还可能存在两个与膀胱TCC相关的抑癌基因 ,分别位于 17p13 3的D17S6 95～D17S130 8和17p13 2的D17S15 33～D17S831。TP5 3的LOH是膀胱TCC发展的晚期事件 ,而 17p13 3和 17p13 2区域的LOH则可能是膀胱TCC发生的早期事件     

胃癌及癌旁组织中ras癌基因扩增,重排和缺失的研究

本文使用Southern杂交技术研究了33例胃癌及癌旁组织中c-Ha-ras、K-ras、N-ras癌基因的扩增、重排和缺失。结果显示:25.8％(8/33)病例有c-Ha-ras基因的扩增、重排和缺失;3.8％(1/26)病例有K-ras基因的扩增;N-ras基因无上述改变。     

原发性胰腺癌中p16基因突变及其蛋白表达的研究

目的：探讨p16基因与胰腺癌发生的关系。方法：采用PCR基础缺失分析，PCR－SSCP及免疫组织化学方法检测28例胰腺癌组织，相应癌旁组织和4例正常胰腺组织中p16基因缺失，突变及其蛋白表达状况，并结合临床病理资料进行分析，结果：28例原发性胰腺癌组织中4例发生p16基因纯合缺失。5例发生p16基因突变，p16基因变异频率为32．1％，28例癌旁组织和4例正常胰腺组织中未发现纯合缺失及突变。p16基因变异频率与淋巴结转移（P＜0．025），转移淋巴结个数（P＜0．01）及临床分期（P＜0．05）密切相关。28例原发性胰腺癌的癌组织，癌旁组织和4例正常胰腺组织p16蛋白阳性表达率分别为57．1％（16／28），85．7％（24．28）和100％（4／4），癌组织中p16蛋白阳性表达率与组织学分化（P＜0．05），淋巴结转移（P＜0．05），转移淋巴结个数（P＜0．05）及临床病理分期（P＜0．05）密切相关。结论：p16基因变异及其蛋白失表达可能是胰腺癌发生发展过程中重要因素之一，而且二者均可作为评估胰腺癌恶性程度及其侵袭能力的有用指标，存在p16基因变异及蛋白失表达的原发性胰腺癌具有更强的恶性潜能。     

中国男性原发不育的遗传高风险因子:Y染色体DAZ基因拷贝缺失

目的 探讨Y染色体无精症因子C区(azoospermia factor C，AZFe)无精症缺失基因(deleted-in-azoospermia，DAZ)家族基因拷贝缺失与中国男性原发不育之间的关系。方法 运用多重PCR与PCR-RFLP检测技术，对210例已生育男性、216例原发无精症与189例严重少精症患者Y染色体AzFc区域DAZ基因家族的基因拷贝数进行分析。结果 在所有已生育男性中未检出DAZ基因拷贝的完全或部分缺失，而在原发无精症与严重少精症患者中DAZ基因拷贝完全缺失率分别为8．8％和12．2％，DAZ1／DAZ2共缺失率分别为8．3％和5．3％。结论 在中国男性原发无精症与严重少精症患者中存在较高频率的DAZ基因拷贝缺失现象，提示Y染色体AZFc区域DAZ基因家族基因拷贝的完全与部分缺失是中国男性原发不育的遗传高风险因子。     

High risk genetic factor in Chinese patients with idiopathic male infertility: deletion of DAZ gene copy on Y chromosome

Idiopathic azoospermia or oligozoospermia affects approximately 2%-4% of all married males. Recently studies have confirmed that the deletion of DAZ in AZF cregion of Y chromosome may be one of the important genetic aetiologies of Caucasian male infertility. To determine the relationship between DAZ gene deletion and idiopathic male infertility in Chinese population, we analysed the DAZ gene copy number of AZFc region in patients with idiopathic azoospermia or oligozoospermia,as well as fertile Chinese men.     

Chromosome 6q deletion mapping in human ovarian tumor, a common deletion region between D6S1649 and D6S311

Objective： To explore the loss of heterozygosity（LOH） on chromosome 6q in ovarian cancer, and localize a minimum area in deletion region. Methods： 93 ovarian tumors were analyzed for LOH studies with 10 microsatellite markers spanning chromosome 6q. To further localize a minimum area in deletion region. Nineteen microsatellite markers were used to refined a minimum area. Results： Forty three tumors （46%） were demonstrated allelic losses, which spanned less than two megabase areas, franked by a distal marker D6S311 and a proximal marker D6S1649, and likely harbored ovarian tumor suppressor gene （s）. With analysis of density of LOH, increased DNA copy number at loci of 6q was demonstrated between D6S1649 and D6S311. Conclusion： It is possible that duplication after the allelic loss might be a main mechanism that leads to carcinogenesis in ovarian tumor. The refinement of these candidate tumor suppressor genes loci might facilitate future loss of heterozygosity studies and enable the isolation of candidate genes from this region.     

