IL-17A可以促进卵巢癌的腹腔转移

目的:探讨白细胞介素（IL）-17A对卵巢癌（OvCa）腹腔转移的影响。方法:以C57BL/6为遗传背景的野生型 （WT）小鼠和IL-17A 缺陷（IL-17A-/-）小鼠为研究对象，腹腔注射同基因小鼠OvCa细胞系ID8，检测内源性IL-17A对 OvCa腹腔种植瘤生长的影响。应用MTT法检测不同浓度的重组小鼠IL-17A（rmIL-17A）对ID8细胞增殖的影响；应用划 痕实验检测不同浓度的rmIL-17A对ID8细胞迁移能力的影响；应用Transwell侵袭实验检测不同浓度的rmIL-17A对ID8细 胞侵袭能力的影响。结果:与IL-17A-/-小鼠相比，WT小鼠腹腔内肠系膜、腹膜后淋巴结、脾脏和肾脏表面等处均见密 集瘤结节转移灶，且腹腔内瘤结节数量显著增多（均P＜0.01）。体外实验结果显示，与对照组相比，不同浓度的 rmIL-17A对ID8细胞增殖无影响（均P>0.05）；与对照组相比，10 ng/mL的rmIL-17A作用6 h后可促进ID8细胞迁移，1 ng/mL和10 ng/mL的rmIL-17A作用12 h后可显著促进ID8细胞迁移（均P＜0.05）；与对照组相比，干预24 h后，1 ng/mL和10 ng/mL的rmIL-17A对ID8细胞的侵袭能力均有促进作用（均P＜0.05）。结论:IL-17A可以促进卵巢癌的腹腔 转移。     

白黎芦醇对脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞活化的抑制作用

目的探讨脂多糖（LPS）诱导的大鼠腹腔巨噬细胞（PMA）活性变化及白黎芦醇（RESV）对它的抑制作用。方法分离大鼠PMA，随机分为对照组、LPS组和RESVI-V组。培养24h后，分别用免疫组化方法检测核网子-kB（NF-kB）活性，酶联免疫吸附法和硝酸还原法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）和一氧化氮（NO）水平。结果对照组仅有少量NF-kB的活化。LPS诱导后，PMA出现大量NF-kB的活化，继而细胞上清液中TNF-α、IL-1和NO的水平显著升高。RESV治疗后NF-kB的活性较PMA组逐渐降低，具有剂量依赖性，并且相应的细胞上清液中TNF-α、IL-1和NO水平明显降低。结论RESV可以抑制PMA中NF-kB的活化，从而减少TNF-α、IL-1和NO的过度分泌。     

肿瘤坏死因子—α预刺激对培养树突状细胞形态学的影响

目的：研究肿瘤坏死因子（TNF）－α预刺激对树突状细胞形态学的影响，方法：Ficoll密度梯度离心分离健康人外周血，获得单个核细胞，培养基用含有10％胎牛血清的RPMI 1640，分两组进行培养，一组用TNF－α预刺激4h后加入粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）及白细胞介素－4（IL－4），每48h再次加入上述3种细胞因子；另一组则在培养初始加入GM－CSF及IL－4，每隔48h再次加入上述2种细胞因子，第5天加入TNF－α，两种中所用细胞因子浓度完全一样，且均于第8天收获细胞，前者记作T－DC，后者记作DC。光镜及扫描电镜观察DC形态学变化及差异，结果：T－DC与DC相比，具有更多，更典型的树突状突起，结论：TNF－α预刺激DC前体细胞4h与TNF－α在培养第5天加入相比，所诱导出的DC的树突状形态更为明显，典型。     

IL-6对体外培养的兔软骨终板细胞生物学行为的影响

目的 探讨IL-6对体外培养的兔软骨终板细胞生物学行为的影响.方法 分离培养兔软骨终板细胞,通过甲苯胺兰染色等方法鉴定后,分别加入不同浓度的IL-6,MTT法测定不同时间点软骨终板细胞增殖活性的变化;流式细胞仪检测软骨终板细胞生长周期的变化;RT-PCR检测蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA的表达变化.结果 10、50、100 ng/ml IL-6对软骨终板细胞的增殖无影响,50 ng/ml IL-6对软骨终板细胞细胞周期无影响,10、50 ng/ml IL-6均对Aggrecan mRNA的表达无影响,仅50 ng/ml浓度时IL-6可降低Collagen Ⅱa mRNA的表达.结论 较大剂量IL-6时可抑制软骨终板基质合成,从而促进椎间盘的退变.     

