As2O3诱导人膀胱癌BIU-87细胞株凋亡及其对细胞周期的影响

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对人膀胱癌BIU-87细胞株生长抑制作用,并探讨对细胞周期及凋亡的影响.方法:CellTiter 96 Aqueous One 试剂检测BIU-87细胞株增殖活力;荧光染色观察凋亡细胞的形态学变化;流式细胞术分析细胞周期及凋亡.结果:As2O3与BIU-87细胞株生长抑制率之间有明显的浓度依赖关系 (P<0.01),IC50为28.92 μmol/L;荧光显微镜下观察到经As2O3作用的BIU-87细胞核膜消失,核染色质呈大小不等的小圆形碎片;流式细胞术结果表明30 μmol/L的As2O3处理BIU-87细胞株48 h后,G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例增加,凋亡率为47.37%.结论:As2O3能显著抑制BIU-87细胞株增殖;使细胞阻滞在S期,并进一步诱导细胞凋亡.     

三氧化二砷诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡作用的研究

目的 探讨三氧化二坤（As2O3)诱导膀胱癌BIU－87细胞凋亡作用。方法 应用倒置相差显微镜、透射电子显微镜、自动酶标仪、细胞免疫组化法，分别对不同浓度加药组及对照组BIU－87细胞的形态学改变，细胞的存活及Bcl-2、Bax蛋白的表达进行观察和测定。结果 生长曲线显示，18．8μg/ml,37.6μg/ml和94．0μg/ml As2O3均能抑制膀胱癌BIU－87细胞的生长增殖。透射电镜观察，膀胱癌细胞表面的突起减少或脱失；部分细胞核染色质聚焦，边移；线粒体膜结构模糊不清。细胞免疫组化法测定Bcl-2、Bax蛋白的表达均有变化，与对照组细胞相比，18．8μg/ml,37.6μg/ml As2O3组Bcl-2和Bax蛋白表达率均升高。结论 三氧化二砷不仅抑制膀胱癌BIU－87细胞增殖，而且诱导细胞凋亡。诱导细胞凋亡与Bax蛋白的表达升高有关。     

Preliminary study of the in vitro growth inhibition of human bladder cancer cell line BIU-87 by arsenic trioxide

Arsenic trioxide (As,O, ) is the major effectivecomponent of Pishuang. Because of its toxic and sideeffects, it was not widely used in clinic for a lOng period. In addition, it was believed that arsenic compound could result in chromosome abnormality, sis…     

藏红花素对人膀胱移行细胞BIU-87细胞抗增殖作用研究

目的 研究藏红花素(crocin)对人膀胱移行细胞株BIU-87增殖的作用及机制.方法 MTT法测定crocin抗增殖效应,FCM分析细胞周期分布,RT-PCR技术测定Cyclin D1, p27kip1 mRNA表达变化,Western blot检测Cyclin D1,p27kip1蛋白表达变化.结果 crocin对细胞生长有抑制作用,且呈时间-剂量依赖关系.FCM检测显示,crocin可使细胞阻滞于G0/G1期;3.2mmol/L crocin作用于BIU-87细胞后RT-PCR结果显示,Cyclin D1 mRNA表达明显下调,p27 mRNA无显著变化;Western blot结果表明Cyclin D1蛋白明显下调;p27kip1蛋白表达显著增加.结论 crocin对细胞有抗增殖作用,可阻滞细胞于G0/G1期,其可影响Cyclin D1 mRNA转录,但并不影响p27 mRNA表达水平,并调控Cyclin D1、p27kip1蛋白表达.     

Effects of Gene Tranfection with CH50 Polypeptide on the Invasion Ability of Bladder Cancer Cell Line BIU-87

Fibronectin(FN) ,a glycoprotein,possesses mul-tiple cell bioactivities such as influencing the cellularmorphology, controlling cellular migration,inducingcellular differentiation and affecting i mmune cell func-tions etc ,whichis closelyrelated withthe carcinogene-sis ,invasion and metastasis[1].CH50 polypeptide is composed of Cell I andHep II bifunctional-domain of human FN, main-tains the function of the original structure and doesnot formnovel function because of deletion of frag-ments a…     