染色体9p21遗传变异与中国汉族人群冠心病的关联性

目的：分析染色体9p21区域rs2383206和rs2383207位点遗传变异与中国汉族人群冠心病的关联性,探讨染色体9p21区域是否为冠心病的易感区域。方法：采用病例-对照方法,选择580例冠心病患者为病例组,选择性别、年龄与其匹配的非心血管病患者或正常人539例为对照组。采用Sequenom MassARRAY飞行时间质谱法对受试者rs2383206和rs2383207位点进行基因分型。结果：2组受试者吸烟史、腰臀比（WHR）、高血压病史、糖尿病史、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）和总胆固醇（TC）水平比较差异均有统计学意义（P<0.05）,病例组冠心病患者吸烟史、高血压病史和糖尿病史所占比例明显高于对照组（P<0.01）,WHR、SBP、DBP和TC水平也明显高于对照组（P<0.05或P<0.01）。rs2383206位点的基因型在病例组和对照组人群中频数比较差异无统计学意义（χ²=4.623,P>0.05）;rs2383207位点基因型在病例组和对照组人群中频数比较差异有统计学意义（χ²=8.936,P<0.05）,其中AA基因型在病例组频数（8.3%）分布明显低于对照组（13.6%）（P<0.05）。结论：吸烟、WHR、高血压病史、糖尿病史、SBP、DBP和TC可能是冠心病的危险因素;9p21区域rs2383207位点AA基因型可能是冠心病的保护基因型。     

Polymorphism on chromosome 9p21.3 contributes to early-onset and severity of coronary artery disease in non-diabetic and type 2 diabetic patients

Background  Susceptibility to coronary artery disease (CAD) and diabetes is encoded by distinct, tightly-linked single nucleotide polymorphisms on chromosome 9p21. This study aimed to examine the association of variant rs1333049 on chromosome 9p21.3 with early-onset and severity of CAD in Chinese patients with and without type 2 diabetes, and to determine the possible impact of rs1333049 on glucose metabolism and inflammation pathways.

Methods  Genotyping of variant rs1333049 on chromosome 9p21.3 was performed in 2387 patients with and without diabetes who were undergoing coronary angiography to evaluate suspected or established CAD. Serum levels of glucose, glycosylated hemoglobin A_1c (HbA_1c), insulin, high-sensitivity C-reactive protein, tumor necrosis factor-α, and interleukin-6 were also measured, and compared with each patient’s genotype.

Results  The homozygous CC genotype of rs1333049 was significantly associated with CAD in diabetic (OR: 1.270, P=0.044) and non-diabetic (OR: 1.369, P=0.011) patients after adjusting for traditional risk factors. There was an association between CC genotype and number of diseased vessels in diabetics (P=0.019), but not in non-diabetics (P=0.126). Among diabetic patients, CC genotype carriers had an increased risk of early-onset CAD (OR: 2.367, P=0.008) and greater cumulative atherosclerotic burden compared with non-CC genotype carriers (Gensini score: 31.80±17.20 vs. 23.09±21.63, P=0.039). No significant differences were observed between genotypes of rs1333049 in serum levels of glucose, insulin, HbA_1c, or inflammatory cytokines for diabetic or non-diabetic patients with CAD.

Conclusions  This study demonstrated a significant association of rs1333049 polymorphism on chromosome 9p21.3 with CAD in Chinese diabetic and non-diabetic patients. The homozygous CC genotype of rs1333049 confers a magnified risk of early-onset and more severe CAD in diabetic patients through a novel biological pathway unrelated to glucose metabolism or inflammation.

     

胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失的精细定位

目的 精细定位胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失及其常见缺失区域,并初步探讨1q21等位基因杂合性缺失在胃癌发生发展中的作用.方法 采用1q21区域7个高密度微卫星多态性标志结合PCR技术.精细分析了30例配对新鲜胃癌手术标本中胃癌染色体等位基因杂合性缺失的情况,利用X2检验和四格表确切概率法初步探讨了1q21等位基因杂合性缺失与胃癌临床特征的关系.结果 30例胃癌标本中,有18例存在等位基因杂合性缺失,占60%(18/30),7个微卫星位点D1S514、D1S2696、D1S498、D1S305、D1S2624、D1S2635和D1S2707的杂合性缺失频率分别为13.3%、10%、20%、23.3%、33.3%、40%和23.3%.常见高频率杂合性缺失区域位于D1S2624-D1S2707之间,即共同缺失区在D1S2635附近;胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失与病人的年龄、性别、胃癌原发灶的部位、癌细胞分化程度及临床分期比较差异没有湿著性意义(P>0.05);但是,胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失与胃癌有无淋巴结转移比较差异有显著性意义(P<0.05).结论 胃癌细胞染色体1q21存在较高频率的等位基因杂合性缺失,D1S2635附近可能存在与胃癌发生密切相关的肿瘤抑制基因.     