川芎嗪对IL-1β诱导的兔原代软骨细胞iNOS表达和NO合成的影响

目的观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对IL-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的兔原代软骨细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达及一氧化氮(NO)合成的影响。方法体外培养兔软骨细胞,用甲苯胺蓝染色检测蛋白多糖,免疫荧光检测兔原代软骨细胞Ⅱ型胶原;用IL-1β10 ng/ml和(或)不同浓度(5、10、15、20μg/ml)川芎嗪共培养兔原代软骨细胞48 h后,RT-PCR和免疫组化检测iNOS基因及蛋白表达;用硝酸还原法检测细胞培养上清液NO的表达。结果软骨细胞呈三角形或多角形,蛋白多糖表达于细胞质中,Ⅱ型胶原主要表达于细胞质,少见于细胞核。与对照组比较,IL-1β单独作用软骨细胞iNOS和NO的表达显著增加(P<0.01);IL-1β和川芎嗪联合作用后,软骨细胞iNOS和NO的表达较IL-1β单独作用显著降低(P<0.05,P<0.01),但仍显著高于对照组(P<0.01)。结论川芎嗪能有效抑制IL-1β诱导兔软骨细胞iNOS的表达和NO的合成。     

补肾益气行血法对人软骨细胞基质金属蛋白酶13表达的影响

目的：观察补肾益气行血中药复方含药血清对MMP-13、II型胶原表达的调控作用及相关意义。方法：将体外培养的人软骨细胞随机分为5组：对照组（正常血清）、低剂量IL-1组（10斗g／m1 IL-1β）、高剂量IL-1组（100Ixg／ml IL-113）、低剂量IL-1加中药组（10μg／ml IL-1p加含药血清）、高剂量IL-1加中药组（100斗g／mlIL-1p加含药血清）,应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）及实时荧光定量PCR,比较补肾益气行血中药复方含药血清在不同剂量IL-1B作用下对MMP-13、II型胶原表达的调控作用。结果：中药含药血清纽均有抑制MMP,13的表达作用,对照纽表达阳性强度高于中药组,中药组II型胶原表达阳性强度高于对照组,统计学均有明显差异。不同剂量IL-1组均能促进MMP-13的表达,对照组阳性强度低于IL-1组,IL-1组II型胶原表达低于对照组,统计学均有明显差异。结论：体外条件下,补肾益气行血中药含药血清能够抑制炎性因子IL-1诱导的MMP-13表达;能对抗MMP-13抑制软骨细胞II型胶原合成,具有保护软骨细胞的作用。     

大鼠脂肪源性干细胞定向分化为施万细胞样细胞的实验研究

目的 研究体外培养成年大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs)并诱导分化为施万细胞样细胞的潜能.方法 分离、培养成年SD大鼠ADSCs,免疫细胞化学法鉴定细胞表面抗原CD44,CD49d和CDl06.传6～8代的ADSCs接种在多聚赖氨酸铺板的培养板内.用含5 ng/nd血小板源性生长因子,10 ng/ml牛碱性成纤维细胞生长因子,14 μmol/L Forskolin,200ng/ml Heregnlin及10%FBS的DMEM/F12培养基诱导分化12 d,免疫细胞化学法鉴定细胞表面标记物GFAP,S-100和P75.结果 分离纯化的ADSCs呈CD44和CD49d阳性,而CD106表达为阴性;诱导后的细胞呈梭形,并表达施万细胞特异性标志蛋白-GFAP,S-100和P75.结论 从大鼠脂肪组织能获得具有增殖和分化潜能的干细胞,这些细胞在特定条件下可定向诱导分化为施万细胞样细胞.     