乙酰半胱氨酸拮抗三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡效应的初步研究

目的：探讨抗氧化剂乙酰半胱氨酸（NAC）能否抑制三氧化二砷（AT）诱导肝癌细胞凋亡及其可能的机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）、DNA梯形电泳及苏木精-伊红染色的方法观察AT对人肝癌细胞BEL-7402的杀伤效应、诱导凋亡效应以及NAC对该效应的影响。结果：①适量AT能抑制肝癌细胞的恶性生长，诱导细胞凋亡；②一定量的NAC能拮抗AT对肝癌细胞的杀伤效应及诱导凋亡效应。结论；AT对肝癌细胞的作用与细胞内谷胱甘肽有密切关系；很可能通过与细胞内巯基（-SH）结合，导致多种功能蛋白失活来诱导细胞凋亡，抑制肝癌细胞的恶性生长。     

温热与冬凌草液对人膀胱癌BIU-87细胞体外凋亡的影响

目的：探讨温热和冬凌草液对体外培养的人膀胱癌BIU-87细胞体外凋亡的影响。方法：通过对体外培养的BIU-87细胞进行加温（37℃、41．5℃、43．5℃）和冬凌草液（0g／L、0．15g／L、0．3g／L、0.6g／L、1.2g／L、2.4g／L）处理,采用形态学和流式细胞术观察温热和冬凌草液诱导的细胞凋亡效应,采用MTT法检测冬凌草作用后细胞的生长抑制率。结果：冬凌草液对BIU-87细胞具有明显的抑制生长作用。形态学观察到实验组中大量具有凋亡特征的细胞。流式细胞仪定量分析显示,随着冬凌草液浓度的增加和温度的升高,BIU-87细胞凋亡率亦呈升高趋势（P〈0．05）。结论：温热和冬凌草液具有协同诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡的作用。     

CH50多肽在膀胱癌细胞系BIU-87中的表达和鉴定

目的：研究CHS0多肽真核表达载体pCH510体外转染膀胱癌细胞系BIU-87以及CHSO多肽的表达和鉴定。方法：以脂质体Lipofectimine^TM2000为介导，将pCH510质粒体外转染给BIU-87细胞，用免疫组化S-P法、Western Blot法鉴定CH50多肽的表达，RT—PCR法鉴定导入基因的表达。结果：转染pCH510质粒的BIU-87细胞明显阳性表达CH50多肽，对照组则不表达。结论：BIU-87细胞体外转染pCH510质粒后能表达CH50多肽，改变了癌细胞的黏附属性，为临床治疗膀胱癌提供了新的途径。     

三氧化二砷对人胆管癌细胞系QBC939生长与凋亡的影响

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对人胆管癌细胞系QBC939的生长抑制与促凋亡作用 .方法　采用 MTT法检测 As2 O3 对胆管癌细胞的抑制作用 ;相差显微镜、电镜下观察细胞形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳测定 DNA L adder;流式细胞术分析 DNA含量 .结果　 0 .5 ,1,2 ,4,8μmol· L- 1 As2 O3均能抑制人胆管癌细胞 QBC939的生长 ,且抑制率具有浓度和时间依赖性 ,4μmol· L- 1 (IC50 )的 As2 O3 作用后 ,QBC939细胞出现典型的凋亡形态特征 ,DNA L adder出现 ,并检测到亚二倍体峰 .结论　 As2 O3 能有效地抑制 QBC939细胞生长并促进其凋亡 .     

三氧化二砷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究

目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,以及诱导细胞凋亡和对周期分布的影响.方法 采用MTF法、DNA ladder检测、流式细胞术等方法 检测As2O3对人肝癌HepG2细胞的生长抑制,诱导细胞凋亡以及对细胞周期分布的影响.结果 MTT法显示:As2O3对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,且具有剂量和时间依赖性.12μmol/L As2O3作用HepG2细胞24、48、72 h后,DNA ladder检测,48、72 h均出现凋亡典型的DNA ladder条带;流式细胞仪分析显示:As2O3处理HepG2细胞24、48、72 h后,凋亡率分别为(9.74±1.22)%、(21.89±2.14)%、(42.72±0.83)%,均显著高于对照组细胞的凋亡率(0.98±0.11)%(P<0.01).同时,流式细胞仪分析显示,As2O3对HepG2细胞有明显的S期和G2期阻滞作用.结论 As2O3对人肝癌HepG2细胞S期和G1期阻滞并诱导细胞凋亡可能是其抗肿瘤的机制之一.     