东北汉族人群7p14-15区域内9个STR位点的遗传多态分析

目的:分析东北汉族人群中7p14-15区域内9个短串联重复序列(STR)位点的遗传多态性。方法:采用荧光标记PCR扩增技术和毛细管电泳方法,对7p14-15区域内9个STR多态位点在100名随机选取的无血缘关系的东北汉族人群中的遗传多态性进行分析。结果:在东北汉族人群中,7p14-15区域的D7S526、D7S690、D7S2252、D7S817、D7S683、D7S656、D7S484、D7S2250、D7S2251位点分别检测出6、6、8、6、4、6、7、8和7个等位基因,17、19、29、17、10、17、24、27和22种基因型,杂合度分别为84%、85%、79%、82%、79%、85%、89%、88%和83%。结论:7p14-15区域的9个STR位点的基因频率和基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡,并在东北汉族人群中呈现较好的遗传多态性。     

陕西省汉族人群2号染色体8个STR基因座的遗传多态性研究

目的 分析陕西汉族人群中2号染色体上8个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因座的多态性.方法 采用荧光标记基因扫描对2号染色体上的D2S112、D2S162、D2S2330、D2S2216、D2S347、D2S259、D2S319和D2S168基因座的遗传多态性进行分析.结果 D2S112、D2S162、D2S2330、D2S2216、D2S347、D2S259、D2S319和D2S168基因座分别检出7、11、9、8、9、9、8和13个等位基因,15、33、23、18、13、12、25和33个基因型,等位基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05).其杂合度分别为0.6985、0.8274、0.8042、0.6816、0.6541、0.5213、0.8432和0.8091:多态信息含量分别为0.6911、0.8199、0.7891、0.6809、0.6388、0.5187、0.8372和0.8049.结论 2号染色体上的这8个STR基因座在汉族人群中有高的杂合度和多态信息量,是理想的遗传标记物.     

陕西地区汉族人群21号染色体3个STR位点的遗传多态性研究

目的 研究21号染色体D2lAl442、D21S1413和D31S1809基因座在陕西地区汉族无关个体中的遗传多态性.方法 随机抽取160例陕西地区汉族群体无血缘关系个体的静脉血,提取细胞基因组DNA,采用PCR技术扩增上述3个短串联重复序列基因座,以聚丙烯酰胺凝胶电泳分型.结果 3个基因座在陕西汉族群体中分别发现9、8、7个等位基因,3个基因座的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);各基因座的杂合度分别为0.750、0.742、0.694;各基因座间具有相互独立性.结论 21号染色体D21A1442、D21S1413和D3lSl809基因座具有高度杂合性和多态信息含量,是有应用价值的遗传标记.     

食管癌组织中 9p21 的杂合性缺失

目的探讨食管癌组织中９ｐ２１（Ｄ９Ｓ１７１）杂合性丢失在食管癌发生中的作用。方法抽提正常和肿瘤组织中的ＤＮＡ，应用９ｐ染色体微卫星标志，经聚合酶链反应，检测食管癌组织中９ｐ２１的杂合性丢失。结果３２例食管癌组织，１４例出现９ｐ２１位点条带的缺失，杂合性丢失率为４３．７％。杂合性丢失与临床病理之间无明显关系。结论杂合性丢失在高发区食管癌病人中有较高的检出率，表明杂合性缺失与食管癌的形成密切相关。     

3号染色体短臂21-22区域63个新基因在鼻咽癌组织中的差异表达

目的寻找与鼻咽癌发病密切相关的未知基闪。方法对63个定位于3号染色体短臂21-22 D3S1609-D3S1295区域的单拷贝并代表未知基因的EST簇进行网上克隆，在获取基因大片段或全长cDNA序列的基础上，应用半定量逆转录．聚合酶链反应检测63个未知基因在4种鼻咽癌细胞铢、32例鼻咽部低分化鳞状细胞癌组织和16例鼻咽部慢性炎症组织中的表达状况。结果49个未知基因在鼻咽癌组织和鼻咽部慢性炎症组织问的表达水平无显著性差异；8个未知基因在鼻咽癌和鼻咽部慢性炎症组织中均不表达；2个未知基因在鼻咽癌组织中表达明显增强；4个未知基因在鼻咽癌组织中表达明显减弱，其中Hs．27566基因在鼻咽癌细胞和组织中均显著低表达或不表达。结论在染色体3p21-22D3S1609．D3S1295区域构建了63个未知基因在鼻咽癌的表达差异谱：筛选出6个在鼻咽癌组织中差异表达的未知基因。     

皖南地区汉族人群21号染色体上2个STRs位点的多态性分析

目的:研究21号染色体上2个短串联重复序列位点(D21S11、D21S1409)在安徽皖南地区汉族人群中的遗传多态性,评价它们在唐氏综合征产前诊断中的应用价值。方法:采用聚合酶链反应、聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术,对皖南地区汉族无亲缘关系的90名个体的样本进行检测。结果:D21S11和D21S1409位点均由多个等位片段构成,片段大小分别在202～260bp和173～233p之间。两个位点的观察杂合度分别为0.4778和0.6222。结论:D21S1409有较高的杂合度,可作为唐氏综合征产前诊断的遗传标志。