水溶性乌梢蛇总蛋白对成纤维样滑膜细胞分泌白介素-1β、α-肿瘤坏死因子和白介素-10的影响

目的 观察水溶性乌梢蛇总蛋白对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞分泌IL-1β、TNF-α和IL-10的影响,以探讨治疗RA的可能机制.方法 用常规方法提取水溶性乌梢蛇总蛋白,取RA患者滑膜组织进行成纤维样滑膜细胞培养;选择对数生长期的细胞进行实验,实验分五组,分别加入昆明山海棠(200μg/ml,阳性对照组)、水溶性乌梢蛇总蛋白(50、150、450μg/ml)DMEM溶液,及加入等体积的DMEM溶液(空白对照组)进行细胞培养,72小后采用ELISA方法测定培养液上清中IL-1β、TNF-α和IL-10的水平,RT-PCR检测滑膜细胞IL-1β、TNA-α和IL-10的mRNA表达.结果 水溶性乌梢蛇总蛋白150 μg/ml、450 μg/ml组和阳性对照组细胞培养液上清中TNF-α、IL-1β水平明显降低,mRNA表达减少,而IL-10水平升高,mRNA表达增加,与空白对照组差异具有统计学意义(P<0.05).结论 水溶性乌梢蛇总蛋白可能通过抑制成纤维样滑膜细胞TNF-α和IL-1β及促进IL-10分泌来减轻炎症反应.到达治疗RA的目的.

Abstract：

Objective To evaluate the effect of soluble total proteins of Zaocys dhumnades on the expressions of interleukin-1β (IL-1β), tumor necrosis factor-α (TNF-α) and IL-10 in human fibroblast-like synoviocytes (FLS) cultured in vitro. Methods Primary cultured FLS isolated from the synovium of patients with rheumatoid arthritis (RA) were incubated in the presence of different concentrations (50, 150 and 450 μg/ml) of soluble total proteins of Zaocys dhumnades, with Tripterygium hypoglaucum Hutch (THH) and DMEM as the positive and negative controls, respectively. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and RT-PCR were used to detect the expressions of IL-1β, IL-10 and TNF-α in the FLS. Results The protein and mRNA levels of IL-1β and TNF-α in the supernatant of the FLS exposed to 150 and 450 μg/ml of the soluble total proteins of Zaocys dhumnades decreased, while IL-10 protein and mRNA increased significantly as compared with those in the negative control group (P<0.01). Conclusion The soluble total proteins of Zaocys dhumnades produce therapeutic effect on RA possibly by inhibiting IL-1β and TNF-α and promoting IL-10 expressions in the FLS.     

人腹膜间皮细胞的培养及特征

目的：建立人腹膜间皮细胞（HPMC）培养模型,检测HPMC细胞外基质蛋白及白细胞介素（IL－8）的表达。方法：采用胰蛋白酶－EDTA消化法,从人的腹膜组织中分离HPMC。采用形态学和链霉菌抗生物素蛋白－过氧化物酶连接法（即SP法）,对培养细胞进行鉴定。采用SP法检测HPMC纤维连接蛋白（FN）、胶原Ⅲ和胶原Ⅴ及转化生长因子（TGF）β1表达。采用逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）检测HPMC IL－8 mNRA和FN mRNA的表达。结果：光镜示细胞融合后呈多边形,超微结构下可见丰富的微绒毛和内质网,免疫组化染色结果示HPMC可表达角蛋白,波形蛋白,胶原Ⅲ,FN,TGFβ1蛋白,Ⅷ因子、胶原Ⅴ表达阴性。人腹膜间皮细胞亦表达FN mRNA和IL－8 mRNA。结论：HPMC培养模型的建立,可为进一步研究腹膜纤维化的防治及IL－8在腹膜透析中的作用提供理论依据。     