三氧化二砷诱导膀胱癌凋亡过程中caspase 3的活化

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)诱导膀胱癌凋亡过程中是否有半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(caspase 3)的活化.方法 应用MTT染色、流式细胞仪、免疫组化、酶联免疫和Western-Blot等方法分别检测了细胞的存活率、DNA含量的分布、凋亡过程中caspase 3蛋白的表达,caspase 3的相对活性及caspase 3的激活.结果 As2O3对膀胱癌T24细胞的抑制作用呈剂量依赖性.4μmol/L As2O3和8μmol/L As2O3组细胞凋亡率分别为7.58%和10.18%,与对照组(凋亡率0.83%)相比差别有显著性意义(P＜0.05);4μmol/L As2O3和8μmol/L As2O3组caspase 3蛋白的表达率分别为36.37%和60.41%,与对照组(8.01%)相比差别有显著性意义(P＜0.05);4μmol/L As2O3和8μmol/L As2O3组caspase 3活性分别为0.205和0.413,与对照组(0.073)相比差别有极显著性意义(P＜0.01).Western-Blot法测定As2O3组均可显著激活caspase 3.结论 As2O3诱导膀胱癌凋亡过程中有caspase 3的活化.     

亚砷酸体外对人肝癌细胞株BEL-7402影响的初步研究

目的 体外培养人肝癌细胞株BEL－7402,从多个角度探讨三氧化二砷（As2O3）的抗肿瘤作用及其机制。方法 应用倒置相差显微镜、电子显微镜、透谢电镜、流式细胞仪,分别对不同浓度加药组及对照组BEL－7402细胞的存活。形态学改变,细胞DNA含量的分布进行了观察和测定。结果 0.5、1、2μmol/L As2O3均能抑制人肝癌细胞株BEL－7402细胞的生长增殖。流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0／G1期细胞减少,S期细胞增多;电镜下,对照组细胞核质比大、核大、核膜有明显切迹,0.5μmol/L As2O3组细胞核质比减少、核变圆、胞浆内出现分化良好的细胞器, 0.5、1、2μmol/L As2O3组均可见细胞膜完整、核固缩、凋亡小体形成。结论 三氧化二砷不仅抑制人肝癌细胞增殖,而且诱导细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞株SKOV3和COC1凋亡

目的：对比研究三氧化二砷(As2O3)诱导卵巢癌细胞株SKOV3和COC1凋亡的作用．方法：用不同浓度的As2O3溶液作用人卵巢癌细胞株SKOV3及COC1,于不同时间点收集细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率及分析细胞周期的变化,原位末端标记法观察细胞凋亡形态学特征．结果：不同浓度的As2O3溶液对卵巢癌细胞株SKOV3及COC1均有不同程度的生长抑制作用．随着药物浓度的升高、作用时间的延长,As2O3对COC1细胞的生长抑制率升高．15．0μmol/L(10ppc)浓度组的As203对SKOV3的生长抑制效应最显．低于15．0μmol/L的浓度组对SKOV3细胞株的抑制率之间没有显性差异．As2O3对COC1细胞的生长抑制作用比SKOV3强．6．0μmol/L As2O3作用48 h SKOV3细胞出现凋亡形态学改变,COC1细胞在1．5μmol/L As2O3作用48h就出现了凋亡形态学改变,且随着作用时间的延长凋亡细胞增多．15．0和6．0μmol/L As2O3作用下SKOV3细胞周期的变化出现了随着药物作用时间的延长G1期细胞比例逐渐上升,S期、G2／M期细胞的比例同时降低的现象．在3．0和1．5μmoL／L As2O3作用下COC1细胞周期也出现了相同的改变．结论：As2O3可以诱导卵巢癌细胞株SKOV3和COC1发生凋亡,COC1比SKOV3对砷剂更敏感．诱导细胞发生G1期阻滞是As2O3抑制卵巢癌细胞生长作用的可能机制之一。     

三氧化二砷对615系小鼠皮下移植性胃癌的抗癌作用及机制研究

目的:观察不同剂量三氧化二砷(As 2O3)对于实体型胃癌移植瘤615系小鼠模型的抑瘤及诱导凋亡作用.方法:40只615系小鼠皮下注射鼠前胃癌细胞株MFC建立移植瘤模型,然后随机分为5组,每组各8只.分别在腹腔内注射5-Fu、生理盐水及不同剂量的As2O3(1、2、4 mg·kg-1·d-1),给药8 d,末次给药24 h后计算抑瘤率,流式细胞术观察凋亡率,透射电镜观察凋亡细胞超微结构,免疫组化半定量分析凋亡调控基因Bcl-2、Bax的表达情况.结果:As2O3对移植瘤生长有明显抑制作用,表现为瘤细胞超微结构出现凋亡征象且凋亡率增加,以2 mg·kg-1·d-1组作用最明显;免疫组化显示As2O3作用下Bcl-2基因阳性细胞数降低,Bax阳性细胞数则上升.结论:As2O3主要是通过诱导细胞凋亡对荷胃癌鼠皮下移植瘤具有明显抑制作用.     