白细胞介素—1β和白细胞介素—8在实验性结肠炎发病中的作 …

研究白细胞介素１β和白细胞介素在结肠炎发病中的作用，观察白细胞介素－１受体拮抗剂对结肠炎的疗效。方法 用３０ｍｇ三硝基苯磺酸＋０．２５ｍｌ体积分数为５０％乙醇制成大鼠慢性实验性结肠炎模型，然后于不同时间点尾静脉注入７ｍｇ／ｋｇ ＩＬ－１ｒａ，进行实验性治疗，以静脉注入３ｍｇ氢化可的松琥珀酸钠作为治疗对照，同时观察治疗前后病变结肠组织学变化，测定结肠髓过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性改变，以原位杂交     

胰岛素铁硒传递蛋白促进组织工程软骨形成的作用

目的研究胰岛素铁硒传递蛋白(ITS)对组织工程软骨形成的影响。方法第2代猪关节软骨细胞单层培养或离心形成细胞聚集体,根据培养液不同分为2组:常规培养组(达尔伯克改良伊格尔培养基+体积分数10%胎牛血清)和ITS组(达尔伯克改良伊格尔培养基+体积分数10%胎牛血清+体积分数1%ITS),噻唑蓝(MTT)法评估2组软骨细胞增殖;细胞聚集体培养1、2、3、4周后取材,比较2组细胞聚集体大体形态、湿质量、组织学、Ⅱ型胶原(ColⅡ)免疫组织化学染色和软骨特异基因表达。结果 MTT检测显示第5、6、7天ITS组光密度值显著高于常规培养组(P<0.01);ITS组软骨细胞聚集体体积在培养3周和4周时明显大于常规培养组;ITS组湿质量培养4周时为(7.91±1.49)mg,明显高于常规培养组的(5.37±1.31)mg(P<0.05)。ITS组细胞聚集体甲苯胺蓝染色和ColⅡ免疫组织化学染色明显强于常规培养组;2组软骨特异基因SRY相关高迁移组盒子基因9、ColⅡ表达相当,ITS组Ⅹ型胶原表达减弱,核心蛋白和Ⅰ型胶原表达增强。结论 ITS通过促进软骨细胞增殖和细胞外基质分泌可更好地促进组织工程软骨形成。     

透骨消痛胶囊含药血清对退变关节软骨细胞表达TNF-α、IL-1β的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng.mL-1IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24、48、72 h后用TaqMan real-time PCR法检测各组mRNA表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞TNF-α、IL-1β的表达。     

脐血IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α与母体、胎儿炎症反应及早产预后的相关性

目的：研究脐血白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与母体、胎儿炎症反应及早产预后的相关性。方法选取2015年1月至2016年1月在我院妇产科就诊的早产孕妇及早产儿各93例作为研究对象。比较母体炎症反应不同时期的脐血细胞因子水平,胎儿炎症反应不同分型的脐血细胞因子水平,不同早产预后的脐血细胞因子水平,利用Spearman相关性分析法分析脐血细胞因子与母体或胎儿炎症反应及早产预后的相关性。结果母体炎症反应≥2期者的IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α的水平明显高于无炎症反应与1期者,IL-10水平明显低于无炎症反应与1期者,而1期的IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α的水平明显高于无炎症反应者,IL-10明显低于无炎症反应者,差异均有统计学意义(P<0.05);胎儿2型炎症反应的IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α的水平明显高于无炎症反应与1型者,IL-10水平明显低于无炎症反应与1型者,而1型的IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α的水平明显高于无炎症反应者,IL-10水平明显低于无炎症反应者,差异均有统计学意义(P<0.05);预后不良的早产儿脐血IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α水平均明显高于预后良好者,而IL-10水平明显低于预后良好者,差异均有统计学意义(P<0.05);根据Spearman法评价相关性可知,IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α分别与母体或胎儿炎症反应及早产预后均呈正相关(P<0.05),而IL-10与母体或胎儿炎症反应以及早产预后呈负相关(P<0.05)。结论脐血IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α水平分别与母体或胎儿炎症反应及早产预后呈正相关,而IL-10与母体或胎儿炎症反应及早产预后呈负相关。     