PTEN基因对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性影响的研究

目的研究抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响。方法将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN体外转染BIU-87细胞（pBp-PTEN-BIU87）,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU-87细胞（pBp-BIU87）和正常BIU-87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,应用MTT分别研究转染前、后膀胱癌细胞对不同浓度抗癌药物丝裂霉素MMC（1、10和100g/mL）、康朴赛星（0.25、2.5和25g/mL）和吡柔比星（2、20和200g/mL）的抑制率和敏感性的变化。结果 RT-PCR证实PTEN在转染的BIU-87细胞中能稳定表达。PTEN转染后,BIU-87细胞对MMC的药物抑制率和敏感性明显提高,对吡柔比星和康朴赛星的药物抑制率和敏感性无明显变化。结论 PTEN基因转染能提高人膀胱癌细胞系BIU-87对某些抗癌药物的敏感性,作用的强弱取决于药物的作用机制。     

三氧化二砷对人肺癌细胞株A2放射增敏的实验研究

目的:本文探讨三氧化二砷(Arsenic trioxide,As2O3)对人肺癌细胞株A2放射敏感性的影响.方法:设立空白对照组、单纯照射组(直线加速器X射线照射,2Gy)、As2O3组(1.0μmol/LAs2O3)、As2O3+照射组(1.0μmol/LAs2O3+X射线照射,2Gy).用流式细胞仪检测As2O3作...     

三氧化二砷诱导肠癌HT-29细胞周期阻滞及凋亡的研究

目的：探讨三氧化二砷（AsO3）对结肠癌细胞增殖的抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响。方法：采用MTr法测定细胞增殖活力，通过细胞形态学观察细胞分裂及凋亡，应用流式细胞仪进行细胞周期解析、凋亡的检测。结果：As2O3呈剂量-时间依赖性抑制结肠癌HT-29细胞系的增殖，作用24、48及72h后抑制50％细胞生长的药物浓度（IC50）分别为40．03,13．76,4．53μmol/L，与对照组差异显著（P〈0．05）。2μmol/L与5μmol/L的As2O3作用24h后，细胞周期出现G2/M期阻滞及亚二倍体凋亡峰，随着作用时间的延长，凋亡细胞随岛，M期细胞减少而逐渐增多。细胞形态学观察分裂期细胞及凋亡细胞明显增加。结论：As12O3抑制结肠癌HT-29细胞的增殖，诱导G2/M期阻滞及细胞凋亡。     

三氧化二砷对大肠癌Ls174细胞致腹水生成的影响

目的研究三氧化二砷（As2O3）对人大肠癌裸鼠腹腔种植腹水生成的影响。方法将大肠癌Ls174细胞通过单独培养,与5-氟尿嘧啶（5-Fu）、As2O3分别共培养后行腹腔内注射构建裸鼠腹水模型,通过单独和联合注入化疗药物,观察腹水生成情况以及检测腹水细胞中耐药基因谷胱甘肽硫转移酶酸性同工酶（GST。百）mRNA表达,比较三氧化二砷对大肠癌致腹水生成的影响。结果5FU和As2O3组裸鼠腹水生成明显减少,且生存期延长,耐药基因GST-π TmRNA表达最低。结论三氧化二砷能够抑制或消除人大肠癌裸鼠腹腔种植及腹水的生成,不同程度地延长生存期并通过下调耐药基因GST-πmRNA表达提高对化疗药物的敏感性。     

三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡对端粒酶活性的影响

目的 探讨As2O3诱导细胞凋亡时对其端粒酶活性的影响及其作用机制.方法 采用光镜、电镜,PCRELISA,RT-PCR等技术,检测细胞凋亡,端粒酶活性及其催化亚单位的表达.结果 As2O3可诱导卵巢癌细胞凋亡,但存在作用浓度,细胞株类型差异性;端粒酶活性随药物作用时间和浓度的增加而明显减弱,同时伴随hTERT mRNA表达水平的下降.结论 端粒酶活性和hTERT mRNA表达在As2O3诱导SKOV3、3AO细胞凋亡过程中共同发挥作用,两者有密切关系,是诱导细胞凋亡的分子机制之一.