藻酸包埋异体关节软骨细胞修复兔膝关节软骨缺损

目的 探讨异体关节软骨细胞作为软骨种子细胞修复关节软骨缺损的可行性。方法 无菌取成年新西兰大白兔四肢关节软骨，酶消化法分离细胞，条件培养基体外培养扩增，藻酸钙凝胶包埋培养1周，植入兔膝关节股骨髁间软骨缺损，对照组缺损旷置。术后3、6个月分别取材，观察缺损修复情况；切片特染和免疫组化观察修复组织病理，并Wakitnni评分评估修复质量。结果 7／8缺损为成熟透明软骨组织修复，1／8为纤维软骨修复；Wakitani平均评1．75分；空白对照组评7．65分。实验组3个月组标本未见淋巴细胞或白细胞浸润，6个月组标本未见明显退变；所有标本均未见藻酸残留。结论 用藻酸包埋异体关节软骨细胞修复兔膝关节软骨缺损的方法是可行的，异体关节软骨细胞在适当的处理后可成为关节软骨组织工程种子细胞。     

无血清培养骺板细胞分泌TGF-β1的实验研究

目的观察骺板细胞在无血清培养液中的生长情况,并通过ELISA方法检测骺板细胞分泌TGF-β1。方法提取3周龄新西兰兔骺板组织,获得良好生物活性的骺板细胞。采用CCK-8生长曲线检测骺板细胞在无血清培养液中的生长增殖情况,并通过ELISA方法检测骺板细胞分泌TGF-β1。结果骺板细胞生长情况良好,分泌细胞外基质。AO/PI荧光染色显示存活的骺板细胞呈亮绿色,周围散在有少量红染的死细胞。骺板细胞在DMEM培养液以及无血清培养液培养时生长曲线形态基本相似,在1、2d时细胞增殖缓慢,之后增殖速度逐渐增加,6-7d逐渐进入平台期。第1天时骺板细胞开始释放TGF-β1,然后释放量逐渐增加,第6d时浓度达到167.2pg/ml。结论骺板细胞在无血清培养液中增殖情况良好并能分泌TGF-β1。     

重组鼠白细胞介素18在肝癌小鼠体内的抗肿瘤作用

目的：探讨不同剂量和输注方式的重组鼠白细胞介素18（rmIL-18）对肝癌小鼠生存时间和肿瘤生长的影响,阐明rmIL-18在体内抗肿瘤的合理应用方式。方法：60只Babl/C小鼠皮下接种小鼠肝癌H22细胞（1×10⁶个）,随机分为5μg rmIL-18腹腔内注射治疗组、0.5μg rmIL-18腹腔内注射治疗组、0.5μg rmIL-18肿瘤内注射治疗组、细胞毒性T淋巴细胞（CTL）腹腔内注射治疗组、CTL肿瘤内注射治疗组和生理盐水腹腔注射对照组,每组10只。从接种肿瘤细胞的第10天起,各rmIL-18组小鼠每隔1d进行对应剂量和方式的注射治疗,CTL组小鼠分别腹腔和肿瘤内注射肿瘤特异性CTL（1×10⁶/只）,生理盐水腹腔注射对照组小鼠腹腔内注射注射等体积（100μL）生理盐水,共计10次。每周测量小鼠肿瘤直径,并记录生存时间。结果：与0.5μg、5μg rmIL-18腹腔内注射治疗组和生理盐水腹腔注射对照组比较,0.5μg rmIL-18肿瘤内注射治疗组小鼠肿瘤生长速度减慢（P<0.01）,小鼠生存时间延长（P<0.01）;与0.5μg rmIL-18腹腔内注射治疗组比较,CTL腹腔内注射治疗组小鼠肿瘤生长速度降低（P<0.01）,小鼠存活率升高（P<0.01）;与0.5μg rmIL-18肿瘤内注射治疗组比较,CTL肿瘤内注射治疗组小鼠肿瘤生长速度降低（P <0.01）,小鼠存活率升高（P <0.01）。结论：rmIL-18抗肿瘤作用的最好途径为瘤内注射,并存在剂量依赖性。     

Effects of transferrin on the growth and proliferation of porcine hepatocytes: a comparison with epidermal growth factor and nicotinamide

Objective To seek an appropriate culture condition in which porcine hepatocytes can continuously proliferate and express their normal differentiation phenotypes for a longer period of time. Methods Different types and dosages of reagents, transferrin, epidermal growth factor and nicotinamide were used to culture porcine hepatocytes in serum-free Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM). And the proliferative effects and functions of the cells were detected at different culture times. Results Transferrin at 5 ng/ml, nicotinamide at 10 mmol/L and epidermal growth factor at 10 ng/ml had better effects on the viability of hepatocytes than DMEM, DMEM+10% fetal cattle serum FCS and other dosages of these reagents (P&lt;0.05). OD values of MTS were still high in culture at day 7 and day 10, while nearly 30%-35% cells went into the S phase. Good hepatocyte funcitons were found in these groups, and the secretion of albumin was positively correlated with OD value of MTS. The levels of aspartate transaminase and ammonia in these media were lower than those in DMEM and DMEM+FCS.Conclusion Transferrin at 5 ng/ml, epidermal growth factor at 10 ng/ml and nicotinamide at 10 mmol/L are benefitial to the viability and proliferation of hepatocytes.     

人腹膜间皮细胞的培养及特征

目的 :建立人腹膜间皮细胞 (HPMC)培养模型 ,检测HPMC细胞外基质蛋白及白细胞介素 (IL - 8)的表达。方法 :采用胰蛋白酶 -EDTA消化法 ,从人的腹膜组织中分离HPMC。采用形态学和链霉菌抗生物素蛋白 过氧化物酶连接法 (即SP法 ) ,对培养细胞进行鉴定。采用SP法检测HPMC纤维连接蛋白 (FN)、胶原Ⅲ和胶原V及转化生长因子 (TGF) β1表达。采用逆转录多聚酶链反应 (RT -PCR)检测HPMCIL - 8mRNA和FNmRNA的表达。结果 :光镜示细胞融合后呈多边形 ,超微结构下可见丰富的微绒毛和内质网 ,免疫组化染色结果示HPMC可表达角蛋白 ,波形蛋白 ,胶原Ⅲ ,FN ,TGFβ1蛋白 ,Ⅷ因子、胶原V表达阴性。人腹膜间皮细胞亦表达FNmRNA和IL - 8mRNA。结论 :HPMC培养模型的建立 ,可为进一步研究腹膜纤维化的防治及IL - 8在腹膜透析中的作用提供理论依据。     

兔下颌骨髁状突软骨细胞体外培养及生物学特性的研究

为探讨兔下颌骨髁状突软骨细胞的体外培养方法及其生物学特性，用胰酶及胶原酶联合消化法获取软骨细胞，并在ＤＭＥＭ培养基中进行原代及传代培养；通过形态学观察及免疫组织化学染色对软骨细胞的贴壁率、生长曲线及表型等细胞生物学特性进行了研究。结果：所获软骨细胞主呈多角形，第３代软骨细胞１２ｈ贴壁率达９５％，软骨细胞倍增时间约５５．１ｈ，６代以内软骨细胞的Ⅱ型胶原蛋白稳定表达。结果表明：本方法获软骨细胞具有稳定     

大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤模型的建立

目的 探讨建立大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E缺氧/复氧损伤模型的一种新方法. 方法 本实验使用大鼠NRK-52E细胞.实验分为对照组和实验组,实验组分为缺氧2,4,6 h及缺氧后复氧1,12和24 h组.缺氧时换用缺氧液,再置入N294% O2 1% CO2 5%缺氧环境;缺氧后换用含10%胎牛血清的EMDM/F12,置入95%空气 CO2 5%有氧环境,制作缺氧/复氧模型;台盼蓝摄取法进行细胞计数及检测细胞存活率,分光光度法检测培养基中的乳酸脱氢酶(LDH)含量. 结果 大鼠肾小管上皮细胞经过缺氧/复氧处理后,与对照组相比,台盼蓝摄取率显著提高,细胞存活率显著下降,LDH含量升高,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 采用三气孵箱法建立大鼠.肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤模型,较其他制模方法 操作简单、易行、可靠.